炎性痛诱导的大鼠背根节及脊髓后角NMDAR1表达变化的研究

目的 观察炎性痛条件下NMDA受体亚型R1(NR1)的表达变化。方法 采用福尔马林试验，在大鼠一侧足背皮下注射5％福尔马林50μL制备局部炎性痛病灶，利用痛行为测定结合组织化学方法检测大鼠背根节及脊髓后角NR1的表达变化。结果 炎症组大鼠背根节中、小型细胞及脊髓背角的NR1表达较生理盐水组显著增加，表明福尔马林刺激导致的炎症痛及痛过敏可能是通过上调NR1受体的表达而实现的。结论 NMDA受体的激活在痛觉过敏的产生和维持中起着至关重要的作用。     

后根切断术及辣椒素对大鼠脊髓后角δ阿片受体免疫反应性的影响

应用免疫组织化学方法观察大鼠单侧脊髓后根切断后和蛛网膜下腔注射辣椒素后,脊髓后角浅层δ阿片受体(DOR)免疫反应性的变化。结果显示:①在单侧后根切断术后第5d,所有大鼠术侧脊髓后角I～Ⅲ层内DOR的免疫反应性均较对照侧明显减弱(P<0.01);②在所有辣椒素处理大鼠中,其脊髓后角浅层DOR免疫反应性均较对照组明显下降(P<0.01)。结果提示,脊髓后角浅层内部分DOR来源于一级传入神经元,其中部分为传入伤害性信息的神经元。     

重组人半乳糖苷结合凝集素-9质粒的构建及表达

目的构建人半乳糖苷结合凝集素-9(Galectin-9)的真核表达质粒pGalectin-9,并检测其表达。方法通过DNA重组技术和PCR方法从人外周血单个核细胞克隆Galectin-9基因,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,通过PCR、酶切及测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pGalectin-9瞬时转染中国仓鼠卵巢(Chinesehamster ovary,CHO)细胞,通过Western blot、RT-PCR和间接免疫荧光方法检测Galectin-9的表达。结果 DNA测序和酶切鉴定证明Galectin-9基因正确克隆至pcDNA3.1(+)的多克隆位点;以重组质粒pGalectin-9瞬时转染CHO细胞,通过Western blot、RT-PCR和间接免疫荧光方法,在分子和细胞水平证实Galectin-9的表达。结论成功构建pGa-lectin-9的重组质粒,并证实其在CHO细胞中可以成功表达。     

辣椒素受体TRPV1对脑缺血再灌注小鼠抑郁行为及神经元自噬的调控作用

目的:探讨辣椒素受体(TRPV1)对小鼠神经元自噬和抑郁样行为的影响及分子机制。方法:87只C57雄性小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、脑缺血/再灌注组(I/R组)、辣椒平(Capsazepine,CPZ)预处理的脑缺血/再灌注组(I/R+CPZ组),剔除因不合要求3只外,每组28只。I/R组小鼠采用右侧...     

血清可溶性LOX-1在急性冠脉综合征患者外周血及冠状动脉斑块局部表达水平的变化

目的探讨血清可溶性凝素样氧化低密度脂蛋白受体－1（L0x－1）对急性冠脉综合征（ACS）的旱期诊断价值。方法用酶联免疫法测定ACS组（90例）、稳定型心绞痛（SAP）组（40例）、正常对照组（50例）肘静脉、股动脉及冠状动脉介入治疗时抽取斑块局部血液的LOX－1和hs—CRP水平。结果ACS组中的LOX－1和hs—CRP的水平明显高于SAP组及对照组（Pd0．01）,冠脉斑块部位的LOX－1水平明显高于股动脉和肘静脉的LOX－1水平（P〈0．01）,冠脉斑块处的LOX－1ROC曲线下的面积是0．900（95％C10．858－0．942）,明显高于hs—CRPROC曲线下的面积（Pd0．01）,斑块部位LOX－1水平与hs—CRP水平呈正相关（P〈0．01）。结论LOX－1可以作为诊断早期ACS的一个有效指标,且冠脉斑块处的Lox－1水平对冠状动脉损伤的炎症反应更敏感。     

2型登革病毒诱导ECV304细胞凋亡及死亡受体的表达变化

【目的】探讨登革病毒诱导ECV304(人脐静脉内皮细胞)细胞凋亡与胞膜死亡受体TRAILR、TNFR、Fas的表达水平的相关关系及其意义。【方法】用2型登革病毒(Dengue Virus Type2,DV2)感染ECV304细胞,流式细胞技术检测ECV304感染前、后细胞凋亡变化及死亡受体TRAILR1-4、TNFR1-2、Fas的表达水平。【结果】登革病毒感染后ECV304细胞凋亡数增加,感染前细胞凋亡数约5%(9.46%±5.07%),而感染后约28%(24.31%±3.70%),感染前、后两组细胞凋亡数经t检验,P<0.05;病毒感染后细胞表达Fas百分比增加,感染前为41%(38.95%±8.50%),而感染后为79%(67.47%±10.05%),感染前、后Fas表达经t检验,P<0.05;而TRAILR1-4,TNFR1-2表达水平甚低,感染前后无明显改变。【结论】DV2感染可诱导血管内皮细胞凋亡,其凋亡与Fas/FasL的表达改变有关,但细胞凋亡的信号转导通路有待进一步研究。     

溃疡性结肠炎和克罗恩病患者端粒结合蛋白TRF1和TRF2及RAP1mRNA表达的变化

目的观察溃疡性结肠炎和克罗恩病患者端粒结合蛋白TRF1、TRF2、RAP1 mRNA的表达,并分析其与疾病的关系。方法选取34例炎性肠炎患者(溃疡性结肠炎18例,克罗恩病16例)和14例健康志愿者(正常对照组)为研究对象,抽取肘静脉血20 m l,分离外周血单核细胞,并经植物血细胞凝集素激活后纯化为激活T淋巴细胞(CD2+5T淋巴细胞)。用RT-PCR法测定受试者外周血单核细胞和激活T淋巴细胞TRF1、TRF2、RAP1 mRNA的表达。结果溃疡性结肠炎组和克罗恩病组患者外周血单核细胞TRF1 mRNA表达水平及激活T淋巴细胞TRF2 mRNA表达水平均较正常对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);溃疡性结肠炎组患者激活T淋巴细胞RAP1 mRNA表达水平显著低于正常对照组,差异亦有统计学意义(P<0.01),但是克罗恩病组患者激活T淋巴细胞RAP1 mRNA表达水平与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);另外,溃疡性结肠炎患者外周血单核细胞TRF1 mRNA表达水平较克罗恩病组显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论感染性肠炎患者外周血T淋巴细胞TRF2和RAP1mRNA表达下调...     

妊娠高血压疾病胎盘组织中NGAL和sLox-1的表达及临床意义

目的 分析妊娠高血压疾病孕妇胎盘组织中中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白(NGAL), 凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(sLox-1)的变化, 探讨NGAL、sLox-1在妊娠高血压疾病中的临床意义。方法 收集2011年3月~2014年1月在笔者医院确诊为妊娠高血压疾病孕妇68例为实验组, 正常孕妇70例为对照组, 采用免疫组化及Western blot法测定两组胎盘组织中NGAL和sLox-1的表达并进行比较。结果 两组孕妇胎盘组织中均可见NGAL及sLox-1的表达, 但实验组中表达水平明显高于对照组, 两组比较差异有统计学意义(F=43.310, P<0.05);实验组中NGAL及sLox-1的表达随患者病情加重表达愈强, 在子痫前期重度组最明显(F=213.167, P<0.05)。结论 NGAL和sLox-1参与了妊娠高血压疾病病理生理改变, 其发病机制与炎性因子活动有关。     

大鼠急性脊髓损伤后MCP-1及BDNF表达变化的实验研究

目的:通过研究大鼠急性脊髓损伤后单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达及其对巨噬细胞的趋化作用、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达变化,探讨脊髓继发性损伤的作用机制及其与损伤后神经修复之间的关系。方法:30只成年Wistar大鼠随机分为各损伤组和假手术组。制备大鼠急性脊髓损伤动物模型,采用免疫组化SABC法,检测损伤后3、6、12、24、72小时MCP-1、BDNF阳性细胞及巨噬细胞的平均光密度值。结果:急性脊髓损伤后3h,损伤区域MCP-1阳性细胞、巨噬细胞、BDNF阳性细胞平均光密度值均比假手术组增加(P<0.05)。MCP-1阳性细胞平均光密度值在24h达峰值(P<0.05),巨噬细胞和BDNF阳性细胞平均光密度值均在72h达到最高(P<0.05)。结论:MCP-1与巨噬细胞参与脊髓继发性损伤,MCP-1对巨噬细胞有趋化作用,巨噬细胞平均光密度值出现的高峰时间滞后于MCP-1阳性细胞;脊髓损伤后BDNF参与神经修复。     

大鼠局灶性脑外伤后脑组织糖皮质激素受体表达变化的实验研究

目的 探讨脑外伤后早期脑组织GR及其mRNA表达变化的时相特点.评价脑外伤治疗过程中应用GC的合理性.方法 采用Feeney'S脑损伤模型,致伤方式制作大鼠局灶性脑损伤模型,应用免疫组化和RT-PCR观察外伤后早期不同时段GR及其mRNA在脑组织中表达情况.结果 与对照组相比外伤后GR及其mRNA在脑组织表达均明显降低(P＜0.05).结论 脑外伤后早期脑组织GR呈低表达,本研究结果不支持在脑外伤治疗过程中使用激素.     

电针对大鼠关节炎性痛的疗效观察及其脊髓机制探讨

目的 观察电针对大鼠关节炎性痛的疗效并探讨其脊髓机制。方法 采用大鼠单侧佐剂性关节炎性痛模型，对大鼠致炎后14d内的痛反应情况作连续记录，且观察致炎后不同时间段（分别取第3、7d）脊髓后角西非单叶豆同工凝集素（BSI-B4）结合位点和N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚型蛋白（NMDA，NR1）的表达情况，以及在针刺条件下上述指标的变化情况。结果 （1）电针后能明显改善炎性痛组大鼠的各痛反应指标变化（P〈0．01），但仍未恢复到生理盐水组水平。（2）注射后第3、7d各组大鼠（包括第3、7d组）脊髓背角的BSI．134结合位点和NR1表达关系比较如下：炎性痛组表达明显高于生理盐水组（P〈0．01）；经电针治疗后，电针组表达较炎性痛组减弱，但仍然比生理盐水组高（P〈0．01）；炎性痛组和电针组大鼠NR1的表达还表现为3d组〉7d组（P〈0．01）。结论 电针可以明显改善单侧佐剂性关节炎大鼠各类痛反应指标，其可能机制是通过减缓炎性痛大鼠C伤害性感受器的持久发放，以及下调脊髓后角浅层NR1的表达抑制兴奋性信息的传入，从而减缓痛觉过敏的形成达到治疗炎性痛的目的。     

eIF4E与磷酸化eIF4E结合蛋白1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的 观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)及磷酸化eIF4E结合蛋白1(p-4EBP1)在甲状腺乳头状癌组织中的表达,并探讨其与甲状腺乳头状癌的侵袭、转移等临床病理特征间的关系.方法 采用免疫组化EnVinsion法检测66例乳头状癌(经典型乳头状癌37例,滤泡型乳头状癌29例)、20例结节性甲状腺肿伴乳头状增生及上述病例的肿瘤旁正常甲状腺组织中eIF4E与p-4EBP1的表达.结果 在肿瘤旁正常甲状腺组织、甲状腺肿伴乳头状增生及乳头状癌中,eIF4E的阳性率分别为11.6%(10/86)、50.0%(10/20)和84.8%(56/66)(P＜0.01);p-4EBP1的阳性率分别为8.1%(7/86)、40.0%(8/20)和66.7%(44/66)(P＜0.01),并且p-4EBP1在滤泡型乳头状癌中的表达显著高于其在经典型乳头状癌中的表达(P＜0.01).eIF4E在有腺外侵袭和淋巴结转移的病例中的阳性率分别为96.7%(29/30)和100.0%(29/29),分别高于无腺外侵袭和无淋巴结转移的病例,后者阳性率分别为75.0%(27/36)和73.0%(27/37)(P＜0.05).而p-4EBP1在这两组病例中的表达差异则无显著性意义(P＞0.05).结论 和正常甲状腺及甲状腺良性病变相比,eIF4E和p-4EBP1在乳头状癌中存在过表达;eIF4E的过表达与乳头状癌的侵袭与转移关系密切,在乳头状癌的进展中可能发挥了重要作用.     

B7-H4在人类肝癌细胞株中的表达及药物作用后其在BEL-7404中的表达变化

目的研究B7家族的新成员B7-H4 mRNA在肝癌细胞株中的表达,以及BEL-7404在抗肿瘤药物索拉非尼作用下mRNA的表达变化。方法采用反转录聚合酶连反应(RT-PCR)方法检测10株肝细胞株中mRNA的表达;使用不同浓度索拉非尼杀伤BEL-7404后检测其B7-H4 mRNA的表达。结果 B7-H4 mRNA在部分肝癌细胞株中有表达;在使用索拉非尼后BEL-7404 B7-H4表达明显下降。结论 B7-H4基因与肿瘤细胞生长活性密切相关。     

sIL—4和细胞间粘附分子及总IgE在呼吸道炎症中的表达

目的探讨可溶性白细胞介素－4（solubleinterleukin－4,sIL－4）、细胞间粘附分子－1（in-tercellaradhesionmolecule－1,ICAM－1）在过敏性鼻炎（allergicrhinitis,AR）、咳嗽变异性哮喘（coughvariableasthma,CVA）、哮喘和慢性支气管炎发病中的作用。方法采用酶标法测定12例AR、21例CVA、29例哮喘缓解期、27例哮喘发作期、11例慢性支气管炎患者和10例正常健康人血标本。结果（1）sIL－4：CVA、哮喘发作期和慢支组高于正常组（P＜0．05）。AR、哮喘缓解期与正常组比较无显著性差异。（2）ICAM－1：各组均高于正常组（P＜0．05）。哮喘发作组又高于AR组和哮喘缓解组（P＜0．05）。（3）总IgE：除慢支组外其余各组均高于正常组（P＜0．05）。结论sIL－4、ICAM－1参与气道炎症的形成过程,且其含量的高低与咳嗽的发生呈平行发展关系。     

氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞Toll样受体-4的表达效应

目的研究低密度脂蛋白(LDL)氧化对人单核细胞源巨噬细胞Toll样受体-4(TLR-4)表达的影响及其机制。方法用RPM I 1640培养基体外培养人THP-1单核细胞系,加入佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)培养48 h使其分化为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)或LDL,用免疫细胞化学、蛋白质免疫印迹和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察脂蛋白氧化前、后对巨噬细胞表达TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的影响。结果Ox-LDL可提高TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的表达(P<0.01);而LDL对TLR-4蛋白及其mRNA的表达无影响(P<0.05)。结论LDL的氧化可能促进THP-1源巨噬细胞TLR-4转录水平的上调,导致蛋白质的合成增加;Ox-LDL可能是动脉粥样硬化中炎症的始发原因之一。     

碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4在胃癌中的表达及其意义

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和成纤维细胞生长因子受体-4(fibroblast growth factor receptor-4,FGFR-4)在胃癌组织中的表达及其意义。方法：应用免疫组化方法,检测81例胃癌及其癌旁组织中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4的表达。结果：11例癌旁正常胃粘膜上皮有1例碱性成纤维细胞生长因子(9．1％),2例成纤维细胞生长因子受体-4(18．2％)染色阳性;5例癌旁不典型增生中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性各2例(40％);4例癌旁肠化碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性分别有2例(50．0％)和1例(25．0％);81例癌组织碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性分别为72例(88．89％)和74例(91．36％);癌组织碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性率明显高于癌旁肠化及不典型增生(P＜0．01);胃癌组织中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4表达的水平与患者肿瘤部位、组织学类型及分化程度无关(P＞0．05);碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色呈明显相关(P＜0．01)。结论：碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4在胃癌组织中表达明显增高可能与肿瘤的发生发展有关。     

B7-H4 在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究共刺激分子B7-H4 在前列腺癌中的表达情况及其临床意义.方法:应用免疫组织化学染色,检测B7-H4 分子在前列腺癌中的表达情况,并评价其与临床病理特征的关系.结果:前列腺癌组织中B7-H4 在胞浆和(或)胞膜弥漫表达,表达量显著高于正常前列腺组织(P<0.05).B7-H4在临床肿瘤分级较高患者的前列腺癌组织中,表达显著强于临床肿瘤分级较低患者的前列腺癌组织.结论:B7-H4 在前列腺癌组织中表达上调,与患者肿瘤分级密切相关.异常表达的B7-H4 在肿瘤的发生、进展中起到一定作用,有望成为肿瘤新的诊断和预后判断指标,封闭肿瘤组织中的B7-H4 有可能成为肿瘤免疫治疗的新策略.     

协同刺激分子B7-H4在恶性肿瘤中的表达意义

协同刺激分子B7-H4是B7家族中的一个新成员,它能通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的产生和细胞周期负性调控T细胞的免疫应答,同时大量表达B7-H4可以促进上皮细胞的恶性转化,保护表皮细胞免于失巢凋亡,在肿瘤的发生、进展和转归中发挥重要作用。研究B7-H4在恶性肿瘤中的表达及意义对于临床诊断具有重要作用,也为新的分子靶点治疗恶性肿瘤提供新的策略。     

B7-H4在卵巢癌的表达及意义

目的 探讨B7-H4在卵巢上皮来源肿瘤中的表达及其与卵巢癌临床病理学特征的关系,并与卵巢癌抗原CA125的表达进行分析比较.方法 采用免疫组织化学S-P法检测B7-H4和CA125在31例卵巢浆液性囊腺癌、13例卵巢黏液性囊腺癌、9例卵巢子宫内膜样癌、18例卵巢透明细胞癌、20卵巢浆液性囊腺瘤、15例卵巢黏液性囊腺瘤中的表达.结果 B7-H4在卵巢浆液性囊腺癌(100%),子宫内膜样癌(77.8%)及透明细胞癌(83.3%)中均出现过表达,而在黏液性囊腺癌中低表达(23.1%);B7-H4在浆液性囊腺癌(100%)和浆液性囊腺瘤(50%)中阳性率的差异有统计学意义(P<0.01);与CA125比较,非黏液性卵巢癌中B7-H4的阳性率高于CA125,其中浆液性囊腺癌,透明细胞癌中二者的差异有统计学意义(P<0.05),B7-H4和CA125的表达正相关(P<0.05);B7-H4的阳性率与卵巢癌的组织学类型有相关性(P<0.05),其在浆液性囊腺癌中有更突出的表达;B7-H4阳性细胞百分比与肿瘤的分化水平及FIGO临床分期无相关性(P>0.05);但各组B7-H4平均阳性细胞百分比均高于CA125,其中低分化组及Ⅲ～Ⅳ期组,二者的差异有统计学意义(P<0.05).结论 在非黏液性卵巢癌中,B7-H4出现优于CA125的高表达,其可能成为新的卵巢癌诊断标志物及治疗的新靶点.     

B7-H4在原发性卵巢上皮性癌中的表达及临床病理意义

目的探讨B7-H4在原发性卵巢上皮性癌(EOC)中的表达情况及其临床病理意义。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术及免疫组织化学PV-9000二步法研究86例原发性EOC(EOC组)、40例良性卵巢肿瘤(良性组)和10例正常卵巢组织(对照组)B7-H4 mRNA及B7-H4蛋白表达情况,并结合临床病理参数进行分析。结果 B7-H4 mRNA在3组卵巢组织中均有表达,且3组卵巢组织的 mRNA光密度值比较差异均有统计学意义(P<0.05);B7-H4蛋白在EOC组中呈细胞质和(或)细胞膜表达,阳性率为77.9%(67/86),显著高于良性组5.0%(2/40)及对照组0%(0/10)的表达(P<0.05)。EOC组的卵巢癌组织中B7-H4蛋白表达与组织病理学类型、临床分期、病理分级、患者年龄、腹水细胞学和淋巴结转移差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 B7-H4在原发性EOC的高表达提示其可能与肿瘤的发生有关,可为卵巢恶性肿瘤的诊断及治疗提供新的依据。