MiR-200c调控ZEB1抑制子宫内膜癌细胞增殖和侵袭

目的:探讨miR-200c调控子宫内膜癌(EC)细胞增殖和侵袭的机制。方法:蛋白印迹和RT-PCR法检测miR-200c、ZEB1和E-cadherin在EC细胞株中的表达。CCK-8检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭力。结果:miR-200c在Ⅱ型EC细胞(HEC-1A和AN3CA)中显著低表达(2.63±0.41和2.83±0.47)。ZEB1在Ⅰ型EC细胞中不表达,而在Ⅱ型EC细胞中高度表达(0.52±0.34和0.81±0.45)。E-cadherin在Ⅰ型EC细胞中高度表达(1.58±0.44和1.01±0.36),而在Ⅱ型EC细胞中极低表达。转染pre-miR-200c后抑制Ⅱ型EC细胞增殖和侵袭能力,A450值分别为1.38±0.27和1.91±0.31,增加AN3CA细胞中E-cadherin的表达。结论:在Ⅱ型EC细胞中miR-200c表达与ZEB1表达呈显著负相关,与E-cadherin表达呈正相关。miR-200c过表达明显抑制Ⅱ型EC细胞增殖和侵袭,miR-200c负性调控ZEB1,参与E-cadherin介导的肿瘤上皮-间质转化。     

MiR-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制胰腺癌细胞系生长侵袭能力的体外研究

目的 探讨MiR-21对胰腺癌细胞生长和侵袭的影响.方法 采用脂质体Lipofectamine 2 000将MiR-21 inhibitor和MiR-21 inhibitor阴性对照转染至胰腺癌细胞ASPC-1,qRT-PCR检测转染效果,细胞免疫荧光、Western blot检测转染后目的蛋白的表达,Transwell、划痕实验检测细胞迁移侵袭能力,MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布的改变.结果 成功构建稳定下调MiR-21的胰腺癌细胞亚系ASPC-1-MiR-21,荧光定量PCR结果显示MiR-21表达量明显下调,抑制MiR-21表达后ASPC细胞的侵袭和增殖能力均受到明显抑制;抑制MiR-21能明显增强PTEN蛋白和减低p-AKT蛋白表达水平,对AKT蛋白水平无明显影响.结论 抑制MiR-21表达可能通过调控PTEN/AKT通路抑制胰腺癌细胞AS-PC-1增殖和侵袭.     

miR-30c减轻肝细胞肝癌的侵袭与转移

目的:观察miR-30c/snail在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达并探讨其在肝癌侵袭中的作用?方法:定量PCR检测肝癌及肝癌细胞系中miR-30c/snail的mRNA表达水平,通过免疫组织化学和Western blot分别检测肝癌及肝癌细胞系中snail的蛋白表达水平,并在肝癌细胞株中转染miR-30c模拟物或抑制物,分析其对肝癌细胞侵袭的作用?结果:与无脉管转移组相比,miR-30c在有脉管转移组的HCC组织中表达明显下调,同时在高转移肝癌细胞株MHCC-97H中也有相似的结果?转染miR-30c模拟物可减少snail的表达,并减少MHCC-97H细胞的侵袭性,然而,转染miR-30c抑制剂则增加snail的蛋白水平,增加HepG2细胞的侵袭力?结论:上调miR-30c的表达通过直接抑制snail,可减弱HCC的侵袭性?一种新的针对miR-30c的治疗策略可能有利于伴侵袭转移的HCC患者?     

Genistein抑制肝细胞肝癌侵袭性生长的体外研究

目的研究genistein对肝癌细胞侵袭性生长的抑制作用及其作用机制.方法以体外培养的Bel 7402肝癌细胞株为研究对象,分别给予5靏/mL和10 靏/mL genistein干预,绘制细胞生长曲线,测定细胞活力和不同时间点细胞体外黏附能力变化,以Transwell小室测定细胞的体外侵袭能力,同时行局部黏着斑激酶(FAK)表达、细胞DNA含量的双参数流式细胞仪检测和细胞凋亡的流式细胞仪检测.结果genistein显著抑制Bel 7402肝癌细胞株的生长,其细胞活力显著下降,肿瘤细胞抑制率在G5组平均为26.71%,在G10组平均为42.64%;细胞体外黏附能力受到显著抑制,在genistein作用的前40 min内最为明显,40 min时的黏附抑制率在G5组为43.52%,G10组为84.18%;细胞体外侵袭能力显著下降,G10组的侵袭抑制率可达28%;细胞凋亡显著增加;细胞周期分析显示S期细胞比率显著降低,细胞生长主要阻滞在G2/M期;信号转导分子FAK表达在G10组(12.89±0.36)%显著低于对照组(19.75±1.12)%(P＜0.05).结论genistein可以显著抑制Bel 7402肝癌细胞株的体外侵袭性生长,FAK表达改变与genistein抑制作用的发挥相关.     

MiR-145-5p靶向下调SERPINE1抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探究miR-145-5p和SERPINE1在胃癌上皮细胞中的潜在调控机制,希望能够为胃癌的精准治疗提供新的思路.方法 从TCGA数据库中下载TCGA-STAD的miRNA成熟体、mRNA和临床数据.利用Edg-eR包对mRNA进行差异分析获得DEGs,并与预测基因取交集获得靶标基因.通过qRT-PCR检测miR-...     

miR-30c对胃癌细胞株HGC-27侵袭转移能力的影响

目的探讨miR-30c对胃癌细胞株HGC-27侵袭转移能力的影响。方法使用miR-30c mimics和inhibitor分别进行miR-30c的过表达和抑制,采用划痕实验和transwell小室实验分析癌细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达差异。结果抑制miR-30c可促进胃癌细胞系HGC-27的侵袭(P<0.05),同时高表达miR-30c可抑制细胞侵袭(P<0.05)。抑制miR-30c后E-cadherin表达降低、Vimentin和Fibronectin表达升高,高表达miR-30c后E-cadherin的表达升高、Vimentin和Fibronectin表达下降。结论 miR-30c可能通过调节上皮间质转化(EMT)相关蛋白来影响胃癌的侵袭能力。     

长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞的侵袭转移

目的 探讨长链非编码ATB通过抑制miR-200c的表达促进乳腺癌细胞侵袭转移的作用及其机制.方法 qPCR检测不同乳腺癌细胞株中ATB和miR-200c的表达情况;双荧光素酶报告基因检测ATB与miR-200c的相互作用;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测沉抑制ATB后乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的变化;MTT细胞增殖实验和Transwell侵袭实验检测抑制ATB后沉默miR-200c对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的逆转作用;Western blot检测抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白的表达.结果 与其他乳腺癌细胞相比,SKBr-3细胞株ATB表达水平最低,miR-200c的表达水平最高;ATB能与miR-200c的位点特异性结合,调控其表达活性;抑制ATB后可以增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,而沉默miR-200c后可以在一定程度上逆转ATB对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;抑制ATB后ZEB1和ZNF217蛋白表达水平得到一定的恢复.结论 ATB在乳腺癌发生、发展过程中起重要作用,ATB可以靶向调节miR-200c调控乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力.     

MiR-105抑制肝癌细胞增殖能力的实验研究

目的 探讨miR-105对人肝癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 改变QGY-7703及HepG2两种细胞的miR-105表达,细胞克隆形成实验和软琼脂增殖试验检测细胞增殖能力的改变;流式细胞仪检测细胞周期改变.结果 细胞克隆形成和软琼脂增殖实验显示,过表达miR-105可抑制QGY-7703及HepG2细胞增殖,反之抑制miR-105表达则促进细胞增殖;细胞流式检测显示miR-105过表达能促进两种癌细胞G0/G1期阻滞.结论 miR-105抑制肝癌细胞增殖,其机制与引起细胞周期阻滞有关.     

Genistein抑制肝细胞肝癌侵袭性生长的体外研究

目的 研究genistein对肝癌细胞侵袭性生长的抑制作用及其作用机制。方法 以体外培养的Bel 7402肝癌细胞株为研究对象,分别给予5μg/mL和10μg/mL genistein干预,绘制细胞生长曲线,测定细胞活力和不同时间点细胞体外黏附能力变化,以Transwell小室测定细胞的体外侵袭能力,同时行局部黏着斑激酶(FAK)表达、细胞DNA含量的双参数流式细胞仪检测和细胞凋亡的流式细胞仪检测。结果genistein显著抑制Bel 7402肝癌细胞株的生长,其细胞活力显著下降,肿瘤细胞抑制率在G5组平均为26.71％,在G10组平均为42.64％;细胞体外黏附能力受到显著抑制,在genistein作用的前40 min内最为明显,40 min时的黏附抑制率在G5组为43.52％,G10组为84.18％;细胞体外侵袭能力显著下降,G10组的侵袭抑制率可达28％;细胞凋亡显著增加;细胞周期分析显示S期细胞比率显著降低,细胞生长主要阻滞在G2/M期;信号转导分子FAK表达在G10组(12.89±0.36)％显著低于对照组(19.75±1.12)％(P<0.05)。结论 genistein可以显著抑制Bel 7402肝癌细胞株的体外侵袭性生长,FAK表达改变与genistein抑制作用的发挥相关。     

miR-98对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的研究microRNA-98(miR-98)对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能机制。方法将阴性对照、miR-98 mimics、inhibitor阴性对照、miR-98 inhibitor瞬时转入肝癌细胞株,应用噻唑盐(MTT)法、平板集落形成实验、Transwell小室侵袭法、流式细胞周期实验检测miR-98对SMMC7721细胞生长、增殖及侵袭能力的影响。进一步用Western blot检测Cyclin D1的表达水平。结果 MTT实验表明miR-98过表达后,肝癌细胞的生长能力明显高于对照组,平板克隆实验的结果说明miR-98可以使肝癌细胞的克隆形成率由17.33%升高至76.66%、Transwell小室侵袭实验表明miR-98使肝癌细胞的侵袭能力也明显增强。流式细胞周期实验发现miR-98过表达后,肝癌细胞停留在G1=66.71%期和S=35.89%期的数目显著高于对照组G1=38.93%,S=26.62%。而当miR-98被抑制后,SMMC7721肝癌细胞的生长增殖及侵袭能力减弱。Western blot实验检测发现miR-98过表达后,CyclinD1的表达也升高。结论 miR-98可能通过上调Cyclin D1的表达,增强SMMC7721细胞的生长增殖和侵袭能力,提示miR-98可能在肝癌的发生、发展中起重要作用。     

MiR-429调节肝细胞癌炎性微环境、分化及增殖

目的 观察miR-429对人肝细胞癌(HCC)炎性浸润、分化以及增殖的影响.方法 利用免疫磁珠法分选人肝癌细胞系HCCLM3细胞,得到EpCAM (CD326)阳性以及阴性的细胞.对两种细胞分别进行miR-429的干扰(AntagomiR-429)与过表达(miR-429mimic),通过流式细胞技术、real-time PCR法检测其干预效果.利用CCK-8法检测miR-429过表达及干扰肝癌细胞系的增殖活性并绘制生长曲线.分别利用干扰miR-429的EpCAM阳性HCCLM3细胞及其对照、过表达miR-429的EpCAM阴性HCCLM3细胞及其对照进行NOD-SCID小鼠皮下荷瘤实验,通过免疫组织化学法检测成瘤后癌组织内炎性细胞浸润情况及增殖分化相关蛋白的表达情况.结果 干扰miR-429的表达能降低EpCAM阳性肝癌细胞的比例,反之,过表达miR-429能促使EpCAM阴性肝癌细胞转化为EpCAM阳性细胞.过表达miR-429可增强EpCAM阴性肝癌细胞在小鼠体内的成瘤能力,而干扰miR-429表达可降低EpCAM阳性细胞成瘤率;与对照相比,过表达miR-429的瘤体组织中出现大量的巨噬细胞,提示miR-429可招募炎性细胞浸润从而促进肿瘤发展;AFP染色提示miR-429与肿瘤的低分化有关;Ki67染色结果证实miR-429在体内能够促进肿瘤组织生长.与对照相比,miR-429在体外也可以促进肝癌细胞的增殖,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-429能够在体外、体内水平影响EpCAM阳性细胞的比例,显著影响肝肿瘤微环境、促进肿瘤细胞的增殖活性并降低其分化潜能.     

异丙酚通过下调ERK-VEGF/MMP-9信号通路对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及机制研究

目的 探讨异丙酚对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭多种生物学行为的影响及相关机制。方法用浓度递增的异丙酚（0μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL）和二甲基亚砜（DMSO）处理HepG2细胞,然后采用体外细胞实验（CCK-8实验、划痕实验、Transwell侵袭实验）检测异丙酚对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。Western blotting检测HepG2细胞中血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、细胞外信号调节激酶（ERK）及p-ERK蛋白相对表达量。结果 CCK-8实验结果发现,与空白对照组比较,5μg/mL组、10μg/mL组及20μg/mL组HepG2细胞存活率逐渐降低（P <0.05）。划痕实验结果发现,异丙酚可以有效抑制HepG2细胞的迁移,且随着药物浓度增加细胞迁移能力逐渐减弱（P <0.05）。Transwell侵袭实验结果发现,异丙酚以一种浓度依赖的方式抑制HepG2细胞的侵袭能力（P <0.05）。Western blotting结果发现,异丙酚刺激可降低HepG2细胞中的VEGF、MMP-9及p-E...     

RECQL基因沉默对HCC细胞株体外增殖的抑制作用

目的观察RECQL基因沉默表达对人肝细胞癌(humanhepatocelullarcarcinoma,HCC)细胞株体外增殖的影响,探讨RECQL作为肝癌治疗潜在靶向基因的可能性。方法以BEL7404、SK-HEP-1、Hep3B、SNU-761HCC细胞为研究对象,采用Westernblot和免疫组化法观察解旋酶RECQL蛋白的表达情况,通过RNA干扰技术抑制RECQL表达,测定HCC细胞和正常肝细胞（THLE-2细胞）的存活率和死亡率,并采用Westernblot法分析凋亡相关蛋白的变化,FACS法检测细胞周期分布。结果RECQL蛋白在BEL7404、SK-HEP-1、Hep3B中为阳性表达,SNU-761中为阴性表达。RECQL-siRNA在阳性表达组中抑制HCC细胞的增殖,引起细胞存活率降低和死亡率增加（均P＜0.01）,但对阴性表达组和THLE-2细胞存活率和死亡率无影响（均P＞0.05）。RECQL-siRNA处理的SK-HEP-1细胞中,剪切型凋亡相关蛋白cleavedcaspase-3和cleavedPARP的表达变化不大,而G2/M期细胞的比例明显增加（P＜0.05或0.01）。结论RECQL基因沉默表达可以抑制HCC细胞的增殖,且这种抑制作用依赖于RECQL的高表达,并对正常肝细胞无影响,其可能机制是阻滞细胞G2/M期,可以作为治疗肝癌的潜在靶向基因。     

过表达CLEC5A基因抑制肝细胞癌增殖和转移并逆转上皮-间质转化

目的 研究C型凝集素结构域家族5成员A（CLEC5A）对肝细胞癌（HCC）增殖、迁移和侵袭能力以及上皮-间质转化（EMT）特性的影响,探索CLEC5A在HCC发生发展过程中的作用及机制。方法 采用免疫组化实验检测CLEC5A在50例HCC组织和癌旁组织中的表达特点,并分析其与HCC肝癌临床病理参数的相关性;通过慢病毒转染构建CLEC5A过表达HCC细胞,分别采用细胞增殖实验（CCK-8法、EdU法）、细胞迁移和侵袭实验（Transwell法）和Western blot实验检测CLEC5A对HCC细胞增殖、迁移及侵袭能力以及EMT标志物表达水平的影响。结果 CLEC5A蛋白在HCC癌组织中的表达低于癌旁组织,其表达水平与患者的肿瘤大小（P=0.008）、肿瘤数量（P=0.010）、肿瘤分化程度（P=0.016）、BCLC分期（P=0.040）和微血管侵犯（P=0.024）等相关;过表达CLEC5A能够抑制HCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并逆转HCC细胞的EMT特性。结论 CLEC5A是HCC潜在的抑癌基因,有望成为该疾病新的治疗靶点。     

沉默circROBO1通过下调KRAS抑制鼻咽癌CNE2细胞侵袭与肺转移

目的探讨沉默环状RNA hsa_circ_0124696(circROBO1)对鼻咽癌CNE2细胞侵袭与肺转移的影响机制。 方法qRT-PCR检测鼻咽癌及癌旁组织中circROBO1表达。采用干扰小RNA(siRNA)沉默鼻咽癌CNE2细胞中circROBO1的表达,Transwell及HE染色检测circROBO1对CNE2细胞迁移能力和体内肺转移的影响。TargetScan在线软件预测circROBO1下游miR-217与下游靶基因KRAS的靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的靶向调控关系。蛋白免疫印迹检测siRNA沉默CNE2细胞中circROBO1表达对KRAS的影响。 结果鼻咽癌组织中circROBO1表达高于癌旁组织(P＜0.05)。与转染si-circNC的对照组相比,si-circROBO1组鼻咽癌CNE2细胞侵袭与体内肺转移能力均显著降低(P＜0.05)。circROBO1下游miR-217与KRAS之间存在靶向结合位点,并且circROBO1可影响KRAS的蛋白和mRNA表达量。 结论沉默circROBO1通过miR-217下调KRAS抑制鼻咽癌CNE2细胞侵袭与肺转移。     

JWA抑制人肝癌细胞的黏附和迁移侵袭潜能

探讨JWA蛋白在人肝癌细胞黏附和迁移侵袭过程中的作用?方法:应用小干扰RNA下调低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L中JWA蛋白表达水平,MTT法检测MHCC97L增殖;应用细胞小室检测MHCC97L在JWA不同蛋白水平时的迁移及侵袭潜能变化;黏附试验检测MHCC97L细胞黏附能力变化?结果:研究发现人肝癌细胞株MHCC97L中的JWA表达水平下降后,肝癌细胞迁移及侵袭能力明显增强,细胞对细胞外基质纤维连接蛋白的黏附力增加?结论:RNA干扰JWA引起肝癌细胞的JWA蛋白表达水平下降,导致肝癌细胞的黏附?迁移及侵袭能力增强,结果提示JWA可能抑制人肝癌细胞侵袭和转移?     

沉默干扰素诱导跨膜蛋白3可抑制肝癌细胞HepG2增殖和侵袭

目的研究干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）在原发性肝癌中的异常表达,探讨沉默IFITM3表达对肝癌细胞系HepG2生
物学特征的影响。方法通过Western blot和免疫组织化学染色法检测60例肝癌组织及对应癌旁组织中IFITM3的表达情况及
相关性;构建IFITM3小干扰RNA片段（IFITM3 si-RNA）,采用脂质体介导转染肝癌细胞（HepG2细胞系）,同时设置无义序列组
和空白对照组,实时荧光定量PCR检测转染后IFITM3 mRNA的表达;CCK8（cell counting kit 8）检测转染后细胞增殖能力;
Western blot检测IFITM3在蛋白水平的表达;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结果和癌旁组织相
比,IFITM3在肝癌组织中的明显高表达。与无义序列组和空白对照组比较,IFITM3 si-RNA转染组细胞IFITM3表达和细胞增
值率降低,穿膜细胞数也明显减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。划痕实验也表明迁移能力降低。结论IFITM3在原发性肝
癌中高表达;IFITM3在肝癌细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,有望成为原发性肝癌基因治疗的侯选靶点。