去甲斑蝥素对人胰腺癌PANC-1 细胞凋亡作用的研究

目的 探讨去甲斑蝥素对人胰腺癌PANC-1细胞凋亡的作用及其机制。方法 将PANC-1 细胞株随机分为处理组 和对照组,处理组加入不同浓度的去甲斑蝥素培养24h后,CCK-8 法检测细胞增殖情况;流式细胞术分析细胞的凋亡情况;免疫印迹法检测细胞内质网应激和凋亡相关蛋白的表达;荧光定量PCR 技术检测细胞内质网应激和凋亡相关蛋白mRNA表达。结果 不同浓度去甲斑蝥素处理PANC-1细胞24h后,与对照组相比,能降低细胞的存活率并诱导其凋亡。与对照组相比,处理组中内质网应激和凋亡相关蛋白的表达水平均上调（均P＜0.05）,同时其mRNA 的表达水平亦均上调（均P＜0.05）。结论 去甲斑蝥素能明显抑制人胰腺癌PANC-1 细胞的生长并诱导其凋亡,并且具有浓度依赖性,这一作用可能是通过内质网应激介导的凋亡途径实现的。     

去甲斑蝥素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的实验研究

目的：探讨去甲斑蝥素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株6T－CEM的凋亡作用。方法：利用DNA断裂点标记法（TUNEL）、DNA凝胶电泳、活细胞拒染以及光镜方法研究有关细胞的凋亡。结果：UNEL标记及DNA凝胶电泳显示：10－40μg/ml剂量的去甲斑蝥素作用6T－CEM细胞24h及10μg/ml剂量的去甲斑蝥素作用6T－CEM细胞超过18h后即出现典型的细胞凋亡特征。结论：一定剂量范围内的去甲斑蝥素可在直接杀伤作用较小的情况下明显诱导6T－CEM细胞凋亡,不会因细胞坏死而引起炎症反应,这对于去甲斑蝥素应用于临床将有十分重要意义。     

去甲斑蝥素对原发性胆囊癌GBC-SD细胞系增殖和凋亡的影响

目的　研究去甲斑蝥素 (norcantharidin ,NCTD)对人胆囊癌GBC SD细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法　将NCTD作用于经体外培养的人胆囊癌GBC SD细胞 ,采用四氮唑盐比色 (MTT)法进行体外细胞杀伤实验 ,测定NCTD对GBC SD细胞生长的抑制率与剂量效应、时间效应的关系 ;采用流式细胞术测定NCTD处理后的GBC SD细胞的细胞周期及凋亡率 ;并通过光电显微镜观察其细胞形态学改变。结果　NCTD浓度为 10 μg/ml时 ,对GBC SD细胞的生长有抑制作用 ,且随药物浓度升高其抑制作用增强 ,呈剂量效应关系 ,NCTD对GBC SD细胞的半数抑制浓度 (IC50 )为 60 μg/ml;NCTD作用 6h后对GBC SD细胞生长具有抑制作用 ,48h时抑制作用最明显 ,呈时间效应关系。经NCTD作用后 ,流式细胞仪显示 :G2 M期的细胞明显增多 ,S期细胞明显减少 ,细胞凋亡率上升 ;光镜检查显示 :GBC SD细胞可出现细胞固缩 ,胞膜突出 ,核碎裂等现象 ,并出现凋亡小体 ;电镜显示 :细胞微绒毛卷缩、高尔基体、线粒体等细胞器衰退 ,并可见典型的凋亡细胞。结论　N...     

白藜芦醇体外抑制人胰腺癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)体外对胰腺癌MIAPaCa-2细胞增殖的影响,并探讨其初步机制.方法:采用四甲基氮唑蓝法(MTT)检测Res处理后MIAPaCa-2细胞的增殖情况.用倒置显微镜、透射电镜观察Res处理后细胞形态学改变,用流式细胞仪分析经25 μmol·L-1、50 μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1 Res分别作用48 h后MIAPaCa-2细胞凋亡率.结果:Res体外能明显抑制MIAPaCa-2细胞的生长增殖,且在一定范围内呈时间、浓度依赖性.经Res处理后,倒置显微镜观察到细胞数目减少,部分细胞变圆,核浓缩,提示可能存在细胞凋亡;电镜证实存在典型的细胞凋亡形态学改变.用25 μmol·L-1、50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1 Res处理48 h后,流式细胞仪检测出各处理组的细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0.05).结论:Res在体外能明显抑制MIAPaCa-2细胞的增殖,诱导细胞调亡可能是Res抑制MIAPaCa-2细胞增殖的主要机制之一.     

去甲斑蝥素体外抑制NCI-H446细胞迁移、增殖及促进凋亡

目的 研究去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)体外抑制人小细胞肺癌H446细胞迁移、增殖和诱导其凋亡作用.方法 以不同浓度NCTD处理H446细胞24h后,采用细胞划痕试验检测NCTD对H446细胞侧向迁移能力的影响;采用细胞计数检测对体外培养的H446细胞的抑制增殖作用;选用不同浓度的NCTD作用H446细胞48 h后,以Hoechst33258染色观察H446细胞形态的变化,研究NCTD对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的诱导作用.结果 经较高浓度的NCTD干预24h后,H446细胞的侧向迁移速度明显减慢(P＜0.01).细胞计数结果显示NCTD作用于H446细胞后其细胞群体倍增时间延长.NCTD作用H446细胞48 h后,部分凋亡细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变,细胞凋亡率增加(P＜0.01).结论 NCTD能明显影响人小细胞肺癌H446细胞迁移、抑制其增殖并诱导其发生凋亡.     

去甲斑蝥素对人多发性骨髓瘤细胞株U266生长调控的影响及其机制的研究

目的 研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对多发性骨髓瘤细胞株的增殖及其凋亡的影响及其可能的机制.方法 四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl-2 thiahiazoyi)-3,5-di-phenyl-tetrazolium bromide,MTT]检测5、20、40、80、160μmol/L的NCTD对U266细胞增殖的影响;用流式细胞术检测不同浓度NCTD对细胞周期及细胞凋亡的影响,并应用半定量反转录聚合酶链反应检测survivin基因表达的变化.结果 在20～160μmol/L的浓度内,NCTD对U266细胞的增殖有抑制,抑制与NCTD的浓度呈剂量依赖关系(P<0.05).不同浓度的NCTD能诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡,使细胞明显阻滞于G2 /M 期;在NCTD作用下,U266 细胞survivin 及其机制可能与诱导凋亡、细胞周期阻滞有关.结论 NCTD能抑制U266细胞的增殖,并诱导其凋亡的机制可能与抑制survivin的表达及G2 /M 期阻滞有关.     

去甲斑蝥素对裸鼠荷人胆囊癌移植瘤增殖和生长的抑制作用

目的　研究去甲斑蝥素对裸鼠人胆囊癌移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法　通过建立人原发性胆囊癌动物模型 ,应用去甲斑蝥素对裸鼠人胆囊癌移植瘤的增殖、生长进行药物对比抑制实验 ,观察、测定裸鼠移植瘤瘤体改变、抑瘤率和细胞凋亡率 ,并绘制生长曲线。结果　去甲斑蝥素的半数致死量 (LD5 0 )是 13 9.96mg·kg- 1,应用其 1/5LD5 0 剂量 ,即可使裸鼠移植瘤瘤体明显变小 (5.61± 0 .3 9vs. 9.78± 0 .61cm3 ,P <0 .0 5) ,抑瘤率达 42 .63 % ,瘤细胞凋亡率明显上升。结论　去甲斑蝥素对裸鼠人胆囊癌移植瘤的增殖和生长有明显的抑制作用     

去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠释放及影响

目的:以去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠为模型药物,比较其从聚合物基质中的释放行为。方法:采用混合和压膜方法制备载药的聚己内酯片,然后剪切成小片后考察其在不同浓度的磷酸缓冲盐和含有不同浓度氯化钠的磷酸缓冲盐中的释药行为,并探讨其释药机制。结果:去甲斑蝥酸钠的释药行为受磷酸缓冲盐浓度以及磷酸缓冲盐中氯化纳浓度的影响,而去甲斑蝥素的释药行为则基本不受其影响。结论:去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠从聚合物中释药行为差异主要由药物渗透压引起,渗透压是影响药物释放的重要因素。     

XIAP抑制剂Embelin体外对人胰腺癌细胞株的抑制效应与机制研究

目的 探讨XIAP小分子抑制剂Embelin体外对人胰腺癌细胞株MIAPaCa-2的抑制效应与机制.方法 将生长至第4-12代之间的MIAPaca-2细胞分为DMSO对照组与Embelin实验组,在实验组细胞中加入不同浓度的Embelin共孵育72h,收集细胞并裂解后取上清液用细胞凋亡试剂盒检测组蛋白(凋亡指标)的OD值水平.MIAPaca-2细胞加入不同浓度的Embelin共孵育60 h后再加入3H胸腺嘧啶继续孵育12 h,取细胞裂解液用同位素γ闪烁计数仪检测3H-CPM数值以判断细胞增殖程度.对DMSO对照组与Embelin实验组的组蛋白OD值与3H-CPM数值分别进行比较分析.结果 Embelin实验组的MIAPaCa-2细胞株组蛋白OD值显著高于DMSO对照组而3H-CPM数值明显低于DMSO对照组(P＜0.01),且实验组Embe-lin的作用浓度与组蛋白OD值呈正相关(r=0.996,P＜0.01).而与+H-CPM数值呈负相关(r=-0.993,P＜0.01).结论 Embelin呈剂量依赖性地诱导人胰腺癌细胞株MIAPaCa-2凋亡并抑制其增殖,有肿瘤抑制效应.     

去甲斑蝥素诱导肝癌细胞凋亡的实验观察

目的 观察去甲斑蝥素(NCTD)诱导肝癌细胞凋亡的分子学机制,为合理应用NCTD治疗肝细胞肝癌提供理论基础.方法 对肝癌细胞株SMMC-7721,BEL-7402进行体外培养,应用不同浓度的NCTD(3、10、30μg/ml)处理肝癌细胞,采用MTT方法检测细胞生存率,锥虫蓝拒染法检测细胞的死亡率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western印迹检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(caspase)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白,以及Bcl-2家族蛋白的表达.结果 MTT检测显示NCTD处理24、48和72 h后SMMC-7721细胞IC50分别为12、6和1.6μg/ml,BEL-7402细胞IC50分别为10、4和2 μg/ml;锥虫蓝拒染法结果显示,浓度为3、10、30 μg/ml的NCTD处理24 h后,SMMC-7721细胞的死细胞率分别为16.89%、46.16%、72.13%,均显著高于未处理对照组的死细胞率3.34%(P＜0.01);BEL-7402细胞的死细胞率分别为19.59%、50.10%、90.31%,均显著高于未处理对照组的死细胞率2.88%(P＜0.01).流式细胞仪检测显示,NCTD 10 μg/ml处理12 h,SMMC-7721细胞凋亡率达到27%,较未处理对照组(7%)升高20%,BEL-7402细胞凋亡率达到30%,较未处理对照组(8%)升高22%;Western印迹结果显示,NCTD 10μg/ml处理8、14和24 h后,在两株肝癌细胞均检测到caspase-9,-3活化,PARP蛋白裂解,以及Bcl-2、Bcl-XL和Mcl-1蛋白的表达下调.结论 结果提示NCTD具有较强的抑制肝癌细胞生存和诱导肝癌细胞凋亡作用.NCTD的抗肝癌作用机理可能是通过诱导多个Bcl-2抑凋亡家族蛋白表达下调,激活内源性线粒体凋亡通路,诱导肝癌细胞发生凋亡.     

吉西他滨与培美曲塞对人胰腺癌细胞BXPC-3及PANC-1生长的体外作用

目的探讨吉西他滨与培美曲塞不同用药次序联合应用对人胰腺癌细胞BXPC-3及PANC-1生长的影响及可能的细胞学机制。方法MTT法测细胞增殖;流式细胞术测细胞周期。结果吉西他滨(10-7-10mg/ml)和培美曲塞(10-7-10mg/ml)均明显抑制2株细胞生长,作用呈现浓度依赖性和时间依赖性。二者联合对2株细胞生长的影响与给药次序有关:先用培美曲塞24h后序贯用吉西他滨对2株细胞的抑制作用明显强于同时给药(P<0.05)和先用吉西他滨24h后序贯用培美曲塞(P<0.05)。吉西他滨联合培美曲塞对BXPC-3细胞周期结果显示:与对照组相比,吉西他滨与培美曲塞分别将细胞周期阻断在G1期和S期(P<0.05);同时给药G2期比例减少(P<0.05);先用吉西他滨后用培美曲塞将细胞周期阻断在G1期(P<0.05);先用培美曲塞后用吉西他滨将细胞周期阻断在S期(P<0.05)。结论吉西他滨与培美曲塞均能抑制人胰腺癌细胞BXPC-3及PANC-1生长,二者联合具协同作用,先用培美曲塞24h后用吉西他滨对2株细胞的抑制作用最强,其协同作用与他们对细胞周期的影响无关。     

X射线对胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2细胞增殖及凋亡的影响

目的探究不同剂量的x射线对胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2增殖和凋亡的影响。方法取处于对数生长期的SW1990和Capan-2细胞,经不同剂量的x射线（2、4、6、8和10Gy）照射后分别培养24、48和72h.CCK培法检测细胞增殖;采用AnnexinV／PI双染的方法检测SW1990和Capan-2细胞的凋亡;Westernblotting检测细胞凋亡相关蚩白的表达变化;RT—PCR检测细胞凋亡相关蛋白的mRNA表达。结果相比正常对照组,x射线能明显抑制SW1990和Capan-2细胞的增殖,井且这种,抑制作用呈剂量依赖性。细胞凋亡率在x射线的作用下也明显增加,并呈现剂量依赖性。Westernblotting结果显示x射线能增加两种细胞中促凋亡蛋白Bax的表达。RT-PCR结果显示x射线能降低抗凋亡蛋白Bel-2mRNA表达,上凋抗凋亡蛋白Bax mRNA表达。结论x射线能抑制胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2的增殖并提高其凋亡率,呈现一定的剂量依赖性,其机制可能与诱导胰腺癌细胞凋亡有关。     

胰腺癌组织中Midkine的表达与细胞增殖及凋亡的关系

目的研究Midkine(MK)蛋白在人胰腺癌组织中的表达与肿瘤细胞增殖和凋亡之间的关系及意义。方法收集人胰腺癌组织标本49例,免疫组化SP法检测MK蛋白和增殖细胞核抗原Ki67的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数,另取同期15例正常胰腺组织作对照。结果15例正常胰腺组织中均未发现MK和Ki67阳性表达,细胞凋亡较少(0.63±0.21);77.1%(35/49)的胰腺癌组织中有MK阳性表达,其表达与肿瘤组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05);49例胰腺癌组织中Ki67平均标记指数(LI)为(31.67±15.41),平均凋亡指数(AI)为(5.93±4.18);MK表达阳性组Ki67平均标记指数为(35.27±16.03),显著高于阴性组的(22.67±13.66)(P<0.05);MK表达阳性组凋亡指数为(5.13±2.69),显著低于阴性组的(7.93±6.65)(P<0.05)。结论MK蛋白可作为反映胰腺癌生物学行为的指标之一,其在胰腺癌中的表达可能起到促进肿瘤细胞增殖和抑制凋亡的作用,MK基因可能成为胰腺癌治疗的新靶点。     

羟喜树碱对人胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究羟喜树碱（ＨＣＰＴ）体外抑制人胰腺癌细胞株ＳＷ－１９９０增殖并诱导其凋亡的作用。方法：体外培养的胰腺癌细胞经不同质量浓度（１．５６２．５,３．１２５,６．２５,１２．５,２５．５０,１００μｇ／ｍｌ）的ＨＣＰＴ处理２０￣２４ｈ后,用ＭＴＴ法测定细胞增殖情况,再分别以Ａｎｎｅｘｉｎ Ⅴ早期凋亡检测试剂盒、电子显微镜、流式细胞术和ＴＵＮＥＬ标记以及ｂｃｌ－２免疫细胞化学标记检测细胞凋亡情况。     

蒿甲醚对胰腺肿瘤细胞的抑制作用

目的观察蒿甲醚(ART)在体外对人胰腺癌SW-1990细胞的杀伤作用和对细胞增殖和凋亡的影响,以及在体内对荷瘤裸鼠移植瘤的抑制作用。方法采用MTT法检测ART对SW-1990细胞的杀伤作用;采用流式细胞仪检测ART对SW-1990细胞周期和凋亡的影响。建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,通过测量裸鼠体质量、移植瘤瘤径和瘤质量,计算肿瘤体积和抑瘤率,观察ART在体内的抗肿瘤活性。结果MTT结果显示,ART对SW-1990细胞的杀伤作用与时间-剂量呈正相关(P<0.05);流式细胞仪检测显示,ART使SW-1990细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡;荷瘤裸鼠体内实验显示,中、高剂量的ART(4、8 mg)对裸鼠移植瘤的生长抑制效果显著(P<0.05),抑瘤率分别为48.10%和53.51%。结论ART在体外及荷瘤裸鼠体内对SW-1990细胞有明显的抑制作用;其抑制作用与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关。     

载多烯紫杉醇脂质微泡增强人胰腺癌BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的制备载多烯紫杉醇脂质超声微泡,并研究其联合超声靶向微泡破裂技术(UTMD)对人胰腺癌BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法采用机械振荡法制备载多烯紫杉醇的脂质超声微泡,检测其粒径、zeta电位、载药量、包封率等性质,MTT法检测IC50,CCK-8法检测细胞毒性作用,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并与单纯多烯紫杉醇药物组、多烯紫杉醇药物+超声组等进行比较。结果载多烯紫杉醇超声微泡平均粒径1.6μm,微泡的包封率为64.2%,平均载药量为16.1%;载多烯紫杉醇脂质微泡组的细胞毒性作用强于其他各组(P<0.01),细胞凋亡率高于其他各组(P<0.01);载多烯紫杉醇脂质微泡组G2/M期细胞增多,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论载多烯紫杉醇脂质微泡联合UTMD能够增加G2/M期细胞阻滞,增强对BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;载多烯紫杉醇脂质微泡有望成为一种治疗胰腺癌的新型药物载体。     

异甘草素抑制胰腺癌SW1990细胞增殖及对survivin表达的影响

目的:研究异甘草素对人胰腺癌SW1990细胞增殖及细胞内survivin表达的影响?方法:体外培养SW1990细胞,给予不同浓度的异甘草素处理,MTT法检测异甘草素对SW1990细胞增殖的影响,实时定量PCR技术检测肿瘤细胞survivin基因mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测survivin蛋白的表达?结果:在一定浓度范围内,异甘草素能显著抑制人胰腺癌SW1990细胞的增殖,并呈时间与剂量依赖性,且异甘草素能显著抑制人胰腺癌SW1990细胞内survivin基因mRNA及蛋白的表达?结论:异甘草素对人胰腺癌SW1990细胞增殖有明显的抑制作用,且可能与下调survivin基因mRNA及蛋白的表达有关?     

蒿甲醚对胃癌细胞和胰腺癌细胞的体外杀伤作用

目的观察蒿甲醚(ART)在体外对胃癌细胞株和胰腺癌细胞株的杀伤作用以及对细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法选择人胃癌细胞株SGC-7901和MKN-45及胰腺癌细胞株SW-1990和BXPC-3,采用MTT法检测不同浓度ART对不同肿瘤细胞的抑制作用;应用流式细胞仪检测ART对肿瘤细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。结果MTT结果显示ART对各株肿瘤细胞均具有显著的杀伤作用(P<0.05),且其细胞毒作用与时间-剂量呈正相关(P<0.05);流式细胞仪检测显示,ART使各株肿瘤细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡。结论ART在体外对SGC-7901、MKN-45、SW-1990、BXPC-3细胞株有明显的细胞毒作用,且具有时间-剂量效应关系;其抑制作用与阻滞细胞周期和诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

磷脂酶D1对胰腺癌细胞增殖的影响

目的 探究磷脂酶D1（PLD1）对于胰腺癌细胞增殖的影响。方法 通过CCK-8法、EdU荧光染色和流式细胞术检测PLD、PLD1及PLD2抑制剂对胰腺癌细胞系Capan-2细胞活力、增殖、周期的影响;采用同样方法检测抑制/过表达PLD1对Capan-2细胞活力、增殖、周期的影响。结果 PLD、PLD1抑制剂均抑制了Capan-2增殖（P=0.004、0.044）,而PLD2抑制剂对Capan-2增殖无明显影响（P=0.945）。下调PLD1的表达使Capan-2细胞活力降低（P=0.000）、增殖能力减弱（P=0.002）,阻碍了细胞周期进展（P=0.004、0.002）;上调PLD1的表达使Capan-2细胞活力提高（P=0.004）、增殖能力增强（P=0.002）,促进细胞周期进展（P=0.0004、0.035）。结论 PLD1能够促进胰腺癌细胞的增殖,在胰腺癌的发展中发挥着重要的作用。