舒林酸对卵巢癌细胞株A2780、SKOV3的凋亡作用

 舒林酸;卵巢癌;细胞凋亡;凋亡相关基因     

姜黄素诱导人卵巢癌细胞株A2780凋亡及其分子机制的研究

背景与目的：姜黄素（curcumin）是传统中药姜黄的主要有效成分,其选择性抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡作用日益成为研究的焦点,但其中所涉及的机制仍然不十分明确。本研究旨在探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株A2780的诱导凋亡效应及其分子机制。方法：10-50μmol/L姜黄素分别处理A2780细胞6-24h后,MTT法检测癌细胞的生长活性;流式细胞仪（FCM）和吖啶橙-溴化乙啶荧光染色法检测细胞凋亡;SP免疫组化法检测细胞内NF-kB蛋白（P65）、caspase-3蛋白表达水平。结果：各浓度姜黄素对癌细胞生长抑制率为62.05％-89.24％,DNA直方图上可见亚“G1“峰;荧光显微镜下部分细胞发生凋亡形态学改变,凋亡率为21.5％-33.5％。NF-kB（P65）表达减弱、caspase-3表达增强,并呈时间依赖性。结论：姜黄素能显著抑制卵巢癌细胞的体外生长;上调caspase-3、下调NF-kB蛋白表达、诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。     

盐酸小檗碱对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究盐酸小檗碱对人胃癌细胞及永生化胃上皮细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨其中可能的分子机制。方法：利用不同浓度的小檗碱处理胃癌细胞系MKN-45和SGC-7901细胞,以及永生化胃上皮细胞系GES细胞,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡（PI标记）,Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果：MTT结果显示与空白对照组相比,小檗碱处理后,细胞增殖速度明显受到抑制（P〈0.05）,并呈浓度依赖性,其中50μg/ml处理组最大抑制率为81.3%,这种抑制作用对胃癌细胞更为明显。流式细胞仪检测表明,小檗碱在较低浓度（10μg/ml）时即可诱导胃癌细胞出现G0/G1阻滞,S期细胞百分比减少和细胞凋亡（P〈0.05）,这种作用呈时间和浓度依赖性。Western blot结果提示小檗碱处理后,胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax及p53蛋白表达水平明显上调。结论：小檗碱可抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡,其机制与阻滞细胞周期进展以及调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和p53密切相关。     

盐酸小檗碱对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究盐酸小檗碱对人胃癌细胞及永生化胃上皮细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨其中可能的分子机制。方法:利用不同浓度的小檗碱处理胃癌细胞系MKN-45和SGC-7901细胞,以及永生化胃上皮细胞系GES细胞,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡(PI标记),Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果:MTT结果显示与空白对照组相比,小檗碱处理后,细胞增殖速度明显受到抑制(P<0.05),并呈浓度依赖性,其中50μg/ml处理组最大抑制率为81.3%,这种抑制作用对胃癌细胞更为明显。流式细胞仪检测表明,小檗碱在较低浓度(10μg/ml)时即可诱导胃癌细胞出现G0/G1阻滞,S期细胞百分比减少和细胞凋亡(P<0.05),这种作用呈时间和浓度依赖性。Western blot结果提示小檗碱处理后,胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax及p53蛋白表达水平明显上调。结论:小檗碱可抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡,其机制与阻滞细胞周期进展以及调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和p53密切相关。     

Twist下调影响卵巢癌细胞株A2780顺铂敏感性的研究

目的:探讨Twist对卵巢癌细胞株A2780顺铂敏感性及细胞增殖凋亡的影响。方法:通过Western blot筛选细胞株,构建小干扰RNA,qPCR筛选Twist-siRNA,将构建成功的Twist-siRNA逆转录于上皮性卵巢癌细胞株A2780中,通过CCK-8细胞术及流式细胞术,研究下调Twist对卵巢癌细胞株的增殖、凋亡及对化疗药物顺铂的影响。结果:选择人卵巢癌细胞株A2780,引入小干扰RNA后,Twist表达降低;细胞的增殖能力下降,凋亡增加（P＜0.05）,差异有统计学意义。si-Twist组相比对照组Twist基因的表达量明显降低, 且呈现一定的顺铂浓度依懒性差异(P<0.05）。结论:下调Twist可抑制卵巢癌细胞A2780的增殖,促进其凋亡;下调Twist卵巢癌细胞A2780对顺铂的敏感性增加。     

汉黄芩素诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡及对细胞端粒酶活性的影响

背景与目的：诱导肿瘤细胞凋亡和调节端粒酶的活性可能成为肿瘤治疗的一条新途径,体内、外实验表明,汉黄芩素具有抗氧化活性和抑制肿瘤细胞生长的功效。本研究旨在评价汉黄芩素诱导卵巢癌A2780细胞凋亡作用和抑制端粒酶活性的能力。方法：应用MTT法、荧光显微镜及琼脂糖凝胶电泳等方法检测汉黄芩素对人卵巢癌细胞A2780的作用;利用TRAP-ELISA方法观察药物处理前后细胞端粒酶活性的变化。结果：汉黄芩素明显抑制A2780细胞增殖,抑制作用呈时间和浓度依赖性,48h的IC50为85μg／ml;用浓度为50、100μg／ml的汉黄芩素作用A2780细胞48h,细胞出现明显的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯状条带。端粒酶的活性随着汉黄芩素浓度的升高而降低;当汉黄芩素浓度大于200la,g／rnJ时,A2780细胞端粒酶的活性受到明显的抑制。结论：50～250μg／ml汉黄芩素可抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导细胞凋亡,其抗肿瘤作用机制与诱导凋亡有关,抑制端粒酶活性可能起部分作用。     

miR－300对人卵巢癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的：研究 miR－300对人卵巢癌细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法：通过荧光实时定量 PCR （qRT－PCR）检测卵巢正常上皮细胞及卵巢癌细胞中miR－300的表达水平和miR－300 siRNA的沉默效果;CCK－8法检测沉默miR－300对卵巢癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测沉默miR－300对卵巢癌细胞凋亡和周期的影响。结果：miR－300在卵巢癌细胞中的表达显著高于卵巢正常上皮细胞;miR－300 siRNA可有效沉默卵巢癌细胞中miR－300的表达;沉默miR－300的表达可以明显抑制卵巢癌细胞的增殖能力,增强卵巢癌细胞的凋亡能力,并使卵巢癌细胞的周期阻滞于G1期。结论：miR－300在卵巢癌细胞的增殖、凋亡和周期过程中起着重要的调控作用。     

沉默S100A10基因对卵巢癌SKOV-3和A2780细胞周期的影响

目的 探讨沉默S100钙结合蛋白A10(S100A10)对卵巢癌SKOV-3和A2780细胞周期的影响及其相关分子机制.方法 将针对S100A10基因的shRNA转染至SKOV-3和A2780细胞中,获S100A10敲降稳转SKOV-3和A2780细胞系,采用CCK8方法检测细胞增殖能力,采用流式细胞技术检测细胞周期变...     

丹皮酚对人卵巢癌细胞A2780s增殖的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)在体外对人卵巢癌A2780s细胞增殖的影响。方法:将不同浓度的Pae作用于人卵巢癌A2780s细胞,应用MTT法检测Pae对细胞增殖的抑制作用,FCM法检测Pae对细胞周期分布及细胞凋亡率的影响。结果:7.81～250.00mg/LPae对A2780s细胞的增殖均有抑制作用,且随着Pae浓度的增加和作用时间的延长,其增殖抑制作用增强。FCM检测结果显示,31.25～250.00mg/LPae作用48h后,G0/G1期和G2/M期细胞比率下降,S期细胞比率上升;细胞出现凋亡,凋亡率随着Pae浓度的增加而上升。结论:一定浓度的Pae具有抑制人卵巢癌细胞增殖和诱导其凋亡的作用。     

索拉非尼对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的探讨索拉非尼对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响。方法采用MTT法,检测不同浓度索拉非尼(1.5、3.0、6.0、12.0、24.0μmol/L)作用人卵巢癌SKOV-3细胞24、48、72 h的抑制率;Hoechst染色法观察药物处理后细胞凋亡情况;应用索拉非尼与紫杉醇不同给药方式作用于SKOV-3细胞,流式细胞仪检测药物处理后细胞周期和凋亡率变化。结果索拉非尼对SKOV-3细胞增殖具有明显抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且呈剂量和时间依赖性;索拉非尼主要使SKOV-3细胞周期阻滞在S期,与紫杉醇联合给药后S期及G2/M期均有延长,且凋亡率较高(P<0.05)。结论索拉非尼对SKOV-3细胞增殖有显著抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,紫杉醇序于索拉非尼给药时细胞凋亡率更高。     

汉防己甲素对前列腺癌PC3细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的 研究汉防己甲素(Tetrandrine,TET)对人前列腺癌细胞PC3增殖与凋亡的影响及可能的作用机制。方法 用不同浓度TET（0、1、2、4、6、8、10 μg/ml）处理PC3细胞,锥虫蓝拒染法和MTT法检测TET对PC3细胞生长的影响,流式细胞仪检测TET对PC3细胞凋亡的诱导作用,Western blot法检测TET对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP表达的影响。结果 2 μg/ml TET作用24 h对PC3细胞生长的抑制率为（20.96±1.72）%,随着药物浓度的增加,抑制作用加强,10 μg/ml TET作用24 h对PC3细胞生长的抑制率达（89.23±4.12）%。TET能诱导PC3细胞凋亡,并能明显诱导凋亡相关基因Caspase-3的剪切活化及其底物PARP的剪切失活。结论 TET能明显抑制PC3细胞生长,诱导细胞凋亡,该作用与TET诱导细胞Caspase-3剪切激活及PARP剪切失活有关。     

拓扑替康诱导卵巢癌COC1/ DDP 细胞凋亡的分子机制初步探讨

  目的 探讨拓扑替康(TPT)对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP的杀伤和诱导凋亡活性及其作用机制。方法 MTT比色法与软琼脂克隆形成测定TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP的杀伤效应；TUNEL法和流式细胞仪研究TPT对靶细胞的凋亡诱导作用；Western blot检测TPT对COC1／DDP细胞内bcl-2、bax和caspase-3基因表达的影响以及caspase-3活性的改变。结果 TPT对COC1／DDP细胞有明显细胞毒性作用，不仅有剂量依赖性，也存在明显的时间依赖性；COC1／DDP细胞在TPT作用后出现特征性凋亡形态特征，且凋亡率由8．54％上升为23．16％(P<0．05)。TPT不影响COC1／DDP细胞内bcl-2蛋白表达，却明显增加19ax蛋白和caspase-3蛋白表达，并提高caspase-3活性。结论 TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP有明显的杀伤和促凋亡作用，其机制可能依赖于细胞内bax蛋白表达增高和caspase-3的活化。     

常规化疗药物诱导卵巢癌OVCAR-3细胞凋亡特点的分析

目的：观察抗卵巢癌药物顺铂、紫杉醇和阿霉素对卵巢癌细胞系ＯＶＣＡＲ－３体外生长和生存的影响并分析由它们所致的细胞死亡性质。方法：采用细胞形态学观察、细胞动力学检测及ＤＮＡ片段化分析等细胞和分子生物学方法,研究化疗药物对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用。结果：上述药物在抑制ＯＶＣＡＲ－３细胞生长的同时可不同程度地诱导细胞凋亡。其中,紫杉醇诱导细胞凋亡的能力最强;较低剂量紫杉醇（１０＾－８Ｍ）和顺铂（２μｇ／     

miRNA-519d对卵巢癌的生长抑制作用及其对XIAP表达的影响

目的 探讨MicroRNA-519d(miRNA-519d)对卵巢癌细胞生长抑制的作用及其对XIAP表达的影响.方法对人卵巢癌细胞系OVCAR3瞬时转染miR-519d mimic(实验组)和NC(阴性对照组),不进行任何转染为空白对照组,转染48 h后进行MTT实验、流式细胞实验、Transwell侵袭实验,观察卵巢癌细胞生长抑制状况,WB实验测定XIAP的表达变化.结果定量Real-time PCR检测显示:miR-519d的表达水平均较对阴性对照组与空白对照组有明显的增高(P<0.05).MTT检测显示:上调OVCAR3细胞内miR-519d水平后,细胞增殖抑制率为(29.81±8.24)%,而阴性照组与空白对照组分别为(2.49±0.28)%和(1.98±0.34)%,对比差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞术检测显示实验组OVCAR3细胞凋亡率为(8.33±1.39)%,而阴性对照组与空白对照组分别为(2.13±2.11)%和(1.89±1.08)%,对比差异有统计学意义(P<0.05).Transwell侵袭实验显示:转染miR-519dmimics后实验组、阴性对照组、空白对照组的三组的细胞转移能力对比无明显差异(P>0.05).Western实验结果显示:处理后实验组的XIAP蛋白相对表达量为(0.98±0.34),阴性对照组为(7.54±1.22),空白对照组为(7.67±1.32),对比差异有统计学意义(P<0.05).结论增强miR-519d的表达能对卵巢癌细胞的增殖起抑制作用,并促进其凋亡,而对卵巢癌细胞的转移没有影响,能抑制XIAP的表达,表明miR-519d在卵巢癌的生长中起到一定的抑制作用.     

大蒜素对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响

目的观察大蒜素对人成骨肉瘤细胞株MG-63增殖和凋亡的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的MG-63细胞,倒置显微镜下观察MG-63细胞的形态学变化,采用CCK-8法检测大蒜素对MG-63细胞增殖抑制能力,吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色及Annexin V-FITC标记流式细胞术检测细胞凋亡情况以及对MG-63细胞周期影响。结果大蒜素可抑制人成骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖,具有明显剂量和时间依赖性,10 μg/ml大蒜素可明显诱导MG-63细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素能够诱导MG-63细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制细胞增殖。     

华蟾素联合顺铂对卵巢癌细胞A2780增殖及凋亡的影响

[目的]研究华蟾素联合顺铂对卵巢癌细胞A2780增殖、凋亡的影响。[方法]采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测华蟾素联合顺铂对卵巢癌细胞A2780的半数抑制浓度(IC_(50))和细胞生长抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期,Hoechst染色检测细胞凋亡。[结果]华蟾素及顺铂能抑制细胞增殖,华蟾素IC_(50)为0.56mg/ml;顺铂IC_(50)为2.8μg/ml;药物对癌细胞的生长抑制率随时间延长而增强。华蟾素和顺铂对A2780细胞表现出凋亡作用,华蟾素使A2780细胞周期停滞于S期(P<0.01),顺铂使A2780细胞周期停滞于G0/G1期(P<0.05)。[结论 ]华蟾素联合顺铂可诱导A2780细胞周期阻滞和细胞凋亡,从而抑制A2780细胞生长。     

Temperature-sensitive Ovarian Carcinoma Cell Line (OvBH-1)

OvBH-1 cells from a patient with ovarian clear cell carcinoma were established and their biochemical status was analyzed. Cells grown at 37°C exhibited normal cell cycle distribution, whereas the cells shifted to 31°C were arrested in the G₂/M phase of the cell cycle. Immunochemical analysis using anti-p53 antibodies (DO-1, PAb240, PAb421, and PAbl620) revealed that only the DO-1 antibody reacted with p53 with a high and similar percentage at both temperatures. PAb240 reacted with a low percentage of cells at 37°C and no reaction was observed at 31°C. PAb421 antibody stained a significantly lower percentage of cells at 37°C than at 31°C. Cells were not stained with PAbl620 antibody and were negative for antibodies against p21^WAF1 and MDM2 proteins independently of the temperature. Sequencing of all coding exons of the p53 gene demonstrated only a neutral genetic polymorphism, i.e. a G-to-A substitution (GAG to GAA) at nucleotide position 13 432. Thus, the observed temperature sensitivity of OvBH-1 cells cannot be ascribed to a p53 primary structure mutation. Based upon immunochemical analyses, we consider, however, that p53 in nuclei of OvBH-1 cells is in a highly unstable conformation. Furthermore, the N-terminal portion of the p53 protein at Ser20 has not been modified, and Lys373 and/or Ser378 of the C-terminus is acetylated and/or phosphorylated. The nuclear location signal of p53 is preserved. Induction of MDM2 protein is uncoupled from the cell regulatory machinery and the induction of p21^WAF1 by p53 is unpaired in OvBH-1 cells.     

尼美舒利对人小细胞肺癌细胞株NCL-H446增殖的抑制作用

目的研究尼美舒利对人小细胞肺癌细胞株NCL-H446增殖的抑制作用,为临床治疗提供实验室依据。方法常规培养人小细胞肺癌细胞株NCL-H446,MTT法检测尼美舒利的细胞毒性作用;倒置显微镜与Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学变化;流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率。结果MTT显示尼美舒利呈剂量与时间依赖性抑制人小细胞肺癌细胞株NCL-H446的增殖;倒置显微镜下可见细胞变小、变圆、皱缩、部分细胞脱落飘浮于培养基中。荧光显微镜下可见细胞核染色质致密浓缩、荧光强度增强、染色质边集、核破碎,凋亡小体形成等。FCM检测结果表明尼美舒利既可诱导NCL-H446细胞凋亡,又可引起坏死,400μmol/L的尼美舒利作用细胞24h后,细胞早期凋亡率为7.65%,晚期凋亡率为29.76%,细胞坏死占23.9%。结论尼美舒利对体外培养的人小细胞肺癌细胞株NCL-H446有较显著的抑制作用,该作用与诱导细胞凋亡与坏死有关。