4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达

目的:研究共刺激分子4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达及其生物学意义。方法:流式细胞仪检测4-1BBL分子在不同的人恶性血液病细胞系的表达;用可介导4-1BBL逆向信号的鼠抗人4-1BBL单抗(mAb1F1)作用于8个不同的人恶性血液病细胞系,细胞计数法和3H-TdR掺入法评价细胞系的体外生长和增殖。结果:FACS结果显示4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系上有不同程度的表达,其中髓性白血病细胞系U937、HL60及B淋巴瘤细胞系Raji、Daudi上呈现较高水平的表达。细胞计数和3H-TdR掺入实验结果表明mAb1F1对髓性白血病细胞系U937和HL60,具有较强的促增殖效应。结论:共刺激分子4-1BBL分子在髓性白血病细胞系和B淋巴瘤细胞系上表达率较高;4-1BBL分子可通过介导逆向信号促进髓性白血病细胞系U937和HL60的生长和增殖。     

来源于门静脉癌栓的人肝癌细胞系CSQT-1的建立及生物学特性分析

目的:从肝癌及门静脉癌栓中分别取材建立人肝癌细胞系,探讨其生物学特性。方法:取人肝癌及门静脉癌栓新鲜手术标本,利用胶原酶消化法进行肿瘤细胞原代培养并扩大克隆培养建系。采用光镜、电镜、染色体核型分析及异种移植瘤实验对新建细胞系生物学特性进行观察。结果:来源于门静脉癌栓的人肝癌细胞在体外稳定培养已经将近1年,传至100余代,命名为CSQT-1。该细胞系具有典型的恶性上皮细胞特征,其群体倍增时间为48 h;染色体中位数为87~90,为亚四倍体;裸鼠皮下异种移植可形成移植瘤,该细胞系中CD133+表达比较稳定。结论:细胞系特征显示该细胞系是一株新建的来源于门静脉癌栓的人肝癌细胞系。     

lncRNA CASC9通过调控miR-424-5p/SOX9分子轴对食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性候选基因9(CASC9)通过调控miR-424-5p/SOX9分子轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞恶性生物学行为的影响.方法 采用RT-qPCR检测CASC9在食管鳞状细胞癌组织、配对癌旁组织、食管鳞状细胞癌细胞系(KYSE450、KYSE150、EC190、EC9...     

THE ESTABLISHMENT OF THE NORMAL HUMAN FIBROBLAST CELL LINE AND A STUDY OF ITS BIOLOGICAL CHARACTERIZATION

用正常成人包皮组织建立NHF8细胞系在体外长期传代培养达400余天。细胞形态为成纤维样并呈规则的放射状生长。细胞培养于含有15％小牛血清的Ⅰ号培养液中并以1:2比例传代培养。细胞系的群体倍增肘间为26小时,其生长曲线呈“S”形。该细胞系染色体众数为46,自发姐妹染色单体交换率(SCE)为0.144/每染色体,紫外线(UV)诱发SCE率为0.143/每染色体。该细胞系经UV诱发的非合成期DNA修复合成(UDS)水平也是正常的。上述结果表明,NHF8细胞是具有正常DNA损伤修复功能的人二倍体细胞系,可以用于许多研究中作为正常对照细胞。此外,我们还利用该细胞系进行了体外细胞恶性转化及环境诱变物质检测等方面的工作。     

肝癌癌基因的研究进展

1癌基因的概念 Oncogene(以下简称Onc,即“癌基因”).癌基因本质上是DNA片段序列.这种DNA片段有特定的核苷酸排列顺序,能使体外培养的易感细胞(最常用的是处于癌前阶段的NIH/3T3小鼠成纤维细胞株)转化为具有类似体内癌细胞表型特征的转化细胞.癌基因首     

人胃肠间质瘤细胞系的建立及其生物学特性

目的：从切除的人小肠间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GIST)组织建立一株间质瘤细胞系,初步鉴定其生物学特性。方法：取人小肠间质瘤组织切成小块,置于含10%胎牛血清、青霉素、链霉素和庆大霉素的RPMI 1640培养基中进行培养,待细胞长满90%汇合面后消化传代培养,并进行形态学、生长动力学、免疫组织化学（免疫组化）及致瘤性等生物学特性研究。结果：成功建立GIST细胞系,命名为GIST-H1 细胞系。该细胞系已在体外培养生存1年,传60余代。免疫组织化学分析显示该细胞CD117（+）,SMA（+）,dog-1（+）,CD34（-）及S-100（-）;该细胞系体外生长的倍增时间为47.5 h;软琼脂集落形成率为24.8%;透射电镜下可观察到该细胞富含线粒体和内质网,多数细胞表面无绒毛,胞核呈卵圆形;染色体核型分析为非整倍体,众数为60~98条;该细胞接种至裸鼠皮下后致瘤性为100%。结论：间质瘤细胞系在体外长期培养后已永生化,形成了可连续传代的细胞系,且具有明显的间质瘤细胞恶性表型特征。     

人肝细胞肝癌细胞系HCC-9903生物学特性的初步观察

目的新建一株人肝癌细胞系,为肝癌研究提供新的实验模型.方法用组织块法培养,并按细胞系建立标准检测细胞的一系列生物学特性.结果细胞维持培养15个月,传代100代,细胞形态及超微结构具有恶性细胞的特征,45代细胞的倍增时间为21.3h,细胞能在软琼脂上生长,形成集落,染色体众数60～67条,主干系为亚三倍体.1q(i)和t(6,11)为其标记染色体,细胞对刀豆球蛋白有凝集反应,5×106细胞接种于裸鼠皮下,肿瘤呈进行性生长.结论该细胞系符合建系标准,是一株新建的肝癌细胞系.     

不同肿瘤细胞系对HPD的摄取及光敏杀伤效应的观察

由于血卟啉衍生物(HPD)能选择性地蓄积在癌细胞内,当被光激活后具有杀伤肿瘤的性能,而起到治疗作用。本实验采用荧光分光光度法研究了3株人癌细胞系在相同剂量和相同药物作用时间摄取HPD的情况,以及对HPD加红光照射后的光敏杀伤效应。材料和方法1.细胞:体外培养的人胃低分化粘液腺癌细胞系MGc 80-3,人鼻咽癌细胞系CNF     

细胞培养中癌变原理的研究——Ⅳ.金仓乳鼠肺恶性转化细胞(BHLB_4)不同克隆系中15号染色体单体性频率与其恶性表达关系的研究

本文从BHLB_4转化细胞系中,分离出5个克隆:Cl-1、Cl-2、Cl-3、Cl-4、Cl-5,对其生物学特性进行分析比较。发现15号染色体单体性频率与细胞转化表型及恶性表型间具有正相关性。由此推断,15号染色体上,可能存在着抑制细胞恶性表型的基因。     

黑色素瘤细胞系HME1的建立及其生物学特性分析

目的：建立一株黑色素瘤细胞系,并分析其体外生物学特性。方法：取黑色素瘤活检组织进行组织块法原代培养,待长满90%后,消化传代培养并进行生长动力学、形态学及致瘤性等生物学特性鉴定。结果：该细胞系已在体外培养生存18个多月,传90余代。其生物学特性如下：该细胞系接种至裸鼠后可致瘤,其移植瘤细胞形态与原实体瘤相似;检测第20代细胞生长曲线,其倍增时间为56.9 h;第20代细胞软琼脂集落形成率平均为19.1%;染色体核型分析为非整倍体,众数为 92条;透射电镜下可观察到细胞表面有丰富的微绒毛、核糖体及黑色素颗粒;SP免疫组化分析显示,细胞有HMB-45表达。结论：该黑色素瘤细胞经体外培养后已永生化,形成了连续传代细胞系,具有黑色素瘤恶性表型的特征。     

稳定高效表达p21~(WAF1/CIP1)的HCT/8-WAF1细胞株的建立

目的 :建立高效、稳定表达 p2 1 WAF1/ CIP1大肠癌细胞株 HCT/8- WAF1。方法 :应用阳离子脂质体分别将带有目的基因 WAF1的 pc DNA3及空白 pc DNA3质粒转染大肠癌细胞株 HCT/8,经G41 8进行阳性筛选 ,将筛选的阳性细胞连续传代培养 ,应用免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1/ CIP1的表达。结果 :经 G41 8筛选后 ,空白对照细胞全部死亡 ,转染目的基因及空质粒组的细胞存活 ,可连续传代培养 30代以上 ,并选择 HCT/8作对照 ;免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1/ CIP1表达结果显示转染目的基因的 HCT/8细胞 p2 1 WAF1/ CIP1表达阳性细胞率 ( 89.96% )显著高于转染空质粒组 ( 8.0 2 % )和空白对照组 ( 3.39% ) ( F=1 6 60 8.99,P<0 .0 0 1 ) ;各代间差异无显著性 ( F=2 .1 71 ,P>0 .0 5 )。结论 :HCT/8- WAF1是一株高效、稳定表达 p2 1 WAF1/ CIP1的大肠癌细胞株     

稳定高效表达p21WAF1/CIP1蛋白的Hela细胞株的建立

目的：建立高效、稳定表达p21WAF1/CIP1人宫颈癌细胞株Hela-pcDNA3-WAF1。方法：应用脂质体(lipofectin)将质粒pcDNA3和重组质粒pcDNA3-WAF1分别转入人宫颈癌细胞系Hela细胞；经G418筛选，转染阳性细胞连续传代培养，并应用免疫荧光技术监测重组基因p21WAF1/CIP1翻译水平的表达活性。结果：经G418筛选，Hela细胞全部死亡，转染质粒pcDNA3和重组质粒pcDNA3-WAF1的Hela细胞存活，并可连续传代培养30代；免疫荧光技术监测p21WAF1/CIP1表达结果显示：转染重组质粒pcDNA3-WAF1的Hela细胞p21WAF1/CIP1表达阳性细胞率（92.83%）显著高于转染质粒pcDNA3（12.26%）和Hela细胞组（5.63%）（F=17 218.22，P<0.001）；各代间差异无显著性（F=1.562，P>0.05）。 结论：建立一株高效、稳定表达p21WAF1/CIP1人宫颈癌细胞株Hela-pcDNA3-WAF1。     

人参细胞培养过程中染色体变异的研究

本文对继代培养了1～8年的人参愈伤组织和细胞株系进行了染色体变异和形态特征的显微观察。研究认为,人参细胞在长期培养过程中逐步向脱分化、薄壁化、球形和液泡化方向变化,同时,细胞分裂生长的速度加快,遗传变异不断增加。对细胞株SI796—1的观察,发现了具双核、四核和八个核的细胞变异类型以及细胞染色体倍数性变异和非整倍性变异;在细胞分裂后期相中,有较多的染色体桥和无着丝点染色体落后以至散失在细胞质中的现象。分析了长期培养细胞形态特征变异和遗传变异的原因以及选育高产细胞株的问题。     

小鼠肝癌细胞系H_(22)—F_(25)/L的建立及其生物学特性

利用自建的小鼠肿瘤淋巴道转移模型(H22—F25)进行体外培养160代,建成了培养细胞系(H22—F25/L)瘤细胞呈悬浮生长,增殖迅速,生长稳定。细胞分裂指数高峰在48小时,细胞增殖高峰为96小时,增殖25倍,H22—F25/L仍保留低分化癌的特征,在615小鼠体内的致瘤率为100％,淋巴结转移率为50％,同时伴有肺转移率为10％。H22—F25/L是一个异质的细胞群体,染色体干系为43(占40％)和86(占32％),其余的旁系各占2～8％。他们有共同的标记染色体M_1、M_2、M_3、M_4,说明相互间有“血缘”关系。     

人星形细胞瘤细胞系JCBI的建立及其特性观察

一株人类星形细胞瘤细胞系在体外已连续传代培养近3年,传至180代。定名为JCBI。其形态具有恶性肿瘤细胞的典型特征;细胞倍增时间为70h;培养第6天时细胞分裂指数为33‰;平板集落形成率为49％;染色体数是83条(35％)和82条(27％),为亚四倍体核型,染色体具有明显异常;在免疫抑制小鼠皮下异种移植成功,成瘤率为87.5％;电镜观察JCBI细胞浆内含有丰富的胶质微丝。用抗GFAP抗体进行免疫细胞化学染色,发现JCBI细胞呈GFAP阳性,证明JCBI确为星形细胞来源的恶性肿瘤。本细胞系的建立为胶质瘤研究提供了一个较好的细胞实验模型。     

MH134-88体外细胞系的建立及其生物学特性的研究

MH134-88是将用四氯化碳诱发成功的C_3H/HeN系小鼠的腹水型肝癌株(MH134)经极限稀释及克隆化方法在体外培养,连续传代而建成的一个纯度较高的小鼠肝癌细胞系。MH134呈悬浮培养,生长迅速,特性稳定,迄今已传200余代。本文对其生物学特性进行了较系统的观察与研究。支原体检测阴性,具有较大推广应用的价值。     

长期传代后HL-60细胞内脱氧胞苷激酶与阿糖胞苷耐药性的关系

 目的  通过观察人早幼粒白血病细胞系(HL-60)及其耐药细胞株(HL-60/R)经过长期传代后细胞内脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase, dck) mRNA表达及其酶活性的变化规律,探讨dck与阿糖胞苷(Ara-C)疗效及耐药现象发生的相关性。方法  分别采用实时PCR方法和核素液闪法测定HL-60和HL-60/R细胞内dck的mRNA表达水平及其酶活性水平。通过体外培养传代,观察2种细胞株经长期传代(5、10、20、30、40、50代)后细胞内dck的mRNA表达及酶活性的变化规律。结果  传代初期结果显示,HL 60和HL 60/R两组细胞株之间的mRNA表达水平分别为0.37±0.03和0.17±0.03,活性值分别为0.069±0.006 nmol·min-1·mg-1 protein和0.019±0.007 nmol·min-1·mg-1 protein,HL-60的dck mRNA表达水平和酶活性均明显高于HL-60/R(P<0.01)。并且两组细胞株之间的显著性差异(P<0.01)持续存在于各传代过程中。HL-60和HL-60/R两组各传代节点(10、20、30、40和50代)的dck mRNA表达水平与酶活性与本组第5代细胞相比,则无明显变化(P>0.05)。结论  HL-60及HL 60/R两组细胞株间的dck mRNA表达和酶活性在传代初期存在显著差异,且两组间的差异持续存在。但与各自的初期传代相比,长期传代后的dck mRNA表达和酶活性变化并不明显,提示dck仅与Ara-C的初期疗效明显相关,而与Ara-C耐药现象的发生可能无关。     

双遗传标记细胞系Wg3h—neo的建立

利用基因转移技术可以把选择标记基因导入哺乳动物的细胞中,使其带有某种选择标记.neo基因是最常用的选择标记基因,摄取了这一基因的细胞能在含有G 418的培养基中生长,缺少这一基因的细胞在含有G 418的培养基中死亡.本文利用DNA—磷酸钙共沉淀法,把含有neo基因的PSV_2-neo质粒转移到HGPRT缺陷的中国仓鼠成纤维细胞系Wg 3 h中,得到了稳定的双遗传标记细胞系Wg 3h-neo,并对这一细胞系进行了初步鉴定.     

C-myc癌基因在正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株上的表达

目的探讨癌基因C-myc在正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株上的表达情况。方法分离正常人外周血淋巴细胞,采用异硫氰酸胍一步法提取正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株RNA,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,比较正常人与肿瘤细胞株C-myc mRNA表达程度。结果 HL-60细胞系C-myc RNA表达最强,GBC胃癌细胞株较正常人为高。结论 C-myc参与了正常、异常细胞生长的调节。