组织工程皮肤的构建及组织形态学观察

背景：应用于临床的组织工程皮肤具有血管化速度慢、力学强度差以及无法永久性保留等局限,因此,需要对相关技术环节进行改进以制备一种合适的永久性皮肤替代物。 目的：建立一种构建有活性的双层组织工程皮肤的方法,并对其组织形态学进行观察。 方法：以Ⅳ型胶原和成纤维细胞联合修饰的同种脱细胞真皮基质为支架,与表皮干细胞复合后依次经浸没式培养和气液分离界面培养构建组织工程皮肤,利用光镜和扫描电镜对其组织学特点进行观察和分析。 结果与结论：以表皮干细胞和同种脱细胞真皮基质制备的组织工程皮肤具有表、真皮双层结构,其中表皮由多层不同分化程度的表皮细胞组成,真皮为天然三维孔隙结构,胶原纤维完整,且表皮层与真皮层紧密连接,形成整体结构,可满足全层皮肤替代物的基本组织学要求。     

脱细胞猪真皮基质与自体微粒皮复合移植28例

目的 观察脱细胞猪真皮基质作为微粒皮移植术覆盖物治疗大面积深度烧伤创面的临床效果.方法 对收治的28例大面积深度烧伤患者行早期切(削)痂术或肉芽创面清创微粒皮移植,以脱细胞猪真皮基质为覆盖物.术后观察患者全身反应、脱细胞猪真皮基质脱落过程、创面愈合等情况.结果 2例患者术后因高热、创面感染、营养不良致脱细胞猪真皮基质1周内溶脱,后经再次手术修复；26例患者术后无严重不良反应,5～7d首次换药见脱细胞猪真皮基质与创面贴附紧密、干燥、呈黄褐色或粉红色、无皮下积液.2周后脱细胞猪真皮基质保持完整干燥,颜色加深.3周后脱细胞猪真皮基质逐渐与创面分离.脱细胞猪真皮基质脱落后21例创面1次性封闭,外观平整；5例残留极少未愈创面,经2～5次换药愈合.结论 以脱细胞猪真皮基质为覆盖物的微粒皮移植术临床效果良好,脱细胞猪真皮基质能够始终保持干燥完整,不易积液,减少术后创面感染的概率.     

异种羊脱细胞真皮基质与自体微粒皮复合移植后创面愈合及COX-2、VEGF的表达研究

目的 制备异种羊脱细胞真皮基质(ADM),观察异种羊ADM与自体微粒皮复合移植的组织学变化,以及免疫组化法检测环氧化酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)在复合移植过程中的表达.方法 用0.25%胰蛋白酶和0.5%曲拉通(Tritonx-100)溶液联合脱细胞法制备异种羊ADM.以48只wistar大鼠为动物模型随机分为2组,每组各24只,背部做4 cm×3 cm全层皮肤缺损,分组采用羊ADM+自体微粒皮+异体皮(实验组)及自体微粒皮+异体皮(对照组)覆盖,术后2、4、6周观察植皮区愈合情况,检测创面收缩率;同时,在以上不同时间段处死大鼠做组织病理学观察及免疫组化检查.结果 (1)通过实验可成功制备出合格的异种羊ADM,脱细胞异种皮的镜下观察可见基质中的表皮已经完全除去,胶原纤维粗细均匀,排列规则,没有细胞成份存在.(2)进行移植术后,观察6周,两组皮片创面基本愈合,两组创面收缩率差异具有统计学意义(P<0.05),实验组术区收缩程度低,组织学检查可见成纤维细胞和血管长人,胶原纤维、弹力纤维结构排列规则;对照组创面收缩明显,组织学检查见成纤维细胞和血管无规则生长,胶原纤维、弹力纤维结构排列紊乱.两组大鼠创面COX-2、VEGF表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 异种羊ADM在彻底脱除了基质中有免疫原性的细胞成分的同时,又保留了组织的基本结构,成为极低抗原性的真皮支架,是一种良好的真皮替代物;异种羊ADM与自体微粒皮复合移植后外观和功能优于自体微粒皮移植;COX-2,VEGF可能参与了创面的修复.     

脱细胞异体真皮基质与人脂肪干细胞的生物相容性

背景：脱细胞异体真皮基质具有优良的生物相容性和组织细胞诱导功能。 目的：评价人脂肪干细胞与脱细胞异体真皮基质的生物相容性。 方法：取健康成年人吸脂术后的脂肪组织分离脂肪干细胞,并行原代与传代培养,传至第3代,将细胞与脱细胞异体真皮基质联合体外培养3,7 d,倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞在支架材料上的黏附、生长及增殖情况,并计算细胞在材料上的黏附率;XTT比色法检测细胞的生长增殖情况。 结果与结论：脂肪干细胞在支架材料上分布均匀,24 h内细胞开始伸展、黏附,二三天完全伸展变形,以梭形为主,呈网状排列;随着培养时间延长,支架上的细胞逐渐增多;人脂肪干细胞细胞与脱细胞异体真皮基质混合培养后平均黏附率为95.03%,并保持正常的生长增殖速度,表明支架对细胞具有良好的黏附性;脱细胞异体真皮基质材料与人脂肪干细胞复合后相容性良好。     

脱细胞真皮基质修复组织缺损研究进展

脱细胞真皮基质(ADM)是一类经过特殊方法分离皮肤表皮与真皮,去除真皮层内的朗格汉斯细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等附件细胞以及抗原成公主要组织相容性复合物(MHC)而仅保留胶原纤维、弹力蛋白等细胞外基质的特殊生物材料.ADM不引起机体排斥反应,为组织修复提供了良好支架,便于血管化和宿主细胞植入.其制备过程包括分离表皮与真皮、脱细胞成分及打孔、冷冻干燥等.根据分类方法的不同,ADM可分为同种异体ADM和异种ADM、补片型及注射型ADM、交联型与非交联型ADM,同时已有产品相继问世,可根据临床需要进行选择.ADM现已广泛应用于各外科领域,如深度皮肤烧伤、乳腺癌术后乳腺重建、修复口腔黏膜、腹壁疝及声带麻痹等.因其自身特点,临床应用前景广阔.就ADM近年来的研究进展作一综述.     

脱细胞真皮基质及其临床应用

脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix,ADM）作为一种永久性真皮支架已成功用于皮肤创面修复、组织充填、重建及美容整形领域。由于ADM去除了皮肤组织中的细胞成分和部分可溶性蛋白,使其免疫原性显著降低,并且提高了组织相容性,被广泛应用于烧创伤所致的皮肤缺损以及口腔黏膜修复、腹壁缺损修补、硬脑膜修补、软硬组织充填及乳房重建等领域,此外,作为人工真皮的支架材料还被应用于组织工程皮肤的构建。     

异种羊脱细胞真皮基质与白体微粒皮复合移植后创面愈合及COX-2、VEGF的表达研究

目的制备异种羊脱细胞真皮基质（ADM）,观察异种羊ADM与白体微粒皮复合移植的组织学变化,以及免疫组化法检测环氧化酶-2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）在复合移植过程中的表达。方法用0．25％胰蛋白酶和O．5％曲拉通（TritonX-100）溶液联合脱细胞法制备异种羊ADM。以48只Wistar大鼠为动物模型随机分为2组,每组各24只,背部做4cm×3cm全层皮肤缺损,分组采用羊ADM＋自体微粒皮＋异体皮（实验组）及自体微粒皮＋异体皮（对照组）覆盖,术后2、4、6周观察植皮区愈合情况,检测创面收缩率;同时,在以上不同时间段处死大鼠做组织病理学观察及免疫组化检查。结果（1）通过实验可成功制备出合格的异种羊ADM,脱细胞异种皮的镜下观察可见基质中的表皮已经完全除去,胶原纤维粗细均匀,排列规则,没有细胞成份存在。（2）进行移植术后,观察6周,两组皮片创面基本愈合,两组创面收缩率差异具有统计学意义（P〈0．05）,实验组术区收缩程度低,组织学检查可见成纤维细胞和血管长入,胶原纤维、弹力纤维结构排列规则;对照组创面收缩明显,组织学检查见成纤维细胞和血管无规则生长,胶原纤维、弹力纤维结构排列紊乱。两组大鼠创面COX-2、VEGF表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论异种羊ADM在彻底脱除了基质中有免疫原性的细胞成分的同时,义保留了组织的基本结构,成为极低抗原性的真皮支架,是一种良好的真皮替代物;异种羊ADM与自体微粒皮复合移植后外观和功能优于白体微粒皮移植;COX-2,VEGF可能参与了创面的修复。     

NaOH消蚀法制备脱细胞真皮基质修补腹壁疝

背景：与其他疝修补材料相比,脱细胞真皮基质具有易血管化、抗感染、从而可用替代传统补片用于感染腹壁缺损重建等特点。 目的：观察NaOH消蚀法制备的脱细胞真皮基质作为修补材料应用于腹疝的应用价值。 方法：以全厚猪皮制成脱细胞真皮基质,45只SD雄性大鼠制备腹壁疝模型,随机数字表法分为腹壁疝组：直接缝合皮肤,Marlex网组和脱细胞真皮基质组：分别应用大小为3.5 cm×4.0 cm的Marlex网和脱细胞真皮基质缝合皮肤;观察修复后1周时有无腹壁疝发生,脱细胞真皮基质组修复后1,2,3,5,10周分别取材,其中每周各组取4只用于苏木精-伊红染色,光镜观察。修复后第5周Marlex网组和脱细胞真皮基质组各取6只用于抗张力试验。 结果与结论：术后1周脱细胞真皮基质组与Marlex网组腹壁疝发生率均显著低于腹壁疝组(P < 0.001)。脱细胞真皮基质的胶原纤维无明显变化,即有少量成纤维细胞植入,术后2周可见新生血管,术后5周脱细胞真皮基质内部血管密度基本稳定。将单独脱细胞真皮基质片与Marlex网行抗张力试验,Marlex网的抗张力显著高于脱细胞真皮基质(P < 0.001)。但植入体内5周后,脱细胞真皮基质筋膜组织的抗张力高于Marlex-筋膜组织(P < 0.05)。提示复合消蚀制备的脱细胞真皮基质可以作为良好的疝修补材料。     

骨髓间充质干细胞-脱细胞真皮基质对大鼠表皮缺损的修复

目的研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)-脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)对SD大鼠皮肤表皮缺损的修复。方法培养SD大鼠骨髓细胞,增殖提纯传代至4代时,成骨成脂,流式细胞仪检测鉴定BMSC,然后将其接种到ADM,2d后移植到皮肤表皮缺损的SD大鼠体内,连续5周观察其修复效果。结果 BMSC-ADM修复SD大鼠皮肤表皮缺损效果良好,5周后,肉眼可见材料与组织结合紧密,有弹性,颜色接近皮肤。结论 BMSC-ADM可以作为修复SD大鼠皮肤表皮缺损的组织工程材料。     

基因修饰牙龈成纤维细胞及脱细胞真皮基质制备牙周组织工程复合物

背景：前期研究发现人血小板源性生长因子B基因转染的牙龈成纤维细胞能够在体外快速增殖,且能够向胞外分泌血小板源性生长因子BB蛋白。目的：了解人血小板源性生长因子B基因修饰牙龈成纤维细胞植入脱细胞真皮基质后,在体内形成牙周组织工程化复合物的能力。方法：将人血小板源性生长因子B基因转染与未转染的Beagle犬牙龈成纤维细胞分别接种于脱细胞真皮基质上,观察细胞在脱细胞真皮基质上的生长情况。将人血小板源性生长因子B基因转染犬牙龈成纤维细胞-脱细胞真皮基质复合物(实验组)、犬牙龈成纤维细胞-脱细胞真皮基质复合物(对照组)及脱细胞真皮基质(空白组)分别植入裸鼠背部皮下,植入后2,4,8周,取背部标本进行组织学观察。结果与结论：人血小板源性生长因子B基因转染与未转染的犬牙龈成纤维细胞均能在脱细胞真皮基质上良好生长。植入后8周,空白组周围的细胞大面积进入脱细胞真皮基质内,部分脱细胞真皮基质出现完全自体化,尽管细胞进入较多,但新生成的胶原纤维较少,细胞只是占据原有的胶原支架生长;对照组开始出现大面积新生胶原纤维,脱细胞真皮基质上原有的胶原纤维逐步被新生的胶原替代,但原有的胶原结构得到保留;实验组出现大面积完全矿化,可见沿原有胶原支架排列的矿化颗粒。表明接种人血小板源性生长因子B基因修饰牙龈成纤维细胞的脱细胞真皮基质在体内获得了成骨性能。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程