散发性扩张型心肌病相关TBX20基因突变谱分析

目的:分析散发性扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)相关TBX20基因突变谱。方法:从中国汉族人群中选择105例散发性DCM患者和130名健康对照者,采集静脉血并使用核酸纯化试剂盒纯化基因组DNA,采用PCR试剂扩增TBX20基因的全部编码外显子,对扩增的TBX20基因片段进行测序,将所得序列与GenBank数据库中的TBX20基因序列进行对比,借助MUSCLE分析突变氨基酸在进化上的保守性,应用MutationTaster和PolyPhen-2预测突变的致病性。结果:在1例散发性DCM患者识别出了1个新的杂合性TBX20基因变异c.832GA,即p.D278N突变,但该突变在130名对照者和其他散发性DCM患者中均未检出。跨物种TBX20蛋白序列比对分析表明,第278位的天冬氨酸在进化上保守,该TBX20基因突变具有致病性。结论:发现散发性DCM相关TBX20基因新致病性突变c.832GA,将有助于DCM患者的遗传咨询和个体化处理。     

特发性心房颤动相关TBX5基因新突变的识别

目的:识别特发性心房颤动(房颤)相关TBX5基因新突变。方法:入选特发性房颤患者116例及健康对照者200名,获取临床资料和外周静脉血标本,抽提全部研究对象的基因组DNA,扩增TBX5基因的全部编码外显子及其侧翼内含子,对扩增片段进行测序以寻找变异。检索PubMed和SNP数据库以明确所发现基因变异的新颖性。应用MUSCLE软件分析多物种TBX5蛋白,以显示被改变氨基酸在进化上的保守性,并应用在线程序MutationTaster和PolyPhen-2分析基因变异的致病性。结果:在1例家族史阴性的特发性房颤患者发现了1个TBX5基因变异,其TBX5基因编码核苷酸序列第314位的腺嘌呤变成了胸腺嘧啶(c.314AT),所编码蛋白的氨基酸序列第105位的天冬氨酸变成了缬氨酸(p.D105V)。该突变不存在于200名对照者,也不存在于PubMed和SNP数据库中。多序列比对分析显示第105位的天冬氨酸在进化上完全保守。在线程序分析表明所识别的基因变异具有致病性。结论:发现了1个特发性房颤相关TBX5基因新突变,提示TBX5基因突变可能是特发性房颤的少见遗传病因。     

高胆固醇血症患者枯草溶菌素转化酶9基因突变研究

目的探讨国人单纯性高胆固醇血症患者人类枯草溶菌素转化酶9基因突变情况。方法排除载脂蛋白B100基因Q3500R位点突变及低密度脂蛋白受体基因突变后的100例单纯性高胆固醇血症患者,提取其基因组DNA,采用聚合酶链反应方法扩增枯草溶菌素转化酶9基因的12个外显子,进行DNA测序分析,同时选100例健康人群作为对照。结果 100例高胆固醇血症患者中,6例发现3处错义突变(D320N、V312F、R319E)、1处框移突变(934delGV312S)、3处同义突变(A305A、Q342Q、K125K)和1处剪接点突变(第2内含子5’剪接位点突变)。结论枯草溶菌素转化酶9基因在以上位点发生的突变可引起单纯性高胆固醇血症。枯草溶菌素转化酶9基因突变可能与国人高胆固醇血症有关。     

汉族散发法洛四联症患儿GATA6、TBX20基因的表达研究

目的:通过研究中国汉族法洛四联症(tetralogy of Fallot,TOF)患儿心肌中GATA6、TBX20基因的表达变化,初步探讨GATA6、TBX20基因与汉族TOF分子发病机制之间的关系。方法:实验组选取中国汉族TOF患儿15例,年龄6.5个月～8岁,平均1.9岁,术中常规切除并留取右心室流出道肥厚心肌;对照组选取汉族室间隔缺损患儿15例,年龄4.5个月～5岁,平均2.2岁。术中留取患儿右心房壁少量心肌组织。提取心肌组织RNA,应用实时荧光聚合酶链反应检测两组心肌中的GATA6、TBX20基因mRNA表达;应用免疫组化染色技术,检测两组心肌中的GATA6、TBX20蛋白的表达并进行统计学比较分析。结果:TOF患者心肌中GATA6、TBX20基因mRNA和蛋白表达水平均较对照组显著降低,差异有统计学意义;同时,TOF患儿心肌TBX20mRNA水平与患儿肺动脉指数呈正相关(r=0.6782,P<0.05)。结论:人类心肌中存在GATA6、TBX20mRNA和蛋白的表达;在中国汉族人群中,TOF的发生可能与心肌组织中GATA6、TBX20基因表达下调有关。     

儿童先天性心脏病TBX20基因突变及功能探讨

目的：对先天性心脏病（先心病）患儿进行TBX20基因突变研究,探讨TBX20基因与先心病发生机制之间的关系。方法：对203例中国汉族先心病患儿（病例组）进行TBX20基因编码区测序,同期300例门诊体检健康儿童为对照组,检测可能的先心病相关性基因突变。对新发现的突变应用蛋白质结构预测服务器I-TASSER进行同源建模,对TBX20基因野生型及突变后的蛋白质结构模型进行预测分析。并进一步构建TBX20野生型及突变型表达载体,分别转染到COS7细胞中,通过双荧光素酶报告基因检测它们在NKX2.5、GATA4协同作用下对下游靶基因心钠素（ANF）启动子转录激活作用的影响。结果：（1）病例组1例房间隔缺损患儿发现一个新的TBX20基因错义突变c.187G>A(A63T),DNA序列中第187位鸟嘌呤突变为腺嘌呤,导致氨基酸序列中第63位丙氨酸变为苏氨酸,在对照组中均未发现该变异。（2）对错义突变A63T进一步研究中,TBX20同源建模显示第63位的非极性、疏水性丙氨酸变为极性、亲水性的苏氨酸,与Gly65、Gly68间的氢键断裂,与Asp62、His64形成新的氢键,导致蛋白质构象发生变...     

老年重症肺炎与sICAM-1、IL-1R1、CD40L及TBX21基因多态性的相关性

目的探讨老年重症肺炎与可溶性细胞间黏附分子(sICAM)-1、白细胞介素-1受体1型(IL-1R1)、肿瘤坏死因子相关激活蛋白(CD40L)及TBX21基因多态性的相关性。方法选择老年重症肺炎患者120例作为观察组;选择同期老年普通肺炎患者113例作为对照组。采用捷斯特肺功能仪测定第1秒最大呼吸容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)及最高呼气流速(PEF);采用酶联免疫吸附试验测定sICAM-1、IL-1R1和CD40L水平;采用实时荧光定量PCR法检测TBX21基因位点rs16947078基因型和基因分布。比较两组肺功能,sICAM-1、IL-1R1和CD40L表达,TBX21基因位点rs16947078基因型和基因频率。结果观察组FEV1、FVC和PEF明显低于对照组(P0.05)。观察组血清sICAM-1、IL-1R1和CD40L水平明显高于对照组(P0.05)。观察组TBX21基因位点rs16947078等位基因G分布明显高于对照组,而等位基因A分布明显低于对照组(P0.05)。观察组TBX21基因位点rs16947078基因型GG频率明显高于对照组而基因型AG频率明显低于对照组(P0.05);而两组TBX21基因位点rs16947078基因型AA比较无明显差异(P0.05)。结论老年重症肺炎患者血清sICAM-1、IL-1R1和CD40L水平升高,且TBX21基因位点rs16947078等位基因G可能为重症肺炎易感基因。     

泛癌组织中T-box转录因子19基因水平与患者预后和肿瘤免疫微环境的相关性

目的 基于数据库数据分析泛癌组织中T-box转录因子19(TBX19)表达水平与患者预后和肿瘤免疫微环境（免疫细胞浸润、免疫检查点基因、肿瘤突变负荷和微卫星不稳定性）之间的关系。方法 从癌症基因组图谱（TCGA）数据库中获取泛癌组织及相应正常组织中TBX19表达水平，比较不同WHO分级和TNM分期泛癌组织中TBX19表达水平，使用Cox回归分析TBX19表达水平与肿瘤患者预后的关系。基于肿瘤免疫估算数据库（TIMER2）数据，采用Pearson法分析TBX19表达水平与免疫细胞浸润丰度的相关性；在Sanger Box网站中利用TCGA数据库采用Pearson方法分析TBX19表达水平与免疫评分、肿瘤突变负荷和微卫星不稳定性的相关性；基于临床生信之家数据库数据，采用Spearman法分析TBX19表达水平与免疫检查点基因的相关性。结果 在膀胱尿路上皮癌、胆管癌、结肠癌（COAD）、结直肠癌（COADREAD）、食管癌、头颈鳞状细胞癌、肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌、混合肾癌、肝细胞癌（LIHC）、肺腺癌、肺鳞癌、嗜铬细胞瘤和副神经节瘤、直肠腺癌、胃癌、胃和食管癌癌组织中TBX19高表达（P...     

法洛四联症患者ZFPM2/FOG2基因编码区突变检测

目的 探讨心脏正常发育相关基因改变导致法洛四联症（TOF）的发生机制.方法 通过聚合酶链反应,并结合DNA测序分析方法检测散发106例TOF患者ZFPM2/FOG2基因编码区的突变或单核苷酸多态性位点.结果 在16例不同的患者ZFPM2/FOG2基因的外显子2、6、8上,分别发现多个位点基因改变,并将新发现的基因改变位点在110名健康人中进行验证,证实其改变位点均为突变位点.结论 ZFPM2/FOG2基因新位点的突变可能通过不同的机制进一步导致转录蛋白的改变,推测是法洛四联症发病的重要遗传基础.     

散发性先天性心脏病相关SMAD1基因新突变研究

目的：研究散发性先天性心脏病相关SMAD1基因新突变。方法：入选202例散发性先天性心脏病患儿和238名健康者,收集其临床资料和血标本并常规抽提基因组DNA,测序分析SMAD1基因以发现致病新突变。克隆SMAD1基因,构建野生型SMAD1表达载体SMAD1-pcDNA3.1,通过定点诱变产生突变型SMAD1-pcDNA3.1,转染COS7细胞,应用双荧光报告基因分析试剂研究突变的功能特性。结果：在1例散发性先天性右心室双流出道合并室间隔缺损患儿中发现SMAD1基因新突变,即NM＿005900.3:c.381T>A;p.(Cys127*)突变。该突变不存在于238名健康者中。报告基因分析表明突变型SMAD1对靶基因TBX20的转录激活作用丧失。结论：SMAD1基因功能丧失性突变可能是部分散发性先天性右心室双流出道合并室间隔缺损的分子病因,这对先天性心脏病的精准医学防治具有潜在意义。     

甲状腺髓样癌患者RET原癌基因突变的研究

目的研究甲状腺髓样癌(MTC)的RET原癌基因突变情况。方法从12例病理诊断的MTC患者和2例临床上怀疑MTC患者提取外周血基因组DNA,对RET原癌基因第10、11、16外显子进行PCR产物直接测序。结果发现8例患者存在基因突变。1例是第10外显子618密码子TGC/CGC突变;2例是第11外显子634密码子TGC/TAC突变;3例是634密码子TGC/CGC突变;2例是第16外显子918密码子ATG/ACG突变。结论直接基因测序分析能在基因水平诊断MTC,分子遗传学分析使术前诊断该疾病成为可能。     

法乐四联症患儿NKX2.5、TBX5、GATA4基因的表达研究

目的:探讨NKX2.5、TBX5、GATA4基因与法乐四联症的发病关系及法乐四联症形成的分子机制. 方法:10例法乐四联症患儿(法乐四联症组),为我院2005-06至2005-12心脏中心住院患儿.年龄4个月～8岁,平均3.5岁.6例非先天性心脏病(先心病)意外死亡患儿作为对照(对照组),均没有先心病病史和遗传病家族史.年龄4个月～9岁,平均年龄3.8岁.留取各病例右心室流出道心肌组织,提取心肌组织总RNA,逆转录为与RNA链互补的单链DNA(cDNA).按照引物设计原则进行引物设计,用来扩增心肌组织NKX2.5、TBX5、GATA4、GAPDH mRNA目的片段.引物长度18 bp～22 bp,扩增片段长度163 bp、206 bp、237bp、203 bp.应用双标准曲线、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法比较NKX2.5、TBX5、GATA4基因的mRNA含量在对照组和法乐四联症组之间的统计学差异. 结果:法乐四联症组的NKX2.5mRNA含量较对照组显著降低,差异有统计学意义.TBXSmRNA和GATA4mRNA含量在法乐四联症组与对照组的差异无统计学意义. 结论:人心肌组织中有心脏发育相关基因NKX2.5、TBX5和GATA4mRNA的表达;法乐四联症可能与心肌组织中NKX2.5mRNA含量降低相关.     

Association between gastric cancer and -1993 polymorphism of TBX21 gene

AIM: To investigate the association between the polymorphism of TBX21 gene and the risk of gastric cancer in a Chinese population.METHODS: The -1993 polymorphism located in TBX21 gene promoter region was identified by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method. The risk between TBX21 gene genotype and gastric cancer was determined by multivariate logistic regression analysis in 220 gastric cancer patients and 262 cancer-free controls matched by age, sex and ethnicity.RESULTS: Compared with the TBX21 -1993TT genotype, the -1993CC genotype exhibited a significantly elevated risk for gastric cancer [Odds ratio (OR) = 3.42, 95% confidence interval (CI): 1.41-8.31]. The relationship between the -1993 polymorphic genotype and the invasive status such as lymph node and distant metastasis was found among the gastric cancer patients (OR = 4.02, 95% CI: 1.87-8.66; OR = 7.02, 95% CI: 3.44-14.34, respectively).CONCLUSION: TBX21 -1993 polymorphism might contribute to the risk of gastric cancer, especially to the distant metastasis.     

TBX1基因与心脏圆锥动脉干畸形的相关研究

心脏圆锥动脉干畸形是婴幼儿期常见的青紫型先天性心脏病,主要由于胚胎期心脏发育异常所致。现综述TBX1基因在心脏发育过程中的作用以及可能的作用机制等国内外近几年的研究进展,旨在揭示TBX1基因与心脏圆锥动脉干畸形的关联。     

Influence of TNF gene polymorphisms in Japanese patients with NASH and simple steatosis

BACKGROUND/AIMS: Tumor necrosis factor (TNF) is considered to play a role in the second hit of non-alcoholic steatohepatitis (NASH). To clarify the effects of TNF in NASH we investigated TNF gene polymorphisms that might influence TNF production were investigated. METHODS: We analyzed 102 patients with non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD; 36 with simple steatosis and 66 with NASH) and 100 control subjects. The serum level of soluble TNF receptor (sTNFR)-2 was measured. The TNF-alpha promoter region positions -1031, -863, -857, -308, and -238 and the TNF-beta gene Nco1 polymorphism site were investigated. RESULTS: The level of sTNFR-2 was significantly higher in NASH patients than in those with simple steatosis or control subjects. In the analysis of TNF gene polymorphisms, there were no significant deviations between the group of all NAFLD patients and the control subjects. The carrier frequencies of polymorphisms at positions -1031C and -863A were significantly higher in patients with NASH than in those with simple steatosis. In the multivariate analysis, TNF-alpha promoter polymorphisms proved to be significant independent factors distinguishing NASH from simple steatosis. CONCLUSIONS: TNF polymorphisms, which influence TNF production, might be associated with the progression of NAFLD.     

Expression and prognostic value of the retinoblastoma tumour suppressor gene (RB-1) in childhood acute lymphoblastic leukaemia

In a retrospective analysis, acute lymphoblastic leukaemia (ALL) blast cells of 102 children were investigated for the expression of the retinoblastoma susceptibility (RB)-1 gene at mRNA level by dot blot hybridization and semiquantitative RT-PCR. 56 patients were analysed by dot blot hybridization and 35 representative patients out of this group by semiquantitative RT-PCR. Two additional groups of patients (23 patients with initial and 23 patients with relapsed ALL) were also investigated by semiquantitative RT-PCR. RB-1 gene expression was detectable in all investigated ALL at different levels. According to the relative mRNA expression the patients were discriminated by the median value in groups with low or high RB-1 expression. The Kaplan-Meier estimates showed that patients with low RB-1 expression had a lower probability of remaining in first remission ( P =0.03) and a significantly higher risk to succumb to their disease ( P =0.03). Furthermore, the comparison of the results between initial and relapsed ALL showed that the relapses had significantly lower RB-1 mRNA expression ( P =0.02). The overall survival of the patients was shorter in both groups when RB-1 gene expression was low. A multivariate analysis, including age, sex, immunological subtype, initial white blood cell count and RB-1 expression, identified RB-1 as an independent prognostic predictor ( P =0.017) in addition to the initial white blood cell count ( P =0.00001). In conclusion, low RB-1 expression is an unfavourable prognostic predictor in initial and relapsed childhood ALL. The RB-1 gene expression in relapsed ALL is significantly lower than in initial ALL.     

右心室肥大时心肌间质胶原改建及其前胶原基因的表达

目的了解法乐四联症肥大右室心肌间质Ⅰ、Ⅲ型胶原的改建及与前胶原基因ｍＲＮＡ表达的关系,为防治心肌间质胶原改建提供新的依据和途径。方法用生化方法定量分析了２２例法乐四联症患者和８例非心血管及胶原系统疾病尸检者的右室心肌间质中的胶原含量和Ⅰ、Ⅲ型胶原比值,以及用斑点杂交法测定法乐四联症患者右室心肌间质Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因ｍＲＮＡ的表达。结果法乐四联症组心肌间质胶原含量为（１４８５±２４８）μｇ／ｍｇ总蛋白,较对照组（７５５±１８９）μｇ／ｍｇ总蛋白明显增多（Ｐ＜００５）;其Ⅰ／Ⅲ型胶原比值为５１０±１８４,较对照组２２７±０５８显著增高（Ｐ＜００５）;法乐四联症组右室心肌间质胶原含量与Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达强度的相关系数分别为０８０（Ｐ＜０００１）、－０２７７（Ｐ＞０１０）。右室心肌间质胶原Ⅰ／Ⅲ型比值与Ⅰ／Ⅲ型前胶原基因表达强度比值呈正相关,ｒ＝０４７（Ｐ＜００５）。结论提示法乐四联症肥大右室心肌间质存在以胶原含量增多和Ⅰ／Ⅲ型比值增高为特点的胶原改建,且主要与Ⅰ型前胶原基因ｍＲＮＡ转录水平上调有关。