氯化甲基汞对小鼠生殖细胞的毒性作用

本实验一次灌胃给予小鼠不同剂量(0、5、10和15mg/kg体重)氯化甲基汞,于染毒后第5、10和15天分别处死各组部分小鼠,检查其精子总数、形态及睾丸病理改变,实验结果表明,给予氯化甲基汞小鼠精子数目减少,精子畸形率增高,睾丸呈现不同程度的病理改变。该实验从形态学方面证实氯化甲基汞对小鼠雄性生殖细胞具有明显的毒性作用。     

五加皮遗传毒性实验研究

目的：探讨五加皮对小鼠体细胞和生殖细胞的遗传毒性。方法：采用小鼠骨髓细胞微核试验（ Ｍ Ｎ Ｔ）、骨髓和睾丸染色体畸变（ Ｃ Ａ）试验以及精子畸形试验。结果：五加皮诱发的微核、染色体畸变和精子畸形均低于正常对照,特别是精子畸形率明显低于正常对照（ Ｐ＜ ００１）。结论：五加皮对小鼠体细胞和生殖细胞均无诱变损伤作用。     

Effect of all-trans retinoic acid on drug sensitivity and expression of survivin in LoVo cells

Background All-trans retinoic acid （ATRA） can influence the tumor cell proliferation cycle, and some chemotherapeutic drugs are cycle specific. In this study, we hypothesize that ATRA can enhance chemotherapeutic drug sensitivity by affecting the cell cycle of tumor cells.
Methods The cell cycle of LoVo cells was evaluated using flow cytometry （FCM）. Cell viability was analyzed using the MTT assay. The morphologic changes in the treated LoVo cells were measured with acridine orange （AO）/ethidium bromide （EB） staining. Expression of survivin in LoVo cells was analyzed by immunofluorescence assay.
Results After LoVo cells were treated with ATRA, the G0/G1 ratio of the tumor cells increased and the cell ratio of S-and G2/M-phase decreased. Viability of the cells decreased significantly after combined treatment with ATRA and 5-fluorouracil （5-FU） or mitomycin c （MMC） and was evaluated by fluorescence microscopy. Expression level of survivin in the tumor cells decreased after ATRA combination treatment.
Conclusions ATRA enhances drug sensitivity of the LoVo cell line to cell cycle-specific agents and inhibits the expression of survivin in LoVo cells. The combination of ATRA and 5-FU or MMC promoted cell apoptosis, and the mechanism involved in apoptosis may be related to inhibition of survivin gene expression.     

体外诱导胚胎干细胞分化为生殖细胞的研究进展

胚胎干细胞是一种具有发育全能性的细胞系，理论上能分化为包括生殖细胞在内的各种组织细胞。由于生殖细胞是遗传物质的传递者，所以胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究具有更深刻的科学及伦理挑战性。本文简要介绍各国科学家在胚胎干细胞向生殖细胞分化方面的研究进展。     

SUN5特异性抗体的制备及其应用

目的制备可检测全长SUN5的特异性抗体,并用该抗体检测SUN5蛋白在人类生殖细胞中的表达。方法通过生物信息 学比较SUN5与新剪切体SUN5β之间的差异,在差异区域设计合成短肽,制备SUN5多克隆抗体并纯化。用新制备的SUN5抗 体对Ntera-2细胞中的SUN5蛋白进行Western blotting和免疫荧光检测,验证抗体的特异性;最后,用该抗体对人睾丸细胞涂片 进行检测,观察SUN5 蛋白在人生殖细胞中的表达。结果成功合成了SUN5 短肽,而且用该短肽制备了SUN5 多克隆抗体。 Western blot 结果显示,新制备的SUN5特异性抗体可检测到全长SUN5蛋白。免疫荧光实验结果表明,在Ntera-2细胞中SUN5 蛋白定位在核膜和胞浆。通过对人睾丸细胞涂片的检测发现,SUN5在睾丸精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达。结论 成功制备了SUN5特异性抗体,该特异性抗体的制备对于深入研究SUN5的功能具有重要的意义。此外,发现SUN5蛋白在精 母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达,提示SUN5蛋白可能在精子发生中发挥着重要的生理功能。     

利用异源性饲养细胞建立人抗原特异性T淋巴细胞克隆

目的 摸索利用有限稀释法建立抗原特异性T淋巴细胞克隆操作中的最佳培养条件,并探讨利用异体来源的饲养细胞作为替代方案的可行性.方法 MTT法测定细胞增殖活性,判断T细胞生长的最佳PHA、IL-2作用浓度以及用丝裂霉素处理法制作饲养细胞的浓度、时间条件,观察IL-4对克隆生长形态的影响.探讨异体饲养细胞进行有限稀释法T细胞克隆时的克隆生长特点和影响因素.结果 克隆时PHA 25 μg/ml、IL-2 27 u/ml,饲养细胞丝裂霉素处理60 μg/ml、80 min为比较理想的操作条件.IL-4可以促进CD4 细胞亚群的克隆生长,但异体饲养细胞法形成的T细胞克隆的抗原特异性难以保障.结论 IL-4对CD4 细胞克隆生长具有促进作用,异体饲养细胞法得到的T细胞克隆抗原特异性不高.     

人胚胎干细胞神经分化的方法探讨

【目的】 利用新建系的人胚胎干细胞株SYSU-7,运用胚体形成的方法,探讨不同的分化条件对胚胎干细胞神经分化的影响。【方法】 首先检测人胚胎干细胞株SYSU-7的Oct4、SSEA4(stage-specific embryonic antigen-4)、TRA-1-60和AKP(Alkaline phosphatase)等胚胎干细胞特异性标志物的表达及体内外三胚层分化的能力;之后,应用含20% Knockout Serum Replacement (KSR)的培养液和神经干细胞培养液(neural progenitor medium, NPM)分别诱导细胞形成悬浮的拟胚体(悬浮时间为4 d或7 d),然后将拟胚体贴壁于多聚鸟氨酸(Polyornithine, PO)和纤维粘连蛋白(Fibronectin, FN)包被的培养皿中继续培养4 ~ 10 d。在分化的不同时间点利用免疫荧光染色的方法检测胚胎干细胞和神经细胞相关的标志性抗原。【结果】 SYSU-7胚胎干细胞表达未分化细胞特异性标志Oct4、SSEA4,TRA-1-60,AKP染色呈强阳性,在体内外具有向三胚层分化的潜能;在体外诱导其向神经分化,结果发现KSR培养液比神经干细胞培养液更有利于胚胎干细胞的神经分化,悬浮生长7 d的拟胚体贴壁后出现特征性的玫瑰花环样结构(rosette structure)的时间更早。数量更多。【结论】 SYSU-7细胞系具有自我更新及多向分化潜能等胚胎干细胞特性。本实验为研究人胚胎干细胞的神经分化提供了新的细胞模型和研究思路。     

L5178Y和WTK1细胞微核试验在抗诱变测试中的应用

为了研究 Ｌ５１７８ Ｙ 和 Ｗ Ｔ Ｋ１ 细胞应用于抗诱变测试系统的可靠性和有效性,按维生素 Ｃ（ Ｖｃ）和叶绿酸铜钠（ Ｃｈｌ）与丝裂霉素 Ｃ（ Ｍ Ｍ Ｃ）的加入顺序,分为同时处理、预处理和后处理三种处理方式,观察 Ｖｃ 和 Ｃｈｌ对 Ｍ Ｍ Ｃ诱导两种细胞微核的抑制作用。结果表明：① Ｖｃ 和 Ｃｈｌ本身无诱导两种细胞微核的作用;② Ｖｃ 与 Ｍ Ｍ Ｃ同时处理和预处理,能显著降低 Ｍ Ｍ Ｃ诱导的两种细胞微核率;③０．１２ｍ ｇ／ｍ ｌ Ｃｈｌ与 Ｍ Ｍ Ｃ同时处理和预处理,能显著降低 Ｍ Ｍ Ｃ诱导的两种细胞微核率,但０．０６ｍ ｇ／ｍ ｌ同时处理和预处理仅能显著降低 Ｍ Ｍ Ｃ诱导的 Ｗ Ｔ Ｋ１ 细胞微核率。后处理方式对微核反应无抑制作用。该研究结果与 Ｖｃ 和 Ｃｈｌ在其它抗诱变试验中的结果基本一致,表明 Ｌ５１７８ Ｙ 和 Ｗ Ｔ Ｋ１ 细胞微核试验在抗诱变作用检测方面有较好的应用价值。     

人胃癌原代细胞培养化疗药物敏感性评价

目的:评价人胃癌原代细胞对7种化疗药物的敏感性。方法:取59例手术切除的新鲜胃癌组织标本,应用人胃癌原代细胞短期培养(混杂非肿瘤细胞)与纯化培养MTT法体外药敏试验,测定每种化疗药物对肿瘤细胞的抑制率。结果:药敏试验测定7种化疗药物抑制率除氨甲蝶呤(MTX)外纯化法均高于短期法,表明纯化法较敏感;两种方法测定药物敏感性顺序一致,由高至低依次为顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、阿霉素(ADM)、依托泊甙(VP-16)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、羟基喜树碱(HCPT)、MTX。结论:7种化疗药物以DDP、MMC、ADM较敏感,VP-16、5-FU次之,HCPT、MTX最差。     

晶状体囊袋内联合应用丝裂霉素C和5-氟尿嘧啶预防后发性白内障

目的：探讨晶状体囊袋内联合应用抗代谢药物预防后发性白内障的作用及其机制.方法：2007年10月至2009年10月本科室收治老年性白内障患者618例（651眼）,术中在白内障超声乳化吸除后晶状体囊袋内分别注入含有或不含有不同抗代谢药物的甲基纤维素溶液0.5 mL.所有患者完全随机法分为4组：实验组155例（157眼）注入含有0.2 mg/mL丝裂霉素C（MMC）、12.5 mg/mL 5-氟尿嘧啶（5-FU）的甲基纤维素溶液;空白对照组173例（194眼）仅注入甲基纤维素溶液;MMC对照组145例（151眼）注入含有0.2mg/mL MMC的甲基纤维素溶液;5-FU对照组145例（149眼）注入含有12.5 mg/mL 5-Fu的甲基纤维素溶液.5 min后用灌注液置换晶状体囊袋内的药物并在囊袋内植入人工晶体.术后随访1年,观察患者术眼术后角膜内皮细胞生长情况,眼内压变化及晶状体前、后囊膜混浊情况,并与术前进行比较.结果：各组患者术后角膜内皮细胞损伤情况无明显差异,术前后眼内压及角膜内皮细胞计数差异无统计学意义（均P〉0.05）.术后随访6个月及以上的患者中,实验组、空白对照组、MMC对照组、5-FU对照组患者晶状体前囊混浊发生率分别为11.83%（11/93）、57.65%（49/85）、50.60%（42/83）、52.63%（40/76）,晶状体后囊混浊发生率分别为3.23%（3/93）、20.00%（17/85）、10.84%（9/83）、14.47%（11/76）,与其他各组比较.实验组晶状体前、后囊混浊发生率均明显下降（均P〈0.05）.结论：晶状体囊袋内联合应用抗代谢药物能有效抑制晶状体上皮细胞增殖,从而预防后发性白内障.     

Comparison of rate of radi at ion- induced chromosome aberrations among six kinds of tissues in mice exposed to different doses of X-rays

<正> Comparison of rate of chromosome aberrations among somatic cells including corneal cells, bone marrow cells and lymphocytes, and germ cells including spermatogonia, primary and secondary spermatocytes after X-irradiation in dosages of 0.5 and 3.0 Gy or background radiation. The results indicated that rate of chromosome aberrations was highest for lymphocytes in the somatic cells and highest for the secondary spermatocytes in the germ cells. When comparison was made between the somatic and germ cells,the rate of chromosome aberrations in the latter was higher than that in the former.     

低剂量辐射增强化疗药物抑制lewis肺癌转移的实验研究

探讨增强化疗药物抑制恶性肿瘤转移的新的有效方法。采用Ｃ５７ＢＬ／６小鼠右后肢腓肠肌内接种ｌｅｗｉｓ肺癌细胞制成实验动物模型，２１ｄ杀鼠取肺，计数肺转移结节数，观察丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）化疗前预先７５ｍＧｙＸ射线全身照射对ＭＭＣ抑制肿瘤转移作用的影响。结果显示，单纯的３．０ｍｇ／ｋｇＭＭＣ腹腔注射不能明显减少ｌｅｗｉｓ肺癌的肺转移结节数（对照组：４１．７±７．４／肺，单纯化疗组：３３．８±１１．５／肺，Ｐ＞０．０５）；而化疗前６ｈ给予７５ｍＧｙＸ射线全身照射组肺转移结节数较单纯化疗组明显减少（２０．３±４．７／肺，Ｐ＜０．０５）。免疫学参数测定结果表明，化疗使荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞（ＰＭΦ），脾脏自然杀伤细胞（ＮＫ）功能明显下降（Ｐ＜０．０５）；而７５ｍＧｙ＋ＭＭＣ组的免疫学参数较单纯化疗组显著提高（Ｐ＜０．０１）。提示化疗前预先７５ｍＧｙＸ射线全身照射对ＭＭＣ免疫抑制的减轻作用可能是其增强化疗抑制ｌｅｗｉｓ肺癌转移的重要基础。     

艾迪联合抗癌药物对肝癌细胞系体外药物敏感性研究

目的 通过测定艾迪及艾迪联合抗癌药物ADM、DDP、5—Fu、MMC对肝磁细胞系7721细胞的体外药物敏感性试验，为肝癌化疗、介入治疗用药提供参考依据。方法 用24孔板培养肝癌细胞系7721细胞，观察细胞在单药及联合用药时的生长、抑制和集落形成情况，以判定药物的敏感性。结果 艾迪对肝癌细胞系7721细胞有抑制作用，引起癌细胞G0／G1期阻滞，艾迪与MMC和ADM有协同作用，其中以艾迪和ADM联合应用时作用最强。结论 艾迪对肝癌细胞系7721细胞有抑制作用，剂量增加与疗效提高有较大关系；艾迪与ADM和MMC联合应用，有协同作用。     

培养原始生殖细胞的新方法——Sertoli细胞的应用

为探讨睾丸支持细胞 (sertolicell,SCs)对原始生殖细胞 ( primordialgermcell,PGCs)的增生与生长是否有明显的促进作用。用SCs和同源生殖嵴成纤维细胞分别与PGCs共培养。结果发现 :与SCs共培养的PGCs集落多于与同源生殖嵴成纤维细胞共培养的PGCs集落 ,传代次数也多于同源生殖嵴成纤维细胞。提示 :SCs能提高原始生殖细胞在体外的增生能力     

大鼠睾丸支持细胞、生精细胞及管周细胞的体外团聚研究

用5、10、15、20和25天龄大鼠睾丸曲细精管分离细胞制成悬液,在体外经固体琼脂培养和旋转培养,得到圆球状和索状细胞团聚体,其主要由支持细胞组成,管周细胞包绕在支持细胞外周。10天龄以前组,在团聚体中可见到部分生精细胞,15天龄以后组的生精细胞全部位于团聚体外.表明新生大鼠睾丸支持细胞、管周细胞及生精细胞间仍保留着部分胚胎期的识别和选择性粘附能力。     

人原始生殖细胞的迁移及表面标志物变化的实验研究

目的探讨人胚胎原始生殖细胞向生殖嵴迁移及其细胞标志物改变.方法人胚生殖嵴或生殖腺经石蜡切片;HE染色,光镜观察;免疫组化方法检测阶段特异性胚胎抗原SSEA-4和SSEA-1的表达;钙-钴法检测碱性磷酸酶(AP)活性;RT-PCR检测4.5、7、9、11周人胚胎生殖嵴中转录因子Oct-4的表达.结果人胚胎第4.5周生殖嵴未见有碱性磷酸酶、阶段特异性胚胎抗原SSEA-4、SSEA-1阳性细胞,且不表达转录因子Oct-4;第5～11周胚胎生殖嵴中持续存在碱性磷酸酶、阶段特异性胚胎抗原SSEA-4、SSEA-1阳性细胞,且表达转录因子Oct-4;第12周胚胎生殖嵴中阶段特异性胚胎抗原SSEA-4、SSEA-1阳性细胞数量明显减少,但存在碱性磷酸酶阳性细胞.结论人胚胎原始生殖细胞自第5周后开始迁移至生殖嵴,直至第11周后完全分化,其形态学特征为碱性磷酸酶、阶段特异性胚胎抗原SSEA-4、SSEA-1阳性,且表达转录因子Oct-4.     

抗人大肠癌免疫磁性白蛋白微球的抗癌效果

目的:观察自制丝裂霉素C免疫磁性白蛋白微球(MMC-IMAMS)体外及体内抗大肠癌效果。方法:将丝裂霉素C免疫磁性白蛋白微球(MMC-IMAMS)与丝裂霉素C磁性白蛋白微球(MMC-MAMS)、单纯丝裂霉素C(MMC)比较,MTT法分别检测其体外对大肠癌细胞株LoVo的杀伤作用,然后通过移植人大肠癌裸鼠模型检测体内的肿瘤抑制率。结果:体外实验丝裂霉素免疫磁性白蛋白微球较单纯丝裂霉素磁性白蛋白微球有更强的肿瘤细胞抑制效率;裸鼠模型体内实验丝裂霉素免疫磁性白蛋白微球组肿瘤抑制率较丝裂霉素磁性白蛋白微球组和单纯丝裂霉素组具有显著差异。且丝裂霉素免疫磁性白蛋白微球是安全的,在体外磁场作用下可较长时间内沉积于靶区。结论:丝裂霉素免疫磁性白蛋白微球安全性好,靶向性更强大,体内体外均有更强的抗癌效果。     

米非司酮对宫颈癌亲代和耐药细胞抗肿瘤作用及耐药逆转作用机制的研究

目的探讨米非司酮(RU486)对宫颈癌亲代细胞株(Hela)和耐药细胞株(Hela/MMC)抗肿瘤作用及耐药逆转作用的机制。方法培养Hela细胞及Hela/MMC细胞株后分为4组:空白对照组、单用RU486组、单用MMC组及联用组。采用流式细胞术检测各组细胞周期和细胞凋亡率变化;蛋白印迹法(Western blotting)检测各组p-糖蛋白(p-gp)的表达。结果 (1)Hela细胞及Hela/MMC细胞,单用RU486组较空白对照组G_0/G_1期比例均明显升高,S期比例明显降低,细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);联用组较单用MMC组G_0/G_1期比例均明显升高,S期比例均明显降低,细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);(2)Hela/MMC细胞p-gp表达显著高于Hela细胞(P<0.01);Hela/MMC及Hela细胞,其单用RU486组与空白对照组相比,p-gp的表达均显著降低(P<0.05),Hela/MMC细胞系,单用MMC组与空白对照组相比,p-gp的表达无明显变化(P>0.05),在联用组,p-gp的表达显著低于单用MMC组和空白对照组(P<0.01)。结论米非司酮可通过调节细胞周期、促进细胞凋亡、降低p-gp的表达发挥抗肿瘤及耐药逆转作用。     

Hela/MMC细胞亚系的建立及其耐药机制的探讨

目的 建立宫颈癌Ｈｅｌａ／ＭＭＣ耐药细胞亚系,并探讨其耐药机制。方法 以人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞为亲本,采用丝裂霉素连续性药物作用,间隙性增加药量,逐步提高药物浓度的方法,分离出ＭＭＣ耐药亚系（Ｈｅｌａ／ＭＭＣ）,并比较两种细胞生物学特性差异。结果 Ｈｅｌａ／ＭＭＣ细胞对ＭＭＣ有５．０２倍耐药,对ＤＤＰ有２．０３倍交叉耐药,对ＶＣＲ、ＡＤＭ和５－Ｆｕ保持敏感;耐药细胞核分裂指数增加;耐药细胞内丝裂霉素     

维甲酸对脂肪源干细胞中生殖标记表达的影响

目的探索脂肪源干细胞(ADSCs)在维甲酸(RA)诱导下是否表达原始生殖细胞标记碱性磷酸酶(ALP)及生殖标记基因vasa。方法分离培养2个月龄SD雌性大鼠ADSCs,传至第3代进行成脂、成骨诱导和表面标记鉴定。将第3代ADSCs分别用10-5、10-6、10-7mol/L RA诱导7 d和14 d,采用ALP检测试剂盒检测各组ALP的活性水平。用RT-PCR方法检测10-5mol/L RA组Vasa mRNA表达。结果将第3代ADSCs分别用10-5、10-6、10-7mol/L RA诱导7 d的D520 nm值分别为0.59±0.04,0.27±0.07,0.15±0.03,对照组为0.07±0.01,诱导14 d的OD值分别为0.42±0.02,0.34±0.01,0.19±0.02,对照组为0.07±0.01,说明RA能显著性促进ADSCs碱性磷酸酶的表达(P<0.01)。第3代ADSCs用10-5mol/L RA诱导7 d Vasa mRNA的表达为阴性。结论第3代ADSCs在维甲酸诱导下能够表达原始生殖细胞标记碱性磷酸酶,但用10-5mol/L RA诱导7 d不能表达生殖标记基因Vasa。