突变SOD1导致星形胶质细胞对氧化应激的易损性

目的研究突变SOD1G93A星形胶质细胞是否表现了对氧化应激的易损性。方法原代突变SOD1星形胶质细胞和野生型SOD1星形胶质细胞体外培养。实验细胞分为突变型组和野生型组;突变组和野生型组又分为对照组、血清剥夺组和EGCG干预组;使用5和10μmol/L EGCG分别干预;用MTT检测细胞的增殖能力;激光共聚焦检测ROS;用Western blot检测细胞中Nrf2及其介导的HO1和NQO1的表达。结果与正常星形胶质细胞相比,含有突变SOD1星形胶质细胞MTT显著下降(P<0.01)。细胞中Nrf2表达下降了44%(P<0.01)。Nrf2介导的HO1和NQO1的表达水平也分别下降了43%(P<0.01)和40%(P<0.05)。5和10μmol/L EGCG使NQO1的表达水平分别升高了1.5和2.5倍(P<0.05),也升高了Nrf2的表达并促进了Nrf2向细胞核中转移。结论突变SOD1造成了星形胶质细胞对氧化应激的易受损性。     

EGCG对小鼠调节性T细胞的产生及细胞因子TGF-β1表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对小鼠体内调节性T细胞(Treg)的产生及转化生长因子TGF-β1的表达和分泌的影响。方法:选择健康、雄性、体重相近的BALB/c小鼠40只,随机分为4组(n=10),设立不同剂量浓度的EGCG组(10、50、85 mg/kg)和对照组。EGCG组每天给予EGCG腹腔注射一次,连续注射3天,对照组每天给予等体积生理盐水腹腔注射一次,连续注射3天。采用流式细胞仪检测小鼠脾脏Treg细胞的产生。采用荧光定量PCR和ELISA方法分别检测小鼠脾脏细胞和外周血TGF-β1因子的表达和分泌水平。结果:与对照组相比较,EGCG处理组小鼠体内的Treg细胞的比例上升,TGF-β1的基因表达水平和蛋白分泌水平均明显增高,当EGCG剂量为85 mg/kg时,其促进作用最明显。结论:EGCG可促进小鼠体内的Treg细胞产生,增强TGF-β1表达和分泌。     

次声介导大鼠小胶质细胞活化的体外模型

为了建立次声介导小胶质细胞活化的体外模型,本研究采用了次声压力仓,保温箱以及保鲜盒等设备。将体外培养的小胶质细胞随机分为三组:正常对照组,次声对照组以及次声作用组,采用倒置相差显微镜观察三组细胞的形态变化。结果显示:正常对照组和次声对照组小胶质细胞形态无明显变化,均表现为胞体小,胞膜光滑;而次声作用后小胶质细胞呈现活化状态,表现为细胞胞体肿胀、体积增大、边缘毛刺状突起。本研究结果提示:我们成功建立了次声介导小胶质细胞活化的体外模型。     

次声激活小胶质细胞抑制成年大鼠海马神经干细胞增殖

目的:探讨次声对成年大鼠海马齿状回颗粒细胞下层(subgranular zone,SGZ)神经干细胞增殖抑制作用的细胞学机制。方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠置于次声压力舱,连续暴露于16 Hz、130 dB次声7 d(2h/d)后,给与小胶质细胞抑制剂米诺环素(50 mg/kg,药物组,n=16)或等体积生理盐水(对照组,n=16),同时设立不经次声作用的正常对照组(n=16);分别于1、3、7和14 d处死大鼠,利用免疫组织化学法以Iba1、OX42标记小胶质细胞,BrdU标记增殖的神经干细胞。结果:小胶质细胞在SGZ区分布较为密集;与正常对照组相比,次声暴露后3 d时OX42免疫反应性明显增强、SGZ区BrdU阳性细胞数目减少最为明显(P0.01);米诺环素可显著改善次声暴露后BrdU阳性细胞数目的减少(P0.01)。结论:小胶质细胞活化参与次声抑制成年大鼠海马SGZ区神经干细胞的增殖。     

EGCG对昆明小鼠早胚体外发育的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(-)(EGCG)对昆明(kunming,KM)小鼠早胚体外发育的影响,为改善小鼠早胚体外培养体系奠定实验基础。方法以空白M16培养液为对照组,M16中添加浓度为0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL、20μg/mL EGCG为实验组,收集KM小鼠1-细胞胚进行体外连续培养,计数各组发育至2-、4-细胞胚、桑椹胚和囊胚等各个阶段的数目,并以2-细胞胚为基数,计算各组至不同阶段的发育率。结果添加EGCG实验组发育到桑椹胚和囊胚的比率明显高于对照组,其中以添加浓度为10μg/mL和20μg/mL的EGCG实验组的效果最显著,其桑椹胚发育率分别为77.3%和78.7%,而对照组只有43.2%(P0.01)。10μg/mL和20μg/mL的EGCG实验组的囊胚发育率分别为53.0%和47.3%,也明显高于对照组(19.2%,P0.01)。结论EGCG可以显著提高KM小鼠1-细胞胚体外发育到桑椹胚及囊胚的比率,以10μg/mL和20μg/mL浓度的EGCG效果最显著。     

EGCG对ConA诱导的肝损伤小鼠TNF-α与IL-17表达的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对ConA诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其作用机制。方法 40只小鼠随机分为正常对照组、EGCG对照组、ConA模型组及EGCG+ConA组。采用HE法检测小鼠肝脏形态学改变,ELISA法检测血清ALT、AST的变化,采用免疫组化方法和Western blot方法检测各组小鼠肝组织中TNF-α与IL-17的变化。结果 ConA模型组ALT、AST的含量比对照组明显升高(0.05),EGCG对照组与正常对照组比较无变化(0.05),EGCG+ConA组比ConA模型组含量下降(0.05)。ConA模型组小鼠肝脏显示较多肝细胞坏死,正常对照组和EGCG对照组小鼠肝脏正常,EGCG+ConA组肝细胞炎症坏死程度较ConA模型组有所减轻。ConA模型组小鼠肝组织中TNF-α与IL-17水平较正常对照组和EGCG对照组明显升高(0.05),EGCG对照组与正常对照组比较无明显差异(0.05),EGCG+ConA组比ConA模型组下降(0.05)。结论 EGCG对ConA所致小鼠肝损伤有明显的保护作用,机制可能与其对炎性因子TNF-α与IL-17的调节有关。     

没食子儿茶素没食子酸酯对中波紫外线辐射后树突状细胞功能的影响

目的 观察没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）对中波紫外线（UVB）辐射后树突状细胞（DC）功能的影响并探讨其可能的机制。方法 分离外周血单核细胞，经细胞因子诱导DC成熟后，再使用不同剂量的UVB照射DC，将经EGCG处理或未处理的DC与淋巴细胞进行混合培养，72h后用MTF法检测DC刺激淋巴细胞增殖能力；用流式细胞术分析DC表面CDS0、CD86、HLA-DR、CD40分子表达的变化；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测DC培养24h后上清液中IL-10及IL-12分泌水平。结果UVB以剂量依赖的方式抑制DC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力，并以剂量依赖的方式抑制DC表面共刺激分子的表达；使用浓度为200μg／ml的EGCG处理DC后，各剂量组UVB所致的免疫抑制作用均可得到部分改善，与单纯照光组相比，UVB＋EGCG组的抑制率分别比同剂量UVB组减少了60．0％、60．4％、59．2％、40．8％及12．2％，当EGCG浓度大于100μg／ml时，EGCG对DC表面共刺激分子的表达有促进作用；UVB照射对DCIL-12及IL-10因子的分泌未有显著影响，经EGCG处理并照射UVB的DCIL-12分泌水平显著降低，但IL-10分泌水平显著提高（P〈0．05）。结论 EGCG具有调节中波紫外线辐射后DC细胞免疫功能的作用，其作用与促进DC表面共刺激分子表达及影响其IL-12及IL-10分泌有关。     

EGCG对ConA诱导的肝损伤小鼠NF-κB和ICAM-1表达的影响

目的通过观察表没食：于儿茶素没食子酸酯（EGCG）对ConA诱导的急性肝损伤小鼠肝组织中NF-κB及ICAM-1表达的影响,来探讨EGCG对小鼠的肝保护机制。方法C57BL／6小鼠分成4组：对照组、EGCG对照组、ConA模型组．EGCG＋ConA组。EGCG对照组及EGCG＋ConA组小鼠给予EGCGEl服（5mg／kg）10d后,予模型组小鼠静脉注射ConA（15mg／kg）建造肝损伤模型。采血及留取肝组织,HE法检测肝组织病理变化,ELISA法检测NF-KB及ICAM-1的表达。结果ConA模型组小鼠肝损伤明显,NF-κB及ICAM-1的表达明显增多,与对照组比较有显著性差异（P〈0．05）;EGCG治疗组肝损伤减轻且伴NF-KB及ICAM-1的表达下降,与模型组比较差异明显（P〈0．05）。结论EGCG对ConA诱导的免疫性肝损伤小鼠有保护作用．其机制可能与调节NF-κB及ICAM-1的表达有关。     

巨噬细胞亚型与疾病的关系及EGCG对巨噬细胞影响的研究进展

作为一种形态和功能独特的白细胞亚群,巨噬细胞在机体免疫反应中发挥重要作用。巨噬细胞可分为M1型与M2型,前者促进炎症反应并抑制肿瘤细胞增殖,后者促进其增殖和组织修复。表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)是绿茶中茶多酚的主要组成部分之一,它能够减少氧化应激和组织损伤,降低肿瘤和心血管疾病等的风险。研究发现EGCG对巨噬细胞有着广泛的影响。文章就巨噬细胞不同亚型与疾病关系以及EGCG通过影响巨噬细胞以治疗疾病的研究进展作一综述。     

EGCG通过调控SIRT1-P53通路诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡

 目的: 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)调控人卵巢癌SKOV-3细胞活力和凋亡的分子机制。方法: SKOV-3细胞给予EGCG(0~50 μmol/L)、SIRT1激动剂SRT1720(1 μmol/L)和SIRT1抑制剂EX527(1 μmol/L)处理后,用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,real-time PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA的表达水平;采用SIRT1去乙酰化酶活性检测试剂盒检测SIRT1酶活性;使用Western blot法检测SIRT1、乙酰化P53和P53的蛋白表达变化。结果: 与正常对照组相比,单独给予EGCG或EX527处理之后SKOV-3细胞活力下降,凋亡率增加;SIRT1的酶活性和蛋白表达水平均明显下降;P53的乙酰化水平显著增加。与EGCG组相比,SRT1720预处理组的细胞活力上升,凋亡率下降,Bax/Bcl-2的相对比值及激活型caspase-3的蛋白水平明显下降,并且SIRT1的酶活性和蛋白表达水平显著增加,P53的乙酰化水平下降。结论: EGCG可通过调控SIRT1-P53通路抑制卵巢癌SKOV-3细胞活力并诱导其凋亡。     

16 Hz,150 dB的次声不同作用时间对大鼠海马caspase-1和caspase-3表达的影响

目的:探讨16 Hz,150 dB次声作用1、3、5 d对大鼠海马caspase-1、caspase-3表达的影响。方法:将成年雄性SD大鼠置于高强度次声仓内,进行16 Hz,150 dB强度的次声照射,每天2 h。40只大鼠随机分为四组,对照组、次声组(分别为次声1 d组、3 d组和5 d组)。次声照射结束后,立即取材。采用免疫荧光法观察大鼠海马caspase-3的表达变化,采用Western Blot方法检测caspase-1、caspase-3的表达量。结果:免疫荧光染色结果显示:与正常组相比,次声5 d组的大鼠海马caspase-3的表达增多(P0.05);Western Blot结果显示:与正常组相比,次声5 d组的大鼠海马caspase-1的表达增多、caspase-3的表达减少、活化形式的caspase-3表达增多(P0.05);次声5 d组大鼠海马caspase-1、caspase-3的表达均比次声1 d组和次声3 d组要高(P0.05)。结论:16 Hz,150 dB的次声随着对大鼠作用的时间延长,其海马caspase-1和caspase-3的表达逐渐增多,引起海马组织的焦亡和凋亡也增多。     

次声对大鼠焦虑抑郁情绪的影响

目的:探讨不同暴露时程16 Hz、115 dB次声对大鼠焦虑抑郁情绪的影响。方法:健康成年雄性SD大鼠随机分为空白对照组(control)、假次声暴露组(sham exposure)和次声暴露组(infrasound exposure),空白对照组动物正常饲养于清洁级动物房,次声暴露组动物每天同一时间段置于次声实验室进行16 Hz、115 dB次声连续暴露(时程分别为7、14、21 d,2 h/d),假次声暴露组动物每天置于同一次声实验室但无次声暴露。大鼠焦虑抑郁情绪变化采用开放旷场和高架十字迷宫行为实验进行评价。结果:两组行为检测均显示,空白对照组与假暴露7、14、21 d组各行为指标均未发现统计学差异,表明次声实验室环境对大鼠行为学表现不会造成明显影响。开放旷场行为实验结果显示,次声连续暴露7 d组动物中央区运动距离显著低于假暴露7 d组(P <0.01),其他行为学实验指标未发现统计学差异;次声连续暴露14 d组动物中央区运动距离、中央区停留时间、中央区进入次数、总运动距离均显著低于假暴露14 d组,角落区停留时间、总静止时间则显著高于假暴露14 d组(P <0.05...     

慢性痛大鼠模型前扣带皮层内小胶质细胞活化与细胞因子表达

目的:观察慢性炎症性疼痛大鼠前扣带皮层(ACC)中小胶质细胞标记物(CD14,IBA1)及促炎症细胞因子(IL-1β,TNF-α)的表达变化。方法:单侧足底注射完全弗氏佐剂(CFA)诱导大鼠慢性炎症性疼痛,用RT-PCR检测ACC中CD14、IL-1β、TNF-αmRNA的表达,用免疫组织化学染色观察ACC中IBA1免疫阳性小胶质细胞的变化。结果:足底注射CFA后4 h、3 d双侧ACC中CD14 mRNA表达较生理盐水(NS)组有显著增加(P<0.001);CFA后4 h、3 d、14 d双侧ACC中IL-1βmRNA表达较NS组有显著增加(P<0.001);CFA后3 d、14 d双侧ACC中TNF-αmRNA表达较NS组有显著增加(P<0.001)。CFA 3 d组双侧ACC中IBA1免疫阳性小胶质细胞胞体变大、突起变粗。结论:ACC中小胶质细胞的活化以及IL-1β和TNF-α的表达增加可能在慢性炎症性疼痛的产生和维持中发挥作用。     

Lactacystin诱导大鼠黑质小胶质细胞的变化及炎性介质的表达

目的:观察蛋白酶体抑制剂Lactacystin诱导大鼠黑质小胶质细胞的变化及炎性介质的表达。方法:采用立体定向术将不同剂量(2μg,10μg)的蛋白酶体抑制剂Lactacystin注射至大鼠黑质部位,免疫组织化学法观察黑质区多巴胺能神经元和小胶质细胞的变化及炎性介质环氧化酶-2(COX-2)、核转录因子κB(NF-κB)的表达。结果:注射不同剂量Lactacystin14d,阿扑吗啡腹腔注射后2μgLactacystin组大鼠无旋转行为,10μgLacta-cystin组出现典型旋转行为;8周后2μgLactacystin组大鼠损毁侧黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数明显减少,2μg和10μgLactacystin组黑质小胶质细胞数量均增加,炎性介质COX-2、NF-κB表达均增强。结论:蛋白酶体抑制剂Lactacystin能激活大鼠黑质小胶质细胞,诱导炎性介质表达。     

外周注射福尔马林诱导前扣带皮层中胶质细胞激活和细胞因子表达增高

为了观察外周注射福尔马林对大鼠前扣带皮层(ACC)中星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S100B,小胶质细胞标记物CD14以及与胶质细胞密切相关的炎症前细胞因子白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,本研究结合行为学检测和RT-PCR方法,观察了大鼠单侧足底皮下注射福尔马林后的行为学变化,并检测了在不同时间点ACC中GFAP、S100B、CD14、IL-1β和TNF-α在基因水平的表达变化。结果显示:福尔马林急性疼痛刺激的大鼠出现典型的双时相自发性疼痛反应。ACC中GFAP和S100B mRNAs表达水平在刺激后30min、1h增高,2h恢复正常;CD14 mRNA表达水平在15min开始增高,1h达到高峰,6h恢复正常;IL-1β和TNF-αmRNAs表达水平在刺激后30min、1h、2h增高,6h恢复正常。上述结果表明,福尔马林外周急性伤害性刺激能够诱导ACC内短暂性的星形胶质细胞、小胶质细胞激活及IL-1β、TNF-α表达增高,提示激活的胶质细胞及表达上调的炎症前细胞因子可能参与伤害性信息的调制。     

次声对PHA和同种异体抗原诱导小鼠脾细胞增殖的影响

目的观察次声对PHA诱导小鼠脾细胞增殖及同种异体抗原诱导T细胞增殖反应的影响。方法应用次声压力舱 ,建立小鼠动物实验模型。以8Hz、120dB次声作用于8wk龄雌性Balb/c鼠 ,每天作用2h ,连续作用14d。取小鼠脾细胞 ,用PHA或同种异体抗原刺激后 ,采用3H TdR掺入法检测脾细胞的增殖情况。结果次声能显著促进PHA诱导的小鼠脾细胞增殖 ,刺激指数(SI)为4.73±0.17 ,与正常对照组的SI(2.12±0.05)相比较 ,提高了2.23倍(P<0.01)。而次声对同种异体抗原诱导的T细胞增殖具有明显的下调作用 ,SI为2.48±0.12 ,较正常对照组4.59±0.32 ,降低45.97 %(P<0.01)。结论次声能够影响机体免疫淋巴细胞的功能。     

EGCG inhibits the growth and tumorigenicity of nasopharyngeal tumor-initiating cells through attenuation of STAT3 activation

A subset of cancer cells, termed cancer stem cells (CSCs) or tumor-initiating cells (TICs) could initiate tumors and are responsible for tumor recurrence and chemotherapeutic resistance. In this study, we enriched TICs in nasopharyngeal carcinoma (NPC) by the spheres formation and characterized the stem-like signatures such as self-renewal, proliferation, chemoresistance and tumorigenicity. By this method, we investigated that epigallocathechin gallate (EGCG), the major polyphenol in green tea could target TICs and potently inhibit sphere formation, eliminate the stem-like properties and enhance chemosensitivity in NPC through attenuation of STAT3 activation, which could be important in regulating the stemness expression in NPC. Our results demonstrated that STAT3 pathway plays an important role in mediating tumor-initiating capacities in NPC and suggest that inactivation of STAT3 with EGCG may represent a potential preventive and therapeutic approach for NPC.     

大鼠原代小胶质细胞的分离和培养方法的改进

目的:探索改进大鼠原代小胶质细胞培养分离纯化方法,以获取数量多、功能活性稳定的小胶质细胞。方法:在Miriam Mecha的混合胶质细胞培养方法的基础上稍加改良,采用直立手摇法进行分离纯化小胶质细胞,细胞铺板后再采用差速贴壁法进一步得到更纯的小胶质细胞。使用台盼蓝法进行细胞计数;采用CD11b免疫荧光方法对纯化的小胶质细胞进行纯度鉴定;采用原代小胶质细胞吞碳粒实验对其功能活性进行检测。结果:改进的方法可以稳定地获取大约1×106个/培养瓶(75 cm2,10 ml)的小胶质细胞,纯度达到98%,并且其吞噬活性也非常强。结论:改进的原代小胶质细胞培养方法操作时间短,获得细胞数量多、稳定性好、纯度高、功能活性强,且可第二次收获细胞,对于离体条件下进行小胶质细胞的研究具有广泛的实用价值。     

单纯性脑震荡大鼠海马OX-42阳性小胶质细胞的表达

目的:观察单纯性脑震荡(pure cerebral concussion,PCC)大鼠脑内海马小胶质细胞(microglia,MG)的反应和变化,探讨小胶质细胞是否参与脑损伤后的病理变化以及变化规律。方法:采用清醒状态下自制金属单摆闭合式脑损伤打击装置制备PCC模型,致伤后随机分为3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、7 d组(n=5),另设正常对照组(n=5)。采用小鼠抗鼠OX-42单克隆抗体(MG特异性标记物)进行免疫组织化学SP法(streptavidin-peroxidase,SP)和免疫荧光染色,观察PCC组和正常组大鼠海马CA1～4区和上、下齿状回OX-42的表达变化。结果:正常状态下,OX-42表达很少甚至很难发现,PCC组大鼠海马CA1～4区和上、下齿状回的OX-42的表达呈现伤后逐渐增高趋势,与正常组比较有显著性差异(P<0.05),7 d后有下降趋势,但仍高于正常组。结论:PCC损伤早期海马MG出现激活后的形态和数量的变化,提示MG参与PCC致伤后的病理变化。