过氧化物酶增生物激活受体γ激动剂对肝星状细胞α1(I)胶原表达的影响

目的观察过氧化物酶增生物激活受体γ(PPARγ)激动剂15d-PGJ2对肝星状细胞株(HSC-T6)前胶原α1(Ⅰ)表达的影响,以进一步探讨PPARγ在肝纤维化进程中的作用机制。方法体外培养HSC-T6细胞,取对数生长期的细胞分为空白对照组、TGFβ-对照组和15d-PGJ2处理组,TGF-β对照组和15d-PGJ2处理组均给予TGF-β因子(终浓度3 ng/ml)共孵育6 h,15d-PGJ2处理组再用1、2、3μmol/L的PPARγ激动剂15d-PGJ2作用24 h。应用RT-PCR、Westernblot方法观察分析各组间肝星状细胞PPARγ、前胶原α1(Ⅰ)基因表达的变化。结果15d-PGJ2能够显著上调PPARγmRNA和蛋白的表达水平,15d-PGJ2处理组的相对吸光度值较空白对照明显升高(P<0.05),而TGFβ-对照组与空白对照组差异无显著性意义(P>0.05)。在TGFβ-刺激下,TGF-β对照组前胶原α1(Ⅰ)mRNA水平均升高,同空白对照组相比差异有显著性意义(P<0.05);15d-PGJ2处理组细胞前胶原α1(Ⅰ)mRNA水平与空白对照组相比差异无显著性意义(P>0.05),但与TGFβ-对照组相比,其表达明显受抑制(P<0.05)。结论PPARγ激动剂15d-PGJ2能够通过上调PPARγ表达而抑制前胶原α1(Ⅰ)转录,提示PPARγ可抑制肝纤维化的发生发展。     

过氧化物酶增生物激活受体γ在ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的探讨氧化修饰的低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的机制和过氧化物酶增生物激活受体（PPAR7）特异性激动剂对培养的VSMC凋亡的影响．评价PPAR7在动脉粥样硬化（AS）发生和发展中的作用。方法培养的鼠VSMC中加入不同浓度OX—LDI．和PPAR7的两种激动剂—环格列酮（ciglitazone）和15脱氧-前列腺素J2（15d—PGJ2）．孵育24h．用透射电镜观察细胞凋亡的特征性形态学改变；流式细胞仪测定细胞凋亡率。另外，在给予ox-LDL、cig／itazone和15d—PGJ2的同时．加入PPARγ的抑制剂PGF2α，比较未加和加入抑制剂PGF2α组之间VSMC的形态学改变、凋亡率。结果ox—LDL及ciglitazone、15d—PGJ2均可诱导VSMC凋亡，且凋亡率增加与3种物质的剂量变化有关；PGF2α能降低OX—LDL ciglitazone和15d—PGJ2诱导的VSMC凋亡率。结论PPAR7内源性的配体OX-LDL诱导VSMC凋亡的作用是通过激活PPAR7途径实现的；PPAR7内源性的配体和特异性激动剂过度激活PPAR7途径有促进细胞凋亡而导致AS斑块不稳定性增加的可能。     

罗格列酮对四氯化碳诱导大鼠早期肝纤维化的抑制作用

目的 探讨过氧化酶增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮（rosiglilazonc）对四氯化碳（CCl4）诱导大鼠早期肝纤维化的抑制作用。方法 建立四氯化碳诱导大鼠早期肝纤维化模型．同时给予罗格列酮（1mg／kg）治疗．造模结束后分别检测正常对照组、四氯化碳模型组、罗格列酮干预组大鼠血清中Ⅲ型前胶原肽（PⅢP）、Ⅳ型胶原、透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的浓度．并做肝病理组织学检查；用RT-PCR方法检测Ⅰ型前胶原mRNA的表达。结果 同四氯化碳模型组相比．罗格列酮干预组肝组织中Ⅰ型胶原mRNA表达明显降低（P〈0．01）。血清中PⅢP、Ⅳ型胶原、LN、HA、TNF-α浓度显著降低（均P＜0．05）．病理组织学检查显示肝纤维化程度亦显著减轻。结论 PPARγ受体激动剂罗格列酮通过抑制胶原基因表达从而在大鼠体内发挥早期抗纤维化的作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠肾成纤维细胞转化生长因子β1/Smad信号途径的作用研究

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂阻断转化生长因子（TGF）β1致肾间质纤维化作用的机制，探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞株（NRK／49F），观察PPARγ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGFβ1诱导的纤维连接蛋白（FN）mRNA表达的影响。利用Western印迹技术观察PPARγ激动剂对TGFβ1诱导的FN和Smad蛋白表达的影响。结果（1）与1ng／ml TGFβ1组比较，5ng／ml TGFβ1组FN mRNA表达量增加了3．6倍（P〈0．01），5ng／ml TGFβ1刺激24h时较刺激前增加了2．4倍（P〈0．01），TGFβ1诱导FN mRNA表达呈一定范围内的剂量（0—5ne／ml）和时间（0—24h）依赖效应。（2）与5ng／ml TGFβ1组比较，10μmol 15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组FN mRNA表达量分别降低37．3％、41．5％和22．7％，FN蛋白表达量分别降低20．6％、38．1％和28．6％。（3）5ng／ml TGFβ1以时间（0．2h）依赖方式诱导p-Smad2／3蛋白表达量增加，作用1h时达到高峰；5ng／ml TGFβ1组p-Smad2／3蛋白表达量较对照组和2ng／ml TGFβ1组分别增加3．42倍和0．97倍。（4）15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组p-Smad2／3蛋白表达量与5ng／ml TGFβ1组比较分别降低61．2％、53．0％和59．S％。3种药物干预组之间p-Smad2／3蛋白表达量比较差异无统计学意义，各组Smad2和Smad3蛋白表达量无显著变化。结论PPART激动剂可以抑制TGFβ1诱导的肾间质成纤维细胞细胞外基质合成，其机制可能与阻断TGF-β1／Smad信号途径有关，提示PPARγ激动剂具有抗肾间质纤维化的潜在作用，可能成为延缓终末期肾功能衰竭的治疗新手段之一。     

结缔组织生长因子反义寡核苷酸对肝星状细胞胶原表达的影响

目的:观察结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸对肝星状细胞株(HSC-T6)前胶原α2(Ⅰ)表达的影响。方法:实验分为反义寡核苷酸(ASODN)组、正义寡核苷酸(SODN)组、脂质体对照组、空白对照组。除空白对照组外,其余各组均于转导前提前加入TGF-β1因子刺激。结果:ASODN能显著抑制经TGF-β1活化后的HSC-T6前胶原α2(Ⅰ)mRNA的表达,而SODN和脂质体对照组对HSC-T6前胶原α2(Ⅰ)mRNA的表达均无明显影响。结论:前胶原α2(Ⅰ)表达与CTGF密切相关,进一步提示CTGF可能是肝纤维化发生发展的关键介导者;应用反义寡核苷酸封闭CTGF的表达有望成为肝纤维化治疗的一种新手段。     

白细胞介素10对肝纤维化大鼠转化生长因子β1及受体的影响

目的 研究白细胞介素10（IL-10）对肝纤维化模型大鼠转化生长因子p1（TGF-β1）、Ⅰ型受体（TGF-RⅠ）和Ⅱ型受体（TGF-RⅡ）表达的影响。方法 27只SD大鼠随机分为对照组和CCl4诱导肝纤维化模型组。至造模第9周。模型组随机分为3组：造模结束即处死（S组）、IL-10治疗2周后处死（I组）及自然恢复2周后处死（R组）。通过免疫组织化学和ELISA方法检测各组肝脏及血清中TGF一β1、TGF-RⅠ和TGF-RⅡ含量。结果 成功建立肝纤维化模型。肝病理组织学显示I组纤维化程度明显改善。R组纤维化程度无明显改善。TGF-β1、TGF-RⅠ和TGF-RⅡ的阳性表达分别为S组明显升高（与对照组比较，P〈0．05），I组显著降低（与对照组阳性指数接近P〉0．05），R组降低，但阳性指数仍明显高于I组（P〈0．05）。血清TGF-β1在S组浓度最高，I组最低。R组较S组略有下降但仍显著高于I组（P〈0．05）。结论 外源性IL-10可能通过抑制肝组织中TGF-β1及相应受体的表达。减弱TGF-β1致纤维化的作用．对肝纤维化有一定的治疗的作用。     

γ干扰素对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的干预作用

目的探讨γ干扰素（IFN-γ）对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的干预作用及其可能的机制。方法75只SD雄性大鼠随机分为健康对照组、肺纤维化模型组、地塞米松干预组、高剂量IFN-γ干预组和低剂量IFN-γ干预组，每组15只。各组随机分别于7，14和28d各处死5只，收集肺组织作切片行HE及Masson染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度，行免疫组化染色测定肺组织转化生长因子岛（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达水平。结果与模型组比较，3个干预组的肺泡炎及肺纤维化程度均明显减轻（P均〈0．05），肺组织TGF-β1、CTGF、Ⅰ型及Ⅲ型胶原的蛋白表达水平明显降低（P均〈0．05），其中高剂量IFN-γ干预组肺组织TGF-β1、Ⅰ型及Ⅲ型胶原的蛋白表达水平较低剂量干预组更为显著（P均〈0．05）。结论IFN-γ具有与地塞米松相似的较强的抗纤维化效应，且不良反应更少。机制可能为通过抑制细胞因子TGF-β1、CTGF的表达而减少肺组织中Ⅰ型及Ⅲ型胶原的生成，最终抑制肺纤维化。     

姜黄素抗血吸虫病肝纤维化及其机制的实验研究

目的 探讨姜黄素抗血吸虫病肝纤维化的作用及可能机制。方法 小鼠随机分为4组：对照组、感染模型组、吡喹酮治疗组和姜黄素治疗组,除对照组外,各组建立血吸虫病肝纤维化小鼠动物模型,用实时荧光定量 PCR 反应观察小鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) mRNA 的表达。应用 HE 染色,免疫组化法及多媒体病理图文定量分析,观察各组小鼠肝脏的病理改变及转化生长因子β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化。结果 姜黄素可显著减轻肝脏纤维组织增生。感染模型组及吡喹酮治疗组 PPARγmRNA 表达较对照组及姜黄素治疗组显著减弱 ( P ＜0.05);姜黄素治疗组 TGF-β1,α-SMA 及Ⅰ、Ⅲ型胶原水平均明显低于吡喹酮治疗组和感染模型组 ( P ＜0.05)。结论 姜黄素有明显的抗日本血吸虫病肝纤维化作用,其抗纤维化机制与其激活 PPARγ 的表达、抑制肝星状细胞 (HSC) 表达 α-SMA 及分泌 TGF-β1,并减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成有密切关系。     

转化生长因子β1对L929细胞增殖转分化及细胞外基质代谢的影响

目的 探讨转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对L929细胞增殖的影响,为体外研究预防食管内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD)术后狭窄提供理论基础.方法 实验分为两组,①空白对照组:L929细胞不做处理;②TGF-β1组,用10 ng/mL TGF-β1 持续刺激L929细胞,依据刺激时间不同又分为24、48、72、96、120 h 5个亚组.观察各组对细胞增殖的影响.用CCK-8法检测细胞增殖,qPCR检测α-SMA及Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原、MMP1、TIMP1 mRNA 表达,Western blot检测α-SMA、MMP1、TIMP1蛋白水平,ELISA检测Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原合成.结果 与空白对照组比较,TGF-β1组细胞增殖能力显著增高(P＜0.05),TGF-β1组α-SMA、Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原、MMP1、TIMP1 mRNA表达均显著升高(P＜0.05);TGF-β1刺激24 h组Ⅰ型前胶原合成增加(P＜0.05),TGF-β1组Ⅲ型前胶原合成增加(P＜0.05);TGF-β1组MMP1、TIMP1蛋白表达增加(P＜0.05).结论 TGF-β1能促进L929细胞增殖,并诱导L929细胞向肌成纤维细胞转分化,同时促进Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原以及MMP1、TIMP1合成.     

肾纤复元胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的抑制作用及机制探讨

目的观察肾纤复元胶囊对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型的治疗作用并探讨其机制。方法将48只SD大鼠随机分为假手术（SOR）组、UUO模型组、氯沙坦治疗组（LOS组）和肾纤复元胶囊治疗组（SXFYC组）。后三组采用经典的单侧输尿管梗阻术建立肾间质纤维化大鼠模型。观察术后第7、14天各组大鼠血尿生化指标变化、肾组织病理变化，检测转化生长因子β1（TGF—β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤维连接蛋白（FN）在肾组织中的表达及TGF-β1、α-SMA、ColⅠ和FN在基因水平的表达情况。结果不同组大鼠术后第7、14天24小时尿蛋白总量差异无显著性（P〉0．05），两治疗组血肌酐明显低于UUO模型组（P〈0．05），两治疗组间差异无统计学意义（P〉0．05）；光镜下肾组织病理切片显示两治疗组与同一时间点UUO模型组相比，肾间质纤维化程度显著降低（P〈0．05），两治疗组间差异无统计学意义（P〉0．05）；免疫组化和RT—PCR结果表明，两治疗组各时间点TGF—β1、α—SMA、ColⅠ和FN的表达均低于UUO模型组（P〈0．05），两治疗组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肾纤复元胶囊可从一定程度上减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度，其作用机制可能与下调TGF—β1和α—SMA表达、抑制ColⅠ和FN的合成有关。     

消癖丸干预二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的效应及其机制

目的：探讨消癖丸干预二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN）诱导的大鼠肝纤维化的作用。方法：采用0．5％的DMN溶液2mL／kg体质量腹腔注射,每周连续注射3d,每日1次,共4周,制备大鼠肝纤维化模型。第3周开始模型大鼠随机分为模型对照组和消癖丸组,消癖丸组给予消癖丸煎剂灌胃,模型对照组给予等量的生理盐水。治疗2周后,观察大鼠肝功能、肝组织病理学改变及肝纤维化相关指标α平滑肌肌动蛋白（alpha—smooth muscle actin,α-SMA）、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF—β1）、组织金属蛋白酶抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）和血红素氧合酶1（heme oxygenase-1,HO-1）表达的变化。结果：（1）与正常大鼠比较,造模2和4周时模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性逐渐升高（P〈0．01或P〈0．05）,4周时血清总胆红素（total bilirubin,TBil）含量显著增加（P〈0．05）;与4周模型组比较,消癖丸组血清AIT、AST、ALP、TBil水平均显著降低（P〈0．01或P〈0．05）。（2）模型大鼠肝组织炎症反应及胶原沉积逐渐加重,4周时部分大鼠肝组织已形成完整包绕的假小叶结构,肝组织羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量显著增加（P〈0．01）;与4周模型组比较,消癖丸组肝组织炎症、胶原沉积明显减轻,肝组织Hyp含量显著降低（P〈0．05）。（3）模型大鼠肝组织α-SMA蛋白表达逐渐增加,4周时显著高于2周模型组（P〈0．01）;聚合酶链式反应分析显示,肝组织α—SMA、TGF—β1、TIMP-1和HO-1mRNA的表达随着模型的进展逐渐升高（P〈0．01）;与4周模型组比较,消癖丸组肝组织α-SMA蛋白的表达及α—SMA、TGF-β1、TIMP-1、HO-1mRNA的表达均显著降低（P〈0．01或P〈0．05）。结论：消癣丸能够显著抑制DMN诱导大鼠肝纤维化的进展,且这一作用机制可能与抑制肝星状细胞活化有关。     

骨形成蛋白-7对MCP-1诱导人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1-Smad 3信号转导的作用

目的探讨骨形成蛋白-7（BMP-7）对单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导体外培养人肾小管上皮细胞转分化的作用,并初步探讨该作用与转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3表达变化的关系。方法将体外培养HK-2细胞分为以下各组：阴性对照组;阳性对照组：TGF-β1（5ng／ml）处理;MCP-1（0．1,1,10及50ng／ml）组,BMP-7组（0．1,1,10,50ng／ml）;MCP-1（1ng／ml）加BMP-7（50ng／ml）组;MCP-1（1ng／ml）加MCP-1中和抗体（5μg／ml）组。应用半定量RT—PCR方法检测HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）mRNA表达,ELISA方法测定上清液中Ⅰ型胶原分泌,Western blot方法检测HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达。结果MCP-1（0．1,1ng／ml）组HK-2细胞α—SMAmRNA表达较阴性对照组明显增强（P〈0．01）。ELISA方法测定MCP-1（0．1,1ng／ml）组上清液中I型胶原分泌明显高于阴性对照组（P〈0．01）。MCP-1中和抗体与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后。HKC细胞α—SMAmRNA表达几乎被完伞抑制（P〈0．001）,而BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后HK-2细胞α—SMAmRNA表达仅部分被抑制（P〈0．01）;MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后Ⅰ型胶原分泌较MCP-1（1ng／ml）组明显降低（P〈0．05）。Western blot方法检测显示,MCP-1（1ng／ml）组HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达水平均较阴性对照组明显上调（P〈0．01）。MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后,HK-2细胞TGF-β1表达均分别比MCP-1（1ng／mL）单独作用明显下调,以MCP-1中和抗体的作用更强（P〈0．01,P〈0．05）;在MCP-1中和抗体或BMP-7作用24h后,Smad3表达也有类似下调（P〈0．01,P〈0．05）。结论MCP-1能诱导体外培养的HK-2细胞发生转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达上调有关。BMP-7能部分抑制MCP-7诱导HK-2细胞转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达部分下调有关;间时提示MCP-1诱导的转分化可能涉及非TGF—β依赖的细胞信号传导途径,需进一步研究。     

siRNA 抑制 HM GA1基因表达对 LX-2细胞生物学功能的影响

目的：探讨高迁移率蛋白 A1（HMGA1）siRNA 对人肝星状细胞 HMGA1、α-SMA 、E-钙黏素（E-cadherin）基因的表达调控作用及增殖活性的影响,并探讨其可能的机制。方法将有效的人工合成的 HMGA1 siRNA 转染人肝星状细胞 LX-2（LX-2）后沉默 HMGA1基因的表达。通过实时荧光定量 PCR（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 LX-2细胞中HMGA1、α-SMA 和 E-cadherin 的 mRNA 及蛋白表达水平。采用四甲基偶氮唑盐（M TT ）法检测 LX-2细胞增殖水平。结果以HMGA1-siRNA 序列1组沉默效果最好。 TGF-β1刺激组与 TGF-β1＋ NC-siRNA 组之间细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 、E-cad-herin 的基因及蛋白表达水平差异无统计学意义（P ＞0．05）,细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 表达均明显高于正常对照组（P ＜0．05）,E-cadherin 表达显著低于正常对照组（P＜0．05）;TGF-β1＋ HMGA1 siRNA 组细胞增殖水平及 HMGA1、α-SMA 的 mR-NA 及蛋白表达水平较另外3组均显著下降（P＜0．05）,E-cadherin 表达水平显著增高（P＜0．05）。结论靶向 HMGA1的 siRNA能够沉默 LX-2中 HMGA1的表达;抑制 TGF-β1诱导的 LX-2增殖水平,提示 HMGA1参与了 TGF-β1诱导的肝星状细胞活化。     

补肾通督方对强直性脊柱炎患者血清TNF-α、TGF—β1及骨代谢的影响

目的：探讨补肾通督方治疗强直性脊柱炎（AS）骨代谢的作用机制。方法：65例AS患者随机分为治疗Ⅰ组（30例,用柳氮磺胺吡啶治疗）和治疗Ⅱ组（35例,用补肾通督方治疗）,并设正常组30例。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组治疗前及治疗24周后血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、骨钙素（BGP）、Ⅰ-型胶原C末端肽（CTX）水平;同时采用双能X线（DEXA）骨密度仪测量治疗前后腰椎和股骨颈的骨密度（BMD）。结果：治疗前两组患者BMD降低,血清TNF—α、CTX水平升高,TGF-β1、BGP下降,与正常组比较有显著差异（P〈0．05,P〈0．01）;治疗后,治疗Ⅱ组各项指标均有不同程度改善（P〈0．05,P〈0．01）,且TNF—α、CTX和骨密度的改善明显优于治疗Ⅰ组（P〈0．05）。结论：补肾通督方可通过调节AS相关细胞因子网络平衡,抑制骨吸收、促进骨形成,有效治疗AS患者骨量丢失。     

白藜芦醇通过巨噬细胞源性外泌体调节肝星状细胞活化对肝纤维化的影响

目的：探讨白藜芦醇（RSV）通过调节巨噬细胞影响肝星状细胞活化的机制。方法：以超速离心法提取空白组（NC-E组）和RSV处理（RSV-E）组外泌体并进行鉴定。将NC-E组及RSV-E组外泌体与转化生长因子-β1(TGF-β1)活化的肝星状细胞JS-1共培养，分为对照组、TGF-β1活化组（TGF-β1组）、NC-E+TGF-β1活化组（NC-E+TGF-β1组）和RSV-E+TGF-β1活化组（RSV-E+TGF-β1组）。采用免疫荧光法、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、western blotting检测肌动蛋白A(α-SMA)和Ⅰ型胶原a1链（Col1a1）纤维化指标表达。Western blotting检测Beclin1和LC3 Ⅰ/Ⅱ自噬相关指标表达。结果：与对照组相比，TGF-β1组α-SMA、Col1a1、Beclin1和LC3 Ⅰ/Ⅱ表达水平升高（P<0.05）；与TGF-β1组相比，RSV-E+TGF-β1组α-SMA、Col1a1、Beclin1和LC3 Ⅰ/Ⅱ表达水平下降（P<0.05）,NC-E+TGF-β1组与TGF-β1组差异无统计学意义（P...     

囊素五肽对人肺成纤维细胞细胞外基质及转化生长因子β1／Smad信号通路的影响

目的观察囊素五肽（BP5）对转化生长因子β1（TGF-1）刺激的人肺成纤维细胞分泌的细胞外基质以及对转化生长一β1／Smad信号通路的影响,探讨囊素五肽抗肺纤维化的机制。方法HLF细胞分为阴性对照组、TGF- β1 刺激组、TGF-β1＋BP5药物干预组（三组均用TGF-β1刺激后分别使用不同浓度BP52．5、5及10μg／mL进行干预）。免疫荧光法测定细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,Westernblot方法检测collagen—Ⅰ、p-Smad2／3、p-Smad3和Smad7蛋白的表达。结果TGF—β1刺激细胞经免疫荧光标记显示α-SMA阳性表达,说明人肺成纤维细胞在TGF-β1刺激下转化为肌成纤维细胞（MF）,TGF-β1刺激同时加BP5不同药物浓度组中,10μg／mL的BP5药物浓度能显著减少细胞增殖转化。经TGF-β1刺激后,人肺成纤维细胞collagen—Ⅰ[（1．402±0．158）比（0．605±0．367）]、p-Smad2／3[（1．457±0．111）比（0．815±0．039）]、p-Smad3[（1．320±O．147）比（0．623±O．128）]蛋白表达较刺激前表达明显增多（P〈0．01）,Smad7表达较对照组降低[（0．613±0．107）比（0．865±0．063）,P〈0．05）];与TGF-β1处理组相比,BP5可抑制由TGF-β1刺激人肺成纤维细胞引起的collagen—Ⅰ蛋白[（0．718±0．049）比（1．402±0．t58）]、p-Smad2／3[（0．696±0．031）比（1．457±0．111）]p-Smad3[（0．766±0．006）比（1．320±0．147）]表达上调（P均〈0．01）,而Smad7的蛋白表达明显增加[（1．237±0．173）比（0．614±0．107）,P〈0．05]。结论BP5可能通过抑制TGF—β1／Smads信号通路激活,下调TGF-β1刺激下人肺成纤维细胞的collagen-Ⅰ及d—SMA蛋白的表达,提示BP5可能对肺纤维化具有一定的干预作用。     

金丝桃素抗乙型肝炎病毒作用及机制的体外研究

目的：从细胞水平评价金丝桃素（HY）的抗乙型肝炎作用,并初步探寻其药物作用靶点。方法选择可分泌乙型肝炎病毒的肝细胞株 HepG2．2．15为实验对象,HY 为 HY 组,拉米夫定（3TC）为3TC 组,去离子水为空白对照组,对细胞进行分组给药。给药72 h 后,采用 Southern 印记杂交及荧光定量 PCR 检测病毒 HBV-DNA 的复制水平;ELISA 检测 HBV 表面抗原（HBsAg）和 HBVe 抗原（HBeAg）的抑制率;采用 Northern blot 与荧光定量 PCR 检测 pgRNA 的表达水平;Western blot 及荧光定量 PCR 检测调控因子肝细胞核因子3（HNF3β）、肝细胞核因子4（HNF4α）、过氧化物酶体增殖激活受体／视黄受 X 受体（PPARα／RXRα）的表达水平。结果与空白对照组相比,HY 组与3TC 组对 HepG2．2．15细胞中的 HBV DNA 及 HBsAg、HBeAg 的表达有明显抑制作用（P ＜0．05）。与空白对照组相比,HY 可显著减少 pgRNA 的表达（P ＜0．05）,而3TC 无明显变化（P ＞0．05）。与空白对照组和3TC 组相比,HY 对调控因子 HNF3β与 HNF4α的表达有显著影响（P ＜0．05）,但对 PPARα和PXRα的表达无影响（P ＞0．05）。结论 HY 具有强效抗乙型肝炎病毒作用,且其可使负向调控因子 HNF3β的表达升高并降低正向调控因子 HNF4α的表达。提示其药物作用靶点可能为 pgRNA。     

护肝合剂对肝星形细胞的活化及胶原表达的作用和机制

目的观察护肝合剂对肝损害模型大鼠血清TGF-β1的影响及护肝合剂含药血清对HSC—T6细胞的增殖、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达的影响,探讨该复方对肝纤维化的可能作用及其机制。方法设立正常组、护肝合剂组、模型组,采用卡介苗和脂多糖进行肝损害造模,然后观察3组ALT、AST和血清TGF-β1的变化。制备各组大鼠的血清,进行HSC-T6细胞的培养,采用MTT方法观察该细胞的增殖情况．并用RT—PCR的方法观察Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。结果模型组造模前后的ALT、AST及TGF-β1都显著升高（P〈0．01）,护肝合剂组上述指标较模型组显著下降（P〈0．01）,护肝合剂组的HSC-T6细胞增殖较模型组显著下降（P〈0．01）,且没有Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。结论护肝合剂能在一定程度上通过改善肝功能、降低TGF-β1水平抑制肝星形细胞的增殖,改善肝纤维化程度。     

阻断Smad3对转化生长因子β1诱导Ⅰ型胶原表达的影响

目的观察siRNA-Smad3对TGF-β1诱导的肌成纤维细胞（C2C12）分泌Ⅰ型胶原的影响。方法用不同浓度的TGF-β1（0、1、5和10ng/mL）干预C2C12细胞24h,200pmol/L siRNA-smad3转染C2C12细胞24h,用ELISA和RT-PCR方法测定Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达。结果0、1、5和10ng/mL TGF-β1干预C2C12细胞,Ⅰ型胶原蛋白（ng/mL）检测结果分别为（616±16）,（713±19）,（783±23）,（853±17）,Ⅰ型胶原mRNA表达（Ⅰ型胶原/β-actin光密度比值）分别为（0.93±0.08）,（1.83±0.17）,（2.50±0.29）,（2.94±0.14）,三组间相互比较P均〈0.01。200pmol/L siRNA-Smad3转染C2C12细胞24h后,用5ng/mL TGF-β1分别干预24h后检测Ⅰ型胶原蛋白：实验组、空白对照组、内对照组分别为（413±20）、（473±29）、（571±29）ng/mL;Ⅰ型胶原mRNA表达分别为（0.78±0.17）、（0.86±0.10）、（1.85±0.19）。内对照组表达增强（与实验组比较P〈0.05）。结论TGF-β1促进C2C12细胞Ⅰ型胶原合成与mRNA表达呈剂量依赖性;siRNA阻断Smad3表达,抑制了TGF-β1促进Ⅰ型胶原合成与mRNA表达的作用。     

贯叶连翘提取物对TGF—β1诱导肺成纤维细胞胶原合成影响的体外研究

目的研究贯叶连翘提取物对TGF-β1诱导离体肺成纤维细胞胶原合成的影响。方法离体成纤维细胞分别加入TGF-β1（10ng／ml）、贯叶连翘提取物（250mg／L）以及TGF-β1＋贯叶连翘提取物共培养48h,设为TGF-β1组,贯叶连翘组,TGF-β1贯叶连翘组,取DMEM培养液为对照组。应用SP免疫细胞化学法,免疫荧光细胞化学法及平均光密度（MOD）分析,观察在TGF-β1作用下,肺成纤维细胞α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达及贯叶连翘提取物的干预。结果TGF-β1诱导肺成纤维细胞α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原阳性染色表达均显著高于对照组。贯叶连翘提取物干预48小时后,α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原阳性染色表达明显下降,仍高于空白对照组。结论贯叶连翘提取物可抑制TGF-β1：诱导肺成纤维细胞转分化及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的合成。