Ezrin和CD44v6在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌组织中Ezrin和CD44v6的表达及其临床病理意义.方法 应用免疫组织化学(SP法)检测73例胃腺癌患者组织标本、15例胃不典型增生组织及12例癌旁胃黏膜组织中Ezrin和CD44v6的表达情况.结果 (1)Ezrin 在正常胃黏膜组、胃不典型增生组和胃癌组中的阳性表达率分别为41.7%、53.3%和83.6%.CD44v6在正常胃黏膜组、胃不典型增生组和胃癌组中的阳性表达率分别为25%、40%和82.2%.(2)Ezrin和CD44v6的表达与淋巴结转移密切相关,有淋巴结转移组Ezrin与CD44v6的阳性率均明显高于无淋巴结转移组(P<0.05);在Ezrin和CD44v6同时表达组中,淋巴结转移率为63%(34/54例)高于两者均为阴性组(1/6例,16.7%)(P＜0.05).结论 联合检测Ezrin和CD44v6的表达有助于预测胃癌的恶性程度和转移潜能.     

胃癌中CD44s和CD44v6的表达及意义

目的 研究CD44s和CD44v6的表达与胃癌发生及临床病理学相关性.方法 利用各种类型的胃癌56例、非典型增生18例及正常胃黏膜组织22例,通过免疫组化ABC法检测CD44s和CD44v6的表达.结果 在胃癌、非典型增生及正常胃黏膜中CD44s蛋白的阳性表达率分别为80.4%、72.2%和13.6%;CD44v6蛋白的阳性表达率分别为83.9%、77.8%和4.6%.胃癌及非典型增生中CD44s和CD44v6蛋白的表达与正常胃黏膜相比均差异有显著性(P<0.01).CD44s和CD44v6蛋白在进展期胃癌中浸润到肌层时强阳性表达率分别为60.7%和57.1%;浸润到浆膜层的胃癌中强阳性表达率分别为82.4%和88.2%,与早期胃癌的强阳性率18.2%和9.1%相比均具差异有显著性(P<0.05,P<0.01).有淋巴结转移的胃癌中CD44s蛋白的强阳性表达率为90.5%,CD44v6蛋白的强阳性表达率为85.7%,与无淋巴结转移的胃癌中强阳性表达率为40.0%相比均差异有显著性(P<0.01).结论 CD44s和CD44v6蛋白的高表达与胃癌的发生有密切相关,CD44s和CD44v6蛋白与癌组织浸润深度及淋巴结转移有关,可做为胃癌的早期诊断及预后断定的重要指标之一.     

上皮钙黏蛋白和CD44v6蛋白在青年胃腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨上皮钙黏蛋白(E-cad)与CD44v6蛋白在青年(≤35岁)胃癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法:收集68例青年(≤35岁)和68例老年(≥60岁)胃腺癌组织,用免疫组织化学EnVision法检测E-cad和CD44v6的表达.结果:远离癌组织的正常胃黏膜上皮几乎全部上皮细胞膜着色,即正常表达;而胃癌组织中E-cad呈异常表达,即细胞质着色或异质性着色.青年胃癌组织E-cad异常表达率和CD44v6阳性表达率分别为70.6%和76.5%,而老年胃癌组织E-cad异常表达率和CD44v6阳性表达率分别为42.6%和51.5%,两者比较差异有统计学意义.青年胃癌淋巴结癌转移组和无淋巴转移组E-cad异常表达率分别为63.6%和32.6%,差异有统计学意义;CD44v6淋巴结癌转移组阳性表达率为80.4%;无淋巴转移组阳性表达率63.6%,差异有统计学意义.青年胃癌组织中E-cad异常表达和CD44v6蛋白表达呈正相关.结论:E-cad蛋白异常表达及CD44v6蛋白高表达预示青年胃癌具有较强的侵袭转移能力,可作为预测青年胃癌转移潜能的生物学指标.     

食管鳞癌中VEGF-C与CD44v6的表达及其与淋巴结转移的关系

目的研究食管鳞癌组织中血管内皮细胞生长因子-C(VEGF-C)与CD44v6的表达及其与淋巴结转移的关系。方法应用免疫组织化学方法对152例食管鳞癌组织进行VEGF-C与CD44v6蛋白检测结果VEGF-C与CD44v6蛋白在食管鳞癌的阳性表达为55.3%和71.7%,VEGF-C与CD44v6的表达与食管癌有无转移有显著差异(P<0.05)。结论VEGF-C与CD44v6与食管鳞癌淋巴结转移密切相关,可作为判断食管鳞癌预后的指标。     

CD44v4在乳腺浸润性导管癌中的表达及 其与浸润转移的关系

目的 探讨CD44v4在浸润性乳腺导管癌中的表达及其与浸润转移的关系。方法 选取2011年1月~2018年3月我院收治的乳腺浸润性导管癌185例设为观察组,另选取同期收治的乳腺良性疾病患者60例设为对照组,采用免疫组化法检测两组CD44v4的表达情况,并比较观察组CD44v4表达及临床病理因素情况。结果 观察组CD44v4阳性表达率为60.54%,高于对照组的5.00%,差异有统计学意义（P＜0.05）。CD44v4表达在不同年龄、绝经前后月经状况、原发瘤大小间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;不同TNM分期、组织学分级、淋巴结转移患者的CD44v4表达比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 CD44v4蛋白在乳腺浸润性导管癌患者中为高表达,检测其表达可作为判断肿瘤预后的新指标。     

非小细胞肺癌中Ezrin和CD44v6的表达及意义

目的 探讨非小细胞肺癌中Ezrin和CD44v6的表达及其与肺癌各种临床病理参数之间的关系.方法 采用免疫组化SP法检测55例非小细胞肺癌组织中Ezrin及CD44v6的表达.结果 Ezrin的表达程度与非小细胞肺癌的TNM分期(P=0.004)和淋巴结转移(P=0.003)密切相关; CD44v6的表达程度与非小细胞肺癌的TNM分期(P=0.012)和淋巴结转移(P=0.010)密切相关;Ezrin 和CD44v6两者在非小细胞肺癌组织中的表达呈正相关(r=0.568, P=0.000).结论 Ezrin和CD44v6与肺癌淋巴结转移和临床TNM分期密切相关,联合检测Ezrin和CD44v6有助于判断肺癌的预后.     

非小细胞肺癌组织中CD133和ALDH1的表达及其临床意义

目的 探讨肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSC)标记物CD133及乙酰脱氢酶1(aldehyde dehydrogenas1,ALDH1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测67例NSCLC组织中CD133和ALDH1蛋白的表达.结果 (1)CD133和ALDH1在32例NSCLC有淋巴结转移组阳性率均为78.13%,在35例NSCLC无淋巴结转移组的阳性率分别为48.57%和51.43%,差异均具有统计学意义(P均<0.05).与患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、组织学类型及组织分化程度均无关(P均>0.05).(2)CD133和ALDH1蛋白阳性表达呈正相关(r=0.389,P<0.05),CD133与ALDH1共表达与NSCLC的淋巴结转移和组织分化程度密切相关(P均<0.05).结论肺癌干细胞标记物CD133和ALDH1可能在NSCLC的淋巴结转移及组织分化中发挥重要作用,尤其是二者共表达可能作为评估转移及进展的观测指标之一.     

食管鳞癌中CD44v4/5、MMP-10的表达与淋巴结转移的关系

目的研究食管鳞癌中CD44v4/5、MMP-10的表达与浸润转移的关系。方法用免疫组化S-P法检测了73例食管鳞癌中CD44v4/5、MMP-10的表达。结果CD44v4/5在淋巴结转移组的阳性表达率为64.6%（31/48）,而在非转移组的阳性表达率为32.0%（8/25）,两组之间差异显著（P〈0.05）。MMP-10在淋巴结转移组的阳性表达率为79.2%（38/48）,而在非转移组阳性表达率为40.0%（10/25）,两组之间亦具有显著差异（P〈0.05）。结论CD44v4/5和MMP-10的表达均与食管鳞癌浸润密切相关。     

非小细胞肺癌中CD44v6的表达

目的　探讨CD4 4v6表达与非小细胞肺癌临床病理特征之间的关系。方法　采用免疫组化S P法检测 132例非小细胞肺癌、6 6例淋巴结转移癌和 115例正常肺组织CD4 4v6表达的情况。结果　非小细胞肺癌CD4 4v6阳性表达率为4 8 4 8% ,高于正常肺组织 17 39%的阳性表达率。CD4 4v6阳性表达与淋巴结转移状况、TNM分期、肿瘤大小和组织学类型有相关性。非小细胞肺癌淋巴结转移组、TNMⅢ期患者、直径 >3cm的肿瘤和鳞癌CD4 4v6阳性表达率分别高于无淋巴结转移组、TNMⅠ期和Ⅱ期患者、直径≤ 3cm的肿瘤和腺癌。淋巴结转移癌CD4 4v6阳性表达率高于肺原发癌。CD4 4v6阳性表达与患者的性别、年龄和组织学分级无相关性。结论　CD4 4v6阳性表达预示非小细胞肺癌具有较强的侵袭和转移能力 ,可作为一项预测非小细胞肺癌转移潜能生物学指标。     

CD44基因拼接体、p53基因突变和染色体倍性与大肠癌转移之间关系的机理研究

目的:探讨大肠癌CD44v6表达、p53基因突变和染色体倍性与大肠癌转移之间的关系和作用机理.方法:流式细胞仪测定大肠癌细胞倍性及其在细胞周期各相中的分布;RT-PCR方法及特异探针D3对大肠癌细胞进行Southern Blot,并对杂交条带进行辉度扫描;银染PCR单链构象多态性(SSCP)技术检测大肠癌细胞p53基因突变.结果:正常对照、良性腺瘤、肿瘤未转移和肿瘤转移组其CD44v6阳性率和p53基因突变率呈逐渐上升趋势,CD44v6辉度扫描表明肿瘤未转移组(2 317.26±198.73)和转移组(10024.16±855.40)相比较,表达量有显著差异(P＜0.02);CD44v6阳性和阴性两组中G2M期细胞均值分别占6.24%和5.48%(P＞0.05),异倍体细胞分别为62.16%和60.00%(P＞0.5);而p53基因突变和未突变两组中G2M细胞占10.33%和4.01%(P＜0.05),异倍体细胞分别为85.20%和30.00%(P＜0.005);肿瘤异倍体细胞转移率显著高于二倍体细胞.结论:CD44v6的表达与转移高度相关,CD44v6和p53基因突变与肿瘤转移关系可能涉及不同的作用机理.CD44v6与p53基因突变相比较而言,CD44v6不失为一个更好的肿瘤转移标记.     

DMD基因突变及突变检测技术研究进展

假性肥大型进行性肌营养不良（DMD／BMD）一类发病率较高的X连锁隐性遗传病。DMD基因庞大,突变机制复杂,随着分子生物学的进展,对DMD基因及其所编码aystrophin蛋白的认识不断深入,探索更简便、准确、经济的基因突变检测技术成为目前对DMD研究的热点,本文着重对DMD基因、突变与表型关系的研究进展,以及突变检测技术的进展做一综述。     

降钙素基因的化学合成与克隆

本文报道用化学法全合成降钙素的基因。基因全长113碱基对。采用大肠杆菌偏爱密码子。整个基因分为6个片段合成。用T~4DNA连接酶一次连接成功,序列分析证明合成的基因序列与设计的一致。     

宫颈癌组织中survivin与BCL-X表达及其相关性

目的研究宫颈癌组织中survivin、BCL-X的表达及其相关性。方法用免疫组化SP法检测survivin、BCL-X在10例正常宫颈组织及51例宫颈癌组织中的表达。结果Survivin在正常宫颈组织中不表达,在宫颈癌组织中表达阳性率为64.71%,Survivin表达阳性率与宫颈癌病理分级与临床分期呈正相关。Survivin表达阳性率与宫颈癌组织中BCL-X表达正相关。结论Survivin异常表达引起的凋亡抑制在宫颈癌发生、发展中起一定作用,其过表达提示宫颈癌预后不良。宫颈癌组织中survivin的表达与BCL-X的表达呈正相关。     

三例眼皮肤白化病患者TYR和P基因的突变分析

目的 分析眼皮肤白化病(oculocutaneom albinism,OCA)患者酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因和P基因的基因突变.方法 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction ,PCR)和变性高效液相色谱(de-naturing high-perfomanee liquia chromatography,DHPLC)技术对3例患者的眼皮肤白化病Ⅰ、Ⅱ型相关基因(TYR和P基因)的外显子进行突变检测,并对DHPLC检出的突变样本进行测序和限制性内切酶分析以验证该突变.针对未见报道的新突变,筛查100名表型正常的无关个体,排除多态的可能.结果 在3例患者中检测出两种P基因突变,未检测到TYR基因突变.其中,患者1的P基因第13外显子发生杂合突变T450M;患者2的P基因发生两个杂合突变,分别是第13外显子T450M和第23外显子G775R;患者3的P基因第23外显子发生杂合突变G775R.P基因第13外显子限制性内切酶分析显示,患者1、2均出现杂合突变T450M导致的Oli I酶切位点部分消失,100名表型正常的无关个体未检出该突变;经检索,T450M为一未见报道的新突变.结论 联合应用PCR、DHPLC、DNA测序和限制性内切酶分析的方法可有效的对白化病进行基因诊断.     

原发性肝细胞癌RIT1基因的突变和扩增

目的　探讨 RIT1基因突变和扩增在肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma,HCC)的发生情况及其与发病的关系。　方法　采用 PCR直接测序法检测 5 0例原发性 HCC患者的肝癌组织和非癌肝组织RIT1基因在所包含的 6个外显子的全序列寻找突变位点 ;并用荧光定量 PCR法检测 RIT1基因的扩增情况。　结果　在 5 0例肝癌组织中 1例出现第 5外显子编码区 2 4 1位核苷酸 G/ C变异 ,其对应密码子改变为GAG81CAG,编码氨基酸改变为 Glu81Gln,该氨基酸变异位于 GTP结合的保守功能域内 ,该病例的非癌肝组织以及其余 4 9例的肝癌组织和非癌肝组织均未发生此种改变 ;在 5 0例肝癌组织和非癌肝组织中均出现 5′- UTR(起始密码子前 2 1位核苷酸 ) G/ C变异 ;在获得有效扩增数据的 4 3例肝细胞癌患者中 ,11例有 2～2 97倍的 RIT1基因扩增 ,扩增率为 2 5 .6 %。　结论　基因扩增是 RIT1基因在肝细胞癌的激活方式之一 ,可能与肝细胞癌的发病有关 ,而点突变方式可能意义不大。     

DC-SIGN和DC-SIGNR基因多态性分析与HIV-1易感性关系研究

目的通过分析DC-SIGN和DC-SIGNR的基因多态性分布及基因频率在健康人群、HIV-1感染者和HIV-1长期暴露不感染人群（ES）的差别,探讨这两个基因与HIV-1长期暴露不感染的关系。方法纳入三组研究对象,包括健康对照组（160例）,HIV-1感染者组（267例）,ES组（37例）。扩增DC-SIGN和DC-SINGR基因的颈区重复序列进行分析。结果三组人群DC-SIGN基因型以7/7为主,等位基因呈低度多态性。DC-SIGNR基因型以7/7为主,等位基因呈高度多态性,出现了较多的非7/7基因型,其中等位基因6在三组间以及在HIV-1感染者和ES之间分布的差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 DC-SIGN基因多态性变异很低,对人群HIV-1易感性的研究意义不大;DC-SIGNR基因呈高度多态性,其低频率等位基因6可能是人群对HIV-1不易感的保护因素。     

视肉膜母细胞瘤(RB)抑癌基因治疗原理及策略

The retinoblastoma (RB) gene was the first tumor suppressor gene identified．It encodes a nuclear phosphoprotein which is differentially phosphorylated during the cell cycle．And the RB gene apparently plays a key role in cell growth regulation．Mutations in RB are seen in virtually all cases of retinoblastoma，and loss of RB gene function has been implicated in the progression of many common human cancers．A number of studies have indicated that replacement of the normal RB gene in RB-defective tumor cells could suppress their tumorigenic activity in nude mice．Preclinical studies also demonstrated that treatment of established human xenograft tumors in nude mice by recombinant adenovirus vectors expressing RB protein resulted in regression of the treated tumor．These studies make the emerging RB gene therapy even more attraction．     

大肠腺癌和腺瘤AEG-1基因的表达及意义

目的探讨AEG-1在大肠癌中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组化的方法检测60例正常大肠粘膜、22例大肠腺瘤和60例大肠腺癌中AEG-1的表达。结果大肠腺癌和腺瘤中AEG-1的阳性率分别为91.7%和90.9%,明显高于正常大肠粘膜组织的23.3%,两者之间差异有统计学意义（P〈0.001）,其中大肠腺癌的中度阳性率和强阳性率分别为31.7%和60%,而大肠腺瘤分别为63.6%和27.3%,两者差异具有统计学意义（P=0.019）;对大肠腺癌中AEG-1表达与肿瘤临床病理特征做相关性分析,结果表明,AEG-1表达强度与肿瘤T、N分期显著正相关（P〈0.05）。结论 AEG-1在大肠癌和大肠腺瘤中表达增强,在大肠腺瘤恶变、大肠癌发生发展过程中发挥重要作用,可作为诊断大肠癌新的生物标记物。     

Efficient in-vitro transfer of a 60-Mb mammalian artificial chromosome into murine and hamster cells using cationic lipids and dendrimers

Non-integrating artificial chromosomes represent a potentially promising approach to ex-vivo and in-vivo gene therapy applications. These large vectors require an efficient means for delivery to target cells. We have evaluated a panel of twenty-one commercially available transfection agents for their ability to mediate the in-vitro transfer of a 60-Mb murine artificial chromosome consisting of mouse major satellite DNA and a payload including a marker gene (hygromycin B) and a reporter gene (lacZ). A rapid screening procedure utilizing iododeoxyuridine-incorporated artificial chromosomes facilitated the assessment of different transfection conditions. The results were confirmed by cytogenetic analysis of positively transfected clones.By transfecting both hamster lung fibroblast cells (V79-4) and murine connective tissue cells [L-M(TK-)], the best results were obtained using either Superfect (cationic dendrimer) or LipofectAMINE 2000 (cationic lipid) with protocols adapted for metaphase chromosome preparation. Transfection efficiencies of 10^–4–10^–2 (0.01–1%) were routinely observed, and recipient cells were able to maintain expression of the reporter gene over the total length of the experiment. This represents a significant advance over our previous attempts at mass-transfection of artificial chromosomes using microcell fusion, where we routinely achieved efficiencies at least two orders of magnitudes less than reported here. These data are particularly noteworthy given that lipid-mediated gene transfer typically involves transfecting millions of plasmids (1 g of DNA from a 5 kb plasmid is approximately 1.2 × 10¹¹ copies) to each cell whereas the much larger artificial chromosomes comprise only a one-to-one ratio, yet achieve transfection efficiencies of (10^–2–10^–1), that is, comparable to our results. These data suggest that artificial chromosomes containing therapeutic genes can be successfully delivered to target cells in vitro using well-established transfection agents.     

癌基因PPO及其同源性基因的结构分析

目的采用PPO(proliferation and phosphorylation oncogene)基因与其同源性基因的结构分析,推测PPO并验证其功能。方法利用PPO的蛋白序列寻找同源基因,比较其结构并利用蛋白免疫杂交方法证实其功能。结果克隆了PPO基因,找到了PPO基因与小鼠、果蝇、蚊子、线虫以及酵母等的同源基因,比较发现PPO在进化上非常保守。人和小鼠的氨基酸序列有许多与磷酸化有关的功能域,并发现其中某些氨基酸在进化上非常保守。进一步研究表明PPO能使ERK2和MEK磷酸化。结论PPO基因在进化上非常保守,与磷酸化功能有关。