麦考酚酸产生菌的诱变育种及发酵的研究

麦考酚酸(MPA)经过酯化后形成的麦考酚酸酯(MMF)是一种新型的免疫抑制剂。麦考酚酸在发酵液中的含量较低，仅200u／ml。以Penicillium brevicompactum D-4为出发菌株，经紫外线诱变和自然分离纯化的分离．筛选出一株MPA的产量明显地高于出发菌株的突变株U8-S-5。它在10m^3发酵罐上的MPA效价可以达到1600u／m1．较出发菌株提高8倍多。     

霉酚酸产生菌短密青霉菌UA-32的发酵研究

研究短密青霉菌UA-32产生霉酚酸的发酵条件。改良了种子培养基,并对发酵所需的氨基酸、碳源进行了考察;采用正交设计优化得到发酵培养基配方。优化后的摇瓶发酵单位比优化前提高90%。     

麦考酚酸产生菌原生质体诱变育种的研究

对麦考酚酸产生菌（Penicillium brevicomactum）的原生质体制备、再生条件进行了研究，建立了原生质体诱变筛选体系。在此基础上，采用紫外线和亚硝酸复合诱变处理麦考酚酸产生菌的原生质体，经原生质体再生获得了A-S-8的菌株，该菌株比对照菌株生产能力提高28．2％，摇瓶和50L发酵实验的效价均可达到6000mg／L以上。     

麦考酚酸酯在肾移植中的应用

目的：观察麦考酚酸酯（ ｍｙｍcoｐｈｅｎｏｌａｔｅｍｏｆｅｔｉｌ,ＭＭＦ）预防移植肾急性排斥的安全性及有效性。方法：４０例肾移植病人分为２组,２０例［男性１２例,女性 ８例,年龄（４３ ± ｓ １０） ａ］为治疗组,给予ＭＭＦ1ｇ, ｐｏ, ｂｉｄ;另 ２０例［男性 １３例,女性 ７例,年龄（４５±１１） ａ］为对照组,给予硫唑嘌呤（Ａｚａ） １５０ｍｐ,ｐｏ, ｑｎ。共 ６ ｍｏ。结果： ＭＭＦ组急性排斥反应发生率为０,Ａｚａ组为２例,２组间差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。２组病人的消化道反应、肝中毒、感染等并发症的发生率的差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。结论：ＭＭＦ是一种能预防移植肾急性排斥反应的安全、有效的免疫抑制剂。     

环孢菌素A产生菌发酵条件的优化研究

利用“单因素多浓度”和“均匀设计法”对环抱菌素生产菌株茄病镰刀菌的发酵条件和发酵培养基组分进行优化．并在5000L发酵罐上对菌株的发酵动力学规律作了初步的探索。实验结果表明。5．5％玉米粉,0．5％葡萄糖,0．5％干酪素．0．05％KCl,0．05％MgSO4,0．015％KH2PO4和0．3％CaCO3为最佳摇瓶发酵培养基组成;5000L发酵罐的发酵动力学规律表明,菌体浓度发酵培养至80h左右达到最大．产素水平在116h左右达到最大。     

国产麦考酚酸酯分散片免疫抑制的疗效

目的:观察国产麦考酚酸酯(MME)分散片的临床疗效。方法:40例首次肾移植术后病人分为2组,20例为治疗组,应用国产MME分散片 环孢素 泼尼松进行免疫抑制治疗。另20例为对照组,应用进口MME 环孢素 泼尼松进行免疫抑制治疗。结果:国产MME分散片组肾移植术后免疫抑制治疗中排斥反应发生3例,进口药组排斥反应发生2例,2组间无统计学差异。副作用2组无统计学差异。结论:国产MME分散片在肾移植术后免疫抑制治疗中疗效确切,安全,且费用低廉。     

麦考酚酸高产菌株的选育

以短密青霉MA-4为出发菌株，应用紫外和亚硝基胍诱变，结合麦考酚酸与三氟乙酸抗性筛选，获得高产、稳定的突变株MA—H8。经过发酵培养基优化，突变株发酵水平为4500μg／ml。     

麦考酚酸酯及其临床应用进展

目的:麦考酚酸酯(MMF)是一种新型的免疫抑制剂.在临床应用中,MMF的使用也越来越广泛,已不仅仅局限于器官移植,还涉及到系统性红斑狼疮(SLE)、自体免疫风湿性疾病的治疗,以及在糖尿病,肺部血管高压的辅助治疗等诸多方面.肠包衣麦考酚酸钠,是一种新的可抵抗胃溶作用的麦考酚酸肠包衣剂型,药物在肠内释放,可以降低胃肠道(GI)不良反应的发生.     

肾移植患者中麦考酚酸游离分数的影响因素

目的：探讨肾移植患者中影响麦考酚酸（MPA）游离分数的因素。方法：采集23名肾移植术后3个月内患者12h内11个时间点的血浆样本，HPLC法测定血浆中游离和总的MPA及其代谢物葡萄糖醛酸结合物（MPAG）浓度。多元线性回归法考察受试者生理、病理特征和MPA游离分数（FUMPA）的相关性。结果：MPA游离分数的自然对数[In（FUMPA）]与白蛋白（ALB），血红蛋白的自然对数[In（Hb）]呈负相关，与MPA游离浓度AUC（MPAfAUG0-12），MPAG的游离分数（FUMPAG）呈正相关，相关系数r分别为-0．552，-0．459，0．781和0．458；P值分别为0．006，0．028，0．000和0．028。其关系式为：In（FUMPA）=-0．0554（ALB）-1．924，r=-0．552；ln（FUMPA）=1．128MPAf＋2．181FUMPAG-5．171，r=-0．850。结论：ALB升高，可致FUMPA呈指数增加；MPAG可与MPA竞争性结合蛋白。     

麦考酚酸及其代谢物血药浓度的HPLC法简介

麦考酚吗乙酯是麦考酚酸的2-乙基酯前体药物，临床广泛应用于器官移植后的抗排斥治疗。本文查阅国内外相关的HPLC分析方法文献，对麦考酚酸总浓度、游离药物浓度及其葡萄糖苷酸代谢物的检测方法进行了归纳和总结，为研究麦考酚酸药动学及其个体化给药提供参考。     

霉酚酸高产菌株短密青霉菌的选育

以短密青霉菌UH35-58为出发菌株,紫外线为诱变剂,采用摇瓶一级发酵补水工艺(64h补水20%)淘汰大量低产菌株,获得高产突变株N110-N76.用HPLC测定其发酵液的霉酚酸含量,发酵单位比出发菌株UH35-58提高120%.经过连续传代试验,该菌株的遗传性状稳定.     

Inflammatory and cytotoxic responses in mouse lungs exposed to purified toxins from building isolated Penicillium brevicompactum Dierckx and P. chrysogenum Thom.

In vitro and in vivo studies have shown that building-associated Penicillium spores and spore extracts can induce significant inflammatory responses in lung cells and animal models of lung disease. However, because spores and spore extracts comprise mixtures of bioactive constituents often including toxins, it is impossible to resolve which constituent mediates inflammatory responses. This study examined dose-response (0.5 nM, 2.5 nM, 5.0 nM, 12.5 nM/g body weight (BW) animal) and time-course (3, 6, 24 and 48 h post instillation (PI)) relationships associated with inflammatory and cytotoxic responses in mouse lungs intratracheally instilled with pure brevianamide A, mycophenolic acid, and roquefortine C. High doses (5.0 nM and/or 12.5 nM/g BW animal) of brevianamide A and mycophenolic acid, the dominant metabolites of P. brevicompactum, and roquefortine C, the dominant metabolite of P. chrysogenum, induced significant inflammatory responses within 6 h PI, expressed as differentially elevated macrophage, neutrophil, MIP-2, TNF, and IL-6 concentrations in the bronchioalveolar lavage fluid (BALF) of intratracheally exposed mice. Macrophage and neutrophil numbers were maximal at 24 h PI; responses of the other inflammatory markers were maximal at 6 h PI. Except for macrophage numbers in mycophenolic acid-treatment animals, cells exhibited significant dose-dependent-like responses; for the chemo-/cytokine markers, dose dependency was lacking except for MIP-2 concentration in brevianamide A-treatment animals. It was also found that brevianamide A induced cytotoxicity expressed as significantly increased LDH concentration in mouse BALF, at concentrations of 12.5 nM/g BW animal and at 6 and 24 h PI. Albumin concentrations, measured as a nonspecific marker of vascular leakage, were significantly elevated in the BALF of mice treated with 12.5 nM/g nM brevianamide A/animal from 6 to 24 h PI and in > or =5.0 nM/g mycophenolic acid-treated animals at 6 to 24 h PI. These results suggest that these three toxins from Penicillium species common on damp materials in residential housing provoke compound-specific toxic responses with different toxicokinetics. Moreover, that these toxins can stimulate significant inflammatory responses in vivo might help explain some of the indoor effects associated with Penicillium spore exposures in indoor environments.     

基因重组hEGF融合蛋白的发酵条件优化

对hEGF融合蛋白基因工程菌的发酵条件进行优化。结果表明，当起始pH为6．6～7．0，以100ml／500ml的装液量，6％接种量，37℃培养2h，加入0．1mmol／L的IPTG诱导4h后，收获菌体可得到较高的生物量和hEGF融合蛋白表达量。其中IPTG诱导开始时间和菌体收获时间对蛋白表达有显著影响。     

人血浆中麦考酚酸及其葡糖苷酸代谢物HPLC法测定

目的:建立HPLC测定人血浆中麦考酚酸(MPA)及其代谢物葡糖醛酸结合物(MPAG)浓度的方法。方法:以安定为内标,血浆经乙腈蛋白沉淀后直接进样。采用Zorbax Eclipse XDB C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温:30℃,流动相:甲醇-0.1%三氟乙酸(55:45,pH=2.2),流速:1.0 mL·min~(-1),检测波长215 nm。结果:血浆内源性杂质和常用合并用药对样品测定无干扰,MPA和MPAG血药浓度分别在0.5-40μG·mL~(-1)和2.5—200μg·mL~(-1)范围内线性关系良好。MPA和MPAG的日内、日间RSD均小于8%,样品提取后在24 h内及3次冻融后稳定性良好。结论:该法快速,简便,准确,可用于MPA和MPAG的体内分析及常规的治疗药物监测。     

肾移植受者霉酚酸临床药代动力学研究

目的研究肾移植受者的霉酚酸(MPA)药代动力学。方法 采用高效液相色谱法监测19名肾移植受者术后多剂量口服霉酚酸酯(MMF)后的MPA血药浓度,采用非线性混合效应模型法计算多剂量口服达稳态的MPA药代动力学参数。结果 MPA达峰时间Tmax为1.0 h,峰浓度Cmax为8.3μg/ml,谷浓度Cmin为2.6μg/ml,药时曲线下面积AUC0～12 h为44.9μg.h/ml。MPA药动学参数群体值CL=27.7 L/h,Vd=85.3 L,个体间变异分别为22.0%2、5.7%。结论本研究建立的群体药动学模型可较准确地描述MPA在肾移植受者的药动学特征,其预测能力尚需进一步评估。     

Bioavailability Improvement of Mycophenolic Acid Through Amino Ester Derivatization

The potential bioavailability improvement of mycophenolic acid (MPA), 1, through ester derivatization was evaluated in monkeys at a dose of 20 mg/kg in this study. The acetyl solketal ester 3 was found to have excellent partition properties but poor aqueous solubility. Thus, even though it can be converted rapidly to MPA by plasma and liver enzymes, it showed poor oral bioavailability (56% of MPA) in monkeys. The bioavailability of the morpholinoethyl ester 4 and the acetyl morpholinoethyl ester 5, on the other hand, was found to be 236 and 150% that of MPA, respectively. Since ester 5 has greater aqueous solubility, but similar chemical stability and enzymatic hydrolysis rates compared to ester 4, the better bioavailability of ester 4 may result from its greater partitioning into the gastrointestinal membranes.     

金霉素发酵条件优化

在50L发酵罐中金霉素发酵适宜的接种量为14.0%，种龄为20-21h(种子效价为20μg/ml左右）。3种不同的酵母粉中，2号酵母粉对金霉素发酵的效果最好。效价比其余两种高5.3%和4.4%，加入0.3%的酵母膏对金霉素发酵后期有一定的促进作用，效价比对照高4.4%。在120m^3发酵罐中，利用数据驱动型方法对发酵过程进行优化，金霉素效价达到21912μg/ml,比对照高出13%。     

HPLC测定人血浆中霉酚酸及其代谢物浓度

目的建立反相高效液相色谱法,同时测定人血浆中霉酚酸（mycophenolic acid,MPA）、酚化葡萄糖醛麦考酚酸（phenol glucuronide metabolite,MPAG）、酰基化MPAG（acyl-MPAG,AcMPAG）的浓度。方法用蛋白沉淀法对样品进行处理。固定相为Zorbax Eclipse XDB C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相：甲醇：20 mmol-L-1 NaH2PO4（用20%磷酸调至pH 3.0）为55∶45,流速：1.2 mL-min-1,检测波长：304 nm,柱温：45℃。结果 MPA、MPAG、AcMPAG浓度在0.2~50μg-mL-1（r=0.999 7）、2.8~531μg-mL-1（r=0.999 9）、0.3~24μg-mL-1（r=0.999 4）内呈良好的线性关系。MPA及其代谢物的绝对回收率均大于80%,MPA、MPAG、AcMPAG的相对回收率分别为94.0%~101.4%,98.4%~101.9%和96.1%~104.2%。日内及日间RSD远低于15%。结论采用反相高效液相色谱法测定人血浆中MPA、MPAG、AcMPAG的浓度和进行药物代谢动力学研究,方法灵敏度高、重复性强。     

产麦角固醇酵母菌株的筛选及发酵条件优化

从12株产麦角固醇(1)的酵母菌中,筛选出的一株1产量较高的酵母菌YN2,并对其产1发酵条件进行了优化.结果表明,最适培养基配方(%)为:酵母粉1,牛肉膏2.5,葡萄糖8,K2HPO4 0.3,MgSO4 0.15.最适培养条件为:培养温度28℃,起始pH6.5,发酵时间72h.在优化的试验条件下,进行摇瓶发酵,1含量可达生物量的2.2%,100ml发酵液中1产量达25.3mg.