IL-1β对新西兰兔下丘脑前列腺素受体EP3亚型表达的影响

为了观察IL-1β对新西兰兔下丘脑前列腺素受体EP3亚型表达的影响,本实验用IL-1β复制新西兰兔发热模型,并用免疫组化方法检测兔下丘脑内侧视前区(medial preoptic area,MPO)和正中视前区(median preoptic area,MnPO)前列腺素受体EP3亚型的表达。结果表明:静脉注射IL-1β可引起新西兰兔体温升高,最大体温上升幅度(maximal raise altitude of temperature,△T)及1h体温反应指数(temperatu reresponse index,TRI1)均高于对照组;同时,注射IL-1β后,下MPO和MnPO前列腺素受体EP3亚型的表达明显增强。上述结果提示:MPO和MnPO神经元前列腺素受体EP3亚型表达的增强可能是IL-1β引起发热的中枢机制之一。     

低氧对大鼠大脑皮层细胞表达IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的影响

目的:观察不同氧浓度环境下不同时间处理对大鼠大脑皮层细胞表达IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的影响。方法:原代培养新生SD大鼠大脑皮层细胞,设1%、4%两个低氧浓度和3、6 h两个低氧处理时间,处理结束后收集各组细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-QPCR)方法检测各组细胞表达IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA情况。结果:与相应的常氧对照组相比,1%和4%氧浓度环境处理细胞3 h和6 h时,IL-1β和TNF-αmRNA表达量均无明显变化(P>0.05);处理细胞3 h时,IL-6 mRNA表达量均无明显变化(P>0.05),但有上升的趋势,处理细胞6 h时IL-6 mRNA表达量均显著升高(P<0.05)。结论:1%和4%氧浓度环境虽均对大脑皮层细胞表达IL-1β和TNF-α mRNA无影响,但可诱导细胞表达IL-6 mRNA,且具有时间依赖性。     

IL-1β对大鼠腹膜间皮细胞葡萄糖转运蛋白1表达的影响

目的:研究白介素1β(Interleukin-1beta,IL-1β)对原代培养大鼠腹膜间皮细胞(PMCs)葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的影响,为防治腹透失超滤提供理论依据及方法。方法:胰蛋白酶消化法进行雄性Wistar大鼠PMCs的原代培养及传代,不同浓度IL-1β(0、1、10、50 ng/ml)作用不同时间(0、1、12、24、48小时),逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测GLUT1的mRNA表达,Western blot检测GLUT1蛋白的表达,生化分析仪检测培养液内葡萄糖浓度的变化,以培养液内葡萄糖的减少量作为细胞对葡萄糖的净利用。结果:IL-1β以浓度及时间依赖方式促进GLUT1 mRNA及蛋白的表达(P<0.05),同时伴有葡萄糖向细胞内转运的增加,50 ng/ml IL-1刺激48小时后GLUT1 mRNA表达与对照组相比增加了近4倍(P<0.01)。结论:IL-1β可以使PMCs细胞GLUT-1表达和葡萄糖摄取增加,这为防治腹透相关腹膜纤维化及腹透失超滤提供了线索。     

激活素A对小鼠巨噬细胞分泌IL-1β的影响

目的：探讨激活素A对小鼠腹腔巨噬细胞活性的调节作用及其机制。方法：免疫组化观察激活素ⅡA型受体（ActRⅡA）在巨噬细胞上的表达，ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中IL-1β分泌水平，采用RT-PCR检测小鼠腹腔巨噬细胞IL-1βmRNA、ActRⅡA mRNA及激活素受体相互作用蛋白2（ActRIP2）mRNA的表达。结果：激活素A可以促进原代培养小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β及IL-1β mRNA表达，并呈剂量依赖关系；激活素A对LPS活化的小鼠原代培养腹腔巨噬细胞分泌IL-1β及IL-1βmRNA的表达具有抑制作用，并呈剂量依赖关系。免疫组化染色证实ActRⅡA在巨噬细胞中高表达，激活素A对巨噬细胞表达ActRⅡA mRNA具有促进作用，采用抗ActRⅡA抗体可以阻断激活素A促进IL-1βmRNA表达作用，进一步检测表明激活素作用后ActRIP2 mRNA表达亦增加。结论：激活素与LPS比较可能是IL-1分泌的弱激动剂，激活素单独应用显示刺激IL-1分泌作用，而与LPS共同作用，则呈现抑制LPS强刺激作用；激活素可能通过ActRⅡA-ActRIP2受体信号传导途径，调控巨噬细胞IL-1β分泌与合成。     

人巨细胞病毒感染THP-1源性巨噬细胞对IL-1β表达的影响

目的 观察HCMV感染THP-1源性巨噬细胞后,促炎细胞因子IL-1β表达的时序性变化.方法 构建HCMV感染THP-1源性巨噬细胞模型,设立HCMV AD169标准毒株感染组、模拟感染对照组、LPS+ATP对照组和poly(dA:dT)对照组.用ELISA法测定THP-1源性巨噬细胞培养上清IL-1β水平在病毒感染细胞后lh、3h、6h、12h、24 h和48 h的时序性变化.分别用real-time PCR和western blot检测感染后6 h IL-1β基因和蛋白的表达水平.结果 HCMV感染THP-1源性巨噬细胞6h后,促炎细胞因子IL-1β基因的相对表达量是模拟感染组的7.77倍.HCMV感染THP-1源性巨噬细胞1h后,细胞上清IL-1β表达量逐渐显著增高,感染后3h和6h继续升高,感染后12h达到高峰,一直持续到48 h.HCMV感染THP-1源性巨噬细胞6h HCMV感染组IL-1β蛋白表达明显高于模拟感染对照组和poly(dA:dT)对照组,而与LPS+ATP对照组比较无统计学差异.结论 HCMV感染THP-1源性巨噬细胞可诱导IL-1β高表达,且呈时序性增高趋势.     

Aβ1-42通过TLR4影响小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症因子IL-1β和IL-6释放

目的探讨Aβ1-42对小鼠巨噬细胞RAW264.7向炎症性细胞转变的影响及机制。方法 RAW264.7细胞分别经过LPS与Aβ1-42刺激,RT-PCR和Western blot检测GM-CSF受体CSF2RA和CSF2RB的表达水平,ELISA检测在Aβ1-42刺激下的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平;采用TLR4抑制剂分别干预LPS和Aβ1-42处理后的RAW264.7,检测CSF2RA与CSF2RB受体的表达变化,炎症因子IL-1β、IL-6的释放。结果 RAW264.7细胞表面GM-CSF受体CSF2RB在LPS与Aβ1-42处理后表达水平均比对照组升高(P0.05),而CSF2RA表达没有显著性改变;炎症因子IL-6与IL-1β在Aβ1-42刺激后分泌增加,同时TLR4抑制剂抑制LPS和Aβ1-42对细胞的刺激。结论 Aβ1-42通过TLR4促进小鼠RAW264.7细胞炎症因子IL-6、IL-1β的分泌。     

人caspase-1基因在肝癌细胞中的表达及对IL-1β水平的影响

目的:将人caspase-1基因真核表达载体转染肝癌细胞后观察其表达水平及对IL-1β水平的影响,为研究cas-pase-1与IL-1β的关系及其在慢性炎症与肿瘤中的作用提供依据。方法:利用阳离子聚合物(jetPEI)将pIRES2-EGFP-caspase-1重组表达载体和pIRES2-EGFP对照载体转染人肝癌细胞HepG2(HepG2/caspase-1、HepG2/mock),48小时后倒置相差荧光显微镜下观察表达情况,利用RT-PCR、Western blot方法检测两组细胞caspase-1表达水平,采用caspase-1底物显色分析研究的方法检测两组细胞中caspase-1的活性。夹心ELISA法检测细胞培养上清以及细胞裂解液中IL-1β的表达水平。结果:转染48小时后倒置相差显微镜下可见,pIRES2-EGFP-caspase-1和pIRES2-EGFP重组表达载体均能在HepG2细胞中高效表达;HepG2/caspase-1细胞中caspase-1 mRNA表达水平显著提高;经LPS刺激后,HepG2/caspase-1细胞中caspase-1总蛋白的水平明显升高;caspase-1的生物活性水平与对照组相比具有显著性差异(t=25.679,P<0.05);HepG2/caspase-1细胞培养上清中IL-1β的水平明显高于HepG2/mock组细胞(t=3.417,P<0.05),胞浆裂解液中的变化相对不显著(t=2.396,P>0.05)。结论:人caspase-1基因真核表达载体pIRES2-EGFP-caspase-1能够在肝癌细胞中高效表达caspase-1,且该重组表达载体在HepG2细胞中能提高活性IL-1β的表达。     

睾丸I-1β原位杂交及输精管结扎对IL-1β mRNA表达的影响

本实验成功地建立了睾丸ＩＬ－１β原位杂交技术，并在此基础上探讨了输精管结扎对睾丸ＩＬ－１βｍＲＮＡ表达的影响。结果表明：输精管结扎６ｍｏ组家兔睾丸ＩＬ－１βｍＲＮＡ的杂交信号明显地强于假手术对照组，而结扎２５ｍｏ组恢复同龄假手术组水平。杂交信号多分布在曲细精管内的支持细胞和生殖细胞中，有的分布在间质的细胞中。结论：输精管结扎早期睾丸产生ＩＬ－１确有明显增加，２５ｍｏ恢复对照组水平。     

TrkA对哮喘小鼠下呼吸道气道阻力及IL-1β表达的上调作用

目的研究NGF的特异性高亲合力受体TrkA对哮喘小鼠下呼吸道气道阻力及IL-1β的表达的调节作用,探讨TrkA介导的信号通路在哮喘发病机制中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、TrkA抗体阻断组。利用An iRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力,利用免疫组织化学方法测定IL-1β表达,M etamoph图象分析系统对结果进行分析。结果哮喘小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组小鼠(P<0.01),TrkA组吸气阻力和呼气阻力明显低于哮喘组。免疫组织化学结果显示TrkA抗体阻断组肺(0.324±0.013)、C7-T5节段脊神经节(0.301±0.065)及对应的脊髓后角(0.216±0.019)IL-1β免疫阳性产物平均光密度值明显低于哮喘组小鼠(0.796±0.025、0.745±0.016、0.528±0.011,P<0.01)。结论NGF介导的TrkA通路的激活可上调IL-1β的表达,介导哮喘气道高反应和炎症反应。     

天麻素对CUS大鼠抑郁样行为及IL-1β和IL-6水平的影响

目的:探讨天麻素对慢性不可预见应激(CUS)大鼠抑郁样行为的改善作用及对炎症因子IL-1β、IL-6表达的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为对照组(Sham),模型组(CUS),模型(CUS)+天麻素低、中、高剂量组,每组8只。对照组每天腹腔注射生理盐水(1 ml/kg),连续14 d;模型组接受CUS造模,并且在造模结束后每天腹腔注射生理盐水(1 ml/kg),连续14 d;模型+天麻素低、中、高剂量组在CUS造模结束后每天腹腔注射不同剂量的天麻素(50、100或者200 mg/kg),持续14 d。随后,通过糖水偏好实验和强迫游泳实验检测各组大鼠的抑郁样行为,在行为学检测结束后处死大鼠,通过ELISA检测海马和血清中IL-1β、IL-6水平变化情况。结果:(1)慢性不可预见应激(CUS)可以导致明显的抑郁样行为,包括糖水偏好减少(P0.05)和强迫游泳不动时间增加(P0.01),CUS组大鼠海马及血浆的IL-1β、IL-6水平明显升高(P0.01)。(2)一定剂量(100和200 mg/kg)天麻素干预可以缓解CUS大鼠的抑郁行为,CUS与CUS+GAS(M)组(P0.05)以及CUS与CUS+GAS(H)组之间(P0.01)存在显著性差异。(3)中高剂量的天麻素可以恢复CUS大鼠海马和血清的IL-1β、IL-6水平,CUS与CUS+GAS(M)组(P0.05)以及CUS与CUS+GAS(H)组之间(P0.05)的IL-1β、IL-6水平存在显著性差异。结论:天麻素可以缓解CUS模型大鼠抑郁样行为,抑制CUS模型大鼠的IL-1β、IL-6水平升高。     

IL-1β和IL-18在鼠巨细胞病毒播散性感染中的表达及意义

目的:在整体水平观察鼠巨细胞病毒(Murine cytomegalovirus,MCMV)播散性感染时脏器病毒载量、caspase-1的活化及其下游因子IL-1β和IL-18的表达状况。方法:建立MCMV播散性感染模型,MCMV Smith株接种后第0、3、7和14天各处死4只小鼠;同时设模拟感染小鼠作为对照。标准空斑试验检测唾液腺、肺和肝组织病毒滴度;Western blot法检测脾细胞中procaspase-1及其活化形式caspase-1的表达强度;双抗体夹心ELISA法检测血清IL-1β和IL-18水平;免疫组化法检测唾液腺、肺和肝组织中IL-1β和IL-18表达状况。结果:肝组织病毒滴度于MCMV感染后3天升高,其后迅速减低,感染2周内肺组织中未检测到病毒,而唾液腺组织病毒滴度呈逐渐增高趋势;与模拟感染对照组比较,播散性感染组感染后3天脾细胞中procaspase-1和caspase-1的表达明显升高(相对吸光值均P<0.01);同时,血清IL-1β和IL-18水平升高达峰值(均P<0.01)。结论:MCMV感染后炎性体活化,caspase-1表达升高;其下游信号IL-1β和IL-18成熟释放增加,并呈组织差异性表达。     

IL-1β对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响

目的:探讨IL-1β对体外培养的兔软骨终板细胞生物学行为的影响。方法:分离培养兔软骨终板细胞,通过甲苯胺兰染色等方法鉴定后,分别加入不同浓度的IL-1β,用MTT测定不同时间点软骨终板细胞增殖活性的变化;免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Fas、caspase-3表达的变化;RT-PCR检测蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA的表达变化。结果:50ng/ml、100ng/ml浓度IL-1β可抑制细胞增殖;10ng/ml、50ng/ml浓度IL-1β可促进Bax、Fas、caspase-3的表达,但仅浓度为50ng/ml时才可降低Bcl-2的表达;10ng/ml、50ng/ml浓度IL-1β可降低Aggrecan、Collagen IIa mRNA的表达。结论:IL-1β可抑制软骨终板细胞的增殖及基质合成,促进软骨终板细胞凋亡,从而促进椎间盘的退变。     

小鼠IL-1β在H22细胞的表达及对NK细胞杀伤活性的影响

目的：重组表达小鼠IL-1β全长基因，转染H22肝癌细胞，分析对NK细胞杀伤活性的影响。方法：构建小鼠IL-1β重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β，利用jetPEI转染H22肝癌细胞，RT—PCR和激光扫描共聚焦显微镜分析IL-1β重组载体的表达，MTT方法分析转染前后，野生型小鼠脾脏NK细胞对H22细胞杀伤活性的变化。结果：RT—PCR扩增出小鼠IL-1β，长度约843bp。纯化的PCR产物与pIRES2-EGFP同时经Xho I和EcoR I双酶切，在T4连接酶作用下连接，转化大肠杆菌，提取质粒经PCR、限制性酶谱分析（XhoI＋EcoRI）和DNA序列测定后，确认获得重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β。将该质粒转染至H22小鼠肝癌细胞中，RT—PCR和荧光观察证实，H22细胞能表达高水平IL-1β重组表达载体，与转染空载体的对照组细胞相比，IL-1β转基因后H22细胞对NK92细胞杀伤抵抗性明显增强，同时野生型小鼠脾脏NK细胞对pIRES2-EGFP-mIL-1β转基因细胞的杀伤活性明显下降，效靶比40：1时下降了约10％。结论：IL-1β能够明显增强H22肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗性，可能是肝癌细胞借以逃逸天然免疫应答的重要机制。     

人IL-1β的克隆及其高效可溶性表达

目的:从人淋巴细胞中克隆白介素-1β(IL-1β)cD-NA,通过原核可溶性表达纯化,获得具有生物活性的可溶性IL-1β,为深入研究和利用IL-1β基因奠定基础.方法:从人PBMC中克隆出人成熟IL-1β基因,并插人到原核表达载体pSUMO中SUMO标签的下游,构建重组表达载体pSUMO-hIL-1β.将该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达hIL-1β/SUMO融合蛋白,经Ni-NTA Agaroae纯化后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.用protease-1切去SUMO标签,用Real time-PCR鉴定其对人T细胞表达的细胞因子的影响.结果:SDS-PAGE分析表明表达产物的相对分子质量(Mr)为37 000,成熟蛋白Mr为17 000,与理论值相符.灰度扫描分析融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的约30%左右,主要以可溶形式存在.Western blot证实该蛋白为hIL-1β.成熟蛋白纯化产物纯度超过90%以上.通过RT-PCR检测证明其具有刺激人T细胞大量表达多种细胞因子(IL-1β,IL-4,IL-10,IL-18,IFN-γ,TGF-β,TNF-α)的活性.结论:利用大肠杆菌表达系统完全可以高效可溶性表达较高纯度的具有生物活性的hIL-1β蛋白.     

血管活性肠肽对leydig细胞分泌的IL-1、IL-6和TGF-β的影响

目的研究血管活性肠肽（VIP）对感染时的leydig细胞分泌的细胞因子IL-1、IL-6和TGF-β的影响。方法SD大鼠的睾丸经Ⅱ型胶原酶消化、过滤及Pereoll分离获得高纯度、高活率的leydig细胞,经不同剂量的VIP作用后,再感染溶脲脲原体（UU）,观察在UU感染时,不同剂量VIP对leydig细胞分泌的IL-1（MTT法）、IL-6、TGF-β（ELISA法）的影响。结果UU感染时,VIP对leydig细胞分泌的细胞因子有明显的影响：能促进leydig细胞分泌IL-1（活性）、抑制IL-6（含量）分泌;同时既能促进（高剂量VIP）又能抑制（低剂量VIP）TGF-β分泌。结论在UU感染时,VIP能改变大鼠leydig细胞细胞因子的分泌格局,表明VIP在抗感染免疫中具有一定的免疫调节作用。     

广州市PM2.5的污染状况及其有机提取物对BEAS-2B细胞IL-8、IL-1β表达的影响

目的调查广州市交通干道附近PM2.5的污染状况,并探讨PM2.5有机提取物对BEAS-2B细胞的炎性损伤效应。方法使用PM2.5采样器采集广州市交通干道附近的PM2.5,分析天平称重计算日平均浓度;索氏提取器提取PM2.5吸附的有机物作用于BEAS-2B细胞,ELISA检测IL-8、IL-1β的表达水平。结果广州市PM2.5日平均浓度为0.057～0.194mg/m3,其超标倍数为0.88～2.98;BEAS-2B细胞受到PM2.5有机提取物作用后,随着PM2.5有机提取物染毒剂量的增加,IL-8、IL-1β的分泌也明显增加;且随着各剂量作用时间的延长,IL-8、IL-1β的表达也增高。结论广州市交通干道旁PM2.5污染相当严重;PM2.5有机提取物能够刺激BEAS-2B细胞释放IL-8、IL-1β等炎性因子,吸引大量的炎性细胞释放炎性介质,从而形成气道的炎症损伤。     

IL-1β转化酶与细胞凋亡

近年发现，ＩＬ－１β转化酶（ＩＣＥ）与细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）之间存在着密切的关系。ＩＣＥ不仅在细胞凋亡中的作用日益受人关注，而且在治疗人动脉粥样硬化、白血病及肾损伤中展现出应用前景。下面就ＩＣＥ与细胞凋亡的关系进行综述     

IL-1β促进肺癌细胞增殖的作用机制研究

目的:研究IL-1β在巨噬细胞促进肺癌细胞增殖的作用机制。方法:采用Transwell 插入式细胞培养皿共培养人肺癌细胞株A549、NCI-H520 细胞和巨噬细胞。BrdU-ELISA 法检测巨噬细胞对肺癌细胞的增殖能力。采用Real-time PCR 法检测巨噬细胞和A549、NCI-H520 细胞中IL-1βmRNA 的表达。应用IL-1β的中和抗体抑制IL-1β的活性,观察IL-1β 在巨噬细胞促进肺癌细胞增殖中的作用。利用Western blot 法检测肺癌细胞中自噬标志物Beclin 1 的表达。结果:BrdU-ELISA 检测结果:A549 细胞与巨噬细胞以1 .0.5 的比例共培养,A549 细胞的OD 值从(0.41±0.06)增加到(1.13依0.10),差异有统计学意义(P<0.05),且A549 细胞的OD 值随共培养巨噬细胞比例的增加而升高(P<0.05)。NCI-H520 细胞与不同浓度的巨噬细胞共培养后,NCI-H520 细胞的OD 值变化趋势与A549 细胞相似。Real-time PCR 法检测结果:在共培养后,巨噬细胞中IL-1βmRNA 的表达显著上调,且有时间依赖性,并显著高于肺癌细胞中的表达。加入IL-1β中和抗体后,BrdU ELISA 法检测的细胞增殖,结果显示IL-1β中和抗体可明显抑制巨噬细胞对肺癌细胞A549 和NCI-H520 的增殖促进作用。Western blot法检测结果显示IL-1β可显著抑制肿瘤细胞Beclin 1 的表达。结论:巨噬细胞和肺癌细胞通过增强IL-1β的表达促进肿瘤细胞的增殖。抑制肿瘤细胞的自噬可能是IL-1β促进肺癌发展的作用机制。     

创伤性颅脑损伤患者IL-1β、IL-6、IL-10水平变化及临床意义

目的 探讨创伤性颅脑损伤后不同时期脑脊液和血清中IL-1β、IL-6、IL-10的水平变化及临床意义.方法 选择79例创伤性颅脑损伤患者,其中轻型12例、 中型25、 重型42例.分别留取伤后1、2、3、7 d的脑脊液和血液标本,采用ELISA法检测伤后各时间点脑脊液和血清中IL-1β、IL-6、IL-10浓度.另取查体健康者12例为对照组.结果 与对照组相比,创伤性颅脑损伤患者脑脊液和血清中IL-1β、IL-6、IL-10水平均显著增高(P<0.01).重型颅脑损伤患者脑脊液和血清中IL-1β、IL-6、IL-10水平显著高于轻中型组(P<0.01);且脑脊液中炎性因子和抗炎因子的浓度显著高于血清中的浓度.结论 创伤性颅脑损伤后促炎因子和抗炎因子水平对TBI病情评估、 临床治疗及预后评估具有一定的临床意义.