不同方法水蛭提取液对体外培养LEC影响的实验研究

目的:观察不同方法水蛭提取液对体外培养的晶状体上皮细胞(LEC)生长的影响,比较不同提取方法的作用强度。方法:以五种常用中药提取法(水醇双提法、乙醇回流法、水提法、水提醇沉法、渗滤法)提取水蛭;植块培养法体外培养牛LEC,各方法水蛭提取液组以等比组距设置药物浓度,分别作用于体外培养LEC各24、72h;以MTT法测定OD值,并计算细胞抑制率,以克贝尔法计算各提取液组24、72hID50值。结果:水蛭渗滤液24hID50与水蛭水醇双提液、水蛭乙醇回流液24hID50比较有显著性差异(P<0.05);水蛭水提醇沉液24hID50与水蛭乙醇回流液24hID50比较有显著性差异(P<0.05)。结论:五种水蛭不同方法提取液均能不同程度抑制体外培养LEC的生长,其中水提醇沉液、渗滤液作用更为明显。     

莪术抑制晶状体上皮细胞增殖的信号转导机制

目的 探讨天然药物莪术（rhizoma curcumae，RC）对体外培养的晶状体上皮细胞（1ensepithelial cell，LEC）增殖的抑制作用，并从信号转导方面研究其抑制LEC增殖的作用机制，为寻求防治后发性白内障（after cataract）的确切有效药物提供实验依据。方法 用牛LEC进行原代和传代培养，取第三代细胞。用10ng／ml重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinant human basic fibroblast growth factor，rhbFGF）诱导LEC增殖。同时分别将5mg／ml、10mg／ml、20mg／ml的莪术作用于增殖状态下的LEC72小时。（1）通过四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色测定法检测莪术对LEC增殖的抑制程度；（2）用钙荧光指示剂Fura-2／AM测定莪术抑制LEC增殖时细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）变化;（3）用放射免疫分析法测定莪术抑制LEC增殖时细胞内环化腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）和环化鸟苷酸（cyclicguanosine monophosphate，cGMP）浓度变化。结果 莪术可明显抑制LEC增殖。抑制LEC增殖时细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）升高，细胞内cAMP浓度显著升高，细胞内cGMP浓度显著降低，cAMP／cGMP比值升高，并具有剂量依赖关系。结论 诱导[Ca^2＋]i升高，激活细胞内Ca^2＋信号转导途径；上调细胞内cAMP水平，下调细胞内cGMP水平，使cAMP／cGMP比值升高，激活细胞内cAMP-PKA、cGMP-PKG信号转导途径可能是莪术抑制LEC增殖的作用机制之一。莪术能够明显抑制LEC增殖的作用，有望成为防治后发性白内障的有效药物。     

水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞体外抑制作用研究

目的研究水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用。方法以液氮快速冻融法制备水蛭提取物,以常规水提醇沉法水蛭提取物作对照,不同浓度体外干预人肝癌HepG2细胞,MTT法检测两种水蛭提取物对HepG2细胞增殖的抑制作用,并进行细胞计数,吖啶橙荧光染色法检测细胞凋亡情况。结果水蛭液氮快速冻融法提取物药物浓度为6-15mg／mL时,对人肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,细胞数目明显下降,并呈剂量依赖性,与水提醇沉法提取物比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。吖啶橙染色可见典型的凋亡细胞形态学特征。结论水蛭液氮快速冻融法提取物可体外抑制HepG2细胞的增殖并诱导凋亡,其作用明显优于水蛭水提醇沉法提取物。     

复方芜荑水和醇提取物抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的体外作用的研究

目的：探讨复方芜荑水和醇提取物体外抗Ⅰ型单纯疱疹病毒（Herpes Simplex Virus-Ⅰ，HSV-Ⅰ）的活性。方法：运用细胞病变法（CPE）及MTT染色法观察复方芜荑水和醇提取物体外对HSV-Ⅰ所致细胞病变的抑制作用、感染的预防作用和对HSV-Ⅰ的直接杀伤作用。结果：复方芜荑水和醇提取物体外有抑制HSV-Ⅰ所致CPE的作用，并且可持续抑制。31．25mg/ml复方芜荑水提物作用24h和72h后对细胞病变的抑制率分别为69．69％和69．79％；15．625mg／ml醇提物作用24h和72h后对细胞病变的抑制率分别为50．26％和52．73％。其水提物效果优于醇提物，但两者对于HSV-Ⅰ的直接杀伤作用和感染的预防作用均较弱。结论：复方芜荑体水和醇提取物外有抗HSV-Ⅰ的活性。     

水蛭提取液对凝血酶诱导的视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 观察渗滤法水蛭提取液对体外培养视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium,RPE）增殖的影响.方法 利用体外培养的视网膜色素上皮细胞,观察水蛭提取液对凝血酶诱导的视网膜色素上皮细胞增殖的影响.结果 128mg/ml水蛭提取液对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有抑制增殖的作用.结论 水蛭提取液对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有抑制增殖的作用.     

水蛭水煎醇沉工艺的正交设计研究

目的：选择最佳工艺路线,确定水蛭提取制备工艺。方法：采用水提醇沉的方法对水蛭进行提取。以双缩脲比色法结合凝血酶滴定法计算其比活力为指标,考察煎煮时间、乙醇浓度、醇沉时间和加水量对水蛭提取物的影响。结果与结论：（20＋10）倍水煎煮（60＋30）min后,提取液80%乙醇醇沉24h条件最佳。     

女贞子不同炮制品的抗脂质过氧化作用研究

通过测定女贞子（Fructusligustrilucidi）的不同提取液及其不同炮制品的水提液对大鼠离体肝脏脂质过氧化产物（MDA）的抑制情况，结果发现：女贞子的水提液抗氧化作用好于水提醇沉液；其不同炮制品对MDA的抑制率，均高于生品；低浓度时（0.5mg／ml）以盐蒸品的抑制作用为最强；高浓度（1．0mg／ml）时各炮制品的抑制率相对比较接近，都有较强的抗脂质过氧化作用，只女贞子生品的水提醇沉液较弱。     

天然药物抑制表皮生长因子诱导的晶状体上皮细胞增殖及其信号转导机制

目的:研究天然药物税香烯(Ele)、姜黄素(Cur)、雷公藤内酯醇(Tri)对晶状体上皮细胞(LEC)增殖的抑制作用及细胞信号转导机制,为防治后发性白内障提供实验依据.方法:重组人表皮生长因子(rhEGF)诱导牛LEC增殖;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测Ele、Cur、Tri对LEC增殖的抑制率;流式细胞术(TCM)检测Ele、Cur、Ti对LEC增殖细胞核抗原(PCNA)的抑制作用;荧光分先光度法检测LEC内[Ca2 ]I、放射免疫分析法检测cAMP和cGMP,并分析Ele、Cur、Tri的影响.结果:(1)Ele、Cur、Tri对rhEGF诱导的LEC增殖的抑制率随浓度增加和时间延长而增高(P<0.01);(2)Ele、Cur、Tri明显下调rhEGF诱导增殖的LEC内PCNA蛋白表达,呈量效和时效关系(P<0.01);(3)Ele、Cur、Tri使增殖的LEC内[Ca2 ]I和cAMP显著增高(P<0.01)、cGMP显著降低(P<0.01).结论:天然药物Eie、Cur、Tri均可显著抑制LEC增殖;Ca2 、cAMP和cGMP细胞信号转导是其抑制LEC增殖的重要细胞和分子机制.Ele、Cur、Tri对防治后发性白内障具有广阔的前景.     

马鞭草对体外培养绒毛形态及HCG分泌影响的研究

本研究以正常妊娠６～８周早孕绒毛体外培养为实验手段，观察马鞭草乙醇提取液不同剂量对绒毛细胞形态及绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）分泌功能的影响，探讨了马鞭草抗早孕的细胞学作用机理，结果表明：２５ｍｇ／ｍｌ和５０ｍｇ／ｍｌ马鞭草乙醇提取液能明显抑制绒毛细胞生长及激素分泌，于加药后２４小时，部分细胞变圆，培养液中ＨＣＧ量下降，４８小时大多数细胞团缩死亡，ＨＣＧ仅为对照组的１／４。一定浓度的马鞭草乙醇提取液可     

芪归解毒汤防治硫酸镍致晶状体上皮细胞损伤的实验研究贾丹张兴儒刘龙民张隆周欢明

目的观察芪归解毒汤药物血清对硫酸镍损伤正常人晶状体上皮细胞（Lens epithium cells，LEC，细胞编号：SRA01／04）的保护作用。方法采用血清药理学方法提取芪归解毒汤药物血清，体外培养晶状体上皮细胞，用硫酸镍产生细胞损伤，再加入体积分数分别为5％、10％、15％、20％的药物血清，倒置显微镜下观察晶状体上皮细胞的形态学改变，MTT法检测细胞活性的变化，试剂盒测量乳酸脱氢酶（LDH）含量的变化。结果倒置显微镜下观察到硫酸镍损伤的晶状体上皮细胞出现肿胀、体积缩小、折光性下降、贴壁率降低等形态学改变。加入10％和15％芪归解毒汤药物血清时细胞生长明显好转，折光性优于硫酸镍组，药物血清浓度为20％时细胞生长接近正常；MTT法检测药物血清组细胞活力较硫酸镍组明显增强；药物血清组LDH活性较硫酸镍组明显降低。结论芪归解毒汤药物血清能明显减轻晶状体上皮细胞的镍性损伤，并呈现剂量依赖关系。     

抗凝血酶效价法测定蛭萸颗粒剂中的水蛭成分

目的:建立复方制剂蛭萸颗粒剂(全蝎、蜈蚣、黄连、黄芪等)中君药水蛭的测定方法.方法:蛭萸颗粒剂经95%的乙醇提取后,用抗凝血酶效价法对方中水蛭进行测定.结果:方法简便可靠,与不含水蛭的空白制剂对照,差异明显,易于识别.结论:使用本法以95%的乙醇提取样品可以区分水蛭与制剂中其它抗凝血酶成分,达到测定水蛭的目的.     

五味子提取液抑菌活性研究

目的:探究五味子提取液的抑菌活性。方法:采用水提醇沉法提取五味子活性成分,以大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌4种标准菌株和环丙沙星耐药及敏感的大肠杆菌野株为供试菌,以环丙沙星为对照药物,采用牛津杯法测定供试菌分别培养16,32,48,64 h后五味子提取液的抑菌圈直径,监测五味子提取液的抑菌活性和抑菌活性的变化趋势,同时采用试管双倍稀释法测定五味子提取液对大肠杆菌耐药株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果:五味子提取液对各供试菌的抑菌圈直径在20.16~30.06 mm,五味子提取液对环丙沙星耐药大肠埃希菌的最低抑菌质量浓度在0.0156 3~0.062 5 g·mL-1,最低杀菌质量浓度在0.312 5~0.062 5 g·mL-1。五味子提取液对所有供试菌都有明显的抑制作用,与环丙沙星相比,五味子提取液对环丙沙星耐药菌的抑制作用表现出极大的优势。环丙沙星与五味子提取液对供试菌的抑菌活性都呈逐渐下降趋势。结论:五味子提取液不仅具有广谱抗菌活性,对环丙沙星耐药菌也具有显著的抑制活性,可开发为新型抗菌剂。     

瑶药柚子枫提取物降血糖作用的研究

目的:研究瑶药柚子枫提取物的降血糖作用。方法:采用四氧嘧啶所致小鼠糖尿病模型和葡萄糖所致高血糖小鼠模型,ig给药7 d后,测定血糖水平。结果:柚子枫水提醇沉上清液提取物(A1)和水提醇沉沉淀物(A2)ig 5,10,20 g.kg-1对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖升高有明显抑制作用,70%醇提物(B)对高血糖值降低作用不明显。A1,A2在ip葡萄糖后0.5,1,2h,对葡萄糖引起高血糖小鼠血糖升高有明显降低作用,B在5～20 g.kg-1剂量下1,2 h对高血糖值降低作用不明显。结论:A1,A2对2种高血糖模型作用效果一致,表现出降血糖作用;B无显著降糖作用。     

细胞凋亡抑制剂防护晶状体上皮细胞氧化损伤及信号转导机制

目的：探讨细胞凋亡抑制剂阿魏酸钠（SF）、五味子乙素（Sch B）、菊花（FC）、车前子（SP）对过氧化氢（H2O2）所致氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）活性以及细胞内钙（Ca2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响,研究四种细胞凋亡抑制剂防治白内障的细胞信号转导机制。方法：将传代培养的牛LEC与H2O2共同孵育复制氧化损伤的模型,同时加入SF和Sch B单体及FC和SP水提取液孵育后,采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性,采用荧光分光光度法检测LEC内钙离子的浓度（[Ca2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,并探讨不同浓度和不同孵育时间（12h、24h、36h）的影响。结果：①H2O2组LEC活性下降,SF、Sch B、FC、SP均可明显增强氧化损伤的LEC活性（P〈0.01）,呈浓度依赖关系和时间依赖关系。②H2O2组LEC的[Ca2＋]i升高,SF、Sch B、FC、SP均可显著降低氧化损伤LEC的[Ca2＋]i（P〈0.01）,呈时间-效应关系。③H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降,SF、Sch B、FC、SP均可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0.01）、cGMP水平显著升高（P〈0.01）,也呈时间-效应关系。结论：四种细胞凋亡抑制剂SF、Sch B、FC、SP可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,通过[Ca2＋]i、cAMP、cGMP信号转导及相互作用调节生物学效应可能是其主要的细胞和分子生物学机制。     

芪归解毒汤对硫酸镍诱导晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用

目的观察芪归解毒汤对硫酸镍诱导正常人晶状体上皮细胞(Lens epithelium cell,LEC)凋亡的影响。方法体外培养正常人晶状体上皮细胞,用血清药理学方法制备含芪归解毒汤药物血清,用药物血清和硫酸镍处理培养的LEC,采用流式细胞术检测LEC凋亡率;透射电子显微镜观察LEC超微结构改变和凋亡小体形成。结果硫酸镍组LEC凋亡率(26.99±2.58)高于中药组LEC(12.21±2.42),硫酸镍组和中药组LEC凋亡率均高于对照组(0.8±0.16),三组间差异有统计学意义(x2=-20.489,P0.01),两两比较均有统计学意义(P0.01)。透射电镜观察到硫酸镍组LEC各阶段均有细胞凋亡,可见到LEC凋亡后的继发性坏死。中药组LEC呈凋亡早期改变,只有少数LEC呈凋亡改变,未见有凋亡后继发性坏死的LEC。结论芪归解毒汤药物血清可有效地抑制硫酸镍诱导的LEC凋亡。     

水蛭古今药用炮制研究

对水蛭古今药用炮制历史进行了整理分析,指出水蛭最初的炮制意图是去腥矫味。始于宋代的“不制入腹生子为害”之说是一种误传,但一直是水蛭制法演变的依据,认为水蛭炮制研究的关键,是在保证其药效的前提下,尽可能选择易于矫味,便于服用入药形式,制法研究中似宜避免高温处理。     

Preventive and therapeutic effects of hirudo on incipient acute tubular necrosis in rats]

Male Sprague-Dawley rats, weighing 180-250 g and depleted with water for 16 h, were injected with glycerol (im) to induce acute tubular necrosis, and then divided into groups given blood-activating and stasis-removing drug, Hirudo solution (GH) tap water (GW), verapamil (GV) and none (GSDW) in incipient stage separately. It was observed that levels of BUN increased at 24th and 48th h after administration of glycerol and levels of Bcr increased at 3rd, 24th and 48th h after injecting glycerol in GH were significantly lower than those increased in GW and GSDW (P less than 0.05-P less than 0.001), but roughly similar to those in GV (P greater than 0.05-P greater than 0.5). Renal histopathological damage under light microscope and electron-microscope in GH at 3rd and 24th h after administration of glycerol were also less severe than those in GW and GSDW. The results suggested that Hirudo could exert a preventive and therapeutic effects on incipient acute tubular necrosis induced by glycerol in rats.     

水蛭防治初发期急性肾功能衰竭的实验研究

为了观察水蛭对初发期急性肾小管坏死(ATN)的防治作用,用禁水16h的成年雄性SD大鼠肌肉注射甘油引起ATN,在初发期给以不同药液,观察到水蛭组3、24、48h Ber升高值,24、48h BUN升高值均明显低于自来水组和单纯禁水组,而与纠正对照异搏停组相似;3、24h肾脏组织形态学损伤水蛭组亦较自来水组和单纯禁水组明显减轻。结果表明,水蛭有防治初发期ARF的作用。