肺腺癌细胞系耐药及凋亡相关基因的表达和逆转

目的 探讨顺铂耐药肺腺癌细胞系Ａ５４９＾ＤＤＰ的耐药,凋亡相关基因的表达及其与亲代细胞Ａ５４９的差异,观察差异表达基因的反义寡核苷酸的逆转作用。方法 将人工合成的反义,正义硫代脱氧寡核苷酸（Ｓ－ｏｌｉｇｏｄｌｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,Ｓ－ＯＤＮ）经脂质体包后转染Ａ５４９＾ＤＤＰ细胞,应用ＲＴ－ＰＣＲ检测耐药及凋亡相关基因ｍＲＮＡ水平,免疫细胞化学及流式细胞－抗体检测相应蛋白及增殖抗原Ｋｉ－６７     

人参单体Rh2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的体外研究

背景与目的肺癌已成为人类癌症主要死亡原因之一.从植物中开发抗肿瘤药物是国内外抗肿瘤新药开发的一个热点.本研究的目的是观察人参单体Rh2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞系凋亡的作用,并探讨其可能的分子机制.方法体外培养的人肺腺癌A549/DDP细胞经不同浓度梯度的人参单体Rh2干预,分别应用MTT实验观察其对细胞增殖的影响,用流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数及相关基因表达的改变,以及用双抗体夹心ELISA法测定细胞上清液sApo-1/Fas浓度变化.结果①人参单体Rh2可抑制A549/DDP细胞的生长,并呈剂量、时间依赖作用.②人参单体Rh2处理A549/DDP细胞24 h,实验组凋亡指数显著高于对照组(P＜0.001),G0/G1期细胞比例显著高于对照组(P＜0.01),S期细胞比例显著低于对照组(P＜0.01),G2/M期细胞比例与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).③实验组p53、Fas阳性表达率显著高于对照组(P＜0.01,P＜0.001),Bcl-2阳性表达率显著低于对照组(P＜0.001).④实验组A549/DDP细胞培养上清液于不同时间sApo-1/Fas含量均显著低于对照组(P＜0.05).结论人参单体Rh2具有诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的作用,其分子机制可能是上调p53和Fas及下调Bcl-2的表达、通过Fas/FasL系统途径诱导细胞凋亡.     

奥美拉唑逆转人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP耐药性的研究

目的:探讨液泡ATPase[vacuolar (H+)-ATPase, V-ATPase]非特异性抑制剂奥美拉唑(omeprazole ,OME)逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP的耐药性及可能的作用机制.方法:以非细胞毒性浓度4 μg/mL的OME预处理A549/DDP细胞24 h,再用2 μg/mL顺铂(cisplatin, DDP)处理 A549/DDP细胞.MTT法检测细胞的增殖抑制率,激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)法间接检测细胞内pH值的变化,FCM法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和PTEN的表达,RT-PCR法检测V-ATPase 、Bcl-2和PTEN mRNA的表达.结果:OME具有逆转A549/DDP细胞耐药性的作用,逆转倍数为1.45 (P<0.01);OME预处理后A549/DDP细胞内pH值明显降低,Bcl-2蛋白表达下降,PTEN蛋白表达增加(P<0.01).V-ATPase在亲本A549及A549/DDP细胞中相对表达量分别为0.88±0.00和0.99±0.00 (P<0.01);A549/DDP细胞中V-ATPase在有无OME预处理的情况下的相对表达量分别为1.09±0.00和1.05±0.02,差异无统计学意义.Bcl-2 mRNA相对表达量下降(P<0.01),PTEN mRNA相对表达量增加(P<0.01).结论:V-ATPase在A549/DDP细胞中高表达,OME能部分逆转A549/DDP耐药性,其作用机制可能与上调PTEN和下调Bcl-2 表达有关.     

IDENTIFICATION OF DRUG RESISTANT RELATED cDNA IN LUNG ADENOCARCINOMA CELL LINES

The mechanisms of multidrug resistance (MDR) in lung cancer are complicated, and have not yet been elucidated completely. Studies showed that clinical MDR in lung cancer can only be explained partially by known MDR related proteins1-3. Our previous study also supported this conclusion4. Therefore, in order to clarify the development mechanisms of drug resistance in lung cancer it would be helpful to identify new drug resistance genes and explore their structure and function. In this study,…     

重组人血管内皮抑素逆转人肺腺癌A549/DDP细胞耐药性研究

目的探讨重组人血管内皮抑素(rh-ES)对A549/DDP细胞耐药性的逆转作用.方法采用人肺腺癌细胞株A549及耐药细胞株A549/DDP作为研究对象,以顺铂(DDP)与重组人血管内皮抑素两者联合及单独给药的方式分别作用于人肺腺癌细胞株A549及耐药细胞株A549/DDP,作用时间72 h,观察不同给药方式造成的同株细胞之间耐药性的不同及不同株细胞间耐药性的差别,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测重组人血管内皮抑素对A549/DDP细胞耐药性的逆转作用.结果DDP对A549细胞半数抑制浓度(IC50)为(0.72±0.05)μg/ml,对A549/DDP的IC50为(11.54±0.64)μg/ml.rh-ES联合DDP对A549/DDP的IC50为(2.0±0.1)μg/ml.逆转倍数(RF)为5.77,相对逆转率(RRR)为88.2%.结论重组人血管内皮抑素能逆转A549/DDP对DDP的耐药性.     

番荔枝内酯单体squamocin诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的 观察番荔枝内酯单体squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨squamocin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测不同浓度的squamocin对人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响;流式细胞仪检测squamocin干预在不同时间点对人肺腺癌A549细胞凋亡率的影响;Western blotting检测squamocin干预前后细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 MTT法显示,squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用随着squamocin浓度的增加和作用时间的延长而增强,24、48、72h半数抑制浓度（IC50）分别为16.54、9.28、6.17μg／ml;流式细胞仪检测显示,在24、48、72h实验组人肺腺癌A549细胞凋亡率之间及其与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中实验组72h的细胞凋亡率最高,为（51.87±1.79）％Western blotting显示,squamocin干预后细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2表达明显下调。结论 squamocin可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,这可能与squamocin上调细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax表达以及降低抑制细胞凋亡基因Bcl-2表达有关。     

p73基因过量表达对人肺癌细胞A549凋亡及其化疗敏感性的作用

背景与目的：部分非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）表达野生型p53基因（wild-type p53,wt-p53）,因此在基因治疗中克服这些NSCLC对wt-p53的抵抗机制就非常重要。P53基因家族的新成员p73是p53的同源体,本研究旨在探讨对wt-p53基因治疗抵抗的人肺腺癌细胞A549在外源p73基因转染或联用化疗药后凋亡程度和对化疗药物敏感性的变化。方法：将真核表达重组质粒pcDNA3-HA-p53或pcDNA3-HA-p73α转染入A549细胞,G418筛选,Western blot检测P53或P73α的表达。MTT法分析转染细胞对顺铂和阿霉素的敏感性,用流式细胞术、TUNEL法和DNA片段法分析化疗药作用下转染细胞的凋亡变化,克隆形成实验观察细胞生物学性状的改变。结果：转染p53或p73α基因的A549细胞可以稳定高表达p53或p73α蛋白。转染p73α的A549细胞在原本没有明显抑制和杀伤作用的药物浓度（6．25μmol／L的顺铂或0．25μmol／L的阿霉素）作用下生长明显受到抑制。顺铂的IC50值从22．65μmol／L降至3．75μmol／L,阿霉素的IC50值从4．20μmol／L降至0．06μmol／L。p73能使A549细胞受顺铂和阿霉素诱导的细胞凋亡增加。而p53没有明显作用。流式细胞术显示p73α基因转染后,顺铂诱导的细胞凋亡率从10．6％升高到36．8％（P〈0．01）,阿霉素诱导的细胞凋亡率从13．0％升高到41．1％（P〈0．01）。克隆形成实验显示．p73α基因转染能明显降低顺铂和阿霉素作用后A549细胞的克隆形成数（P〈0．01）。对顺铂和阿霉素的化疗增效倍数分别为2．0和2．4倍。结论：外源性p73基因的导入增加了wt-p53型A549细胞对顺铂和阿霉素等化疗药的敏感性。该作用可能与p73基因能不依赖于p53基因诱导细胞凋亡有关。p73基因可用于治疗wt-p53不能发挥作用的恶性肿瘤。     

吴茱萸碱逆转人肺癌细胞株Ａ５４９／ＤＤＰ耐药机理的实验研究

目的　观察吴茱萸碱逆转人肺腺癌耐药株Ａ５４９／ＤＤＰ细胞耐药性的效果并探讨其与阻断ＮＦ κＢ信号传导通路的相关性。方法　采用ＭＴＴ法检测单用吴茱萸碱、顺铂（ＤＤＰ）以及两药联用在不同时间对Ａ５４９／ＤＤＰ细胞的增殖影响,计算ＩＣ５０及耐药逆转倍数。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。ＲＴ ＰＣＲ检测各组ＭＤＲ１、ＮＦ κＢ、Ｂｃｌ-２、ＭＭＰ-２和ＶＥＧＦ的ｍＲＮＡ表达。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测各组细胞的ｐＩκＢ-α、pＩＫＫα蛋白表达水平。结果　吴茱萸碱０.１２５ｍｇ／Ｌ、０.２５ｍｇ／Ｌ针对Ａ５４９／ＤＤＰ细胞对ＤＤＰ的耐药逆转倍数分别为３.６６８和１1.４８。ＲＴ ＰＣＲ显示在吴茱萸碱作用下检测基因的ｍＲＮＡ表达随着吴茱萸碱浓度的增加和时间的延长其表达逐渐下降。当吴茱萸碱与ＤＤＰ联用时,可明显提高Ａ５４９／ＤＤＰ细胞对化疗药的敏感性,凋亡细胞显著增加（Ｐ＜０.０５）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法结果提示Ａ５４９／ＤＤＰ细胞中ｐＩκＢ-α的表达水平随着吴茱萸碱作用时间的延长逐渐下降,ｐＩＫＫα表达则无显著变化。结论　吴茱萸碱可以通过抑制ＩκＢ-α的磷酸化阻断ＮＦ-κＢ信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加耐药细胞对ＤＤＰ的敏感性。     

纳米氧化铈颗粒对人肺腺癌耐顺铂细胞辐射敏感性的影响

目的：研究纳米氧化铈颗粒对人肺腺癌耐顺铂细胞（A549/DDP）辐射敏感性的影响。方法：采用细胞增殖抑制实验确定γ射线半数抑制剂量和纳米氧化铈的使用浓度,细胞集落形成实验检测γ射线和纳米氧化铈处理后的细胞存活情况。将细胞分为阴性对照,γ射线照射组,纳米氧化铈低、中、高浓度组（分别加入0.000 5、0.05和5 μmol/L的纳米氧化铈处理后,再进行照射）,采用流式细胞术进行细胞凋亡率、细胞周期和胞内pH值检测。结果：通过细胞增殖抑制实验,确定γ射线诱导A549/DDP细胞半数抑制剂量为25 Gy。细胞集落形成实验观察发现,与照射组相比,纳米氧化铈低浓度组细胞的SF₂降低、a/b比值和增敏比升高。流式细胞术检测发现,纳米氧化铈低浓度组细胞凋亡率增加（t=5.42,P < 0.05）;纳米氧化铈低、中、高浓度组的S期阻滞明显（t=3.14、4.08、6.81,P < 0.05）;纳米氧化铈低、高浓度组的胞内pH值升高（t=2.86、4.93,P < 0.05）。结论：低浓度纳米氧化铈对于体外培养的A549/DDP细胞具有一定的辐射增敏作用。     

Bim在克唑替尼诱导EML4-ALK融合基因阳性肺腺癌细胞株H2228凋亡中的作用机制

目的 探讨Bim在克唑替尼诱导EML4-ALK融合基因阳性肺腺癌细胞株H2228凋亡过程中的作用机制。方法 在不同时间点（24、48、72h）用不同浓度克唑替尼分别处理EML4-ALK阳性肺腺癌H2228细胞株和EML4-ALK阴性肺癌A549细胞株,采用MTT法检测克唑替尼作用72h的细胞增殖抑制情况;PI单染流式细胞仪检测经300nmol／L克唑替尼作用24、48和72h的细胞凋亡率;采用Western blotting法检测克唑替尼诱导前后Bim蛋白（Bim-EL、Bim-L和Bim-S）的表达水平,同时对促凋亡分子 Bid和抗凋亡分子 Bcl-2、Bcl-xL的蛋白水平进行联合检测;采用siRNA 技术“沉默”Bim 基因的表达,用流式细胞仪检测 siRNA“沉默”Bim基因后克唑替尼诱导H2228细胞株的凋亡率。结果 克唑替尼作用72h后,肺腺癌H2228细胞株和A549细胞株的细胞增殖抑制率均随着克唑替尼药物浓度的增加而逐渐升高,呈剂量依赖性。克唑替尼作用于H2228细胞72h的IC50值为335nmol／L。300nmol／L克唑替尼作用H2228 细胞株24、48、72h后的凋亡率分别为（19.19±0.61）％、（35.47±1.17）％、（43.58±4.84）％,作用A549细胞株的凋亡率分别为（12.71±0.1）％、（18.22±0.13）％、（19.36±0.45）％。随着克唑替尼（300nmol／L）作用时间的延长,细胞凋亡率亦随之增加,并呈时间依赖性（P＜0.05）。在凋亡细胞中发现Bim蛋白水平升高,以及抗凋亡蛋白 Bcl-2、Bcl xL表达降低,但促凋亡蛋白 Bid 在不同药物浓度及时间点的表达水平无明显变化。此外,经siRNA 技术“沉默”Bim 基因后,克唑替尼诱导的H2228细胞株凋亡率明显降低。结论克唑替尼通过下调抗凋亡蛋白 Bcl 2、Bcl xL及上调Bim的表达水平来发挥其诱导细胞凋亡作用,该过程可被Bim siRNA抑制。     

Polo-like激酶1反义RNA对肺癌细胞A549细胞周期的影响

背景与目的Polo-Like激酶1(Polo-likekinase 1,Plk1)是参与有丝分裂调控的重要分子,已在肺腺癌细胞株A549中检测到Plk1的高表达,并认为Plk1高表达与肺癌患者的放化疗耐受和预后相关。本研究利用反义RNA技术,探讨Plk1基因表达下调对肺癌细胞细胞周期的影响。方法培养肺腺癌细胞株A549,构建表达Plk1反义RNA的质粒pcDNA3.0-Plk1(pc3.0P),通过脂质体介导转入A549细胞,Westernblot、RT-PCR检测Plk1的表达,BrdU脉冲标记和流式细胞术分析细胞周期变化;免疫荧光染色检测α微管蛋白的表达。结果A549细胞转染pc3.0P后,Plk1mRNA的表达较对照组显著下降(P<0.05),转染24h后Plk1mRNA的表达下降46.75%,转染48h后下降61.84%;蛋白表达亦有下降;S期细胞百分数(BrdU标记指数)较对照组明显下降(P<0.05),转染后48h仅有25.59%;转染后72h出现G2/M期阻滞(P<0.05),并出现细胞凋亡;微管染色显示细胞周边缺乏微管的聚集,单极纺锤体形成。结论Plk1影响纺锤体微管的形成,使A549细胞增殖速度减慢,细胞周期阻滞并发生凋亡。     

大鼠肺鳞癌癌变过程中凋亡和增殖相关基因表达的研究

背景与目的:细胞凋亡信号转导的关键是凋亡下游蛋白caspase-3的激活。有关caspase-3与人类非小细胞肺癌的研究已取得了很大的进展,但它与大鼠肺鳞癌的关系的研究未见报道。本研究探讨大鼠肺鳞癌癌变过程中细胞增殖与凋亡相关基因cas-pase-3和增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达在癌变过程中的作用。方法:取60只Wistar大鼠,其中50只用化学致癌物3-甲基胆蒽(3-methylcholanthrene,MCA)及二乙基亚硝胺(diethyinitrosamine,DEN)碘油溶液于左肺叶支气管灌注以诱发大鼠肺鳞状细胞癌;另10只灌注碘油作为对照。用免疫组织化学SP法检测癌变过程中caspase-3和PCNA蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡细胞。结果:对照组大鼠支气管粘膜上皮、癌前病变和肺鳞癌中,caspase-3蛋白表达的阳性评分均值分别为3.10±0.99、2.25±1.13、1.38±0.95;PCNA的平均增殖指数(PCNA-LI)分别为:14.10±5.02、28.13±8.72、41.88±14.24;平均凋亡指数(AI)分别为:0.60±0.52、2.06±0.85、2.26±1.14。肺鳞癌与对照组大鼠支气管粘膜上皮相比,其caspase-3蛋白阳性表达的差异有非常显著性(P<0.01),与癌前病变相比其caspase-3阳性表达的差异有显著性(P<0.05)。对照组大鼠支气管粘膜上皮为低增殖指数和低凋亡指数,分别与后     

Aurora A反义寡核苷酸对人肺癌细胞系A549细胞生长与细胞周期的影响

目的：探讨Aurora A基因表达的下调对肺癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法：用脂质体瞬时转染法介导Aurora A反义硫代磷酸寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides,ASODN）处理肺腺癌A549细胞,RT-PCR及Western-blot方法检测Aurora A mRNA和蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期分布的变化,四氮唑盐法（MTT）检测转染前后细胞生长抑制率变化。结果：Aurora A反义寡核苷酸作用于A549细胞后,细胞的生长抑制率在一定范围内呈剂量和时间依赖性,其中48h的IC50值约为300nmol/L,在此浓度和时间下,Aurora A反义寡核苷酸可明显降低Aurora A mRNA和蛋白的表达,且细胞周期阻滞于G2/M期和S期。结论：下调Aurora A表达可抑制肺腺癌细胞系A549的增殖,同时导致细胞阻滞于G2/M期及S期。     

Slp2反义真核表达载体的构建及功能研究

背景与目的 肺癌相关基因的研究一直是研究的热门课题，S1p2基因是通过cDNA微阵列技术筛选出的肺癌差异表达基因之一，本研究旨在对S1p2基因在肺癌细胞系中的表达及其功能进行初步研究。方法 提取肺癌细胞系A549、GLC-82、NCI-H446、NCI-H460的细胞总RNA，用RT-PCR方法检测肺癌细胞系中S1p2基因mRNA水平的表达；构建S1p2反义基因，通过离子脂质体将克隆的S1p2反义基因导入肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460，用半定量RT-PCR检测转染目的基因对肺癌细胞系S1p2表达的影响；通过四唑盐比色法绘制细胞生长曲线以及流式细胞分析、软琼脂细胞克隆形成试验，观测转染S1p2反义基因对肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460生长速度、细胞周期以及细胞增殖能力的影响。结果 在4个肺癌细胞系中，S1p2基因均为阳性表达；转染S1p2反义基因后的肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460的细胞生长速度明显减慢；在流式细胞分析直方图上表现为G2期的细胞增多，并曾在转染目的基因的NCI-H446细胞流式直方图中观察到了位于G0／G1期左侧的“亚Gt峰”的出现；转染S1p2反义基因后肺癌细胞系的软琼脂培养细胞克隆形成率明显低于未转染细胞。结论 S1p2基因与肺癌细胞的生长、增殖力密切相关，有必要进行深入研究和探讨。     

曲古抑素A对耐顺铂人肺腺癌细胞株凋亡影响及其机制的探讨

目的:探讨曲古抑素A(TSA)诱导耐顺铂(DDP)人肺腺癌A549/DDP细胞株凋亡的作用及机制。方法:荧光染色检测细胞凋亡,蛋白质印迹法分析cFLIP、Caspase-8、Caspase-3和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达的变化,同时比色法测定Caspase-8活性。结果:曲古抑素A能诱导凋亡A549/DDP细胞株凋亡,随着浓度增加,其凋亡率逐渐增加。蛋白质印迹法结果显示,TSA处理细胞后,cFLIP蛋白水平下降,Pro-caspase-8减少,提示该酶被激活,促使Bid蛋白切割。Procaspase-3减少,提示酶被激活。PARP蛋白减少,切割的条带逐渐增加,提示PARP活性增加,促进细胞凋亡。比色法结果显示TSA对Caspase-8活性和cFLIP的影响具有浓度和时间依赖性。结论:TSA可以通过降低cFLIP水平激活Caspase-8诱导A549/DDP细胞凋亡。     

人肺腺癌A549/DDP耐药细胞减弱顺铂诱导的细胞凋亡

目的：探讨人肺腺癌Ａ５４９／ＤＤＰ耐药细胞的多药抗药机理。方法;应用形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、原位ＤＮＡ断裂点的末端标记法观察细胞亡的状况,用免疫组化法检测ｂｃｌ－２基因的表达。结果：癌细胞在顺铂作用下产生了典型的凋亡形态学改革。３μｇ／ｍｌ,５μｇ／ｍｌ,７μｇ／ｍｌ顺铂作用４８小时,Ａ５４９细胞ＤＮＡ裂解片断呈现典型的阶梯状排列条喧,而在５μｇ／ｍｌ、７μｇ／ｍｌ顺铂作用４８小时,Ａ５４９／     

人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系的建立及其特性

背景与目的:临床前和临床研究显示吉西他滨对实体瘤有较好的疗效,尽管已有卵巢癌和红白血病吉西他滨耐药细胞系的报道,但肺癌吉西他滨耐药细胞系尚未见报道。我们建立了人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系,并对其细胞生物学特性进行研究。方法:逐步增加培养基中吉西他滨的浓度,建立了对吉西他滨耐药的人肺腺癌细胞系A549-Gem。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验,计算出A549和A549-Gem的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI)。比较A549和A549-Gem的生长曲线,并计算出两细胞系的倍增时间。采用MTT法检测A549-Gem对几种常用抗肿瘤药物的交叉耐药谱。结果:吉西他滨对A549和A549-Gem的IC50分别为(6.56±1.19)μmol/L和(921.09±225.27)μmol/L,RI为140.52(P=0.0195)。集落形成实验的RI为132.95。根据生长曲线计算出A549和A549-Gem的倍增时间为29.7h和36.4h。交叉耐药实验表明,A549-Gem对长春新碱(VCR)和足叶乙甙(VP-16)的RI分别为54.38和6.18(P<0.01),对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、阿糖胞苷(Ara-C)和紫杉醇(Taxol)无交叉耐药。结论:成功建立了人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系A549-Gem,耐药性能明显、稳定,非常适合用于肺癌中吉西他滨耐药的研究。A549-Gem对VCR、VP-16产生交叉耐药,对ADM、DDP、Ara-C和Taxol无交叉耐药     

肺癌组织端粒酶表达与耐药,凋亡相关基因关系及其临床意义

目的 探讨肺癌冰冻组织端粒酶催化亚单位（ｃａｔａｌｙｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓｕｂｕｎｉｔ,ｈＴＲＴ／ｈＥＳＴ２）编码基因ｍＲＮＡ表达与细胞凋亡,增殖,耐药及凋亡相关基因的关系及其预后意义方法 应用ＴＲＡＰ－ＰＣＲ,原位杂交检测端粒酶活性（ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ,ＴＡ）及ｈＴＲＴ／ｈＥＳＴ２表达,ＲＴ－ＰＣＲ,免疫组化检测耐药及凋亡相关基因ｍＲＮＡ及蛋白水平,原位杯端标记（ｉｎｓｉｔｕｅ     

Identification and characterization of different subpopulations in a human lung adenocarcinoma cell line (A549)

The morphology, cell growth, antigenic expression and tumorigenicity of cell subpopulations from the A549 lung adenocarcinoma isolated by Percoll gradient separation have been analysed. Four subpopulations were obtained (subpopulations A, B, C and D). Immunocytochemical analysis of several antigens was performed with monoclonal antibodies (MAbs): MUC1 mucin (C595, HMFG1 and HMFG2), MUC5B (PANH2); gp230 (PANH4); carbohydrate antigens including sialyl Lewis x (KM93), Tn antigen (83D4), Lewis y (C14); 5, 6, 8, 17 and 19 cytokeratins and p53. The cell population D tended to form cell aggregates that piled up on the monolayer similar to overgrowth cultures of the A549 parental cell line, whereas A, B and C cell subpopulations formed well spread monolayers. Both parental A549 and subpopulation D secreted abundant mucus. The topographic distribution and secretion production were correlated with tumorigenic assays since only subpopulation D grew in nude mice exhibiting reduced latency period; these characteristics correlated with the fast growth of the subpopulation D in vitro. Immunocytochemical analysis demonstrated that subpopulation D showed greater expression of MUC1 mucin and carbohydrate antigens such as Tn antigen, sialyl Lewis x and Lewis y and less expression of cytokeratins, p53, MUC5B and gp230; conversely, subpopulations A, B and C showed the opposite antigenic profile. Our results illustrate heterogeneity in the A549 cell line; subpopulations A, B and C retained characteristics of more differentiated adenocarcinoma while subpopulation D displayed features of a less differentiated tumor line.