近皮层大鼠C6胶质瘤模型的建立研究

目的:建立一种便于开骨窗及肿瘤切除的近皮层大鼠C6胶质瘤模型.方法:立体定向下将C6细胞接种于大鼠脑皮层、白质交界处.建立近皮层荷瘤鼠模型.取7只模型鼠,分别于接种的第7、11、15天行头颅MRI检查,了解肿瘤的生长情况.行病理HE切片观察、流式细胞DNA细胞周期分析及GFAP免疫组织化学检测,了解肿瘤的生长特性和病理特征.5只荷瘤鼠及2只正常大鼠经尾静脉注入5-ALA后,取肿瘤组织及脑组织制成细胞悬液行荧光分光光度分析,探讨血脑屏障的破坏情况.取29只荷瘤大鼠,分成开骨窗组、开骨窗加取瘤组及对照组,观察生存期.结果:用本法建立近皮层C6胶质瘤模型54只,52只成功建立模型,成功率96.3%.病理、流式细胞、免疫组织化学显示大鼠C6胶质瘤生长特性和病理特征与人脑胶质瘤相似;对照组、开骨窗组及开骨窗加肿瘤切除组生存期分别为(32.000 0±8.981 5)、(41.888 9±6.461 8)、(59.400 0±14.416 0)d.行组间单向方差分析,生存期比较有统计学差异(P＜0.05).结论:该方法建立的胶质瘤模型稳定,生长特性和病理特征与人脑胶质瘤相似,便于开骨窗及切除肿瘤,是进行胶质瘤研究的较好模型.     

大鼠C6脑胶质瘤模型建立及X刀治疗的护理

目的总结大鼠C6脑胶质瘤模型制作及X刀治疗的护理经验。方法协助医生对20只大鼠制作脑胶质瘤模型及给予X刀治疗，在术前、术中、术后积极实施相关护理对策。结果大鼠C6脑胶质瘤模型制作成功率80％，X刀治疗成功率100％，治疗后的存活率为86％。结论熟悉大鼠脑胶质瘤模型制作及X刀治疗的技术，加强术前、术中、术后的配合有助于提高实验的成功率，提示熟练的护理配合在动物模型制作及X刀治疗中具有重要的意义。     

尾状核区注射法建立Wistar大鼠C6胶质瘤模型的实验研究

目的探讨尾状核区注射法建立Wistar大鼠C6胶质瘤模型的技术要点及成瘤效果。方法立体定向辅助下将C6细胞接种于Wistar大鼠右侧尾状核区,建立C6细胞胶质瘤鼠模型。共建立15只模型鼠,分别于接种的第7、14、21天行头颅MRI检查,3周后分批灌杀动物行病理HE切片观察、S100及GFAP免疫组织化学检测,了解肿瘤的生长特性和病理特征。对照组5只Wistar大鼠接种同体积培养液,同样方法进行检测。结果用本法建立Wistar大鼠C6胶质瘤模型15只,成功率为100%。磁共振扫描显示接种第2周时10只大鼠有肿瘤生长,MR表现为T2高信号;第3周时全部有肿瘤生长,瘤周水肿明显。病理、免疫组织化学显示大鼠C6胶质瘤生长特性和病理特征与人脑胶质瘤相似。结论该方法建立的胶质瘤模型稳定是进行胶质瘤研究的较好模型。     

大鼠C6脑胶质瘤动物实验模型的建立

目的 为脑胶质瘤的基础理论、临床治疗和药效学研究提供简便、经济、实用的大鼠C6脑胶质瘤动物实验模型。方法 采用自制大鼠脑固定架，固定后，于脑靶点接种C6胶质瘤细胞。观察动物行为状态和生存期，并对脑肿瘤进行形态学，细胞学和分子生物学相关指标的检测。结果 接种C6胶质瘤细胞后，动物进食量减少，体重下降，有的动物出现眶周出血，眼球突出，自身旋转，癫痫发作，偏瘫等症状，大约在2至3周内，动物大多死亡，病理解剖显示颅内肿瘤形成。结论 该方法建立的脑胶质瘤具有与人脑胶质瘤相似的特性，肿瘤形成时间短，存活期较稳定，可供脑胶质瘤基础理论、实验治疗和药效学研究的需要。     

大鼠脾脏来源内皮祖细胞对C6胶质瘤细胞增殖能力影响的体外研究

目的研究体外内皮祖细胞对C6胶质瘤细胞增殖能力的影响。方法取SD大鼠脾脏采用密度梯度离心法获取内皮祖细胞,通过观察其分化过程中的形态特征,激光共聚焦检测其吞噬乙酰化低密度酯蛋白(DiI-acLDL)和结合荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1)的特异性,免疫荧光检测细胞表面抗原CD34和CD31的表达,对EPCs进行鉴定。按0、10%、20%、30%、40%、50%6个浓度将内皮祖细胞条件培养基加至C6胶质瘤细胞的常规培养基中观测其对C6胶质瘤细胞增殖的影响;分别采用内皮祖细胞条件培养基和常规培养基孵育C6胶质瘤细胞24h,流式细胞仪检测2组的细胞周期。结果激光共聚焦鉴定DiI-acLDL和FITC-UEA-1双染色阳性细胞即为正在分化的内皮祖细胞;免疫荧光检测内皮祖细胞一致性表达CD34和CD31。随着内皮祖细胞条件培养基含量的增加,36h和48h各浓度组的光密度值也随着增加,且50%内皮祖细胞条件培养基组D(490)值(2.018±0.220)、(2.388±0.448)均高于对照组(1.163±0.103)、(1.106±0.174),且差别有统计学意义(P0.01)。50%含有内皮祖细胞条件培养基培养的C6胶质瘤细胞的增殖率(即S+G2/M)明显高于对照组[(34.650±1.492)%vs(29.587±2.504)%,P0.05]。结论体外内皮祖细胞条件培养基能促进C6胶质瘤细胞的增殖,其机制可能与其分泌的各种血管生成类细胞因子有关。     

C6胶质瘤细胞对体外共培养大鼠神经干细胞增殖影响的初步研究

目的探索与C6胶质瘤细胞体外共培养后大鼠神经干细胞（Neural Stem Cells NSCs）的增殖变化。方法分别培养神经干细胞、星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞。利用共培养池（cell culturetranswell inserts）建立两种细胞的体外共培养模型。应用相差显微镜及电镜观察各组共培养后NSCs的形态变化;共培养后NSCs MTT法作生长曲线。结果原代培养后获得神经干细胞及星形胶质细胞;与C6胶质瘤细胞共培养7天后的NSCs增殖较对照组快,电镜观察可见核质比增高,细胞器较发达。结论 C6胶质瘤细胞对体外共培养的大鼠NSCs的增殖有一定促进作用。     

大鼠C6胶质瘤分子生物学研究进展

脑胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤,随着各种生物治疗方法在肿瘤治疗领域的应用,关于大鼠C6胶质瘤分子生物学方面的研究进展迅速。文章主要对大鼠C6脑胶质瘤血管生成或抑制因子、细胞周期调控因子以及自杀基因的应用等方面予以综述。     

乌骨藤粗提物对大鼠胶质瘤C6细胞的体外实验研究

目的 观察乌骨藤粗提取物(MTE)不同组分对大鼠C6胶质瘤细胞增殖情况的影响,探讨其作用机制.方法 采用新型四氮唑盐法(MTS)检测MTE的Fr1、Fr2、Fr3组分对C6细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测Fr2对C6细胞凋亡和周期的影响;采用荧光定量PCR(qPCR)技术检测不同浓度Fr2对C6细胞的Bax、Bcl-2表达的影响.结果 MTE的Fr1、Fr2、Fr3均能显著抑制C6细胞的增殖(JP＜0.05),与阳性对照组5-氟尿嘧啶(5-FU)相比抑制率也较高(P＜0.05),其半数抑制浓度分别为:60.32、52.30、83.83 μ g/ml.经80、160 u g/ml的Fr2处理24 h后,可有效促进C6细胞早期和晚期凋亡(P＜0.05),其周期被阻滞在G2期;Fr2相同方式处理后,C6细胞中Bax表达水平分别提高到(124.80±7.68)％和(380.30±6 91)％;Bcl-2表达水平分别降低到(84.20±3.10)％和(34.20±4.80)％(P＜0.05).结论 MTE能够显著抑制C6胶质瘤细胞的增殖,其中主要有效成分Fr2能够诱导C6细胞发生G2期周期阻滞,并通过影响Bax和Bcl-2的表达,促进其凋亡.     

注射后留置时间对大鼠C6脑胶质瘤模型的影响

目的:采用不同的留置时间建立大鼠C6胶质瘤模型,比较不同的留置时间对于模型成功率的影响,提高肿瘤种植成功率.方法:36只SD大鼠按留置时间3 min、5 min、10 min分为3组,C6细胞体积10μ1细胞悬液、注射时间5 min.第一次未种植成功者再次种植.术后用骨蜡封骨窗并清创缝合.造模术后2周和3周分别行MRI平扫及增强证实模型肿瘤生长.统计学方法采用Fisher精确检验.结果:36只大鼠,16只第一次种植成功,20只种植失败,改变条件再次种植,2只死于麻醉意外,18只成功.留置时间3 min与5 min,其0.01相似文献   

槲皮素对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用

目的：研究类黄酮化合物槲皮素（quercetin,QUE）对体外培养的大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖调控的作用。方法：按QUE浓度分成10、25、50、75及100 μmol·L^-15个处理组和空白对照组（生理盐水）及溶剂对照组（二甲亚砜）,大鼠脑胶质瘤C6细胞在RPMI 1640培养基中生长达1×10⁶·mL^-1后,在96孔板中分别加入上述浓度的QUE继续培养,每组设3复孔,作用24、48及72 h,采用MTT比色法检测QUE对大鼠脑胶质瘤C6细胞的增殖抑制情况,流式细胞术（FCM）对50及100 μmol·L^-1的QUE作用48 h的大鼠脑胶质瘤C6细胞进行周期分析,免疫组化法检测50 μmol·L^-1的QUE作用48 h 的p53和bcl-2基因产物。结果：与空白对照组比较,QUE处理组随药物浓度增加和作用时间的延长,A值减小(P<0.05),对C6细胞的增殖抑制作用增强,使停滞在G₀／G₁期的细胞增加(P<0.01),而S和G₂/M期细胞减少(P<0.05)。P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论：QUE对C6细胞增殖抑制作用具有浓度、时间依赖性,通过P53蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少诱导细胞凋亡来实现。     

蒿甲醚对大鼠原位脑胶质瘤抑瘤及抗血管生成的实验研究

目的探讨蒿甲醚是否在选择性地杀伤SD大鼠原位脑胶质瘤的同时还具有抑制血管生成的作用.方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度蒿甲醚对大鼠C6脑胶质瘤细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC5)0;采用立体定位仪在48只SD大鼠大脑皮质层接种C6脑胶质瘤细胞(1×106个/μL),雌、雄各半;随机分为3组,每组8只.分别为空白对照组、阳性对照和实验组.在接种第3天后,实验组各组采用灌胃给药法连续给药10 d;于接种后的第20天解剖大鼠,经活体左心室灌注4%多聚甲醛,固定肿瘤的全脑标本.在大鼠脑部接种穿刺点做冠状切口,按垂直和水平方向测量肿瘤大小.肿瘤体积=a2bπ/6(a为肿瘤的短径,b为肿瘤的长径).采用免疫组化方法检测移植瘤组织微血管密度.结果实验组各组对SD大鼠原位脑胶质瘤的抑瘤率分别为:54.5%、61.0%、64.5%和69.8%,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);各实验组血管计数均明显少于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01).各实验组SD大鼠原位脑胶质瘤体积较空白对照组显著减小.结论在一定剂量范围内,口服蒿甲醚对SD大鼠脑部原位接种C6脑胶质瘤有明显的抑制作用;蒿甲醚抑制原位脑胶质瘤生长的机制之一可能是透过血脑屏障抑制脑胶质瘤血管生成.     

在大鼠胶质瘤C6细胞中过表达Pygo2促进其细胞增殖

 目的 通过构建过表达Pygo2的重组体上调Pygo2表达,探讨其在大鼠胶质瘤C6细胞增殖中的作用及机制。方法 重组体经EcoR I和Hind Ⅲ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染大鼠胶质瘤C6细胞,采用Western blot检测外源Pygo2蛋白表达,应用克隆形成实验和MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot检测过表达Pygo2对C6细胞中cyclinD1、β-catenin水平的影响,并采用细胞免疫荧光法检测其对C6细胞中cyclinD1、β-catenin亚细胞定位的影响。结果 双酶切和测序鉴定结果证实插入序列正确,重组体能有效上调Pygo2表达。将重组体转染C6细胞上调Pygo2表达后,细胞的生长增殖被显著促进,克隆形成显著增多,细胞周期进程从G1期至S期转变显著增强;且cyclinD1水平随之增高,亚定位无改变,β-catenin水平和亚细胞定位无明显改变。结论 成功构建了过表达Pygo2的重组体,过表达Pygo2通过增高cyclinD1水平,促进细胞从G1期进入S期,从而促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖。     

建立大鼠C6脑胶质瘤模型与观察颅内肿瘤生长

建立大鼠Ｃ６脑胶质瘤模型,行一般观察和ＭＲＩ检查以确定颅内肿瘤生长情况,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标。方法体外培养大鼠Ｃ６胶质瘤细胞,应用立体定向法将含１０ｇ．Ｌ＾－１琼脂糖和１＊１０＾６Ｃ６细胞悬液１０μＬ注入大鼠了尾状核。接种后行一般观察和ＭＲＬ检查,对５组接种大鼠分别在第１０,１５,２０,２５日和自然死亡前做主动脉多聚甲醛灌注固定,对脑组织和肿瘤标本进行切片观察和ＨＥ染色。结果５０只接     

双向电泳技术分析大鼠星形细胞和C6细胞的蛋白差异

目的：建立大鼠星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的双向电泳（2-DE）技术体系,寻找星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的蛋白表达差异。方法：提取大鼠星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞中的总蛋白,进行第一向等电聚焦（IEF）和第二向十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离总蛋白,GS-800获得凝胶图像,并测量不同凝胶间蛋白斑点在IEF和SDS-PAGE方向上的位置偏差,使用PDQuest7.3软件对凝胶图像进行分析,找出星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的差异表达蛋白。结果：星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的蛋白表达谱上,分别检测到523±16和550±20个蛋白点,平均匹配点数为452±18和472±21,匹配率达86.4%和85.8%,不同凝胶间蛋白质点在IEF方向的偏差为（0.67±0.48）mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为（0.73±0.56）mm,对比分析了星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的2-DE图谱,发现有24个点发生了明显的表达变化（P〈0.01）,在星形胶质细胞中高表达的点有8个,在C6胶质瘤细胞中高表达的点有14个,星形胶质细胞中没有发现表达的点有2个。结论：建立了大鼠星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的双向电泳技术体系,发现两者的双向电泳图谱存在明显差异,C6胶质瘤细胞中表达上调以及星形胶质细胞中没有发现表达的蛋白可能与肿瘤的发生,神经干细胞的迁移有关,表达下调的蛋白可能与抑制肿瘤的发生有关。     

干扰miR-21表达抑制胶质瘤U251细胞增殖迁移与侵袭

目的 探讨干扰miR-21表达对胶质瘤细胞U251增殖、迁移和侵袭的影响。方法使用脂质体将miR-21抑制物(人工合成干扰miR-21表达的核苷酸片段,miR-21处理组)以及对照组转染于U251细胞,利用qRT-PCR验证miR-21处理组转染的细胞中miR-21表达水平;通过MTT法、细胞划痕、transwell等实验观察miR-21处理组和对照组对U251细胞增殖迁移和侵袭的影响。结果miR-21 处理组中miR-21的表达量明显下调。即转染miR-21 抑制剂能有效降低U251细胞中miR-21的表达。miR-21 处理组的 U251细胞与对照细胞相比,增殖速度明显下降,差异具有显著性。细胞划痕实验显示干扰miR-21抑制U251细胞迁移能力。Transwell侵袭实验结果显示,miR-21 处理组的U251细胞的侵袭能力较对照组细胞明显下降。结论miR-21能促进胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力,它可能在胶质瘤的发生和进展中发挥重要作用。     

miR-3175/SIX5轴调节神经胶质瘤细胞的增殖和迁移

[目的]探讨miR-3175在胶质瘤细胞中的表达,以及对胶质瘤细胞增殖和迁移能力的影响及相关作用机制。[方法]采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测胶质瘤细胞与人正常胶质细胞中miR-3175的表达水平。向胶质瘤细胞株中转染miR-3175 mimics和inhibitors后,采用噻唑蓝(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法检测各组胶质瘤细胞增殖能力的变化,以Transwell实验对细胞迁移能力进行评估,流式细胞术检测细胞凋亡。使用miRTarBase和TargetScan预测软件对miR-3175的作用靶点进行预测,以双荧光素酶报告基因系统、免疫印迹法和Real-time qPCR分析miR-3175和sineoculis同源异型盒同源物5(sineoculis homeobox homologue 5,SIX5)的相互作用。通过生物信息学与免疫印迹法分析SIX5...     

C6脑胶质细胞瘤的在体实验研究

目的　建立大鼠C6脑胶质瘤模型 ,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标。方法　应用立体定向法 ,将 1%琼脂糖含 1× 10 6C6瘤细胞悬液 10 μl注入大鼠右脑尾状核并行一般观察和MRI检查。在接种后第 10、15、2 0、2 5天和自然死亡前 ,对大鼠做主动脉多聚甲醛灌注固定 ,对脑组织和肿瘤标本进行大体观察和HE染色。结果　 5 0只接种大鼠均有颅内肿瘤生长 (10 0 % ) ,远处和颅外转移率为 0 % - 4 %。结论　成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型 ,接种后大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标。     

Development of a rat C6 brain tumor model

Objective To establish rat C6 brain- tumor models and find a simple reliable index to judg e tumor volume. Methods C6 cell suspension (10 μl) containing 10 g/L agarose and 1×10［6］ cells was i njected into the right caudate nucleus of the rat brain by a stereotaxic method . After implantation, rats were observed and given MRI scans. Rats were perfus ed with paraformaldehyde trans- aorta at the 10th, 15th, 20th and 25th day and b efore natural death. All brains, lungs, spinal cords and tumors were sectioned and inspected. Tumor- containing samples were prepared histologically by hemato xylin and eosin (HE) stains. Results Fifty implanted rats had 100% yield of intracerebral growth, with distant metast asis of 0% to 4%. Conclusion A rat C6 brain- tumor model was successfully established. Rat survival time is correlated with tumor volume and may be useful as an index of tumor size .     

C6脑胶质细胞瘤的在体实验研究

目的　建立大鼠C6脑胶质瘤模型,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标.方法　应用立体定向法,将1%琼脂糖含1×106 C6瘤细胞悬液10μl 注入大鼠右脑尾状核并行一般观察和MRI检查.在接种后第10、15、20、25天和自然死亡前,对大鼠做主动脉多聚甲醛灌注固定,对脑组织和肿瘤标本进行大体观察和HE染色.结果　50只接种大鼠均有颅内肿瘤生长（100%）,远处和颅外转移率为0%-4%.结论　成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型,接种后大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标.