氟对大鼠成骨细胞纤连蛋白表达的影响

目的 观察纤连蛋白(fibronectin)在氟中毒大鼠骨组织和体外培养成骨细胞中的表达,探讨纤连蛋白在氟骨症发生机制中的作用.方法 Wistar大鼠144只,雌雄各半,体质量约120 g,按体质量将大鼠分为4组:对照组(正常食料)、加氟(F-)组(正常食料+ 100 mg/L F-)、低钙偏食组(合成食料)、低钙偏食加氟组(合成食料+ 100 mg/L F-),每组36只,在喂养4、8个月时分别处死大鼠,取股骨组织固定、石蜡包埋;采用细胞培养的方法,体外培养乳鼠颅骨成骨细胞,按不同的染氟剂量分为4组:0(对照)、1、2、4 mg/L组,分别在培养47、72 h收集颅骨成骨细胞和培养上清.体外培养乳鼠颅骨成骨细胞,按不同的染氟剂量分为4组:0(对照)、0.01、1.00、10.00 mg/L组,在染氟培养的第2天加入矿化诱导液,继续培养3周后取出玻片、酒精固定.免疫组化(IHC)法检查纤连蛋白在大鼠股骨组织中的表达;原位杂交法测定大鼠股骨组织中纤连蛋白mRNA表达;酶联免疫吸附(ELISA)法测定颅骨成骨细胞培养液中纤连蛋白含量;RT-PCR法测定成骨细胞纤连蛋白mRNA表达;0.1％茜素红染色,光镜下观察颅骨成骨细胞矿化结节形成.结果 光镜下对照组和低钙偏食组大鼠股骨组织中纤连蛋白均有阳性表达,可见到棕黄色颗粒,但量较少;加氟组和低钙加氟组骨组织中可见到大量的纤连蛋白阳性表达的棕黄色颗粒.光镜下大鼠股骨组织中成骨细胞、骨细胞和骨髓内细胞均有纤连蛋白mRNA阳性表达,对照组和低钙偏食组纤连蛋白mRNA阳性表达的红色颗粒较少,加氟组和低钙偏食加氟组纤连蛋白mRNA阳性表达的红色颗粒较多.培养48 h,成骨细胞培养上清液中纤连蛋白均增加,4 mg/L组纤连蛋白(0.108±0.042)明显高于对照组(0.081±0.010,t=0.764,P＜0.05);培养72 h,1、2、4 mg/L组纤连蛋白(0.089±0.010、0.087±0.012、0.098±0.023)明显高于对照组(0.070±0.014,t值分别为0.765、0.704、0.996,P均＜ 0.05).培养48和72 h,1、2、4 mg/L组成骨细胞纤连蛋白mRNA表达(0.61±0.06、0.77±0.07、0.77±0.07)和(1.61±0.14、2.54±0.20、2.75±0.22)均明显高于对照组[0.48±0.04(t值分别为0.111、0.182、0.182,P均＜ 0.05)和0.97±0.08(t值分别为0.093、0.109、0.108,P均＜0.05)].在1.00、10.00 mg/L组,光镜下成骨细胞中可见大量矿化结节形成.结论 纤连蛋白在氟中毒大鼠骨组织和体外培养成骨细胞中的表达均增加,染氟也促进成骨细胞形成矿化结节,提示纤连蛋白可能通过调节骨组织的矿化过程,在氟骨症发生机制中发挥作用.     

大鼠血管球囊成形术后血管局部纤连蛋白的改变

目的探讨细胞外基质在血管成形术后再狭窄中的作用。方法在大鼠胸主动脉球囊损伤模型上，应用免疫组化和原位杂交的方法，观察纤连蛋白（Ｆｎ）在损伤后不同时间点和位置的蛋白和ｍＲＮＡ的表达。结果Ｆｎ在球囊损伤后第３天开始表达，第７天进一步增加，１４天达高峰，３０天仍持续高表达，在新生内膜及近内膜的中层最为明显。结论Ｆｎ在球囊损伤后异常增加，为新生内膜形成的重要原因，可能在成形术后再狭窄形成中起重要作用     

宫颈长度联合胎儿纤连蛋白检测在早产预测中的价值

目的探讨宫颈长度联合胎儿纤连蛋白（FFN）检测预测早产的价值。方法采用阴道B超测量186例先兆早产孕妇宫颈长度,ELISA法测量其宫颈阴道分泌物中胎儿FFN水平,分析其预测妊娠结局的价值。结果宫颈长度联合胎儿FFN测定预测早产的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为98．73％、76．92％、89．66％和96．77％,其特异度、阳性预测值明显高于宫颈长度及胎儿FFN单独检测（P〈0．05）。结论宫颈长度联合胎儿FFN检测对预测早产有较高的价值。     

Smad2反义寡核苷酸对高糖培养人肾小球系膜细胞分泌纤连蛋白、层黏连蛋白的影响

用脂质体法将Smad2反义寡核苷酸瞬时转染人肾小球系膜细胞,设立正常糖组、高糖组、脂质体组、甘露醇组、转染Smad2正义寡核苷酸组及反义寡核苷酸组,ELISA法检测各组纤连蛋白和层黏连蛋白的含量.结果 显示高糖培养可使人肾小球系膜细胞分泌纤连蛋白和层黏连蛋白增加,转染Smad2反义寡核苷酸可抑制纤连蛋白和层黏连蛋白的分泌.     

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对梗死心脏纤连蛋白的调节

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体(AT1,AT2)拮抗剂对梗死心脏心肌基质金属蛋白酶(MMP)及细胞外基质纤连蛋白(fibronectin,FN)的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉建立心肌梗死模型,术前7天起分别用安慰剂、AT1受体拮抗剂缬沙坦(10mg.kg-1.d-1)、AT2受体拮抗剂PD123319(30mg.kg-1.d-1)。术后1、3、7天免疫沉淀法分别检测左心室游离壁(LVFW)、室间隔、右室壁心肌组织基质金属蛋白酶MMP-2、3、9及基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)及细胞外基质FN的表达,免疫荧光检测LVFW、室间隔、右心室心肌FN的分布。结果术后7天右心室心肌排列基本正常,室间隔心肌肥厚,LVFW心肌有不同程度的坏死、肥厚及纤维化。术后1、3、7天室间隔MMP-2、3、9蛋白表达呈逐渐增加的趋势,TIMP-1及FN表达逐渐减少,各时相点与基础值相比差异有统计学意义(P<0.01);术后1、3、7天LVFWMMP-2、3、9蛋白表达一直处于高水平,TIMP-1和FN蛋白表达处于低水平,各时相点与基础值比较差异有统计学意义(P<0.01)。FN在右心室心肌组织中表达较多,其次为室间隔和LVFW,MMP-2、3、9表达与FN表达结果相反。室间隔和LVFWMMP表达,手术+缬沙坦组低于手术组和手术+PD123319组(均P<0.01),手术组与手术+PD123319组比较差异无统计学意义。手术+缬沙坦组室间隔及LVFWFN表达高于手术组和手术+PD123319组(P<0.01),手术组与手术+PD123319组比较差异无统计学意义。手术组心肌梗死面积(51.0%±2.8%)高于手术+缬沙坦组(40.4%±2.1%,P<0.05),手术组与手术+PD123319组(49.5%±2.1%)比较,差异无统计学意义。结论血管紧张素Ⅱ受体AT1拮抗剂通过增加MMP-2、3、9的表达而降解心肌细胞外基质FN参与心肌重构的病理过程,进一步恶化心功能。     

KNN法在含纤连蛋白域蛋白质亚细胞定位中的应用

目的探讨K最近邻（KNN）法在含纤连蛋白（FN）域蛋白质亚细胞定位中的应用价值。方法选取含FN域蛋白质80个（40个细胞外蛋白质和40个细胞内蛋白质）,采用KNN法进行蛋白质亚细胞定位,并采用jack—knife检验法和5维交叉验证法检验样本的定位的准确率。结果KNN法定位细胞内蛋白36个,细胞外蛋白35个。jackknife法检验KNN法蛋白质定位准确率为88．75％,5维交叉法验证其定位准确率为82．5％。结论利用KNN法可较准确的预测含FN域蛋白质的亚细胞位置。     

动脉粥样硬化程度与患者血清中趋化素和纤连蛋白EDA水平的相关性

目的 分析动脉粥样硬化（AS）程度与患者血清中趋化素（chemerin）和纤连蛋白EDA片段（EDA-FN）水平的相关性。 方法 102例颈AS患者根据病症的严重程度分为轻度AS组（轻度硬化组,颈内动脉收缩期峰值流速在125~230 cm/s,动脉内径缩小<30%）和重度AS组（重度硬化组,颈内动脉收缩期峰值流速>230 cm/s,动脉内径缩小>70%）,采用ELISA方法测定患者血清中趋化素和EDA-FN的含量,并收集患者的相关临床资料。 结果 重度硬化组患者血清趋化素含量和EDA-FN水平显著高于轻度硬化组（P<0.05,或P<0.01）,AS程度与血清趋化素含量呈正相关（r=0.212,P<0.01）,与EDA-FN水平呈正相关（r=0.283,P<0.01）。 结论 AS程度与血清中趋化素和EDA-FN水平有相关性。     

近距离小剂量放疗对血管平滑肌细胞纤黏连蛋白及弹性蛋白基因表达的影响

目的 :探讨近距离小剂量放疗对血管平滑肌细胞 (VSMC)纤维黏连蛋白 (FN)和弹性蛋白基因表达的影响及其机制。方法 :以 7、14、2 8Gy60 Co射线辐射培养的大鼠主动脉VSMC弹性蛋白及FNmRNA表达的影响 ,无辐射为对照组。结果 :7Gy放疗组对VSMC弹性蛋白及FNmRNA表达与对照组比较差异无统计学意义 ,而 14、2 8Gy放疗组FNmRNA分别为0 .72± 0 .12和 0 .4 9± 0 .0 9,与对照组 (0 .95± 0 .0 7)比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。 14和 2 8Gy辐射后细胞弹性蛋白mRNA水平分别为1.93± 0 .2 5及 2 .16± 0 .2 2 ,与对照组 (1.0 7± 0 .11)比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :14、2 8Gy60 Co射线辐射可以抑制FNmRNA及加强弹性蛋白mRNA的表达。     

吡咯烷类对糖基化终产物诱导的老年大鼠内皮细胞纤连蛋白mRNA表达的影响

目的观察抗氧化剂吡咯二硫代氨基甲酸乙酯(PDTC)对糖基化终末产物(AGEs)诱导的老年大鼠内皮细胞核转录因子(NF-κB)活性、活化蛋白(AP-1)组成成分c-jun和纤维连接蛋白(Fn)mRNA表达的影响。方法取24月龄的SD大鼠主动脉内皮细胞进行原代培养,再给予不同剂量AGEs及PDTC继续培养并分为5组,采用荧光免疫化学法检测细胞NF-κB活性和RT-PCR检测细胞c-jun和Fn mRNA的表达。结果不同剂量AGEs组中,NF-κB活性呈浓度依赖性上升, AGEs 25 mg／L组和50 mg／L组分别为(0．25±0．02)％和(0．42±0．03)％,与未给AGEs对照组(0．04±0．01)％比较,差异有统计学意义(P<0．05);AGEs还上调了Fn mRNA和c-jun mRNA的表达(P<0．05)。给予PDTC干预后,抑制了AGEs诱导的NF-κB激活,干预后AGEs 25 mg／L组和50 mg／L组NF-κB分别为(0．21±0．01)％和(0．22±0．01)％,与干预前比较,差异有统计学意义(P< 0．05);PDTC干预后,AGEs诱导的c-jun和Fn mRNA的表达均有所下调。结论抗氧化剂PDTC通过抑制NF-κB和c-jun途径,下调了AGEs诱导的血管基底膜Fn的表达。     

压力负荷下血管紧张素Ⅱ对心肌基质金属蛋白酶和纤连蛋白的影响

目的探讨压力负荷下心肌组织基质金属蛋白酶家族(MMPs)MMP-2、3、9与其抑制物-1(TIMP-1)的变化,及血管紧张素受体拮抗剂对MMP-2、3、9、TIMP-1及细胞外基质纤连蛋白(fibronectin,FN)的影响.方法腹主动脉缩窄法建立大鼠超压力负荷模型,实验动物分为手术组(n=8);缬沙坦(valsartan)组(n=8):手术组 缬沙坦(1 mg/kg·d);PD123319组(n=8):手术 PD123319(30 mg/kg·d)组;假手术组(n=8).免疫沉淀法检测心肌组织MMP-2、3、9及TIMP-1,免疫荧光检测FN分布.结果大鼠术后14 d,缬沙坦组血浆AngⅡ浓度显著高于假手术组及PD123319组(P＜0.05),缬沙坦组心肌AngⅡ浓度则低于假手术组及PD123319组(P＜0.05).手术组MMP-2、3、9蛋白表达显著高于假手术组(P＜0.01),手术组TIMP-1、FN蛋白表达显著低于假手术组(P＜0.01);缬沙坦组MMP-2、3、9显著低于手术组及PD123319组(P＜0.05),缬沙坦组TIMP-1、FN显著高于手术组及PD123319组(P＜0.05).MMP-2、3、9、TIMP-1及FN蛋白表达在手术组与PD123319组间差异没有显著性(P＞0.05).结论超压力负荷下,心肌组织MMP-2、3、9表达量的增高,细胞外基质FN,参与心肌重构的病理过程,主要通过AT1起作用.     

压力负荷下血管紧张素Ⅱ对心肌基质金属蛋白酶和纤连蛋白的影响

目的探讨压力负荷下心肌组织基质金属蛋白酶家族(MMPs)MMP-2、3、9与其抑制物-1(TIMP-1)的变化,及血管紧张素受体拮抗剂对MMP-2、3、9、TIMP-1及细胞外基质纤连蛋白(fibronectin,FN)的影响。方法腹主动脉缩窄法建立大鼠超压力负荷模型,实验动物分为手术组(n=8);缬沙坦(val-sartan)组(n=8):手术组 缬沙坦(1 mg/kg.d);PD123319组(n=8):手术 PD123319(30 mg/kg.d)组;假手术组(n=8)。免疫沉淀法检测心肌组织MMP-2、3、9及TIMP-1,免疫荧光检测FN分布。结果大鼠术后14 d,缬沙坦组血浆AngⅡ浓度显著高于假手术组及PD123319组(P<0.05),缬沙坦组心肌AngⅡ浓度则低于假手术组及PD123319组(P<0.05)。手术组MMP-2、3、9蛋白表达显著高于假手术组(P<0.01),手术组TIMP-1、FN蛋白表达显著低于假手术组(P<0.01);缬沙坦组MMP-2、3、9显著低于手术组及PD123319组(P<0.05),缬沙坦组TIMP-1、FN显著高于手术组及PD123319组(P<0.05)。MMP-2、3、9、TIMP-1及FN蛋白表达在手术组与PD123319组间差异没有显著性(P>0.05)。结论超压力负荷下,心肌组织MMP-2、3、9表达量的增高,细胞外基质FN,参与心肌重构的病理过程,主要通过AT1起作用。     

纤连蛋白对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝星状细胞凋亡的影响

目的研究纤连蛋白（FN）对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导肝星状细胞fHSC）凋亡的影响及调控机制。方法MTr比色法、流式细胞术检测加入FN时,外源性TRAIL对HSC-T6细胞增殖和诱导细胞凋亡的影响;采用WesternBlot检测粘着斑激酶（FAK）、磷酸化粘着斑激酶（pFAK）、Bax的表达。结果TRAIL可以抑制HSC-T6细胞增殖。可以诱导HSC-T6细胞凋亡,而FN的存在可以使TRAIL诱导的HSC—T6细胞凋亡明显减少（P〈0．05）,WesternBlot分析显示TRAIL诱导I-ISC-T6细胞凋亡时加入FN,细胞浆pFAK表达上调而线粒体Bax表达下降。结论FN可以使外源性TRAIL诱导的HSC-T6细胞凋亡减,扮．棚制可能与FN但伸FAK磷酪仙．pFAK表达上调并减少线粒体Bax表达有关。     

软骨来源的间质干细胞移植治疗心肌梗死的初步实验研究

目的:研究人类软骨来源的间质干细胞(CDSC)移植对大鼠心肌梗死后心功能的影响。方法:从人类流产胚胎股骨头和膝关节软骨中分离CDSC并进行流式鉴定。制备大鼠心肌梗死模型,将Hoechst标记的CDSC植入大鼠心肌梗死区(CDSC移植组)。每只大鼠接受50μl含5×107个细胞的悬液注射(n=20),对照组注射等量无血清的细胞培养液(n=20)。移植后4周行心脏超声和病理学检查,及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测。结果:CDSC表面标志CD44、CDl47、CD90为阳性,CD34、CD45、HLA-DR为阴性。CDSC移植后4周大鼠左心室射血分数、短轴缩短率、后壁增厚率及舒张末期和收缩末期内径均明显优于对照组(P<0.05)。移植细胞抗横纹肌肌动蛋白、肌钙蛋白-I染色阴性,而肌细胞结合蛋白和平滑肌肌动蛋白染色阳性。CDSC移植组大鼠心肌梗死区毛细血管密度高于对照组(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示CDSC移植组大鼠心肌梗死区Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶组织抑制因子、转化生长因子β-1和血管内皮生长因子等基因转录水平均高于对照组(P<0.05)。结论:CDSC移植到梗死心肌后可以显著改善心功能,主要机制可能在于减少梗死区胶原降解,促进血管新生,延缓左心室重构。     

溶组织内阿米巴也存在哺乳动物样的β1整合素样纤连蛋白受体装配的信号复合物

溶组织内阿米巴是人阿米巴病的病原体 ,阿米巴病的一个最显著特点是滋养体入侵时引起组织的迅速破坏和坏死 ,入侵时 ,滋养体作用并降解细胞外基质蛋白和内皮细胞。目前已知滋养体能够与纤连蛋白 (FN)作用 ,通过肌动蛋白的多聚化 ,诱导灶性黏附 (focaladhesion)。到目前为止 ,在各种细胞 ,所有的FN受体都被认为是整合素 ,而且滋养体是通过其膜分子 β1整合素样纤连蛋白受体 (β1EhFNR)与FN发生作用 ,又 β1EhFNR是一Mr为 14 0 0 0 0蛋白质 ,与哺乳动物的β 整合素有免疫学交叉反应 ,那么 ,在滋养体是否也存在类似于哺乳动物细胞内由整…     

猪链球菌2型四川人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白基因的克隆和序列分析

目的对2005年猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2，S．suis 2）四川资阳人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白（FBPS）基因进行克隆和序列分析。方法以ZYH18的基因组DNA为模板，采用PCR方法扩增出纤连蛋白／血纤蛋白原结合蛋白基因片段，克隆于pMD-T18栽体，构建成载体pMD-T—fbps，转化到宿主菌TG1中，进行序列测定（GenBank登录号为DQ345444）。测序结果与实验室保存的其它7株猪链球菌2型临床分离菌株测序结果及GenBank提交序列AF438158进行编码区基因的同源性比对。结果成功克隆了实验室保存的分离于不同时间和地点的，包括ZYH18在内的8株S．suis2临床分离菌株的．朋加基因，并对其编码区基因进行了同源性比对。结论实验室保存的8株菌的FBPS编码区基因同源性高达100％，并不因分离时间和地点的不同而不同；与GenBank提交序列AF438158同源性为99％，存在两个氨基酸的差异。     

卡氏肺孢子虫的附着使培养的肺细胞上纤连蛋白-结合的整联蛋白的表达增强

卡氏肺孢子虫是一种细胞外寄生虫,是免疫抑制宿主特别是艾滋病患者主要的致死病原。肺孢子虫需附着于肺泡上皮细胞上生长和繁殖,易与Ⅰ型肺泡上皮细胞结合。以往的研究证实细胞外基质蛋白的纤连蛋白Fn在肺孢子虫与宿主细胞附着过程中的介质作用。Fn特异地与肺孢子虫表面的糖蛋白gp120连接,gp120是一种110—120kDa高     

瘦素、纤连蛋白、基质金属蛋白酶-9对人绒毛细胞滋养细胞侵袭性的影响

目的探讨瘦素、纤连蛋白（FN）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）对人绒毛细胞滋养细胞侵袭性的影响。方法取孕6-10周人工流产妊娠绒毛,分离、培养细胞滋养细胞（CTB）并经光镜、免疫细胞化学鉴定;应用体外培养侵袭模型检测瘦素、FN、MMP-9及瘦素＋FN对CTB侵袭能力的影响。结果瘦素、FN、MMP-9及瘦素＋FN作用后,浸润穿过基底膜的CTB数均显著多于对照组（P均〈0．01）,尤其是瘦素＋FN。结论瘦素、FN、MMP-9能增强CTB的侵袭能力;瘦素与FN有协同作用。     

玻连蛋白与动脉粥样硬化关系的研究进展

动脉粥样硬化(AS)过程是一个以动脉壁脂质蓄积为特征,多种细胞(包括单核/巨噬细胞、淋巴细胞、内皮细胞、平滑肌细胞以及血小板)参与的复杂病变过程。玻连蛋白是一种具有多种生理功能的糖蛋白,能够通过与特异性的整合素和尿激酶受体结合,促使平滑肌细胞黏附、迁移,以及与纤溶酶原激活物抑制因子-1和血小板膜受体结合。尽管目前还有争论,但是玻连蛋白作为一个AS的重要因素,已经受到了越来越多的关注。