同种异体角膜缘移植术后免疫排斥反应的实验研究

目前导致异体角膜缘移植失败的主要原因是术后免疫排斥反应造成的干细胞永久性破坏。本研究通过建立大鼠同种异体角膜缘移植模型，分析了同种异体角膜缘移植术后免疫排斥反应的特征性表现，并初步探讨了其免疫排斥反应的机制。     

兔异体角膜缘移植的实验研究

目的：观察异体角膜缘移植反应的临床表现，初步探讨角膜缘移植反应的免疫机制。方法：20只健康白兔随机分为三组，分别行角膜缘环形切除＋角膜上皮剥离术（n=6），自体角膜缘移植术（n=7），异体角膜缘移植术(n＝7）；术后以1％荧光素钠染色观察角膜上皮化，移植排斥反应通过移植眼的临床表现和病理检查加以评估。结果：异体角膜缘移植术后早期可见角膜上皮化，术后10－14天（平均11．8天）发生角膜上皮炎症反应，反应可分为四个阶段：初发期、急性期、排斥期和慢性期；病理检查显示炎症反应的发生及其强度。结论：本试验模型中，移植反应的各个时期有明显的特征，对各期移植反应的说明将使我们在临床上更容易、准确的判断移植反应的发生及其强度。     

不同移植手术治疗角膜缘干细胞缺损的实验研究

目的探讨以人羊膜为载体培养的角膜缘干细胞，自体及异体移植治疗全角膜缘干细胞缺损。方法制作兔眼角膜缘干细胞完全缺损3个月的模型。实验动物随机分为自体移植组和异体移植组，前者取对侧眼角膜缘组织，后者取异体兔眼角膜缘组织，均以去除上皮细胞的羊膜基底膜为载体，培养12d后行角膜缘干细胞羊膜移植术。术后观察3个月，以角膜上皮染色、角膜浑浊和新生血管3项指标进行临床疗效评定，通过病理检查评估术后角膜上皮修复情况，印迹细胞学检查移植前后角膜上皮的细胞表型。结果体外培养的兔角膜缘干细胞可在羊膜上粘附生长并增生，体外培养12d可形成复层。自体移植组和部分异体移植组术后角膜上皮逐渐愈合，透明度提高，基质细胞浸润减轻，新生血管减退或消失。印迹细胞学检查显示：移植前角膜上皮细胞PAS阳性，而移植后转为阴性；组织病理学显示：移植前角膜上皮大部分缺损，移植后呈现角膜上皮结构。部分异体移植组术后出现了免疫排斥反应。结论兔自体角膜缘干细胞羊膜移植术可重建眼表；免疫排斥反应仍是异体角膜缘干细胞羊膜移植术失败的主要原因。     

大鼠异体角膜缘移植排斥的实验研究

目的通过建立大鼠角膜缘移植模型,对比观察同种异体角膜缘移植和自体角膜缘移植术后的表现及组织病理特点。方法32只SD大鼠随机分成两组,分别接受来自Wistar大鼠和自体对侧眼的角膜缘移植术。移植术后观察30d。依据裂隙灯下植片水肿、炎症反应、新生血管增加的情况,判断植片排斥反应的发生。PAS染色观察组织病理特点。结果根据眼表评分,异体角膜缘移植组中13只(81·3%)SD大鼠平均术后6d发生了移植排斥反应;自体移植组无一例发生排斥。两者比较具有统计学意义(P<0·01)。大鼠异体角膜缘移植排斥的主要表现为植片水肿、炎症、新生血管生成等。组织病理显示,在异体移植组有大量的淋巴细胞浸润;而自体角膜缘移植组仅有极少量炎症细胞浸润。结论通过尝试建立以大鼠为研究对象的角膜缘移植模型,观察异体角膜缘移植排斥反应的表现和组织病理特点,可以为异体角膜缘移植免疫排斥的研究提供新的平台。     

角膜缘组织移植治疗重度眼前段化学伤

目的：探讨角膜缘移植治疗眼前段化学伤的手术时机，手术技巧，方法：14例（16眼）眼前段化学伤分别施行自体或同种异体角膜缘移植。结果：术后2周，12眼角膜上皮形成，4眼发生排斥反应，随访12－18月，13眼眼表稳定，视力提高。结论：角膜缘组织移植可恢复角膜干细胞功能，重建健康眼表。     

高危患者穿透角膜移植联合环状角膜缘移植术

目的 评价高危患者行穿透性联合环状角膜缘角膜移植术的远期效果。方法 18例高危患者行穿透性联合环状角膜缘角膜移植术，术后随访10－31月，平均19.56月。观察术后视力变化及术后不同阶段的排斥反应发生率。结果 术后视力有不同程度的提高，排斥例数术后3月内3例（16.67%)，术后6月4例（22.22%)，术后12月6例（33.33%)，术后31月8例（44.44%)。结论 对部分高危患者进行穿透角膜移植联合环状角膜缘移植可降低术后排斥率，获得稳定的眼表面。     

异体角膜缘上皮细胞培养后移植的实验研究

目的观察含培养的角膜缘上皮细胞的羊膜片移植到角膜缘干细胞损伤的异体兔眼角膜上的效果。方法把羊膜为载体组织块培养的角膜缘上皮细胞移植到角膜缘干细胞损伤的异体兔眼角膜上,术后观察角膜混浊度、角膜新生血管、角膜上皮等情况,定期兔进行病理组织学检查。结果角膜缘上皮细胞在羊膜上培养16d形成3～4层,用含有培养的异体角膜上皮细胞的羊膜片移植的12只兔眼,术后第5天,损伤的角膜表面全部上皮化,第16天开始,12只兔眼逐渐出现排斥反应。结论含培养的角膜缘上皮细胞羊膜片异体移植术后早期角膜全部上皮化,晚期则出现排斥反应。     

羊膜及角膜缘上皮移植术治疗复发性翼状胬肉

目的 探讨羊膜移植联合角膜缘上皮移植术治疗复发性翼状胬肉的疗效。方法 对24例（28眼）复发性翼状胬肉患者一期实施羊膜移植联合自体角膜缘上皮移植术。结果 术后平均随访9.4月表明,羊膜植片无一例排斥反应,翼状胬肉有一例复发。结论 羊膜移植联合角膜缘上皮移植术治疗复发性翼状胬肉疗效显著。     

新鲜羊膜联合带活性角膜缘的全板层角膜移植治疗早期严重眼烧伤

目的：探讨新鲜羊膜联合带活性角膜缘的全板层角膜移植治疗早期严重眼烧伤疗效。方法：对早期严重眼烧伤14例15眼施行新鲜羊膜联合带活性角膜缘的全板层角膜移植术,术后观察移植物贴附、生长及眼表情况,监测重建的穹窿深度,了解是否有睑球粘连的发生。结果：移植的羊膜、角膜缘及角膜全部成活,重建的眼表面很快上皮化并保持基本稳定。除6眼因白内障及角膜持续水肿外,余视力均有提高。4眼发生睑球粘连,余形成足够的穹窿深度,眼球运动基本正常。术后3眼移植角膜缘发生排斥反应,局部用药控制。结论：治疗早期严重眼烧伤,新鲜羊膜移植能够有效防止睑球粘连,异体角膜缘及全板层角膜移植可恢复角膜结构并提供足够的干细胞,获得稳定眼表面。积极防治移植角膜缘排斥反应十分重要。     

羊膜联合自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉

目的探讨羊膜联合自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉的效果。方法采用羊膜联合自体角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉56例(61眼)，随访平均12月。结果56例(61眼)术后均无复发，移植片存活，未见排斥反应发生，治愈率达100％。结论应用羊膜联合自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉，不仅取材方便、安全，而且可获得根治性治愈的理想效果，值得临床推广。     

间充质干细胞在角膜损伤修复和角膜移植中的应用

严重损伤后角膜的修复及角膜移植后的抗免疫排斥反应是角膜疾病治疗中的重点和难点.间充质干细胞可在特定环境下诱导分化为角膜上皮细胞、角膜基质细胞等细胞类型,或通过旁分泌作用抑制炎性反应及新生血管的生成,进而保护损伤组织,促进角膜修复.此外,间充质干细胞还具有抗炎和调节免疫的特性,使其在抗角膜移植排斥反应中发挥作用.     

人牙髓干细胞在角膜重建中的应用研究进展

角膜重建是对角膜组织遭受各种外伤、炎症、退行性疾病的影响后,进行角膜结构完整性及角膜功能的手术重建修复.角膜疾病在世界范围内造成了上百万人的视力损害甚至失明.当前角膜移植是角膜盲的主要治疗措施,然而供体角膜组织的短缺是一个世界性的难题,治疗后因为移植物受到宿主免疫排斥而造成的治疗失败也不罕见.如今随着组织培养和生物工程技术的进步,自体干细胞移植在再生医学中的应用前景越来越被人重视,它将有可能取代异体组织移植成为再生医学的重要临床治疗手段.人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)是一类从人第三磨牙中分离出的成人干细胞,它和角膜细胞共同来源于胚胎外胚层的脑神经鞘.众多研究结果显示牙髓干细胞拥有向角膜细胞分化的潜能,并且不会引起受体的免疫排斥.这些发现显示了牙髓干细胞在眼表重建的相关临床应用中的潜力.本文就hDPSCs的特性及在角膜重建中的研究现状进行综述.     

利用组织工程方法治疗角膜缘干细胞缺失的相关研究进展

角膜缘干细胞在角膜上皮更新和创伤愈合中起重要作用,角膜缘干细胞缺失可导致各种严重眼表面疾患。因为治疗上存在自体移植的健眼损伤问题,同种异体移植的排斥反应以及供体不足等问题,近年来随着对干细胞研究的深入以及组织工程学的发展,有利于克服和解决上述问题,为角膜缘干细胞缺乏的治疗带来了曙光。本文通过近年来组织工程治疗角膜缘干细胞缺失的相关研究的回顾,归纳了种子细胞和支架材料选择两方面的研究进展,以探索该领域存在的问题和未来的研究方向。（国际眼科纵览, 2017,  41:   346-351）     

诱导多能干细胞分化为视网膜神经细胞和色素上皮细胞的研究现状

2006年,Yamanaka等将4个转录因子导入已分化的小鼠皮肤成纤维细胞,进而获得了类似于胚胎干细胞的多能干细胞,称之为诱导多能干(iPs)细胞.iPS细胞具有自我更新和分化的全能性,利用iPS细胞技术能够获得患者或者疾痫特异的多能性干细胞,这样可以避免移植过程中的免疫排斥问题,也避开了人类胚胎干细胞研究所带来的伦理问题.这些特点,使iPS细胞在损伤修复和组织再生的领域备受关注.眼科学者对iPS细胞的深入研究将会拓展其在眼科应用的前景,为临床眼科疾病的治疗提供新的思路和方法.     

Corneal allograft rejection: risk factors, diagnosis, prevention, and treatment

Recent advances in corneal graft technology, including donor tissue retrieval, storage and surgical techniques, have greatly improved the clinical outcome of corneal grafts. Despite these advances, immune mediated corneal graft rejection remains the single most important cause of corneal graft failure. Several host factors have been identified as conferring a "high risk" status to the host. These include: more than two quadrant vascularisation, with associated lymphatics, which augment the afferent and efferent arc of the immune response; herpes simplex keratitis; uveitis; silicone oil keratopathy; previous failed (rejected) grafts; "hot eyes"; young recipient age; and multiple surgical procedures at the time of grafting. Large grafts, by virtue of being closer to the host limbus, with its complement of vessels and antigen-presenting Langerhans cells, also are more susceptible to rejection. The diagnosis of graft rejection is entirely clinical and in its early stages the clinical signs could be subtle. Graft rejection is largely mediated by the major histocompatibility antigens, minor antigens and perhaps blood group ABO antigens and some cornea-specific antigens. Just as rejection is mediated by active immune mediated events, the lack of rejection (tolerance) is also sustained by active immune regulatory mechanisms. The anterior chamber associated immune deviation (ACAID) and probably, conjunctiva associated lymphoid tissue (CALT) induced mucosal tolerance, besides others, play an important role. Although graft rejection can lead to graft failure, most rejections can be readily controlled if appropriate management is commenced at the proper time. Topical steroids are the mainstay of graft rejection management. In the high-risk situations however, systemic steroids, and other immunosuppressive drugs such as cyclosporin and tacrolimus (FK506) are of proven benefit, both for treatment and prevention of rejection.     

Cell therapy for retinitis pigmentosa: From rats to pigs

Retinitis pigmentosa (RP) is a leading cause of blindness worldwide and lacks effective clinical treatment. Stem cell-based therapy offers a novel experimental therapeutic approach, based on the strategy that transplanted progenitor cells can replace or rescue damaged photoreceptor cells. However, many factors remain to be determined, for example, what is the optimal time to choose for targeting the host tissue during the progression of the degeneration, what the characteristics and potential capacities in different stem cells, do stem cells differentiate into functional daughter cells, and to what degree can host retinal function be restored? We have used Royal College of Surgeons rats and light-induced retinal degeneration minipigs as animal models of retinitis pigmentosa to study the effectiveness of cell transplant therapies and the functional capacity of the host retina. Stem cells from rat retina and bone marrow, neonatal pig, and human fetal retina have been investigated to find the proper donor cells. The dedifferentiation and then redifferentiation of Müller cells following retinal stem cell transplantation may contribute to host visual function and presents a promising line of research.     

Acute hydrops in keratoconus masquerading as acute corneal transplant rejection

PURPOSE: To document 2 cases that developed acute hydrops corneae within the host tissue after corneal transplantation. Subsequent extension across the transplant-host interface led to edema of the transplanted tissue, with consequent misdiagnosis and treatment of acute transplant rejection. METHODS: The patients attended the Anterior Segment Service at Moorfields Eye Hospital, London, UK. RESULTS: Both patients had a reduction in vision, ocular discomfort, and stromal edema of the transplanted button and adjacent host cornea. No break in the Descemet membrane was noted in either case. CONCLUSION: It is important to differentiate hydrops of the host cornea from acute transplant rejection. This distinction will allow the judicious use of steroids and may allay patient anxiety about possible rejection.     

Differential diagnosis and therapy of graft rejection after keratoplasty

Allograft rejection is the leading cause of corneal graft failure after perforating keratoplasty. Clinically, graft rejection may present as acute changes in corneal host tissue. All three corneal layers, epithelium, stroma and endothelium, can be affected separately or manifest combinations of rejection. Differentiation from other postoperative morphological changes following corneal transplantation can prove to be difficult, but is critical in treatment. This article is intended to provide a review on differential diagnoses and current therapeutic measures.     

角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉疗效观察

目的 观察和分析自体角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉的临床效果.方法 对58例65眼翼状胬肉患者进行翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植术治疗,观察手术后炎症反应和翼状胬肉复发情况.结果 对翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术后58例65眼病例观察和随访3-12个月,63眼无复发,治愈率96.92％,2眼复发,复发率3.08％.结论 翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植术式取材方便、操作简单,手术后没有排斥反应,可以重建和修复角膜缘上皮组织,增加角膜缘干细胞数量和功能,起到重建和修复眼表完整性的作用,阻滞结膜上皮纤维组织异常增生和新生血管生长,达到了治愈翼状胬肉,减少复发的良好效果.     

体外构建组织工程角膜的研究进展

角膜移植是目前治疗角膜盲最有效的方法,但角膜供体材料不足及角膜移植术后的免疫排斥反应限制了角膜移植的临床应用.构建具有良好生物相容性和正常生物学功能的组织工程角膜替代物是解决当前角膜供体不足最为有效的方法.近些年来,随着生物材料、细胞培养及组织工程技术的发展,组织工程角膜在支架材料、种子细胞及组织的三维构建等方面都取得了较大进展,部分组织工程产品及技术也已经应用于临床.人们有望通过组织工程技术构建出具有良好机械强度、透光性及生物相容性的组织工程角膜,真正解决临床上角膜供体缺乏及移植术后免疫排斥等问题.羊膜、脱细胞猪角膜基质、胶原、丝素蛋白及壳聚糖等是目前较常用的支架材料.组织工程角膜较常用的种子细胞主要有永生化和原代培养的角膜细胞、胚胎干细胞及成体多能干细胞.本文就组织工程角膜的支架材料、种子细胞及三维构建进行综述.