产ESBLs大肠埃希菌随机扩增多态性分析

目的 对产ESBLs菌的耐药现状进行分析研究,对耐药菌株进行基因分型流行病学研究.方法 对临床分离的50株大肠埃希茵根据CLSI标准进行初筛:和确证实验,对产ESBLs菌运用随机扩增多态性分析(RAPD)进行相似性分析.结果 本院产ESBLs大肠埃希菌检出率为22%,氨苄西林抗生素抗性达到80%,GC含量为60%的引物适用于大肠埃希茵的随机扩增分析,11株产ESBLs菌运用RAPD技术可分为10种基因型,其中相同基因型别的2株菌来自同一科室.结论 RAPD技术运用于产ESBLs菌的相似性分型具有经济、快速、可靠的特点.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌肺炎临床及基因型分析

目的了解产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药情况和基因型,探讨产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌医院获得性肺炎（HAP）的危险因素。方法对140例大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌HAP患者（其中产ESBLs菌者88例为阳性组,非产ESBLs菌者52例为阴性组）细菌耐药情况进行分析。通过病例对照研究和多因素Logistic回归分析产ESBLs细菌HAP的危险因素。对保留的53株产ESBLs菌株以随机扩增多态性DNA（RAPD）分型法进行基因分型。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌耐药率明显高于非产ESBLs菌。Logistic多因素回归分析结果表明,入住ICU天数延长、使用三/四代头孢菌素是独立的危险因素。通过RAPD分型,37株产ESBLs大肠埃希菌分为27型,16株产ESBLs肺炎克雷伯菌分为13型。结论入住ICU时间、三/四代头孢菌素使用是产ESBLs细菌HAP的主要危险因素;RAPD是从分子水平对耐药细菌进行流行病学研究的一种经济、快速、可靠的基因分型方法。     

多重耐药大肠埃希菌基因分型及其与耐药表型的关系

目的分析福州地区临床分离的多重耐药大肠埃希菌的基因型及其与细菌耐药表型的关系。方法收集临床分离的多重耐药大肠埃希菌88株,采用K—B法进行药敏试验。多重PCR法进行基因分型。结果多重PCR法可将大肠埃希菌分为4个基因型,其中检出D型42株,B2型17株,A型17株,B,型12株。4组基因型对阿米卡星、头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟和妥布霉素的耐药率差别有统计学意义（P〈O．05）。结论多重耐药大肠埃希菌对多种抗生素具有很高的耐药性。基因分型以致病性较强的B2型与D型为主,应采取相应措施预防院内感染。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药机制研究

目的研究临床分离产ESBLs大肠埃希菌的耐药机制和分子流行病学情况。方法PCR检测大肠埃希菌的I类整合酶、插入序列共同区(ISCR/orf513)、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因;以肠杆菌科间的重复序列(ERIC)为引物进行基因扩增,SPSS13.0分析其遗传多态性。结果102株产ESBLs的大肠埃希菌中,I类整合酶阳性菌有59株(57.8%),orf513阳性菌有6株(5.9%),ESBLs中的TEM型有91株(89.2%),SHV型有0株,CTX-M型有35株(34.3%)。根据指纹图谱,可以把102株大肠埃希菌基因型分为82种,经SPSS系统聚类分析,可归为17个大类。结论产ESBLs大肠埃希菌的整合酶阳性率较高;整合子和ISCR可以共存;ERIC-PCR是一种效果较好的基因分型方法。     

儿童患者中检出产ESBLs大肠埃希菌的耐药性和基因分型

目的了解本地区儿童患者临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药基因型别和耐药性的变化情况。方法收集自儿童患者分离鉴定的大肠埃希菌株1327株，通过K-B法作药敏试验，采用美国NCCLS1999年推荐的抑制剂增强纸片法确认产ESBLs株，并对ESBLs进行初步基因分型。结果检出产ESBLs菌株702株，检出率为52．9％，产ESBLs大肠埃希菌对青霉素类、氨曲南及头孢菌素类抗生素耐药率为55．5％。95．0％；PCR初步分型结果，单独携带TEM型基因的占56．7％，单独携带SHV型基因的占15．0％，携带两种基因的占25．8％。结论产ESBLs大肠埃希菌检出率逐年上升，具有多重耐药的特点；产ESBLs大肠埃希菌主要携带TEM型和SHV型β-内酰胺酶基因，其中绝大部分产TEM型β-内酰胺酶。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的基因型分型及耐药分析

[目的]了解大连市中心医院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌耐药基因型及耐药情况。[方法]收集该院2005年11月-2006年2月连续不重复产ESBLs大肠埃希菌40株,采用美国国家临床实验室标准化委员会推荐的表型确认方法进行筛选。在此基础上,分别用针对TEM、SHV、CTX-M-Ⅰ、CTX-M-Ⅱ、CTX-M-Ⅲ、CTX-M-Ⅳ型β-内酰胺酶基因的六对特异性引物对每株细菌进行聚合酶链反应（PCR）,毛细管电泳方法检测所有产ESBLs大肠埃希菌的TEM、SHV、CTX-M基因。应用K-B纸片扩散法检测产ESBLs大肠埃希菌对临床常用抗生素的耐药性。[结果]毛细管电泳结果显示,40株产ESBLs大肠埃希菌中,仅携带一种基因型的分别为SHV型1株（2.50%）,CTX-M-Ⅰ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅱ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅲ型2株（5.00%）,CTX-M-Ⅳ型4株（10.00%）。有18株（46.15%）同时携带两种或两种以上基因型,且多为CTX-M型与TEM型或SHV型共同存在;药物敏感试验结果显示,产ESBLs大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素均表现出较高的耐药性,对碳青霉烯类药物（亚胺培南和美洛培南）的耐药率最低。[结论]该院产ESBLs大肠埃希菌近期流行的主要基因型别为CTX-M型,而且多基因携带情况常见;碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物。     

海南地区产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌基因型研究

目的 了解海南地区产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌基因型特点.方法 收集来自海南地区8所医院2009年度不重复临床分离的大肠埃希菌540株,分别采用纸片扩散法和三维试验进行表型筛选和AmpC酶检测,用接合试验证实酶基因型的转移性,通过PCR检测及序列分析进行质粒AmpC酶基因型确定,用E-Test法对产质粒AmpC酶株进行MIC测定.结果 540株大肠埃希菌中,头孢西丁抑菌环直径≤17mm的占22.8%(123/540),除五指山市菌株全部对头孢西丁敏感外,其他医院均有对头孢西丁的耐药株.酶提取物三维试验检测阳性的占1.90%(10/540),以PCR方法 对10株三维试验阳性大肠埃希菌进行基因检测,结果 6株在约462 bp处扩增出条带,经测序和比对结果 证实为CMY-2型质粒AmpC酶.10株产AmpC酶大肠埃希菌接合试验有2株接合阳性,接合子均扩增出CMY-2型条带.药敏结果 显示6株产质粒AmpC酶大肠埃希菌对3代头孢菌素、氨曲南和含酶抑制剂的敏感性极低,对亚胺培南和美罗培南均敏感.结论 海南地区存在产质粒介导的CMY-2型AmpC酶大肠埃希菌,药敏结果 显示对3代头孢菌素耐药率极高,但对亚胺培南和美罗培南均敏感.     

多重PCR检测临床产ESBLs大肠埃希菌的耐药基因型研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药性、产ESBLs的阳性率及耐药基因之间的关系。方法采用Kirby-Bauer(K-B)琼脂扩散法检测120株临床分离的大肠埃希菌对18种抗生素的耐药性,用酶抑制剂增强实验纸片法检测产ESBLs菌株,运用多重PCR技术检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果120株大肠埃希菌产ESBLs的有51株,阳性率为42.5%。120株大肠埃希菌对亚胺培南全部敏感,产ESBLs的大肠埃希菌对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等头孢类抗菌药物的耐药率高达100%;51株产ESBLs菌株其中46株扩增到CTX-M型耐药基因,44株扩增到TEM型基因,2株扩增到SHV基因,1株OXA型基因,未检出PER和VEB型。结论大肠埃希菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青酶烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物;产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型别为CTX-M型和TEM型。     

大肠埃希菌质粒型AmpC酶基因的检测分析

目的 调查大肠埃希菌质粒型Ampc酶基因的存在状况。方法 采用MH药敏平板对40株临床分离的大肠埃希菌进行抗菌药物敏感试验和ESBLs纸片法确诊，PcR方法检测DHA和ACT-1型Ampc酶基因。结果 40株大肠埃希菌呈多重耐药，20株ESBLs阳性菌AmpCM基因阳性率90％，20株ESBLs性菌Ampc酶基因阳性率45％，40株大肠埃希菌ACT-1和DHA基因阳性率分别为57．5％，40．0％，有12株大肠埃希菌同时携带ACT-1和DHA基因。结论 临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重，质粒型AmpC酶基因携带率高。     

产ESBLs大肠埃希菌耐药基因分型研究

目的对本院分离的31株产ESBLs大肠埃希菌进行耐药基因分型研究。方法用PCR对根据CLSI标准进行产ESBLs大肠埃希菌的初筛确证实验得到的产ESBLs大肠埃希菌31株,进行耐药基因的分型研究。结果31株产ESBLs大肠埃希菌中,TEM型为15株,SHV型为3株,CTX-M型为6株,TEM型对氨苄西林100%耐药,而SHV和CTX-M型主要对三代头孢类抗生素耐药,其治疗的首选药物为亚胺培能。结论本院检出的产ESBLs大肠埃希菌主要型别为TEM型,耐药基因分型研究将为临床用药和医院感染监控提供较有价值的参考。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌质粒ampC基因检测和耐药性分析

目的 检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的质粒ampC基因,并检测其对抗生素的耐药性,了解大肠埃希菌在院内的流行情况,指导临床合理用药.方法 在产ESBLs的大肠埃希菌中筛选出头孢西丁耐药菌株30株,通过热裂解法进行DNA抽提,对6组ampC特异引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物,进一步DNA测序确定其基因型.结果 5株同时产ampC酶和ESBLs大肠埃希菌的耐药性与195株只产ESBLs的相似,对β内酰胺类抗生素耐药强(P<0.01),符合ESBLs特点;同时符合ampC酶的特点,对头孢西丁和β-内酰胺酶抑制剂耐药(P<0.01),对四代头孢菌素和碳青霉烯类敏感.30株试验菌中有5株为阳性,基因型分别为CIT型2株,DHA型2株,EBC型1株.结论 大肠埃希菌可同时产ESBLs和Ampc酶菌株,由于其为质粒介导,具高传播性,易爆发院内感染,须高度重视.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌质粒ampC基因检测和耐药性分析

目的 检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的质粒ampC基因,并检测其对抗生素的耐药性,了解大肠埃希菌在院内的流行情况,指导临床合理用药.方法 在产ESBLs的大肠埃希菌中筛选出头孢西丁耐药菌株30株,通过热裂解法进行DNA抽提,对6组ampC特异引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物,进一步DNA测序确定其基因型.结果 5株同时产ampC酶和ESBLs大肠埃希菌的耐药性与195株只产ESBLs的相似,对β内酰胺类抗生素耐药强(P<0.01),符合ESBLs特点;同时符合ampC酶的特点,对头孢西丁和β-内酰胺酶抑制剂耐药(P<0.01),对四代头孢菌素和碳青霉烯类敏感.30株试验菌中有5株为阳性,基因型分别为CIT型2株,DHA型2株,EBC型1株.结论 大肠埃希菌可同时产ESBLs和Ampc酶菌株,由于其为质粒介导,具高传播性,易爆发院内感染,须高度重视.     

革兰阴性杆菌TEM型β-内酰胺酶耐药基因研究

目的 了解中南大学3所附属医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性杆菌TEM型耐药基因的检出及流行情况.方法 收集254株多重耐药革兰阴性杆菌,采用双纸片协同法(DDS)进行ESBLs表型确证,多重PCR.法扩增blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因,TEM特异性引物对其整个开放阅读框进行扩增并对PCIL产物测序,通过BLAST分析确定基因型;并对携带有TEM基因的革兰阴性菌株用随机扩增多态DNA(RAPD)方法进行菌株的同源性分析.结果 经多重PCR扩增,105株肠杆菌获得阳性结果,其中85株菌携带TEM基因,26株菌携带SHV基因,10株菌携带OXA-1基因;6株非发酵菌获得阳性结果,均携带TEM基因,且全部为TEM-1型广谱β-内酰胺酶.携带blaTEM耐药基因的菌株所含RAPD类型:大肠埃希菌12种,肺炎克雷伯菌6种,阴沟肠杆菌7种.结论 TEM-1型β-内酰胺酶是湖南地区主要流行的TEM型酶;大肠埃希菌产TEM酶情况尤为突出;在同一医院以及同一病区存在TEM-1型β-内酰胺酶的克隆传播.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌质粒谱与基因型的相关性

目的:探讨产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌质粒谱与ESBLs基因型的相关性.方法:收集郑州大学第一附属医院检验科2007年至2008年临床分离产ESBLs大肠埃希菌46株,采用琼脂精凝胶电泳进行质粒谱分析,采用PCR技术检测ESBL基因型,分析同一菌株所携带质粒条带数与其携带ESBLs基因型别数的相关性.结果:产ESBLs大肠埃希菌有5种质粒谱型(分别为携带单一21000 bp质粒、21000 bp+2500 bp 2种质粒、21000bp+2500 bp+3000 bp 3种质粒、21000 bp+2500 bp+3000 bp+7000 bp 4种质粒以及21000 bp+2500 bp+3000 bp+7000 bp+9000 bp 5种质粒)和5种ESBLs基因型(1种型别10株,2种型别15株,3种型别12株,4种型别8株,5种型别1株),同一菌株质粒谱与其ESBLs基因型无相关性(r8=0.091,P=0.548).结论:多种ESBLs表达基因可定位于同一质粒上.     

肺炎克雷伯菌基因分型与药敏结果分析

目的对肺炎克雷伯菌各型菌株的耐药现状进行流行病学研究。方法采用改进的随机引物扩增多态性DNA分型法(RAPD)基因分型技术,对分离自门诊和住院患者的48株肺炎克雷伯菌进行基因分型,同时对菌株进行12种抗生素敏感试验。结果48株肺炎克雷伯菌41株有稳定的RAPD带型,共分16型,同型菌株药敏结果基本相同。结论该院呼吸科R ICU存在肺炎克雷伯菌的小流行;合理使用抗生素,加强重点病区的消毒隔离措施,是控制医院感染流行的重要措施。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的基因型分布

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌所产生的ESBLs的基因型特征。方法PCR通用引物扩增blaTEM、blaSHV、blaCTX-M和blaOXA基因后测序以确定其基因亚型。结果140株大肠埃希菌中68株产blaCTX-M-9,58株产blaTEM-1,35株产blaSHV,15株产blaCTX-M-1。结论产ESBLs的大肠埃希菌的主要流行型别为blaCTX-M-9型和blaTEM型。     

产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因型分析

目的 了解我院临床分离大肠埃希茼产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率和基因型分布情况.方法 确证试验鉴别临床分离大肠埃希菌中产ESBLs株,PCR扩增CTX-M耐药基因,PCR.RFLP和DNA测序确定CTX-M基因型.结果 确证实验证明,88株大肠埃希菌中有57株ESBLs阳性,其中54株CTX-M基因扩增阳性.PCR-RFLP分析发现,10株携带CTX-M-1组基因,39株携带CTX-M-9组基因,另外5株同时携带CTX-M-1和CTX-M-9组基因.测序证实7株CTX-M-9组扩增产物均为CTX-M-14型,3株CTX-M-1组扩增产物均为CTX-M-3型.结论 大肠埃希菌中产CTX-M型ESBLs的检出率较高,其基因型以CTX-M-14和CTX-M-3型为主.     

耐氟喹诺酮类药物的大肠埃希菌gyr A基因点突变检测

目的：研究大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制,方法：对大肠埃希菌标准菌44302和临床收集的3株对氟喹诺酮类药物高度耐药的大肠埃希菌及1株敏感菌,用PCR方法扩增DNA旋转酶gyr A基因的N末端编码区．并进行克隆和序列测定。结果：对氟喹诺酮类药物高度酎药的大肠埃希菌的gyr A基因的序列分析,发现3个导致氨基酸改变的基因点突变：丝氨酸-83→亮氨酸;丙氨酸-84→脯氨酸;天冬氟酸-87→天冬酰氨．结论：对氟喹诺酮类药物高度耐药的大瞄埃希菌的DNA旋转酶A亚单位存在着基因点突变。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的：分析临床大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的基因型分布以及产ESBLs细菌中头孢菌素酶的存在情况。方法：质粒接合实验分析耐药性转移，根据超广谱β-内酰胺酶和头孢菌素酶各种已知基因序列设计引物，进行聚合酶链反应分析，确定超广谱β-内酰胺酶的基因型分布以及头孢菌素酶基因。结果：80.4％的菌株质粒接合实验成功，66％的菌株为TEM基因型，14％的菌株为SHV基因型，10％的菌株为CTX-M型。2株菌同时存在AmpC酶。TEM阳性的大肠埃希菌RAPD带型呈多样性。结论：临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性可以发生转移，ESBLs以TEM基因型为主，部分菌株为SHV、CTX-M型。同一菌株内可以产生2种不同基因型的超广谱β-内酰胺酶。产ESBL菌株不是以细菌克隆播散为主。     

大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶基因型与耐药相关性分析

[目的]对临床分离的大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs)株的发生率、基因类型及其对抗菌药物的耐药相关性进行分析,为临床治疗产ESBLs大肠埃希菌感染提出建议.[方法]常规分离临床标本,经API系统鉴定.按照NCCLs推荐的纸片扩散法表型确证实验进行ESBLs检测.采用PCR方法对细菌进行耐药基因扩增.采用二倍琼脂稀释法测定抗菌药物对所有菌株的最低抑菌浓度(MIC).[结果]84株大肠埃希菌中产ESBLs30株,占35.71%.30株表型确证实验ESBLs阳性菌中,23株菌有至少一组引物扩增呈阳性.基因型构成以CTX-M型为主.最低抑菌浓度结果,产ESBLs大肠埃希菌对亚胺培南敏感率为100%;对含酶抑制剂的复合β-内酰胺类抗菌药物哌拉西林/他唑巴坦敏感率为76.67%;对头孢噻肟的耐药率为83.33%,对头孢他啶耐药率为46.67%.[结论]本实验ESBLs产生株基因型以CTX-M型为主,其对含酶抑制剂的复合β-内酰胺类抗菌药物哌拉西林/他唑巴坦相对敏感,对头孢他啶耐药率比头孢噻肟相对低,亚胺培南是最敏感的抗菌药物.