A Study on Antitoxic Role of Vesicular Monoamine Transporter 2 in Transgenic Chinese Hamster Overy Cells

Objective:To study the antitoxic role of vesicular monoamine transporter 2 (VMAT2) in transpgenic Chinese Hamster ovary(CHO) cell.Methods:With the technology of transgene from PC12 to CHO,MTT reduction assay was used to detect MPP^ toxic effect on wild type CHO(wtCHO) and transgenic CHO.Meanwhile,the role of reserpine was also observed in MPP^ toxic effects.Results:The sensitivity of transgenic CHO to MPP^ was much less than that of wtCHO with 0.5 mmol/L MPP^ .Transgenic CHO had the same sensitivity as wtCHO if rotenone was given.WtCHO,by given reserpine alone,didn‘‘‘‘‘‘‘‘t change its sensitivity to MPP^ .Conclusions:VMAT2 has protective effect on transgenic CHO by transporting MPP^ to vesicles.     

囊泡单胺类转运体功能抑制在帕金森病发病机制中作用的研究

帕金森病（PD）发病机制有多种学说，近年的科学研究从帕金森病黑质多巴胺能神经元选择性受损出发，发现黑质纹状体系统自身的多巴胺递质囊泡转运体（VMAT２）受到抑制而触发的多巴胺内源性毒性可能在帕金森病发病机制中起了关键的作用犤１，２犦。２０００～２００２年，本课题组通过研究加入VMAT特异性抑制剂利血平（RE）后犤３犦，cDNACHO细胞（转PC１２细胞含VMAT２基因的转基因中国仓鼠卵细胞）和野生株中国仓鼠卵细胞（wtCHO细胞）的死亡方式及多巴胺毒性在大鼠嗜铬瘤细胞（PC１２）细胞的作用途径，探讨了PD的发病机制…     

囊泡单胺类转运体功能抑制对PC12细胞的毒性及抗氧化剂的干预

目的：研究囊泡单胺类转运体(VMAT)功能抑制对大鼠嗜铬瘤(PC12)细胞产生的内源性毒性及抗氧化剂的保护作用。方法：用流式细胞仪观察VMAT功能抑制以及不同干预方法对PC12细胞存活的影响和细胞死亡方式。结果：单独加入VMAT抑制剂利血平对PC12细胞无毒性作用；利血平协同多巴胺明显增加多巴胺的毒性，使同样浓度的多巴胺诱发PC12细胞的凋亡率明显增加。加入还原型谷胱甘肽(GSH)、二硫苏糖醇(DTF)和脉冲1号使PC12细胞的生存率明显提高。结论：VMAT功能抑制触发了多巴胺内源性毒性可诱发细胞凋亡，具有抗氧化作用的制剂有细胞保护作用。     

囊泡单胺转运体2与糖尿病相关的研究进展

囊泡单胺转运体2(VMAT2)是神经内分泌细胞膜上必不可少的蛋白质,参与转运细胞内单胺类递质,在体内分布广泛。近年来,VMAT2在胰腺中的定位及生理功能初步被阐明。随着分子影像学和神经内分泌学的蓬勃发展,VMAT2作为B细胞的潜在分子标志物,在活体外利用其特异性配体,通过正电子断层扫描评价胰岛B细胞量、早期预测与诊断糖尿病的方法备受关注。该文就VMAT2与糖尿病的相关研究进展予以综述。     

囊泡单胺转运体在帕金森病小鼠脑组织中的分布特征

目的：探讨囊泡单胺转运体(VMAT2)在帕金森病(PD)小鼠模型脑组织中的分布特征与帕金森病的关系。方法：使用利血平、MPTP及联合利血平和MPTP分别造成C57BL小鼠的PD模型，应用免疫组织化学方法观察VMAT2和TH在黑质致密部、纹状体、腹侧被盖和蓝斑分布的变化。结果：免疫组织化学分析显示，帕金森病小鼠较对照组小鼠VMAT2和酪胺酸羟化酶(tvrosine hvdmxvlase，TH)阳性神经元细胞数目在黑质致密部明显减少，腹侧被盖和蓝斑中的阳性神经元细胞数无明显变化；VMAT2和TH在纹状体区域阳性神经元纤维明显减少；同时发现在正常对照组中VMAT2在黑质致密部中的分布既少于腹侧被盖也少于蓝斑。结论：这种对多巴胺神经元具有保护作用的VMAT2在黑质致密部中的分布少于腹侧被盖和蓝斑，黑质致密部保护作用薄弱是帕金森病黑质选择性受损的重要原因。     

囊泡单胺类转运体功能抑制对PC12细胞凋亡的影响

目的：研究帕金森病黑质多巴胺神经元的死亡机理。方法：用四甲基偶氮唑盐（MTT）法及流式细胞仪观察囊泡单胺类转运（VMAT）功能抑制对大鼠嗜铬细胞瘤（PC12）细胞凋亡的影响。结果：单独作用的VMT抑制剂和利血平对PC12细胞无毒性作用，超过一定浓度的多巴胺（0．3mmol/L）对PC12细胞有毒性作用，利血平协同钦巴胺明显增加多巴胺的毒性，使同伴浓度的多巴胺诱发PC12细胞的凋亡率明显增加，致使较低浓度的多巴胺（0．15mmol/L）就可降低PC12细胞生存率，结论：VMAT功能抑制引发了多巴胺的内源性毒性，进而诱发多巴胺神经元的凋亡，可较好地解释帕金森病的发病机理。     

囊泡单胺转运蛋白2的研究进展

囊泡单胺转运蛋白2（VMAT2）是囊泡单胺转运蛋白家族（VMATs）成员之一,主要参与单胺类神经递质的转运。VMAT2既可转运突触前释放的神经递质至囊泡中,又可将胞质内有害的单胺隔离到囊泡中。VMAT2功能丧失会导致单胺类囊泡隔离减少,胞浆中单胺聚集。VMAT2缺失会引起亨廷顿病、迟发型运动障碍、帕金森病等中枢神经系统疾病。     

β-synuclein 对Ⅱ型囊泡单胺转移体表达的促进作用

目的探讨β-突触核蛋白(β-synuclein)对Ⅱ型囊泡单胺转移体(VMAT2)表达的影响。方法通过2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色检测β-synuclein稳定表达对细胞内ROS水平的影响;采用免疫荧光双标法、免疫组织化学法及Western blotting检测VMAT2在稳定转染β-synuclein的SH-SY5Y细胞及正常SH-SY5Y细胞中的表达情况。结果 DCFH-DA荧光染色显示,稳定表达β-synuclein的细胞的荧光强度较正常SH-SY5Y细胞明显减弱。VMAT2在稳定转染β-synuclein的SH-SY5Y细胞中的表达水平较正常SH-SY5Y细胞明显升高。结论β-synuclein能够促进VMAT2的表达,减少胞浆内DA含量,抑制ROS产生,在帕金森病多巴胺神经元变性过程中对其起到保护作用。     

快速老化模型小鼠海马囊泡谷氨酸转运体表达与兴奋性毒性关系的研究

目的：已有研究表明,阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的发病机制与谷氨酸兴奋性毒性有关,囊泡谷氨酸转运体（vesicular glutamate transporters,VGLUTs）位于谷氨酸能突触前神经元的囊泡膜上,特异地将细胞质中的谷氨酸转运进突触囊泡,其在囊泡膜上的数量以及囊泡外胞质中的谷氨酸浓度,决定了其转运谷氨酸进入囊泡的速度和囊泡的填充程度。然而,在AD 病人大脑皮层中VGLUT1 与VGLUT2 显著减少,但是却存在严重的谷氨酸（glutamic acid,Glu）兴奋性毒性这一矛盾现象。本研究的目的是采用AD 动物模型探讨VGLUTs 减少但却存在谷氨酸兴奋性毒性的可能原因。方法：采用微透析技术,采集快速老化模型小鼠SAMP8 及其对照SAMR1海马部位组织间液,通过 HPLC 电化学方法检测氨基酸类神经递质的含量。采用Western Blot 方法,检测海马中VGLUT1 和VGLUT2 的表达,并检测降解VGLUTs 的酶calpain、caspase3 的表达及Glu 作用的突触后受体NMDA、AMPA 的表达情况,同时检测高亲和力谷氨酸转运体EAAT1/2、谷氨酰胺酶、谷氨酰胺合酶,以及谷氨酰胺转运相关的SN1、SAT1 的表达。结果：与SAMR1 相比,SAMP8 小鼠海马部位VGLUT1/2 表达降低,海马组织间液Glu 升高。一方面,位于星形胶质细胞上的Glu 转运体EAAT1 和 EAAT2 表达降低,另一方面,突触后膜上NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、NMDAR2C、NMDAR2D 的表达降低,AMPA2 表达升高,提示可能是由于这两个方面的因素导致了突触间隙Glu 浓度过高,造成了兴奋性毒性。在SAMP8 小鼠海马部位,谷氨酰胺合酶和谷氨酰胺酶降低,转运谷氨酰胺的转运体SN1 降低、SAT1 升高,提示这可能会导致胞质中Glu 减少,从而反馈调节VGLUTs 的表达降低,同时,降解VGLUT1/2 的酶caspase3 表达增加,两者最终导致了SAMP8 小鼠海马中VGLUTs 减少。结论：AD 动物模型SAMP8 海马中VGLUTs减少而Glu 增多,其可能原因是降解VGLUT1/2 的酶增多和胞质中Glu 减少,同时突触后Glu 受体和EAAT1/2 表达降低。     

转染VMAT2基因的CHO细胞抵抗多巴胺毒性作用的研究

目的：探讨囊泡单胺转运体（vesicular monamine transporter-2,VMAT2）对多巴胺（dopamine,DA）毒性的抵抗作用。方法：采用细胞免疫荧光染色法测定VMAT2基因在转染的CHO细胞（VMAT2-CHO）中的表达;MTT比色法检测不同浓度DA作用下的野生型CHO（WT－CHO）和VMAT2-CHO细胞存活率;应用ELISA法DA检测试剂盒测定细胞内DA的水平;采用活性氧检测试剂盒测定细胞内活性氧的水平。结果：VMAT2-CHO细胞内有较强的特异性荧光表达,主要定位在核周区域,胞浆中也有散在的荧光; 0.25～0.4mmol/L DA作用72h, VMAT2-CHO细胞存活率显著高于WT-CHO细胞（P<0.05）;0.4mmol/L DA作用于WT-CHO和VMAT2-CHO细胞24?h,VMAT2-CHO细胞内DA为（199.33±15.155）ng/ml,显著高于WT-CHO细胞（141.4±8.784）ng/ml（P<0.01）;而细胞内活性氧（ROS）水平则由（144.490±5.295 ）U/106cells增加至WT CHO细胞的（217.895±15.885）U/106cells（P<0.01）。结论：转染VMAT2的CHO细胞对DA引起的毒性有显著的抵抗作用。     

Ⅱ型单胺囊泡转移体在SH-SY5Y细胞中的稳定表达

目的构建稳定表达Ⅱ型单胺囊泡转移体（VMAT2）的SH-SY5Y细胞系。方法构建VMAT2真核表达载体，利用脂质体转染神经母细胞瘤SH-SY5Y，选择筛选后挑取单克隆扩大培养，通过Western-blot及免疫荧光的方法鉴定蛋白质在细胞中的表达，并通过免疫双荧光技术对VMAT2在细胞系中的分布进行定位。结果Western-blot及免疫荧光结果显示该蛋白在挑选的细胞系中有高效表达。免疫双荧光结果显示表达的蛋白定位在大密度核心囊泡（LDCV）。结论该细胞系的成功构建为研究VMAT2在帕金森氏病（PD）发病机制中的作用奠定良好的基础。     

Ca~(2+)在大鼠应激性胃粘膜损伤中作用的研究

目的 :探讨大鼠胃粘膜与急性胃粘膜损伤之间的关系。方法 :采用原子吸收光谱分析法 ,测定胃粘膜Ca2 +含量。结果 :胃粘膜损伤程度随应激时间延长而加重 ,胃粘膜Ca2 + 含量却下降 ,二者呈明显负相关 ,但是 ,CaCl2 预应激或应用钙通道阻断剂 ,可减轻胃粘膜损伤程度。结论 :Ca2 + 在急性胃粘膜损伤中有一定的作用。     

人参皂苷Rb3对中国仓鼠肺细胞染色体畸变作用

目的研究人参皂苷Rb3对中国仓鼠肺细胞(CHL)染色体畸变作用。方法测定人参皂苷Rb3对CHL细胞的半数抑制浓度(IC50),根据IC50设立不同剂量组,进行染色体畸变试验,分别观察人参皂苷Rb3接触CHL细胞6 h、24 h及加S9后6 h染色体的畸变情况,根据标准进行结果判定。结果染毒6 h、24 h及加S9后染毒6 h染色体畸变为阴性。结论人参皂苷Rb3不能引起CHL细胞染色体产生畸变作用。     

奥氮平和阿立哌唑对大鼠胰岛β细胞葡萄糖转运蛋白2表达的影响

目的:了解奥氮平和阿立哌唑对大鼠体重、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、C肽、胰岛素敏感指数(ISI)及胰岛β细胞葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)表达的影响,以探讨其诱导血糖异常的可能病理机制。方法:24只雌性SD大鼠随机均分成奥氮平组、阿立哌唑组和空白对照组,分别给予奥氮平5mg/(kg.d)、阿立哌唑5mg/(kg.d)和生理盐水灌胃,共28d。在第1,7,14,28天剪尾采血,测体重和FPG;在第28天测定FINS和C肽水平,计算ISI,用RT-PC和免疫印迹检测法分别测定胰岛β细胞GLUT2的含量。结果:持续灌胃第14及28天,奥氮平组体重高于空白对照组[(214.88±7.66)g比(202.38±9.44)g,P<0.05],[(229.88±7.92)g比(203.75±9.60)g,P<0.05];奥氮平组FPG高于空白对照组[(5.55±0.46)mmoL/L比(4.14±0.23)mmoL/L,P<0.05],[(5.91±0.40)mmoL/L比(4.19±0.24)mmoL/L,P<0.05]。持续灌胃第28天,奥氮平组FINS水平高于空白对照组[(17.48±2.96)比(9.89±1.24),P<0.05];奥氮平组C肽水平高于空白对照组[(0.158±0.024)vs(0.095±0.008),P<0.05];奥氮平组ISI水平低于空白对照组[(-4.612±0.208)比(-3.716±0.167),P<0.05];奥氮平组胰岛β细胞GLUT2基因表达含量低于空白对照组[(0.806±0.145)比(1.209±0.798),P<0.05],GLUT2蛋白表达含量低于空白对照组[(0.868±0.513)比(1.440±0.148),P<0.05];而阿立哌唑组的变化无统计学的意义(P>0.05)。结论:阿立哌唑对大鼠体重、FPG、FINS、C肽、ISI及GLUT2无明显影响。而长期治疗过程中,服用奥氮平的大鼠体内产生胰岛素抵抗,胰腺β细胞GLUT2的表达降低,胰岛β细胞自身胰岛素抵抗(IR)可能是奥氮平诱发血糖代谢障碍的原因之一。     

中药注射剂致RBL-2H3细胞脱颗粒的研究

目的:探讨中药注射剂引起RBL-2H3细胞脱颗粒情况及其机制。方法:RBL-2H3细胞分别与阳性药物C48/80及15种中药注射剂作用,从形态学和超微结构观察、β-氨基己糖苷酶释放检测等方面研究RBL-2H3细胞脱颗粒情况。用WST-8法检测中药注射剂对RBL-2H3细胞和BRL细胞的细胞毒作用。结果:甲苯胺蓝染色和电镜观察细胞超微结构变化从形态学上证明中药注射剂引起RBL-2H3细胞脱颗粒。上清中β-氨基己糖苷酶释放率检测表明脉络宁、清开灵、参麦和痰热清注射液明显促进酶的释放,酶释放率在20%以上,与阴性对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。进一步的研究发现,痰热清注射液成分中的黄芩和生脉注射液成分中的红参、五味子与RBL-2H3细胞的脱颗粒有关。大部分中药注射剂致RBL-2H3细胞脱颗粒的作用与细胞毒作用相关,但有的中药注射剂致脱颗粒无细胞毒作用。结论:一些中药注射剂可致RBL-2H3细胞脱颗粒,中药注射剂中有的成分与RBL-2H3细胞脱颗粒相关;有的中药注射剂致RBL-2H3细胞脱颗粒与细胞毒作用有关,而pH和渗透压可影响细胞的脱颗粒。     

Changes of Serotonin (5-HT), 5-HT2A Receptor,and 5-HT Transporter in the Sprague-Dawley Rats of Depression,Myocardial Infarction and Myocardial Infarction Co-exist with Depression

Background:To evaluate whether serotonin (5-HT),5-HT2A receptor (5-HT2AR),and 5-HT transporter (serotonin transporter [SERT]) are associated with different disease states of depression,myocardial infar...     

急性髓细胞白血病细胞IL-2受体基因的研究

为研究髓细胞白血病（ＡＭＬ）细胞白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因及ＩＬ－２在ＡＭＬ中的作用，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对４１例ＡＭＬ患者化疗前白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ进行检测，并对部分ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定其对重组人ＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）的反应。结果显示，ＡＭＬ细胞ＩＬ－２Ｒα和ＩＬ－２β基因表达是一普遍现象，４１例中白血病细胞有ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ表达分别为２８例（６８．３％）和３２例（７８．０％），ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ同时表达者２１例（５１．２％）。ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞对ｒｈＩＬ－２的体外反应呈不均一性，表现为细胞增殖、受抑或不反应，８例中仅１例Ｍ５型患者细胞呈增殖反应。本研究表明ＡＭＬ细胞ＩＬ－２Ｒ基因表达是一普遍现象，这些细胞在体外对ｒｈＩＬ－２的反应呈不均一性，大多表现为无反应或受抑。     

不同镁离子浓度对TTV核酸检测的影响

目的 :确定输血传播病毒TTV核酸检测方法中的最佳镁离子浓度。方法 :根据TTVORF2区基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针。结果 :在确定最佳引物浓度之后 ,分别建立不同镁离子浓度的PCR检测体系 ,根据反应曲线选择最佳镁离子浓度。结论 :最佳镁离子浓度应为 4 .0mmol/L。     

产后哺乳妇女月经复潮、排卵及卵巢变化与婴儿喂养关系研究

目的探讨产后哺乳妇女卵巢改变及首次排卵时间与婴儿喂养的关系,为哺乳妇女采取避孕措施提供科学依据。方法对791例产后哺乳妇女进行问卷调查,记录哺乳妇女的月经复潮时间和婴儿添加辅食时间。对其中的101例哺乳妇女采用B超监测排卵情况及卵巢变化,并结合基础体温测量及宫颈黏液评分进行连续观察。结果791例产后哺乳妇女给婴儿添加辅食的平均时间为(4.7±1.3)个月。757例月经复潮,占95.7%(757/791),平均复潮时间为(6.6±3.7)个月。通过B超发现101例产后哺乳妇女有53例(52.5%)监测到>1.8cm的卵泡,平均在产后154d(5.1个月),有32例(60.4%)B超监测卵泡>1.8cm后萎缩,结合BBT及宫颈黏液评分,提示排卵多为黄体功能不全。产后4个月内B超监测首次排卵者占10.9%(11/101),4个月后排卵者占41.6%(42/101)。给婴儿添加辅食时间与月经复潮时间及首次排卵时间呈显著正相关(n=100,r=0.4764,P<0.01及n=53,r=0.5554,P<0.01)。结论添加辅食对产后月经复潮及排卵有较大影响。建议产后妇女在以母乳喂养为主的情况下,避孕措施的自行选择以产后60d为宜,具体实施应在产后4个月开始;延期母乳喂养是避孕的一种有效方法。     

2型糖尿病的中医病因探讨

2型糖尿病的中医病因是禀赋不足与过剩,情志不舒,饮食不节,饮食西式化,过食肥甘,食物性质改变,劳逸失度(过劳过逸),滥用温补药物等。