米非司酮对早孕外周血和蜕膜组织自然杀伤细胞亚群的影响

目的和方法：采用流式细胞仪检测淋巴细胞亚群法,探讨米非司酮对早孕外周血和蜕膜ＮＫ细胞亚群的影响。结果：早孕和米非司酮处理组外周血的ＮＫ细胞各亚群的百分率近似;米非酮处理组血清Ｅ２和Ｐ４均稍高于早孕组。而早孕蜕膜组的三个ＮＫ细胞亚群的百分率均明显高于米非司酮处理组。米非司酮处理组的蜕膜以ＣＤ５６Ｎ炙主要淋巴细胞亚群,而外周血则以ＣＤ５６ＣＤ１６和ＣＤ１６ＮＫ细胞为主。结论：米非司酮主要作用于早孕母胎     

复发性流产患者蜕膜自然杀伤细胞亚群Fas表达的研究

近年来研究发现，Fas-FasL在母胎免疫耐受中起重要作用，即表达FasL的滋养细胞能够杀伤入侵到胎盘绒毛的表达Fas的淋巴细胞，从而使滋养细胞免受母体免疫细胞的破坏。以往大多数研究重点放在母胎界面T细胞的凋亡上，而对妊娠早期蜕膜组织的主要淋巴细胞、NK细胞的凋亡报道较少，我们通过用流式细胞术检测复发性流产（RSA）患者外周血和蜕膜组织淋巴细胞、     

早孕妇女外周血和蜕膜组织中自然杀伤细胞亚群的变化

目的和方法：用流式细胞仪检测正常非孕及早孕妇女外周血和蜕膜自然杀伤细胞表面标记ＣＤ５６和ＣＤ１６分子,探讨早孕外周血与蜕之间自然杀伤细胞亚群的差异以及雌、孕激素对外周血自然杀伤细胞的影响。结果：蜕膜以ＣＤ５６细胞为主要淋巴细胞,早孕外周血则以ＣＤ５６ＣＤ１６和ＣＤ１６为主。孕酮在一定范围内增加,可使外周血自然杀伤细胞各亚群的百分率明显增加;在早孕期、雌、孕激素水平的急剧升高可能使外周血ＣＤ５６细胞     

自然流产患者蜕膜组织NK细胞受体表达分析

目的研究自然流产患者子宫蜕膜组织中NK细胞受体的表达格局。方法采用RT-PCR和免疫组织化学法检测了12例早期自然流产及40例同期正常早孕要求行人工流产者蜕膜组织的NK细胞受体表达水平。结果NK细胞受体中阳性最高的是KIR2DL4,流产组和对照组分别为100%和95%,其次是KIR2DL1,分别为83.3%和75%。ILT2和ILT4的阳性率较低,流产组和对照组分别为25%、30%和8.3%、10%。统计结果显示,KIR2DL4、KIR2DL1、ILT2和ILT4mRNA阳性率在早期自然流产病人组和对照组之间均无显著性差异。与对照组相比,早期自然流产病人的蜕膜组织中KIR2DL4分子的表达水平明显降低,具体表现在KIR2DL4的分布密度上。结论早期流产的发生与NK细胞受体的转录水平可能并无直接关联,但KIR2DL4分子的表达水平高低,可能对早期胚胎的生长、发育起关键作用。     

自然流产患者外周血与蜕膜NK细胞亚群数量变化的研究

目的：研究自然流产患者外周血与蜕膜组织自然杀伤细胞亚群数量的变化。方法：对36例自然流产患者及30例正常健康早孕者（对照）外周血及蜕膜组织中淋巴细胞进行单克隆抗体标记,应用流式细胞仪定性、定量分析技术对NK细胞（natural killer)亚群进行分析。结果：（1）流产组外周血及蜕膜组织NK细胞CD56＋CD16＋百分比较对照组明显升高。（P＜0．01）,而蜕膜组织中NK细胞CD56＋CD16－百分比明显低于对照组（P＜0．001）。（2）外周血与蜕膜组织NK细胞CD56＋CD16＋亚群存在相关性（γ＝0．516,P＜0．05）。结论：NK细胞亚群的数量变化可以引起蜕膜免疫微环境的失调,导致自然流产。外周血与蜕膜NK细胞CD56＋CD16＋亚群存在正相关关系。     

早孕外周血及蜕膜中NK细胞表型及T淋巴细胞亚群的变化

目的: 检测孕妇外周血及蜕膜中T淋巴细胞亚群和NK细胞表型, 探讨它们与母-胎界面免疫耐受的关系.方法: 收集20例早孕同一患者的蜕膜组织及外周血, 密度梯度离心法分离出淋巴细胞, 流式细胞术(FCM)检测两组中NK细胞、 T细胞含量及其表面分子CD16、 NKG2A、 NKG2D表达水平.结果: 蜕膜自然杀伤(dNK)细胞占蜕膜淋巴细胞(57.15±4.0)%, 外周血自然杀伤(pNK)细胞占外周血淋巴细胞(11.46±1.58)%; dNK细胞表面CD16的表达明显低于pNK细胞, 二者分别(10.3±3.9)%与(95.6±2.6)%(P＜0.05); dNK细胞表面NKG2A的表达明显高于pNK细胞, 二者分别为(87.10±4.5) %与(27.5±4.2)% (P＜0.01), dNK细胞NKG2D的表达水平与外周血NK细胞相近, 分别为(88.70±4.1)%与(93.10±3.6)% (P＜0.05); 蜕膜中的CD4 T淋巴细胞的表达低于外周血中CD4 T淋巴细胞, 二者分别为(13.70±1.0)%与(15.85±2.4)% (P＜0.05), 蜕膜中CD8 T淋巴细胞表达明显低于外周血中CD8 T淋巴细胞, 二者分别为(15.23±1.5)%与(18.85±1.73)%(P＜0.01).结论: 妊娠期蜕膜中的NK细胞及T淋巴细胞可能是同维持母-胎界面的免疫耐受的重要原因.     

自然流产小鼠蜕膜组织和血清中TNF-α受体1的表达特点

目的比较正常妊娠与自然流产小鼠模型蜕膜组织受体1（TNFR1）和血清中可溶性TNFR1（sTNFR1）表达特征的差异,探讨TNFR1和sTNFR1与不明原因自然流产的关系。方法建立正常妊娠模型CBA×BALB／c和自然流产模型CBA×DBA／2。采用免疫组化SABC法测定两组模型孕13天蜕膜组织TNFR1的表达水平;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定两组模型孕13天血清sTNFR1的表达水平。结果自然流产模型蜕膜组织TNFR1的表达显著高于正常妊娠模型（P〈0．01）,血清sTNFR1的表达水平显著高于正常妊娠模型（P〈0．05）。结论TNFR1和sTNFR1与自然流产的发生发展有关。蜕膜组织TNFR1表达的增加是自然流产发生的原因之一,而血清sTNFR1水平的升高则对妊娠具有自我保护和自我调控的生理机制。     

自然流产患者蜕膜组织TNF-α及TGF-β1mRNA的表达分析

目的研究自然流产患者子宫蜕膜组织中细胞因子TNF-α和TGF-β1mRNA的表达格局。方法采用实时荧光定量RT-PCR法检测了15例早期自然流产及20例同期正常早孕要求行人工流产者蜕膜组织的TNF-α和TGF-β1mRNA表达水平。结果流产组和对照组蜕膜组织TNF-αmRNA的表达水平分别为1.98±0.52和1.08±0.10;TGF-β1mRNA的表达水平分别为0.82±0.34和1.41±0.23。统计结果显示,与对照组相比,早期自然流产病人的蜕膜组织中TNF-αmRNA的表达水平明显增加(P<0.01),而TGF-β1mRNA的表达水平则显著降低(P<0.01)。结论早期自然流产的发生可能与母胎界面TNF-α和TGF-β1mRNA的异常表达有关。     

妊娠子宫微环境中uNK细胞NKG2A和NKG2D及其配体表达的研究

目的：研究妊娠子宫微环境中子宫自然杀伤细胞（uNK细胞）NKG2A和NKG2D及其相应配体的表达，探讨NKG2A与NKG2D的不平衡表达在母胎免疫耐受形成中的作用。方法：选择30例孕6-9周的正常妊娠妇女,分离其新鲜蜕膜组织，除去绒毛,分离蜕膜和外周血单个核细胞，采用流式细胞仪测定NK细胞的数量及NKG2A与NKG2D的表达；采用RT-PCR技术检测滋养层组织NKG2A与NKG2D配体人类白细胞抗原-E(HLA-E)、主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子相关蛋白A(MICA)mRNA的表达结果：妊娠子宫蜕膜淋巴细胞中NK细胞约占70%,流式细胞分析的结果显示，子宫自然杀伤细胞NKG2A的表达显著高于外周血NK细胞，分别为97.86%±1.75%与33.35%±10.92%（〖AKx-D〗±s），两者差异显著（P<0.05），在滋养层细胞中检测到其配体HLA-E的表达；而与外周血相比，uNK细胞表面NKG2D的表达与之较为相近，分别为93.21%±4.52%与97.80%±1.72%，但两者仍有显著差异（P<0.05）。在滋养层组织未检测到其相应配体MICA mRNA的表达结论：蜕膜中的淋巴细胞主要为NK细胞，其免疫学表型与外周血NK细胞有较大的区别，妊娠期子宫自然杀伤细胞表面高表达抑制性受体NKG2A，同时滋养层组织表达相应的配体人类白细胞抗原-E，这可能是维持母胎界面免疫耐受的重要因素。     

白血病抑制因子在正常早孕、稽留流产蜕膜绒毛中表达的初步临床研究

目的探讨白血病抑制因子（LIF）在正常早孕、稽留流产蜕膜绒毛组织中的表达,及其与稽留流产发生的关系。方法采用免疫组化技术-链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接（SP）法对白血病抑制因子（UF）在2组妇女绒毛蜕膜组织中的表达进行组织学定位和表达强弱度分析。通过病理图像分析仪对图片进行观察,并运用所附分析系统软件测量各组平均光密度值（IOD）。采用放射免疫法检测正常早孕妇女（正常早孕组,20例）、稽留流产患者（稽留流产组,25例）血清人绒毛膜促性腺激素（β—hCG）及孕酮（P）水平。结果（1）孕酮及hCG水平在2组孕妇间的比较：正常早孕组孕妇血清中孕酮、hCG水平分别为（37．5±15．2）ng／mL、（9005,8±2134．9）mIU／L,稽留流产组孕妇分别为（19．1±11．6）ng／mL、（3120．3±1213．2）mIU／L,两组孕妇血清孕酮、hCC水平比较,有显著性（P〈0．01）;（2）LIF平均相对含量在2组孕妇蜕膜、绒毛组织中的比较：正常早孕组孕妇分别为0．38±0．15,0．36±0．11;稽留流产组孕妇分别为0．20±0．17,0．18±0．13。正常早孕组与稽留流产组比较,差异有显著性（P〈0．05）。结论LIF在稽留流产蜕膜绒毛组织中的表达量降低,可能是导致hCG及孕酮分泌下降,最终造成稽留流产的原因之一。     

Cytokine secretion patterns of NK cells and macrophages in early human pregnancy decidua and blood: implications for suppressor macrophages in decidua

PROBLEM: Local immune modulation has been shown to be of considerable importance for the maintenance of successful pregnancy. We have previously reported the secretion of interferon-gamma (IFN-gamma), interleukin-4 (IL-4) and IL-10 in human decidua from early normal pregnancy. The aim of this study was to investigate the cellular source of cytokine secretion in the decidua, and compare this to secretion patterns in peripheral blood. METHOD OF STUDY: Decidual tissue and peripheral blood was collected from 20 women undergoing surgical abortion during first trimester pregnancy. Monocytes/macrophages and NK cells were enriched by immunomagnetic cell separation and cytokine secretion was detected by enzyme-linked immunosorbent spot-forming cell assay. RESULTS: Decidual and peripheral monocytes/macrophages and NK cells spontaneously secrete IFN-gamma, IL-4 and IL-10. The number of IL-10 secreting cells was significantly higher in decidual macrophages compared with decidual non-monocytic cells as well as compared with blood monocytes/macrophages. These differences were not seen for IFN-gamma or IL-4. CONCLUSIONS: Our results indicate that decidual macrophages subserve important suppressive functions in the pregnant uterus.     

Frequency and phenotype of natural killer cells and natural killer cell subsets in bovine lymphoid compartments and blood

Natural killer (NK) cells are widely distributed in lymphoid and non‐lymphoid tissues, but little is known about the recirculation of NK cells between blood and tissues. This is relevant to understanding recirculation in the steady‐state and also for determining the roles for NK cells in vaccine‐induced immunity and responses to infection. Therefore, the percentage of NK cells and their phenotype across peripheral blood, afferent lymph and lymph nodes in steady‐state conditions was investigated in cattle using the pseudo‐afferent lymphatic cannulation model. CD2⁺ CD25^lo NK cells were the predominant subset of NK cells within the blood. In contrast, CD2⁻ CD25^hi NK cells were the main subset present within the skin‐draining afferent lymphatic vessels and lymph nodes, indicating that CD2⁻ NK cells are the principal NK cell subset trafficking to lymph nodes via the afferent lymphatic vessel. Furthermore, a low percentage of NK cells were present in efferent lymph, which were predominantly of the CD2⁻ subset, indicating that NK cells can egress from lymph nodes and return to circulation in steady‐state conditions. These compartmentalization data indicate that NK cells represent a population of recirculating lymphocytes in steady‐state conditions and therefore may be important during immune responses to vaccination or infection.     

复发性自然流产患者外周血自然杀伤细胞免疫表型检测

目的 检测复发性自然流产(RSA)患者外周血自然杀伤(NK)细胞的免疫表型。方法 应用流式细胞术检测27例RSA妊娠患者、41例RSA非妊娠患者、32例正常妊娠者和25例正常非妊娠者外周血CD56dimCD 16+、CD56brightCD16+/-、CD69+、HLA-DR+ NK细胞表达并进行比较。结果RSA妊娠组、RSA非妊娠组、正常妊娠组和正常非妊娠组外周血CD56dimCD16+ NK细胞占总NK细胞的比例分别为(88.69.±5.86)％、(79.25±9.31)％、(79.24±10.09)％、(75.49±11.96)％;CD56brightCD16+/- NK细胞的比例分别为(8.18±5.54)％、( 12.20±6.49)％、( 13.13±8.65)％、( 11.53±6.23)％;CD69+ NK细胞的比例分别为(3.42±2.13)％、(2.36±1.72)％、(2.68±1.81)％、(2.08±1.73)％;HLA-DR+ NK细胞的比例分别为(15.26±9.32)％、(9.96±7.18)％、( 10.57±8.05)％、(9.64±6.12)％。与RSA非妊娠组、正常妊娠组及正常非妊娠组比较,RSA妊娠组CD56dimCD16+、CD69+、HLA-DR+ NK细胞显著升高（均P＜0.05）。与RSA非妊娠组及正常妊娠组比较,RSA妊娠组CD56brightCD16+/- NK细胞明显降低（均P＜0.05）。结论 RSA妊娠患者外周血中NK细胞CD56dimCD16+、CD69+和HLA-DR+表达增高,而CD56brightCD16+/-表达下降,可能在RSA的发生发展中起着一定的作用。     

自然流产患者蜕膜组织中TNF-α,MMP-9的表达

目的通过检测自然流产患者蜕膜组织中TNF-α,MMP-9表达,探讨二者与自然流产发生的关系。方法采用免疫组化SABC法测定30例自然流产与20例同期正常早孕要求行人工流产患者蜕膜组织中TNF-α,MMP-9的表达。结果流产组蜕膜组织中TNF-α,MMP-9阳性表达率分别为86.7%,83.3%,高于对照组(13.3%,P=0.006;16.7%,P=0.005),两组蜕膜组织中二者的表达有显著性差异,P0.05。结论自然流产患者蜕膜组织中TNF-α,MMP-9的表达增高,提示TNF-α,MMP-9在自然流产的发生中起重要作用。     

Expression of killer cell inhibitory receptors on human uterine natural killer cells

The establishment of the human placenta in early pregnancy is characterized by the presence of large numbers of natural killer (NK) cells within the maternal decidua in close proximity to the fetally-derived invading extravillous trophoblast which expresses at least two HLA class I molecules, HLA-G and HLA-C. These NK cells have an unusual phenotype, CD56^bright CD16, distinguishing them from adult peripheral blood NK cells. They may control key events in trophoblast migration and therefore placentation. Human NK cells in peripheral blood express receptors for polymorphic HLA class I molecules. This family of receptors, known as killer cell inhibitory receptors (KIR), are expressed on overlapping subsets of NK cells to give an NK cell repertoire which differs between individuals. Using a panel of monoclonal antibodies to several members of the KIR family and analysis by flow cytometry, we have found that KIR are expressed by decidual NK cells. There is variation in both the percentage of cells expressing a particular receptor and the density of receptor expression between decidual NK cells from different individuals. Comparison of NK cells from decidua and peripheral blood of the same individual showed that NK cells from these two different locations express different repertoires of KIR. Receptors are present in individuals who do not possess the relevant class I ligand, raising the possibility that these NK receptors may be involved in recognition of the allogeneic fetus by the mother at the implantation site.