骨形态发生蛋白-2对人脐带间充质干细胞增殖和分化的影响

目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)增殖和分化的影响.方法 体外培养hUCMSCs,在培养基中加入20 mg/L BMP-2,噻唑蓝(MTT)比色法观察BMP-2对hUCMSCs的增殖效果,流式细胞术检测BMP-2作用后细胞表面STRO-1的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测量BMP-2作用后hUCMSCs骨桥蛋白(OPN)、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)的mRNA表达变化,碱性磷酸酶染色观察hUCMSCs在BMP-2培养基作用下ALP染色变化,Von kossa染色实验观察BMP-2对hUCMSCs钙结节的形成.结果 细胞在未加BMP-2和加BMP-2培养基中培养1、3、5、7 d,虽然细胞的增殖率上升,但各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),同时发现在2%血清的培养基中培养7 d后,hUCMSCs的增殖促进约10%左右.BMP-2培养7 d后细胞表面STRO-1阳性细胞比例上升明显,由25.1±4.0上升至51.1±6.4,差异有统计学意义(P＜0.01).BMP-2培养条件下COL1 mRNA的表达增强,差异有统计学意义(P＜0.05),OPN mRNA出现表达,ALP mRNA比无BMP-2培养明显增强,差异有统计学意义(P＜0.05).在BMP-2培养条件下ALP染色出现大片细胞阳性染色.在培养28 d,Von kossa染色出现明显的钙结节.结论 BMP-2对hUCMSCs成骨诱导分化作用明显,而增殖作用很弱.     

补肾活血方通过调节MGP、BMP-7因子对慢性肾脏病大鼠血管钙化的抑制作用

目的:观察补肾活血方通过调节基质Gla蛋白(matrix Gla protein,MGP)、骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)因子对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)大鼠血管钙化(vascular calcification,VC)的抑制作用,探讨补肾活血方抑制CKD大鼠VC的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组及中药组,每组20只,模型组与中药组大鼠实验第1~4周给予250 mg·kg-1·d-1腺嘌呤混悬液灌胃及含1. 8%高磷饲料喂养,第5~8周腺嘌呤改为隔日灌胃。中药组同时按55 g·kg-1·d-1剂量给予补肾活血方灌胃治疗,每日1次。正常组灌胃等量生理盐水。给药8周后,HE染色观察肾组织变化,茜素红染色观察主动脉钙化结节情况,检测主动脉钙含量及ALP活性,腹主动脉取血检测血清钙(Ca2+)、磷(P3-)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、全段甲状旁腺激素(i PTH),Western blot法检测主动脉α-平滑肌蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)蛋白的表达,Real-time PCR法检测主动脉MGP、BMP-7mRNA表达。结果:HE染色观察提示:中药组较模型组正常肾小球数目增多,肾小管扩张程度降低,炎性细胞数量下降,腺嘌呤结晶减少。茜素红染色观察提示:与正常组比较,模型组主动脉出现钙化结节,广泛红色颗粒物沉着;与模型组比较,中药组钙化结节减少。与正常组比较,模型组主动脉钙含量及ALP活性升高,血P3-、Scr、BUN、i PTH水平升高,血Ca水平下降(P 0. 01),主动脉ALP蛋白表达明显升高、α-SMA蛋白表达明显下降(P 0. 01),模型组主动脉MGP、BMP-7 mRNA表达下调(P 0. 01);与模型组比较,中药组主动脉钙含量及ALP活性明显降低(P 0. 05),血P3-、Scr、BUN、i PTH水平均下降(P 0. 01,P 0. 05),血Ca2+水平升高(P 0. 01),中药组主动脉ALP蛋白表达降低、α-SMA蛋白表达升高(P 0. 01),且中药组MGP、BMP-7 mRNA表达上调(P 0. 01)。结论:补肾活血方能够改善CKD大鼠肾脏组织学、肾功能、改善钙磷代谢,上调MGP、BMP-7因子表达,这可能是其抑制CKD大鼠VC的作用机制。     

尿毒症患者桡动脉盐皮质激素受体表达与血管钙化的关系

目的 探讨尿毒症患者动脉血管壁醛固酮-盐皮质激素受体（Ald-MR）表达情况与血管钙化的关系。 方法 以初次行动静脉内瘘术的60例尿毒症患者为对象。术中取桡动脉远心端0.5 cm,van Kossa染色检测血管钙化程度及评分后,将尿毒症患者分为无钙化、轻中度钙化、重度钙化3组（A、B、C组）。免疫组化法检测桡动脉壁MR、11β-羟基类固醇脱氢酶2（11β-HSD2）、核心结合因子α1（Cbfα1）、骨桥蛋白（OPN）、胶原Ⅰ（ColⅠ）表达,计算其吸光度（A）值。原位杂交法检测血管壁醛固酮合成酶2（CYP11B2）mRNA表达。对照组为同期行脾切除术的8例患者,取脾动脉,检测指标同尿毒症组。测定各组患者血清钙、磷、肌酐、甲状旁腺激素（PTH）等指标,对MR表达与钙化积分、骨相关蛋白表达进行Pearson相关分析。 结果 尿毒症患者动脉血管钙化发生率为31.67%（19/60）。A、B、C组分别为41例、11例、8例。对照组患者无血管钙化。免疫组化结果显示,MR、11β-HSD2在对照组均无明显表达;MR表达在A、B、C组中逐步增加,A值分别为728±84、806±133、1288±223,C组显著高于A组（P < 0.01）;11β-HSD2表达在A、B、C组分别为2098±215、3110±373、1607±300,B组最高,C组显著下降,与B组差异有统计学意义（P < 0.01）。骨相关蛋白OPN、Cbfα1、ColⅠ在对照组动脉壁无明显表达;在A、B、C组表达逐步增加,C组显著高于A组（9405±1701比4563±480,1125±592比553±102,754±1871比1821±241,均P < 0.01）,且3种骨相关蛋白分布位置均与van Kossa染色中钙化物质沉积部位一致。原位杂交结果显示各组患者和对照组动脉血管壁均无CYP11B2 mRNA表达。相关分析结果表明,桡动脉MR表达与血管钙化积分、OPN、Cbfα1、ColⅠ表达呈正相关,相关系数分别为0.469、0.312、0.413、0.379,P值分别< 0.01、<0.05、<0.01、<0.01。 结论 尿毒症患者动脉MR表达上调,并与钙化程度、骨相关蛋白表达上调呈正相关,提示尿毒症患者动脉Ald-MR系统活性增强可能是动脉钙化的重要机制。     

淫羊蕾对肾阳虚雄性大鼠肾脏和股骨BMP-7表达的影响

目的 观察淫羊藿在醋酸泼尼松所致的肾阳虚雄性SD大鼠肾脏和股骨骨形态发生蛋白-7(BMP-7)的表达,探讨淫羊藿的抗骨质疏松机制中BMP-7的作用.方法 3月龄雄性SD大鼠24只,随机分为正常组、肾阳虚模型组和淫羊藿组,灌胃给药90 d后,ELISA检测血清BMP-7含量,RT-PCR检测肾脏和股骨BMP-7 mRNA的表达,免疫组化检测肾脏和股骨BMP-7的表达部位及数量.结果 醋酸泼尼松致肾阳虚大鼠血清BMP-7含量下降(P＜0.05),肾脏和股骨BMP-7 mRNA和BMP-7的表达亦明显下降(P＜0.05),淫羊藿能提高血清BMP-7的含量(P＜0.05),并在mRNA水平(P＜0.05)和蛋白水平上增加肾脏(P＜0.05)和股骨BMP-7的表达.结论 醋酸泼尼松可导致肾脏和股骨BMP-7表达的减少,淫羊藿可通过上调肾脏和股骨中BMP-7的表达,增加诱导成骨作用,修复骨组织损伤,肾脏可能通过BMP-7的血循传送途径调控骨骼疾病.     

转染骨形态发生蛋白-2基因的人脐带间充质干细胞成骨研究

目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因转染人脐带间充质干细胞(hUCMSC)对其成骨分化和体内异位成骨的影响.方法 实验分为3组,空白组:10％胎牛血清+ DMEM培养基,对照组:10％胎牛血清+DMEM培养基+空慢病毒载体转染,实验组:10％胎牛血清+DMEM培养基+BMP-2+增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染,检测3组不同培养基培养后人脐带间充质细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性变化,蛋白印迹法检测骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、BMP-2的蛋白表达变化.yon kossa染色观察hUCMSC钙结节形成.大鼠肌袋内植入BMP-2转染hUCMSC/COL1,通过CT三维重建及苏木素-伊红(HE)染色观察其体内成骨能力.结果 hUCMSC BMP-2转染良好,转染率可达到(90.95±4.35)％,实验组细胞在第5天,ALP活性就由(26.492 ±7.105) U/g·蛋白增加至(38.625±11.592) U/g·蛋白,在第14天,实验组的ALP的活性可以高达(49.732±13.068) U/g·蛋白,对比空白组和对照组都有明显增加(P＜0.05).对比空白组和对照组,实验组COL1、BMP-2和OPN蛋白呈现高表达(P＜0.05).转染BMP-2基因后,hUCMSC培养28 d可形成大量的钙结节.BMP-2转染hUCMSC/COL1在大鼠肌袋内可异位成骨.结论 转染BMP2基因可促进hUCMSC细胞成骨能力.     

MC3T3E1细胞分化过程中Cbfα1及相关基因的表达

目的 研究在小鼠前成骨细胞MC3T3E1诱导成骨过程中，总Cbfα1、Cbfα1两种亚型Cbfα1／P56、Cbfα1／P57及碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白和骨桥素在前成骨细胞成熟过程中的变化。明确Cbfα1、Cbfα1亚型及相关基因表达与成骨细胞分化的关系，探求与成骨细胞成熟更密切相关的Cbfα1亚型，为进一步的Cbfα1亚型研究提供基础。方法 MC3T3E1细胞在含β-甘油磷酸钠，抗坏血酸的培养基中培养22d，在细胞培养的不同时间（0，4，10，14，18，22d），用α-磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶（ALP）活性；VanGieSon苦味酸酸性复红染色法染色细胞Ⅰ型胶原；茜素红染色观察矿化结节形成；半定量RT-PCR检测总Cbfα1mRNA及Cbfα1／P56、Cbfα1／P57mRNA和Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、骨桥索mRNA的表达；用Western-blot检测Cbfα1蛋白的表达。结果 MC3T3E1细胞在β-甘油磷酸钠存在的情况下，培养第18d开始出现矿化，第22dⅠ型胶原染色及茜素红染色均观察到明显矿化结节形成。随MC3T3E1细胞的分化，Cbfα1mRNA的表达量逐渐增高，Cbfα1／P57mRNA在第18和22d的表达量明显增高，Cbfα1／P56mRNA无变化。Cbfα1蛋白随MC3T3E1细胞的分化，表达量逐渐增高。同样，随MC3T3E1细胞分化，Ⅰ型胶原、骨钙素、骨桥素和骨涎蛋白mRNA的表达量逐渐增高。ALP活性0～10d逐渐增高，10d后逐渐下降。结论 在MC3T3E1细胞的分化过程中Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、骨桥素mRNA随MC3T3E1细胞的分化表达逐渐增高。Cbfα1 mRNA及Cbfα1蛋白的表达随细胞的分化逐渐增高，与其他成骨特异性基因的变化趋势一致，并以Cbfα1／P57mRNA亚型为主。Cbfα1／P57亚型的表达与成骨分化的关系更密切，在进一步的与成骨细胞分化有关的Cbfα1亚型研究应以Cbfα1／P57亚型为主。     

尿毒症患者高级蛋白氧化产物与血管钙化的关系及其机制探讨

目的 研究CKDⅤ期患者血中高级蛋白氧化产物(AOPP)水平及其与动脉钙化的关系，并探讨AOPP可否诱导动脉平滑肌细胞向成骨细胞分化。 方法 50例CKDⅤ期患者为尿毒症组，10例肾功能正常的胸腺瘤患者作为对照组。测定血AOPP、钙、磷、甲状旁腺激素(iPTH)水平，同时分别取桡动脉和同级别的胸廓内动脉做组织学检查。体外用次氯酸处理的人血清白蛋白(AOPP-HSA)作用于主动脉平滑肌细胞（HASMC），以单纯人血清白蛋白(HSA)培养基和常规培养基作为对照，RT-PCR法检测核结合因子α-1(CBFα-1)及骨桥蛋白(OPN)水平。 结果 CKDⅤ期患者血浆AOPP水平明显高于对照组[(90.22±55.88) μmol/L 比 (35.79±4.31) μmol/L, P < 0.01]。50例桡动脉标本中44例有OPN沉积于中膜（88％），其中24例有明显的钙化(48％)，对照组无一例有OPN沉积及钙化。Pearson相关分析显示血清AOPP水平与桡动脉内膜中层厚度（IMT）(r ＝ 0.691，P ＜ 0.01）及管壁/管腔比值（r ＝ 0.354，P ＜ 0.05）呈正相关。血管钙化程度与AOPP（r ＝ 0.791，P ＜ 0.01）、血清磷（r ＝ 0.602，P ＜ 0.01）、iPTH水平（r ＝ 0.549，P ＜ 0.05）呈正相关。体外试验显示AOPP-HSA可诱导HASMC表达CBFα-1和OPN，而单纯HSA无此效应。 结论 CKDⅤ期患者普遍存在高AOPP血症和血管钙化，血AOPP水平与血管钙化密切相关。这可能与AOPP直接诱导动脉平滑肌细胞向成骨细胞分化有关。     

糖尿病大鼠肾小动脉内膜中膜厚度比与骨基质蛋白的相关性

目的 观察糖尿病大鼠肾小动脉骨基质蛋白表达情况及内膜中膜厚度比变化，探讨其相关关系及对糖尿病肾病血管病变的影响。 方法 70只健康雄性SD大鼠被随机分为糖尿病肾病组（DN，n = 40）和健康对照组(N，n = 30)。DN大鼠模型采用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱导，成功35只。N组予同等剂量柠檬酸缓冲液。分别于4、12、24周处死动物，应用免疫组化方法检测各时间点肾小动脉中骨基质蛋白核心结合因子（Cbfα1）、骨形态蛋白2（BMP-2）的表达。原位杂交法检测其基因表达。应用免疫荧光方法检测肾小动脉内膜中膜厚度比。实时荧光定量PCR法测定BMP-2及基质Gla蛋白（MGP）的基因表达。 结果 DN组各时间点血糖及尿蛋白量(24 h)均较N组显著增高（P < 0.05），自第12周开始，DN组血肌酐、血磷较N组显著增高（P < 0.05）。免疫组化显示DN组肾小动脉4周时已有Cbfα1、BMP-2表达，随时间延长表达逐渐增强，24周表达最强，各时间点均显著高于N组（P < 0.05）。原位杂交显示Cbfα1、BMP-2仅在肾小动脉中有表达，表达趋势同免疫组化结果；4周时主要表达于血管内弹力层；12周后外弹力层及肌层表达也增强。实时荧光定量PCR显示DN组4周时BMP-2 mRNA已有表达，随时间延长表达逐渐升高，24周最高（P < 0.05）； DN组MGP表达量 4周最高，随时间延长表达逐渐降低，24周最低（P < 0.05）。而N组BMP-2和MGP mRNA各时间点表达量差异均无统计学意义。免疫荧光显示第4、12周时，DN组内膜中膜厚度比与N组差异均无统计学意义；24周时显著高于N组（P < 0.05）。DN组Cbfα1与BMP-2呈正相关（r = 0.670, P < 0.01）；与MGP呈负相关（r = －0.466，P < 0.05）；小动脉内膜中膜厚度比与Cbfα1、BMP-2呈正相关（r = 0.727，P < 0.01； r = 0.581，P < 0.01）。 结论 DN早期小动脉内膜中膜厚度比与Cbfα1、BMP-2呈正相关。Cbfα1、BMP-2、MGP可能参与了DN血管病变。     

高镁对高磷诱导血管钙化的影响及其机制

目的 探讨高镁对高磷诱导血管钙化的影响及其可能的机制.方法 体外原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs),用β甘油磷酸盐(β-GP)诱导钙化.VSMCs细胞被分为4组:对照组、高磷组(10 mmol/L β-GP)、镁干预组(10 mmol/L β-GP+3 mmol/LMgSO4)、镁通道抑制剂(2-APB)干预组(10 mmol/L β-GP+3 mmol/L MgSO4+10-4 mol/L 2-APB).采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-PCR法和Western印迹法检测细胞核心结合因子α-1(Cbfα-1)的表达.24只雄性SD大鼠被随机分为3组:对照组(甲基纤维素灌胃+高磷饮食)、血管钙化组(硫酸腺嘌呤灌胃+高磷饮食)、高镁干预组(硫酸腺嘌呤灌胃+高磷高镁饮食).造模成功后测定大鼠主动脉脉搏波速率(PWV);采用yon Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测胸主动脉钙化情况;免疫组织化学方法检测胸主动脉Cbfα-1表达.结果 细胞培养14 d后,与高磷组相比,镁干预组VSMCs钙盐沉积明显减少,ALP活性降低(P＜0.05),Cbfα-1表达下调;2-APB可抑制高镁对VSMCs的保护性作用.Cbfα-1的动态观察结果显示,镁干预组第3天Cbfα-1的表达下调(P＜0.05),其抑制效应随时间延长呈增强趋势.体内实验中,大鼠慢性肾衰竭血管钙化模型制备成功.和体外实验一致,与血管钙化组相比,高镁干预组大鼠血浆镁离子水平明显升高,胸主动脉PWV明显降低(P＜0.05),血管钙盐沉积程度亦明显减轻.免疫组织化学结果显示高镁可明显降低高磷诱导的Cbfα-1表达(P＜0.05).结论 高镁可抑制血管钙化,其机制可能与其抑制VSMCs骨源性分化相关.     

Hyperphosphatemia-induced nanocrystals upregulate the expression of bone morphogenetic protein-2 and osteopontin genes in mouse smooth muscle cells in vitro

Vascular calcification, which contributes to cardiovascular disease in patients with uremic hyperphosphatemia, is associated with vascular cell expression of osteogenic genes, including bone morphogenetic protein (BMP)-2 and osteopontin (OPN). High inorganic phosphate levels in vitro stimulate the osteogenic conversion of smooth muscle cells; however, the mechanism governing this is not clear. We found that high-phosphate medium increased the expression of BMP-2 and OPN in mouse smooth muscle cells in culture. However, this effect was lost in the presence of the mineralization inhibitor, pyrophosphate, suggesting a contribution of calcium phosphate crystals. Addition of 1-2?mmol/l phosphate alone to growth medium was sufficient to induce nanosized crystals after 1 day at 37?°C. Isolated crystals were about 160?nm in diameter and had a calcium to phosphate ratio of 1.35, consistent with the hydroxyapatite precursor octacalcium phosphate. Nanocrystal formation increased fourfold in the absence of serum, was blocked by fetuin-A, and was dependent on time and on the concentrations of phosphate and calcium. Purified synthetic hydroxyapatite nanocrystals and isolated high-phosphate-induced nanocrystals, but not nanocrystal-free high-phosphate medium, also induced BMP-2 and OPN. Thus, our results suggest that BMP-2 and OPN are induced by calcium phosphate nanocrystals, rather than soluble phosphate. This mechanism may contribute, in part, to hyperphosphatemia-related vascular cell differentiation and calcification.     

尿毒症血清诱导人脐动脉平滑肌细胞成骨样转化和钙化的研究

目的 研究尿毒症血清对原代培养人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）成骨样转化和细胞外基质钙沉积的影响。 方法 收集40例健康人、40例非透析尿毒症患者和45例透析尿毒症患者血清，检测有关生化指标。组织植块法原代培养HUASMC，分别给予健康人血清（对照组）、透析（透析组）和非透析（非透析组）尿毒症血清孵育。茜素红S钙沉积染色及甲氧-酚酞络合酮法检测细胞层钙盐含量。实时定量PCR、荧光定量法及Western 印迹分别检测骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）和骨形成蛋白2（BMP２）基因以及蛋白表达。 结果 血清生化检测结果显示尿毒症血清较健康对照存在高磷、高脂、高全段甲状旁腺激素（iPTH）、高C反应蛋白（CRP）、白细胞介素6（IL-6）和低胎球蛋白A（P < 0.05），而透析组血清的三酰甘油、CRP、IL-6较非透析组血清高（P < 0.05）。与健康对照组相比，透析组和非透析组尿毒症血清均使HUASMC钙盐沉积更显著，BAP、OPN以及BMP2的表达上调（P < 0.05），且透析组血清作用更明显。 结论 尿毒症血清体外能够诱导HUASMC成骨样转化和钙化，提示可能和尿毒症相关的血管钙化有关。透析并发的微炎性反应状态可能加速了这一过程。     

普伐他汀抑制肿瘤坏死因子α介导的人脐动脉血管平滑肌细胞成骨样钙化

目的 研究普伐他汀干预对肿瘤坏死因子α（TNF-α）介导的人脐动脉血管平滑肌细胞（hUASMC）成骨样分化标志蛋白骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）和骨形成蛋白2（BMP-2）表达以及细胞外钙盐沉积的影响，并探讨普伐他汀在血管钙化防治中的潜在作用。 方法 植块贴壁法原代培养人hUASMC。予以TNF-α刺激和普伐他汀干预，甲O-酚酞络合酮方法测定细胞外基质钙盐沉积；实时定量PCR法观察血管平滑肌细胞BAP和OPN mRNA表达水平；免疫印迹法观察血管平滑肌细胞BAP、OPN和BMP-2蛋白表达水平。 结果一定浓度范围的普伐他汀呈浓度依赖方式抑制TNF-α对hUASMC的促增殖作用（r = －0.946，P < 0.01）；一定浓度范围的普伐他汀呈浓度依赖方式下调TNF-α介导上调的BAP、OPN mRNA表达（r = －0.972，P < 0.01）与蛋白的表达水平（BAP蛋白，r = －0.820，P < 0.01；OPN蛋白，r = －0.972，P < 0.01；BMP-2蛋白，r = －0.928，P < 0.01），抑制血管平滑肌细胞成骨样分化，减少细胞外基质钙盐的沉积（r = －0.973，P < 0.01）。 结论 普伐他汀可抑制TNF-α对hUASMC的促增殖作用，抑制细胞成骨样分化，减少细胞外基质钙盐的沉积。     

Pyrrolidine-dithio-carbamate ammonium counteracts high-phosphate-induced aortic calcification by inhibiting p65 nuclear translocation in uremic rats

Objective To investigate the effects of pyrrolidine-dithio-carbamate ammonium (PDTC) on high-phosphate-induced vascular calcification in uremic rats. Methods Eight-week-old SD rats were pair-fed with standard chow containing 1.2% calcium and 0.6% phosphorus for the control group (n=8) or 0.75% adenine, 1.2% calcium, and 1% phosphorus for the chronic renal failure(CRF) group (n=8) or PDTC group (intraperitoneal injection, 100mg•kg-1•d-1, n=8) for 8 weeks. The abdominal aortas were excised for Western blotting and immunostaining assay of NF-κB p65, osteopontin (OPN) and core binding factor α1(Cbfα1) protein. Results Serum urea nitrogen, creatinine, inorganic phosphate, calcium-phosphorus product increased significantly in CRF group and PDTC group after 4 weeks and 8 weeks (all P﹤0.01), although no differences were found between the latter two groups. After 8 weeks, aortic calcification was found in these two groups, immunostaining assay revealed OPN and Cbfα1 expressed in aortic intima, media and adventitia, and Western blotting analysis showed that total NF-κB p65, nuclear phosphorylated-p65 (p-p65), OPN and Cbfα1 expressions were significantly higher than those in control group (all P﹤0.01). The expression of total p65 and p-p65 was positively correlated with Cbfα1(r=0.707, P﹤0.01; r=0.507, P﹤0.01). Conclusion PDTC alleviates inorganic phosphate-induced aortic calcification significantly by inhibiting the nuclear translocation of NF-κB p65 and the expression of Cbfα1.     

Role of type Ⅲ sodium-dependent phosphate cotransporter PiT-1 in cardiac damages in uremic rats fed with high phosphate diet

Objective To evaluate the expression of type III sodium-dependent phosphate cotransporter (Pit-1) in cardiac damages in uremic rats fed with high phosphate diet. Methods Male SD rats were given an adenine and high phosphate diet as uremic rats (n＝18, uremic rats) or just high phosphate diet (NHP group, n＝6). After making uremic models, 18 rats were randomly divided into three groups as follow: uremic rats received high phosphate diet only (UHP group, n＝6); uremic rats received high phosphate diet and intraperitoneal phosphonoformic acid (PFA) 0.15 g·kg-1·d-1 (UHP＋PFA group, n＝6 ); uremic rats received high phosphates diet and intraperitoneal normal saline 0.15 g·kg-1·d-1 (UHP＋NS group, n＝6). At the end of 4th week and 8th week, serum Scr, Ca, P, and urine Ca, P were examined. At the end of the 8th week, the rats were sacrificed, and left ventricle weight, myocyte diameter, cardiac fibrosis were measured. The expression of PiT-1, TGF-β1, Cbfα-1, phosphorylation p38 mitogen-activated protein kinase (p-p38MAPK) and ERK (p-ERK) were determined by Western blotting. Results At the end of 4th week, Scr was higher in the uremic rats than that in the NHP rats. There was no significant difference of serum Ca, P, 24 h urinary P and Ca clearance among 4 groups (P＞0.05). At the end of 8th week, serum P was higher and Ca was lower in uremic groups than that in NHP group (P＜0.05). There was no significant difference of Scr, serum Ca, P, 24 h urinary P and Ca clearance among uremic groups (P＞0.05). Compared with those in NHP rats, the left ventricle weight, myocyte diameter, and the collagen volume fraction (%) increased in UHP group and UHP＋NS group (all P＜0.05), however, these parameters were ameliorated in UHP＋PFA group significantly (all P＜0.05). Western blotting showed that the expressions of PiT-1, TGF-β1, Cbfα-1, p-p38MAPK and p-ERK were higher in UHP group and UHP＋NS group than that in NHP group and they decreased significantly in UHP＋PFA group (all P＜0.05). Conclusions There are significant cardiac damages in uremic rats received high phosphate diet, companied with increased PiT-1, TGF-β1, Cbfα-1, p-p38MAPK, p-ERK expressions. The adverse effects are ameliorated by PiT-1 blocker, indicating that PiT-1 play a role in high phosphate diet induced cardiac damages in uremic rats.     

帕米膦酸钠对高磷诱发大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的 观察高磷对大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）钙化的影响,探讨帕米膦酸钠对RVSMC钙化的保护作用及相关机制。 方法 培养RVSMC细胞融合后,实验分为3组：正常磷对照组（Pi 1.4 mmol/L）、高磷组（Pi 4.5 mmol/L）、不同浓度帕米膦酸钠处理组（Pi 4.5 mmol/L+帕米膦酸钠10-5、10-6、10-7 mol/L）。甲O-酚酞络合酮吸光光度法测定细胞外基质钙含量。BCA法测定蛋白含量,用蛋白含量标化钙含量,同时以von Kossa染色半定量钙化情况。Western印迹检测不同组细胞的转录因子核心结合因子α1（cbfα-1）、骨钙素的表达量。 结果 培养3 d后,与高磷组相比,帕米膦酸钠干预组细胞外基质钙含量均显著减少（均P < 0.05）;von Kossa染色显示帕米膦酸钠干预组钙质沉积（黑色颗粒）亦显著减少。Western印迹显示,培养3 d后帕米膦酸钠处理组cbfα-1、骨钙素的表达量均较高磷组显著减少（均P < 0．05）。 结论 帕米膦酸钠对高磷诱导的RVSMC钙化有保护作用,此作用可能与其阻断RVSMC向成骨细胞转化有关。