氯沙坦通过ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶途径抑制高糖诱导的小鼠系膜细胞结缔组织生长因子表达

糖尿病肾病(DN)是糖尿病严重的慢性并发症之一,其主要病理特征是由细胞外基质(ECM)增多引起的肾小球硬化.血管紧张素(Ang)受体拮抗剂氯沙坦可有效地延缓肾小球硬化,被用于DN的治疗.高糖可诱导肾脏系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)的表达,从而促进ECM积聚和组织器官的纤维化.丝裂原活化蛋门激酶(MAPK)作为真核细胞胞质内的信号转导终末通路,与DN的发病密切相关[1].本研究观察高糖是否通过ERK1/2 MAPK途径调节小鼠系膜细胞CTGF的表达,以及氯沙坦对CTGF的作用是否也与ERK1/2 MAPK通路相关.     

megsin基因转染对高糖环境中系膜细胞胞外调节蛋白激酶表达的影响

目的 观察megsin基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞血小板源性生长因子BB（PDGF-BB）、磷酸化胞外调节蛋白激酶1/2（pERK1/2）、转化生长因子β1（TGF-β1）的表达及Ⅳ型胶原水平的影响;探讨megsin基因对细胞外信号调节激酶（ERK）通路的作用。 方法 将小鼠肾小球系膜细胞分为7组：低糖组（A组,5.5 mmol/L）、高糖组（B组,30 mmol/L）、高糖+空质粒组（C组）、高糖+megsin质粒组（D组）、高糖+megsin质粒+ERK通路抑制剂组（E组）、高糖+ megsin siRNA组（F组）和低糖+甘露醇组（24.5 mmol/L甘露醇,G组）。分别在培养12、24、48 h后,采用Western印迹法测定各组系膜细胞megsin、PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1的表达,放射免疫测定法（RIA）测定各组细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度。 结果 与A组相比,高糖刺激可上调系膜细胞megsin、PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1的表达及上清液Ⅳ型胶原的水平（均P ＜ 0.05）,且有一定的时间依赖性。转染megsin基因可进一步上调高糖环境下系膜细胞PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1、Ⅳ型胶原的表达（均P ＜ 0.05）。应用ERK通路抑制剂后,与D组相比系膜细胞megsin 和PDGF-BB的表达无明显变化（均P ＞ 0.05）,而pERK1/2、TGF-β1及Ⅳ型胶原的表达则明显降低（均P ＜ 0.05）。转染megsin siRNA对系膜细胞megsin基因进行干扰后,系膜细胞PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1的表达及Ⅳ型胶原的含量较B组下调（均P ＜ 0.05）。 结论 高糖环境下,转染megsin基因可使小鼠系膜细胞megsin、PDGF-BB表达增高,其可能部分通过ERK通路使TGF-β1表达上调及Ⅳ型胶原合成与分泌增加。megsin siRNA干扰可使上述指标下调,megsin基因可能在糖尿病肾病发病中起重要作用。     

高糖对系膜细胞胞外调节蛋白激酶表达及细胞外基质合成的影响

目的：探讨高糖环境下系膜细胞中胞外调节蛋白激酶（ERK）转导途径活性和转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA表达的变化。方法：分离培养大鼠肾脏系膜细胞,调整培养液浓度为以下3组,即正常糖组、高糖组、甘露醇组。分别予干预12h、24h、48h后用免疫细胞化学法和Western-blot法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2（pERK1/2）的表达进行定位、定性及半定量分析,用RT-PCR法检测细胞中TGF-β1 mRNA的表达,放免法测定各组细胞上清中Ⅳ型胶原的含量。结果：高糖组系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达较正常糖组明显增高并由胞浆向胞核内转移,随培养时间延长其表达呈上升趋势（P〈0.01）,高糖组TGF-β1 mRNA的表达及细胞上清液Ⅳ型胶原的含量均高于正常糖组（P〈0.01）,甘露醇组上述指标较正常糖组略有升高,但两组间无统计学意义（P〉0.05）。结论：高糖环境下系膜细胞中ERK信号转导通路被激活,TGF-β1 mRNA表达上调,可能是糖尿病肾病系膜细胞受损,肾小球硬化的机制之一。     

高糖状态下JAK2-STAT3通路的活化对系膜细胞转化生长因子β1、纤连蛋白表达的影响

JAK-STAT通路是近年发现的一组信号转导通路,能介导多种细胞因子和生长因子的细胞内信号转导过程.有研究提示JAK2-STAT3通路可能与系膜细胞的增殖、肥大及细胞外基质分泌有关[1].本研究旨在探讨高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞JAK2-STAT3信号转导通路的活性变化及用AG-490(tyrphostin B42,JAK-STAT通路特异性阻断剂)抑制此通路活化对大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、纤连蛋白(FN)表达的影响,为进一步探讨JAK-STAT信号转导通路与糖尿病肾病发病机制的关系提供新的思路.     

普罗布考对结缔组织生长因子在系膜细胞中表达的调节

结缔组织生长因子(CTGF)是一种相对分子质量为36 000～38 000的分泌多肽,在包括肾脏在内的多种不同器官中可致纤维化病变[1].CTGF可诱导人肾小球系膜细胞产生与糖尿病.肾病相关的病理变化,如增加细胞外基质积聚及诱导细胞周期停滞在G1晚期[1].CTGF在糖尿病肾病中的作用及如何调控CTGF表达为当前研究热点.普罗布考是一种降脂药物,并具有抗增殖活性,已初步应用于糖尿病的治疗[2].本研究旨在明确CTGF在高糖状态下系膜细胞中的表达变化以及普罗布考对CTGF表达的调控,并进一步探讨其分子机制.     

滋肾通络方对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA表达影响的实验研究

目的:观察滋肾通络方含药血清对高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA的影响,并探讨其在防治糖尿病肾病(DN)中的机制。方法:以高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞生长建立模型,分为以下8组:(1)正常组;(2)高糖组;(3)高糖+LPS组;(4)苯那普利组;(5)滋肾通络方小剂量组;(6)滋肾通络方中剂量组;(7)滋肾通络方大剂量组。采用RT-PCR技术从分子生物学水平检测各组系膜细胞中TGF-β1、MMP-2及MMP-9mRNA表达。结果:与正常组相比,高糖组、高糖+LPS组TGF-β1mRNA的表达明显升高(P<0.01),MMP-2及MMP-9mRNA的表达明显降低(P<0.01);与模型组相比较,滋肾通络方大、中、小剂量组对大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA表达显著降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论:滋肾通络方含药血清能够抑制大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA的表达,增加MMP-2、MMP-9mRNA的表达,从而通过增加肾小球系膜细胞细胞外基质的降解以延缓DN进展。     

己酮可可碱对高糖诱导肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达信号通路的影响

目的 探讨高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的变化及其作用通路,并且研究己酮可可碱（PTX）对CTGF表达的影响。 方法 体外培养大鼠系膜细胞,观察不同浓度的高糖在不同时间对系膜细胞转化生长因子β（TGF-β）、CTGF、 p-Smad2/3、Smad7及纤连蛋白（FN）表达的影响;并在高糖培养液中加入TGF-β中和抗体及不同浓度的PTX观察其对上述各指标表达的影响。 结果 高糖可以诱导系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA及蛋白表达增加（均P < 0.05）,且呈时间、剂量依赖性,同时伴有p-Smad2/3蛋白表达的增加及Smad7蛋白表达的减少。阻断TGF-β可使高糖诱导的CTGF mRNA及蛋白表达分别下降86.4%及91.8%（均P < 0.05）。PTX可以抑制高糖诱导的系膜细胞CTGF mRNA及蛋白表达,随着PTX浓度的增加其抑制作用更为显著（P < 0.05）,但对于TGF-β的表达没有影响。结论 高糖可通过TGF-β-Smads通路使CTGF mRNA表达增加进而影响其蛋白表达。PTX可以有效的抑制CTGF的表达而对于TGF-β的表达没有直接的抑制作用。     

结缔组织生长因子:糖尿病肾病治疗的新靶点

结缔组织生长因子(CTGF)在糖尿病肾病(DN)发病过程中作为转化生长因子-β(TGF-β)的下游调节因子,具有促进成纤维细胞活化以及细胞外基质产生、积聚等功能。现就CTGF的生物学特征和生理功能,CTGF在DN发病机制中的作用、CTGF作为糖尿病肾病的临床标志以及以CTGF为靶点治疗DN的价值和意义作一综述。     

结缔组织生长因子与糖尿病肾病

糖尿病肾病(DN)是糖尿病最主要的慢性并发症之一,在西方国家已成为终末期肾病(ESRD)的首要病因[1].其发病机制迄今未明.一般认为与高血糖及其引起的代谢紊乱、肾小球血流动力学改变等因素有关.近年来,某些生长因子在DN发病机制中的作用越来越受到重视.其中,结缔组织生长因子(CTGF)作为转化生长因子β(TGF-β)促纤维化活性的下游效应因子而备受关注.     

megsin基因对高糖环境中肾小球系膜细胞炎性介质的影响

megsin表达增多可能与以系膜细胞增生和细胞外基质沉积为主的肾小球疾病关系密切[1].炎性反应在糖尿病肾病(DN)的发生发展中起关键作用已被广泛接受.单核细胞趋化蛋白1( MCP-1)过度表达介导大量巨噬细胞趋化和激活,加重糖尿病肾损伤.经检索,尚未见关于megsin与MCP-1的关系,及其在DN发病机制中的作用的报道.本实验通过体外转染megsin基因,观察高糖环境下megsin基因对系膜细胞MCP-1表达及Ⅳ型胶原分泌的影响,探讨megsin在DN发生、发展中的作用机制.     

螺内酯对大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及转化生长因子β1表达的影响

螺内酯(SPI)是非选择性醛固酮(ALD)受体拮抗剂,一直作为保钾利尿剂应用于临床.研究发现螺内酯尚具有抗炎、抗纤维化及减少尿白蛋白等降压外作用[1],但确切机制尚不十分明确.肾小球系膜细胞(MC)产生的活性氧(ROS)及分泌的转化生长因子β1(TGF-β1)在糖尿病肾小球硬化的发生、发展中起着重要作用[2].本实验探讨SPI的肾保护作用及机制,为临床应用SPI治疗DN提供依据.     

Impact of all-trans retinoic acid on COX-2 expression and Smad pathway in rat glomerular mesangial cells induced by TGF-β1

转化生长因子β1(TGF-β1)可能是致组织纤维化的核心因子,其经典信号通路为Smad通路.环氧化酶2(COX-2)是一种膜结合蛋白,在炎性反应中起重要作用.局部浸润的炎性细胞、肾小球的巨噬细胞、系膜细胞都是COX-2的来源[1].维甲酸能抑制肾脏纤维化,保护肾功能[2],其主要包括全反式维甲酸(atRA),92顺式维甲酸和132顺式维甲酸.本研究探讨atRA对肾小球系膜细胞TGF-β-Smad信号通路中COX-2表达的影响.     

Impact of all-trans retinoic acid on COX-2 expression and Smad pathway in rat glomerular mesangial cells induced by TGF-β1

转化生长因子β1(TGF-β1)可能是致组织纤维化的核心因子,其经典信号通路为Smad通路.环氧化酶2(COX-2)是一种膜结合蛋白,在炎性反应中起重要作用.局部浸润的炎性细胞、肾小球的巨噬细胞、系膜细胞都是COX-2的来源[1].维甲酸能抑制肾脏纤维化,保护肾功能[2],其主要包括全反式维甲酸(atRA),92顺式维甲酸和132顺式维甲酸.本研究探讨atRA对肾小球系膜细胞TGF-β-Smad信号通路中COX-2表达的影响.     

全反式维甲酸对转化生长因子β1诱导肾小球系膜细胞环氧化酶2表达及Smad信号通路的影响

转化生长因子β1(TGF-β1)可能是致组织纤维化的核心因子,其经典信号通路为Smad通路.环氧化酶2(COX-2)是一种膜结合蛋白,在炎性反应中起重要作用.局部浸润的炎性细胞、肾小球的巨噬细胞、系膜细胞都是COX-2的来源[1].维甲酸能抑制肾脏纤维化,保护肾功能[2],其主要包括全反式维甲酸(atRA),92顺式维甲酸和132顺式维甲酸.本研究探讨atRA对肾小球系膜细胞TGF-β-Smad信号通路中COX-2表达的影响.     

霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞外基质的影响

目的：通过检测霉酚酸酯（MMF）的代谢产物霉酚酸（mycophenolic acid,MPA）对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）增殖、转化生长因子-β1（transformation growth factor-β1,TGF-β1）和细胞外基质的主要成分：纤维连接蛋白（fibrin,FN）、层黏连蛋白（laminin,LN）和胶原Ⅳ（typeⅣ collagen,ColⅣ）分泌的影响,探讨MPA对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）的保护机制。方法：四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定高糖及高糖加入不同浓度MPA（1～10μmol/L）后对大鼠MCs增殖的影响,ELASE的方法测定各组24h、48h、72hFN、LN、ColⅣ的表达,荧光定量多聚酶链反应的方法检测各组标本中TGF-β1 mRNA的表达,并进行统计学分析。结果：高糖可以诱导MCs增殖及TGF-β1、FN、LN、ColⅣ的表达,MPA抑制高糖环境下MCs增殖和FN、LN和ColⅣ分泌并呈剂量时间依赖性,MPA可以呈剂量依赖性抑制高糖环境下MCs分泌TGF-β1,各组之间有统计学差异（P〈0.05）。结论：MPA可以通过抑制高糖环境下MCs的增殖和TGF-β1的分泌,从而抑制系膜外基质增多、系膜区扩张,有效阻止细胞外基质积聚,从而防止肾小球硬化,延缓DN的发展。     

糖尿病肾病患者血清miR-192的表达及其对转化生长因子β信号通路的影响

目的 检测糖尿病肾病(DN)患者血清中microRNA( miR)-192的表达,并探讨其在DN的作用机制.方法 应用实时荧光定量PCR检测肾活检确诊的DN组、糖尿病无肾损害组和健康人群血清中miR-192的表达,以U6小RNA为内参,计算其相对表达量.同时检测肾组织miR-210表达.探讨miR-192作为DN特异性血清学指标的可能性.用生物信息分析方法分析可受miR- 192调节的靶基因,并在体外过表达或下调miR - 192表达以进一步研究.用不同浓度转化生长因子β1( TGF-β1)刺激肾小球系膜细胞,检测细胞和培养上清中miR - 192 含量.结果 DN患者血清miR- 192表达量显著低于健康对照(0.41±0.09比1.00±0.00,P＜0.01).各组间miR-210表达差异无统计学意义.TGF-β信号通路下游基因抗锌指E盒结合蛋白1(ZEB-1)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)可被miR- 192调节.不同浓度TGF-β1刺激均导致系膜细胞及培养上清miR-192含量显著下降.结论 血清中miR-192可能通过调节TGF-β通路参与DN的发病.miR-192具有的特异性可能会成为DN潜在的诊断标志物.     

缺氧诱导因子1α调控内皮素1表达在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

糖尿病肾病(DN)是终末期肾脏病(ESRD)的主要原因,也是一类以进行性肾间质纤维化(RIF)为特征的疾病.研究表明在DN状态下,肾脏固有细胞如系膜细胞、肾小管上皮细胞均能发生表型转换而表现间充质细胞特性参与RIF[1].缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和其下游基因内皮素1 (ET-1)均能导致上皮细胞转分化(EMT)[2-3].但二者是否参与DN肾小管上皮细胞转分化(TEMT)及其相互作用并不清楚.本研究观察高糖环境下HIF-1α、ET-1、α-SMA和E-cadherin的表达情况,以及HIF-1α siRNA转染和ET-1特异性A受体拮抗剂BQ123对其的影响,旨在探讨HIF-1α和ET-1在高糖诱导TEMT中的作用.     

Roux-en-Y胃旁路术下调糖尿病大鼠肾脏转化生长因子-β1表达

Roux -en-Y胃旁路术(RYGP)能显著改善Goto-Kakizaki( GK)大鼠糖脂代谢[1 ]及胰岛功能[2],且对GK大鼠肾脏具有保护作用[ 3].转化生长因子-β1(TGF-β1)是糠尿病肾病(DN)发生、发展过程中各种信号通路的重要调节蛋白[4].     

人体病理性瘢痕组织中过氧化物酶体增殖物激活受体的表达

研究显示,过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)除了促进脂肪形成和胰岛素稳态外,还参与许多细胞功能的调控,如拮抗转化生长冈子β1(TGF-β1)的促纤维化效应[1-3].作为一种拮抗组织纤维化的内源性保护因子,PPAR在一些器官纤维化(如糖尿病性肾小球硬化症)中旱弱表达[4-5].在皮肤的病理性瘢痕组织巾,PPAR、结缔组织生长因子(CTGF)和TGF-β1是否也有表达差异,是本研究的关注重点.     

百令胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织转化生长因子-β1和结缔组织生长因子表达的影响

糖尿病肾病是一类以进行性肾纤维化为特征的肾脏疾病,生长因子和细胞因子在糖尿病肾病的发生、发展过程中起重要作用.而TGF-β1和CTGF都是其病理进程中的关键因子.研究显示,某些中药成分可通过作用于TGF-β1和CTGF,起到延缓糖尿病肾病大鼠疾病进展的作用.我们以往研究显示,纯中药制剂百令胶囊可以明显降低糖尿病肾病大鼠的血压,减少大鼠的24 h尿蛋白定量,减轻肾组织免疫病理损伤,改善肾功能[1].为此本研究进一步探讨百令胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1和CTGF表达的影响.