抗人CD134单抗对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响

目的： 观察不同浓度抗人CD134单抗对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响及时间效应，旨在探讨抗人CD134单抗延长T细胞存活的可能机制。 方法: 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测不同浓度（1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L）抗人CD134单抗对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响，同时检测每种浓度作用不同时间（6 h、12 h、24 h、48 h）对外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达的影响。 结果: 不同浓度CD134单抗作用不同时间，对人外周血单个核细胞穿孔素mRNA表达均有不同程度抑制作用，在 24 h 该作用达高峰。当CD134单抗浓度﹥5 mg/L时，这种抑制作用不再增强（P>0.05）。 结论: 抗人CD134单抗可在转录水平抑制穿孔素表达，该效应在 24 h 达高峰且会饱和，此乃抗人CD134单抗延长T细胞存活的主要机制。     

枸杞多糖调控老年大鼠T细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的 :探讨枸杞多糖对老年大鼠T细胞过度凋亡及相关基因表达的调节作用。方法 :利用TUNEL标记的流式细胞术和荧光实时定量PCR技术 ,研究了老年大鼠和年轻大鼠T细胞凋亡百分率及抗凋亡和促凋亡基因 (Fas,FasL ,TNFR1,Bax ,Bcl 2 ,TNFR2 )mRNA表达情况 ,并研究了枸杞多糖对老年大鼠T细胞凋亡百分率及促凋亡和抗凋亡基因mRNA表达的影响。结果 :枸杞多糖能够有效地降低老年大鼠T细胞的过度凋亡 ,而且可以下调促凋亡的TNFR1基因mRNA表达并上调抗凋亡的Bcl 2基因mRNA表达。结论 :枸杞多糖下调促凋亡基因表达的同时上调抗凋亡基因的表达 ,从而改善老年大鼠T细胞过度凋亡的状态     

抗人CD134单抗对植物血凝素诱导的外周血单个核细胞穿孔素表达的影响

目的 观察不同浓度抗人CD134单抗对外周血单个核细胞（PBMC）穿孔素表达的影响及时间效应，旨在探讨抗人CD134单抗治疗自身免疫性疾病的可能机制。方法 在植物血凝素诱导下，分别以1μg／ml、5μg／ml和10μg／ml的抗人CD134单抗作用于人PBMC，于6h、12h、24h、48h用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测穿孔素mRNA表达，流式细胞仪检测穿孔素蛋白表达。结果 不同浓度的CD134单抗作用不同时间后，健康成人PBMC穿孔素mRNA和蛋白的表达均有不同程度的下调，且在24h达最低值。当CD134单抗≤5μg／ml时，随着单抗浓度的增加，穿孔素mRNA明显下调，其差异有统计学意义，当CD134单抗浓度〉5μg／ml时，穿孔素mRNA不再下调（P〉0．05）；穿孔素蛋白表达也有类似的变化。结论 抗人CD134单抗可以在转录水平和翻译水平上抑制穿孔素的表达，这种作用在24h达到高峰且会饱和，这可能被用于治疗某些自身免疫性疾病。     

CD4~+ TNFR2~+ 调节性T细胞在免疫相关疾病中作用机制的研究进展

调节性T细胞(Treg)是一种具有免疫抑制功能的效应性T淋巴细胞,在维持机体的免疫自稳中发挥重要作用。肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)主要表达于淋巴细胞并参与调节淋巴细胞的分化和存活。TNFR2可以稳定CD4~+CD25~+Treg的数量及其抑制功能。作为人和小鼠体内抑制功能最强的Treg,CD4和肿瘤坏死因子受体双阳性(CD4~+TNFR2~+)Treg参与多种疾病如肿瘤、移植排斥、结肠炎、关节炎、寄生虫感染等的免疫反应过程。CD4~+TNFR2~+Treg在各种免疫相关疾病中的作用及其机制已成为新的研究热点。     

033 CD30/CD30L的功能研究进展

CD30最初发现于何杰金淋巴瘤中的何杰金细胞和Reed-sternberg(RS)细胞,现已知在一些正常淋巴细胞、病毒感染的淋巴细胞、淋巴系统来源的肿瘤细胞及产生Th2型细胞因子的活化T细胞亚群表面也有表达.CD30属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族,CD30的生理功能除具有协同刺激信号的传递外,还有其他多种功能.CD30配体(CD30L)属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族,CD30L存在于活化的T细胞、静止B细胞、粒细胞、胸腺髓质细胞以及各种白血病细胞.CD30和CD30L交联后,通过TNFR相关因子(TRAF),包括TRAF1,2,3,5,导致多样的生理功能信号传导.本文就CD30/CD30L的分子生物学特征、细胞上的表达、生理功能及其与疾病关系的研究做以下综述.     

CD30/CD30L的功能研究进展

CD30最初发现于何杰金淋巴瘤中的何杰金细胞和Reed sternberg(RS)细胞 ,现已知在一些正常淋巴细胞、病毒感染的淋巴细胞、淋巴系统来源的肿瘤细胞及产生Th2型细胞因子的活化T细胞亚群表面也有表达。CD30属于肿瘤坏死因子受体 (TNFR)超家族 ,CD30的生理功能除具有协同刺激信号的传递外 ,还有其他多种功能。CD30配体 (CD30L)属于肿瘤坏死因子 (TNF)超家族 ,CD30L存在于活化的T细胞、静止B细胞、粒细胞、胸腺髓质细胞以及各种白血病细胞。CD30和CD30L交联后 ,通过TNFR相关因子 (TRAF) ,包括TRAF1,2 ,3,5,导致多样的生理功能信号传导。本文就CD30 /CD30L的分子生物学特征、细胞上的表达、生理功能及其与疾病关系的研究做以下综述     

生存素对过敏性鼻炎鼻黏膜组织中CD4~+T细胞凋亡的调控及其机理

目的通过检测季节性过敏性鼻炎(seasonal allergic rhinitis,SAR)患者鼻黏膜CD4+T细胞生存素、Fas表达水平及其凋亡细胞频率,探讨生存素对SAR患者鼻黏膜CD4+T细胞凋亡过程的调控作用及其机理。方法收集2016年1月至2017年1月期间来我院就诊的30例SAR患者(SAR组)及30例单纯鼻中隔患者(对照组)的下鼻甲黏膜,分离提取得到CD4+T细胞,Western blot、RT-qPCR法检测CD4+T细胞生存素的表达水平;经AICD激活剂处理2组CD4+T细胞后,流式细胞术检测凋亡细胞的频率,Western blot、RT-qPCR法检测Fas表达水平;采用生存素shRNA处理SAR组鼻黏膜CD4+T细胞,使生存素基因沉默,检测凋亡细胞的频率、Fas表达水平;采用生存素质粒转染对照组鼻黏膜CD4+T细胞,使生存素过表达,检测凋亡细胞的频率、Fas表达水平。结果 SAR组鼻黏膜CD4+T细胞生存素表达水平明显高于对照组(P0.05)。经AICD激活剂处理后,SAR组鼻黏膜CD4+T细胞凋亡细胞频率、Fas表达水平显著低于对照组(P0.05)。生存素shRNA处理SAR组鼻黏膜CD4+T细胞后,其凋亡细胞频率、Fas表达水平明显高于shRNA-NC(P0.05)。生存素质粒转染对照组鼻黏膜CD4+T细胞后,凋亡细胞的频率、Fas表达水平明显低于对照质粒(P0.01)。结论与对照组相比,生存素在SAR患者鼻黏膜组织CD4+T细胞中高表达,其可能通过下调CD4+T细胞表面Fas的表达,抑制CD4+T细胞AICD过程,使活化的CD4+T细胞在鼻黏膜中持续存在,参与AR中Th2异常优势的维持。     

胰岛移植免疫耐受的研究进展

随着2000年Edmonton方案提出并应用到胰岛移植后,使得移植的成功率大大提高。该方案之所以取得极大的成功,其中尤为重要的是其对以往的免疫抑制方案的改进,这使得免疫耐受的诱导成为近年来胰岛移植领域的研究热点之一。首先新型免疫抑制药物,如脱氧精胍菌素、来氟米特等,在延长同种异体胰岛移植的存活时间的同时,且无任何β细胞毒性作用,提高了胰岛移植的成功率。其次,通过TNF/TNFR家族和B7/CD28家族共刺激分子的阻断,同样具有相似的效果,抗CD40L抗体和CTLA-4 Ig诱导移植免疫耐受已经进入临床研究阶段。而通过调节细胞因子网络(如IL-4、IL-6和IGF)干预Thl/Th2转换亦可诱导移植耐受,但孤立的细胞因子治疗并不足以诱导耐受发生和维持。而让胰岛细胞表达可抑制细胞凋亡基因,同样对移植物功能存活具有重大意义,研究表明Fas/FasL、DCR3和A20基因等均能对移植胰岛的存活起保护作用。随着研究的深入和免疫学的发展,将对免疫耐受的机制有更为深人地了解,相信在未来的胰岛移植治疗糖尿病领域,移植排斥现象将能得到高效可靠的解决方法。     

Decorin提升小鼠脾脏细胞对乳腺癌细胞系4T1的免疫响应性

目的评价高表达核心蛋白聚糖(Decorin)的小鼠乳腺癌细胞系4T1对正常小鼠脾细胞的免疫激活效应,明确Decorin对抗肿瘤免疫的调节作用。方法采用携带Decorin基因的复制缺陷型重组腺病毒Ad.DCN感染小鼠乳腺癌细胞系4T1。与小鼠脾细胞共培养3d后,通过流式细胞术检测小鼠脾细胞的CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、T记忆细胞(Tm)和T调节细胞(Treg)的百分比;利用实时定量PCR(qPCR)技术检测Th1类细胞因子IL-2、IL-12、TNF-α和IFN-γ的表达,Th2类细胞因子IL-4、IL-6、IL-10和转化生长因子β(TGF-β)的表达,以及与杀伤相关基因穿孔素与颗粒酶B的表达。结果与小鼠乳腺癌细胞系4T1共培养后,小鼠脾细胞CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞、Treg细胞比例无明显改变,但Tm细胞比例显著升高;同时,细胞因子、穿孔素和颗粒酶B表达下调。但是,病毒感染的4T1细胞,特别是Ad.DCN感染的4T1细胞可显著抑制Treg细胞,并部分逆转细胞因子表达的下调。结论 Decorin高表达可增强正常小鼠脾脏细胞对乳腺癌细胞系4T1的免疫响应性,从而激活抗肿瘤免疫反应。     

CD30／CD30L的功能研究进展

CD30最初发现于何杰金淋巴瘤中的何杰金细胞和Reed-sternberg(RS)细胞,现已知在一些正常淋巴细胞,病毒感染的淋巴细胞,淋巴系统来源的肿瘤细胞及产生Th2型细胞因子的活化T细胞亚群表面也有表达,CD30属于肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族,CD30的生理功能除具有协同刺激信号的传递外,还有其他多种功能,CD30配体（CD30L）属于肿瘤坏死因子（TNF）超家族,CD30L存在于活化的T细胞,静止B细胞,粒细胞,胸腺髓质细胞以及各种白血病细胞。CD30和CD30L交联后,通过TNFR相关因子（TRAF）,包括TRAF1,2,35,导致多样的生理功能信号传导。本文就CD30／CD30L的分子生物学特征,细胞上的表达,生理功能及其与疾病关系的研究做以下综述。     

OX40信号上调Survivin表达对CD4+T淋巴细胞增殖存活的影响

目的　探讨OX4 0信号抑制活化后CD4 T细胞凋亡,维持细胞存活及促增殖作用是否与Survivin相关。方法　分离培养小鼠脾脏CD4 T淋巴细胞,以去除T细胞的脾细胞作为抗原呈递细胞,交联CD3单克隆抗体活化T细胞。用免疫印迹法比较不同时相点,加入OX4 0抗体及转染Survivin负显性突变体基因后,CD4 T细胞中Survivin蛋白表达差异。流式细胞仪检测AnnexinV染色后细胞凋亡数量。〔3H〕TdR掺入法测细胞增殖。结果　CD4 T细胞活化后2～8d ,OX4 0抗体刺激可明显增强Survivin表达,并减少2 5 %细胞凋亡;Survivin突变体降低Survivin蛋白表达后使凋亡增加2 2 %。结论　OX4 0信号能够通过上调Survivin表达来抑制CD4 T细胞凋亡,从而维持细胞存活和增殖。     

Bcl-2家族蛋白参与调节CD3ε和5-氟尿嘧啶介导的T淋巴细胞凋亡

目的：研究Bcl-2家族成员在5-氟尿嘧啶(5-FU)和CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡中的作用，阐述T淋巴细胞凋亡的分子机制，为相关肿瘤的治疗提供依据。方法：用CD3ε特异的单克隆抗体(200μg/ml)和5-FU(2．5μg/ml)单独或联合刺激JK、TJK和T3JK细胞，诱导细胞凋亡，用MTS比色法检测细胞死亡率，用Western blot检测Bid的表达和活化。用脂质体的方法转染细胞。结果：CD3ε特异的单克隆抗体和5-FU分别单独处理TJK细胞，都能诱导其凋亡并伴随Bid的活化，二者联合使用能显著增加TJK细胞凋亡和Bid的活化。Bcl-2过表达可明显降低TJK细胞对5-Fu的敏感性。结论：Bcl-2家族成员参与CD3ε和5-FU诱导的T淋巴细胞凋亡的调节，Bcl-2过表达能显著抑制T淋巴细胞对5-FU的敏感性。     

免疫细胞死亡受体的信号传导途径及其调节

死亡受体 (DeathReceptor)是肿瘤坏死因子受体(TNFR ,TumorNecrosisFactorReceptor)基因超家族的成员 ,具有富含Cys的胞外结构域[1] 和胞内死亡结构域 (DD ,DeathDomain)。死亡结构域具有诱导细胞凋亡的功能 ,有时也可抑制细胞凋亡或介导其它生物学功能。死亡受体包括 :CD95 (也称Fas或Apol)、TNFR1(也称p5 5或CD12 0a) [1,2 ] 、DR3(DeathReceptor 3) (Apo3,WSL 1,TRAMP ,LARD) [3 ] 、DR4 [4]和DR5 (也称Apo2 R ,TRAIL R2 ,TRICK 2 ,或KILL ER) [5] 、p75神经生长因子受体 (NGFR) [6] 和禽源的CAR1[7] 等。…     

人类巨细胞病毒特异性CD8+ T细胞IFN-γ和穿孔素水平的检测

目的研究人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽(pp65495-503, NLV)特异性CD8+ T细胞的功能特性.方法将HLA-A2/NLV四聚体染色与细胞内细胞因子或穿孔素染色相结合,以流式细胞仪直接分析NLV特异性CD8+ T细胞内穿孔素的表达水平,或者在NLV抗原肽刺激6 h后分析γ-干扰素(IFN-γ)的表达水平.结果 NLV抗原肽能诱导hCMV特异性CD8+ T细胞分泌IFN-γ,不同供者特异性CD8+ T细胞产生IFN-γ的比率存在较大差异(55.69±17.64) %,当NLV抗原肽质量浓度为10 μg/mL时IFN-γ阳性细胞百分率最高;未经刺激的特异性CD8+ T细胞内表达较高水平的穿孔素(53.90±16.41)%.结论识别单一表位的hCMV特异性CD8+ T细胞合成IFN-γ和穿孔素的能力存在多样性.     

人膜型LIGHT分子对Mo-DC成熟和T细胞激活的调节作用

利用我们建立的表达人膜型LIGHT分子的基因转染细胞(L929/LIGHT)探讨LIGHT/HVEM信号体外对Mo-DC诱导分化的影响,并进一步研究其对T细胞活化和抗凋亡的共刺激作用。从健康人外周血中分离的单核细胞经GM-CSF联合IL-4诱导形成Mo-DC,流式细胞术分析Mo-DC诱导过程中HVEM和LIGHT的表达;基因转染细胞L929/mock、L929/LIGHT、L929/CD40L或L929/LIGHT联合L929/CD40L,分别经丝裂霉素处理后,与GM-CSF联合IL-4诱导的Mo-DC共育,流式细胞术检测Mo-DC细胞表面成熟标志CD83和CD86的表达,利用FITC-Dextran分析Mo-DC对抗原的摄取能力;L929/LIGHT或L929/mock经丝裂霉素处理后,与抗人CD3单抗激发的T细胞共育,流式细胞术分析CD4+和CD8+T细胞表面活化标志CD25的表达,Annexin V和PI双标记分析T细胞的凋亡率。结果表明,高表达HVEM的单核细胞在诱导形成成熟Mo-D(iDC)的过程中下调了HVEM的表达,成熟Mo-DC(mDC)又上调表达HVEM,而LIGHT在Mo-DC分化过程中呈短暂的诱导性表达;基因转染细胞L929/LIGHT及其联合L929/CD40L能上调Mo-DC表面共刺激分子CD83和CD86的表达,并下调Mo-DC对FITC-Dextran的摄取能力;L929/LIGHT细胞能上调CD4+、CD8+T细胞CD25的表达,并增强T细胞抗凋亡能力。因此,基因转染细胞L929/LIGHT表面表达的人膜型LIGHT分子介导的LIGHT/HVEM共刺激信号对Mo-DC的诱导成熟和T细胞活化及抗凋亡能力具有促进作用。     

GITR及其在免疫调节中的作用

糖皮质激素诱导的TNFR家族相关受体（GITR），也被称为TNFRSF18、AITR（人类）。静止T细胞低水平表达GITR，而CD4^＋CD25^＋调节性T细胞则呈高水平表达。GITR与其配体（GITRL）结合后会增强T细胞激活、增殖、分泌细胞因子、MAPKs和NF-κB激活效应、抑制CD4^＋CD25^＋Treg细胞的功能，从而加强效应性T细胞的活性，有利于增强抗肿瘤免疫和抗病毒免疫。随着生物学环境的变化，GITR激活Siva或者TRAF，起着促进或诱导凋亡的作用。     

中国HIV感染者细胞毒性淋巴细胞内穿孔素的差异性表达

目的 了解中国HIV感染者细胞毒性相关的NK细胞及CD8^＋T细胞内穿孔素表达水平，探讨HIV感染过程中穿孔素表达与机体免疫功能的关系。方法 采集31例未经抗病毒治疗的HIV感染者和经过高效抗逆转录病毒疗法（HAAS）治疗的17例HIV／AIDS患者以及15例健康对照的抗凝全血，应用流式细胞仪胞内染色法检测CD56^＋／CD3^-、CD3^-／CD16^＋NK细胞及CD8^＋／CD3^＋内穿孔素表达的百分数，分析其与NK细胞绝对值、NK细胞百分数、CD4^＋T、CD8^＋T淋巴细胞绝对值及血浆病毒载量的相关性。结果 中国HIV感染者的NK细胞CD56^＋／CD3^-及CD3^-／CD16^＋亚群穿孔素表达百分数（平均13．17％，平均24．05％）高于CD8^＋T细胞穿孔素表达百分数（平均9．03％）；NK细胞内穿孔素表达低于健康对照（P〈0．05，P〈0．05），CD8^＋T细胞内穿孔素表达高于健康对照（P〈0．05）；NK细胞及CD8^＋T细胞内穿孔素表达水平与其绝对计数显著相关，与疾病进展不相关。HAART治疗组NK细胞内穿孔素表达升高，CD8T^＋细胞内穿孔素表达无显著变化。结论 中国HIV感染者NK细胞内穿孔素表达降低，抗病毒治疗后升高；CD8^＋T细胞内穿孔素表达升高，抗病毒治疗后无显著变化。     

CD137研究新进展

CD137是近年新发现的肿瘤坏死因子受体超家族的新成员 ,是一种新的共刺激信号分子。它参与T细胞的活化、分化、增殖、凋亡、信号传导及细胞外粘附 ;活化的CD137参与调节细胞因子对粒细胞的抗凋亡作用 ;CD137作为一个独特的潜在的单核细胞存活因子 ,可诱导单核细胞存活、增殖与粘附 ;CD137作为一种重要的受体亦参与调节树突状细胞 (DC)的功能 ;CD137的配体 (CD137L)表达于癌细胞表面 ,在肿瘤免疫及治疗中起作用 ;自身免疫病中慢性活化的自身反应T细胞表达CD137,CD137的异常表达与免疫疾病的发生存在某种关系 ;CD137在改善骨髓移植后异源T细胞的移植物抗宿主病 (GVHD)和移植物抗白血病 (GVL)等异源免疫反应中亦起重要作用。     

067 CD137研究新进展

CD137是近年新发现的肿瘤坏死因子受体超家族的新成员,是一种新的共刺激信号分子.它参与T细胞的活化、分化、增殖、凋亡、信号传导及细胞外粘附;活化的CD137参与调节细胞因子对粒细胞的抗凋亡作用;CD137作为一个独特的潜在的单核细胞存活因子,可诱导单核细胞存活、增殖与粘附;CD137作为一种重要的受体亦参与调节树突状细胞(DC)的功能;CD137的配体(CD137L)表达于癌细胞表面,在肿瘤免疫及治疗中起作用;自身免疫病中慢性活化的自身反应T细胞表达CD137,CD137的异常表达与免疫疾病的发生存在某种关系;CD137在改善骨髓移植后异源T细胞的移植物抗宿主病(GVHD)和移植物抗白血病(GVL)等异源免疫反应中亦起重要作用.     

γ-氨基丁酸对高脂膳食小鼠免疫功能的影响

目的探讨γ-氨基丁酸(GABA)对高脂膳食小鼠免疫功能的影响及其机制。方法 30只雄性C57BL/6小鼠被随机分为正常组(正常饲料),高脂组(高脂饲料),GABA干预组(高脂饲料,饮用水中加入2 mg/ml的GABA)饲喂20周后,测定小鼠体质量和胸腺、脾脏脏器指数,流式检测小鼠外周血中CD4+细胞、CD8+细胞和CD4+CD25+CD127-/low调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的比例,分选出外周血Treg并测其活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位水平及基因Nrf2、GSK-3βmRNA表达水平。结果高脂膳食小鼠胸腺、脾脏脏器指数、CD4+/CD8+比值、Treg比例的显著下降显示其免疫功能受到损伤。Treg中的ROS水平显著上升,线粒体膜电位下降。Nrf2 mRNA表达水平显著下调,GSK-3βmRNA表达水平显著上调,并且基因的表达水平与Treg的ROS水平和线粒体膜电位水平显著相关。通过添加GABA能够有效改善高脂膳食诱导的机体免疫功能损伤,并可能通过GSK-3β、Nrf2基因的作用来减少过量ROS导致的调节性T细胞线粒体膜电位降低。结论长期高脂膳食可导致免疫功能损伤,GABA能够改善免疫功能并通过清除自由基来减少调节性T细胞凋亡。