一步法RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因

目的：建立一步法RT—PCR检测APL患者PML—RARα融合基因的实验方法。方法：用特异引物一步法RT—PCR检测PML—RARα融合基因,并作灵敏度试验。结果：本方法的灵敏度可达到1：10^3水平。对25例APL患者检测PML—RARα融合基因,阳性率为100％,并可检测出PML—RARα融合基因各种融合方式。结论：一步法RT—PCR检测PML—RARα融合基因有很好的灵敏度和特异性,操作简便、快速,特别适用于临床检测。     

急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因检测的临床意义

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测PML/RARα融合基因在急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断中的应用价值。方法应用常规细胞遗传学分析28例APL患者的染色体核型,同时用FISH法检测PML/RARα融合基因。结果 28例初诊的APL患者254例常规核型分析检出t(15;17)(q22;q12);2例患者核型正常;另1例未检出t(15;17),核型分析结果为涉及15和17号染色体的复杂异常;FISH检测所有病例均存在PML/RARα融合基因。结论 FISH法行PML/RARα融合基因检测特异性和敏感性好,是诊断APL的可靠方法。     

急性早幼粒细胞白血病患者PML/RARα融合基因首次转阴时间及其临床意义探讨

目的:为了观察和分析急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)PML/RARα融合基因首次转阴时间和首次转阴时间长短的临床意义。方法:选取我院初诊APL患者60例,按照APL临床路径行诱导缓解及缓解后巩固治疗和维持治疗;应用多重巢式PCR动态监测APL患者PML/RARα融合基因的表达水平变化,计算首次转阴时间,随访观察并评价首次转阴时间的临床意义。结果:除3例死亡和1例失访外,其余56例初诊APL患者经正规治疗后,其PML/RARα融合基因均在24至381 d之间首次转阴,平均首次转阴时间为(131±90)d。首次转阴时间在PML/RARα融合基因不同亚型之间存在差异,L型转阴时间较S型的短(P=0.032),而不同年龄、性别、危险度分层组别之间差异均无统计学意义。首次转阴后的56例患者分别随访25 d至1979 d,中位随访时间为946 d,其中1例133 d首次转阴患者维持3个月后转阳并且随后出现临床复发,其余55例患者均长期保持分子水平缓解。结论:初诊APL患者PML/RARα融合基因平均约在正规治疗后4个月首次转阴;不同基因亚型之间首次转阴时间存在差异。PML/RARα融合基因首次转阴时间可客观反映APL患者治疗后白血病细胞的消减水平,对临床治疗有提示作用,但不能作为判断预后的绝对依据;以PML/RARα融合基因动态监测微小残留病灶对分析APL复发具有重要的临床意义。     

巢式RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的意义

目的 探讨巢式RT-PCR技术在检测急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARα融合基因的价值。 方法 采用巢式RT-PCR检测218例初诊为APL患者的PML/RARα融合基因的表达水平及在部分患者的动态变化;随机选择39例APL完全缓解(CR)的患者,分别用流式细胞术(FCM)和巢式RT-PCR监测外周血或骨髓中的微小残留病(MRD)白血病细胞。 结果 在确诊的167例APL患者中PML/RARα融合基因阳性率为90.4%(151/167);39例APL-CR患者中PML/RARα融合基因阳性率76.9%(30/39);FCM和巢式RT-PCR监测APL-CR患者MRD有很好的一致性(P＞0.05)。 结论 巢式RT-PCR对APL的诊断有高灵敏度和高特异性;对APL的疗效及预后判断有重要临床意义。     

急性早幼粒细胞白血病PML—RARα融合基因检测的临床意义探讨

目的探讨PML-RARα融合基因检测在临床检查急性早幼粒细胞白血病（APL）治疗前后的意义。研究PML—RAR饯融合基因含量与急性早幼粒细胞白血病（APL）病变进程的关系。方法运用RT-PCR技术检测急性早幼粒细胞白血病患者治疗前后骨髓内PML-RARα融合基因含量。结果所有51例初诊为APL的患者均做PML—RARα融合基因检测,其中阳性4l例,阳性率为80．4％。初诊为APL的51例患者治疗18个月后（进行随访）,其中死亡3例,阳性3例,阳性率为5．9％。结论PML-RARα融合基因的检测对APL诊断具有重要价值。定期检测PML—RAR仅基因可尽早发现分子学复发以及时治疗,并避免血液学复发。     

骨髓细胞形态学诊断早期急性早幼粒粒细胞白血病1例并文献复习

<正>急性早幼粒细胞白血病(APL)是急性粒细胞白血病的一种亚型,其特征是15号染色体上的早幼粒细胞白血病基因(PML)与17号染色体上的维甲酸受体α基因(RARα)发生易位。该融合基因的转录导致PML/RARα融合蛋白通过与RAR元素的相互作用阻断参与骨髓细胞分化的关键基因的表达。PML/RARα融合蛋白抑制PML和RARα的正常功能,抑制细胞凋亡^[1]。临床上APL发病常较为凶险,早期弥散性血管内凝血(DIC)死亡率高,     

急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因检测及临床意义

急性早幼粒细胞性白血病(APL)是一组累及 17号染色体上的维甲酸受体α基因,其中t(15;17)(q22;q21)易位后形成的早幼粒细胞性白血病(PML)/维甲酸受体α(RARα)融合基因在APL中的重视率最高,占90%以上[1].本研究以34例形态学诊断为APL患者和2例疑似APL患者为对象,采用筑巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测患者PML/RARα融合基因,并追踪观察部分患者PML/RARα融合基因的动态变化,探讨其在诊断、疗效评估及预测预后中的意义.     

实时定量PCR检测46例初诊急性早幼粒细胞白血病患者PML/RARαmRNA的分子表达

本研究探讨实时定量PCR（Q-PCR）检测PML／RARα mRNA的方法学，并对46例初诊急性早幼粒细胞白血病（APL）患者骨髓标本进行检测。构建PML／RARα的bcr1型和ber3型转录本以及内参照abl基因转录本的阳性标准品质粒；利用ABI Prism 7500型Q-PCR仪对46例初诊APL患者和40例非APL患者骨髓标本进行检测，PML／RARα mRNA定量结果以校正比值（NQ）表示，NQ=PML／RARα mRNA拷贝数／ABLmRNA拷贝数；应用四色流式细胞术检测免疫表型。结果显示，Q-PCR结果的日间差和日内差平均变异系数（CV）分别为1．58％和0．88％。可重复敏感度为可以检测5 copies／100ng RNA。40例非APL患者PML／RARα mRNA均为阴性。46例初诊APL患者PML／RARα mRNA表达量NQ中位值为0．450（0．084—1．082）。比较32例bcr1型和14例bcr3型两组患者的特征表明，PML／RARα mRNANQ中位值分别为0.454（0.084—1、082）和0．386（0.151—0．848）（P〉0．05）。形态学诊断M3v的患者比例分别为9.40％和48.96％（P〈0.05）；初诊时WBC中位数分别为2．15（0．2—59．6）和9．35（0．91—122．8）（P〈0．05），而在性别、年龄、初诊时血红蛋白和血小板计数、骨髓中APL细胞比例、DIC指标等方面无差异。流式细胞仪术检测时，CD45／SSC射门情况下，APL细胞群分布可以分为两类：高侧向角（L-SSC，粗颗粒）和非高侧向角（NL-SSC，细颗粒）两类。bcr1型患者中85．70％表现为L—SSC，而bcr3型患者中64．29％表现为NL-SSC。结论：建立的Q—PCR方法稳定可靠，敏感度高；berl型和bcr3型APL患者的PML／RARetmRNA表达量无差异，bcr3型APL患者中形态学M3v比例和WBC数比bcr1型患者高；PML／RARα不同转录本类型和免疫表型以及细胞形态学之间有一定的相关性。     

骨髓涂片双色荧光原位杂交检测急性早幼粒细胞白血病的PML/RARα基因重排

为了探讨双色荧光原位杂交(D—FISH)技术在骨髓涂片(BMS)上检测PML／RARα基因重排对急性早幼粒细胞白血病(APL)的诊断价值，采用光谱绿(Spectrum Green)和光谱桔红(Spectrum Orange)分别标记PML和RARα两种基因探针对27例临床拟诊为APL的患者进行BMS-D—FISH检测，并与常规细胞遗传学(CCG)、逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测结果作比较。结果表明：18例初诊患者中，CCG检出t(15；17)者14例，他们的BMS-D-FISH和RT—PCR均证实有PML／RARα基因重排，从而肯定了对APL的诊断；而CCG未检见t(15；17)易位的4例中有1例显示阳性的BMS-D-FISH和RT—PCR结果，证实该例有隐匿易位存在，其余3例的两种检测均是阴性，因而他们被重新诊断为AML而不是APL；9例缓解患者中，CCG查出1例部分缓解患者有t(15；17)易位，其BMS-D—FISH和RT—PCR均为阳性，而8例完全缓解患者(6例伴正常核型，2例未作CCG检测)的BMS-D-FISH和RTPCR检测显示6例阴性，2例阳性，提示该2例患者有微小残留病(MRD)存在。结论：BMS—D—FISH是检测APLPML／RARα基因重排的敏感可靠方法，有助于APL确诊及其MRD检测，适合于CCG检测失败、伴有隐匿易位、RT—PCR检测缺乏材料以及需作回顾性研究者。     

应用实时定量逆转录聚合酶链反应方法检测急性早幼粒细胞白血病患者PML-RARα基因转录本的临床意义

急性早幼粒细胞白血病（APL）特征性染色体改变形成了t（15；17），涉及PML—RARα融合基因。由于全反式维甲酸、砷剂的使用，目前APL患者的生存期大大延长，但是缓解期的患者仍存在复发的危险性。我们利用实时定量RT—PCR方法检测了56例APL患者PML—RARα融合基因转录本的表达，以便动态观察这些患者的治疗效果，提高治愈率。现将结果报告如下。     

CD117/CD11b在急性早幼粒细胞白血病不同病期的表达变化

为了了解CD117／CD11b在急性早幼粒白血病细胞初诊及治疗后的表达变化，探讨其表达变化对APL诊断和预后的意义，采用CD45／SSC双参数散点图设门方法进行三色或四色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原分析，应用RT—PCR技术检测骨髓中PML／RARα融合基因的mRNA表达。结果表明：APL与CML慢性期都高表达MPO、CD13和CD33，而几乎不表达CD34、HLA—DR及T，B淋巴系列标志。有14．5％的APL患者表达cD56，有48，2％的APL患者表达CD15，CD15在APL的表达明显低于CML慢性期（48，2％船95．2％，P〈0．01）。有78．3％的APL患者表达CD117，而在CML慢性期不表达CD117。CD11b在APL的表达率仅为16．9％，而在CML慢性期几乎都表达CD11b。有72．3％的APL患者呈CD117^＋CD11b^-表型，而在CML慢性期患者细胞中均未见此表型，它几乎均呈CD117^＋CD11b^-表型。11例表型为CD117^＋CD11b^-的APL患者经治疗获完全缓解，在2个月以后CD117阳性细胞百分率均小于5％，同时细胞高表达CD11b，呈CD117^-CD11b^＋表型。检测31例APL患者PML／RARα融合基因，25例该融合基因阳性，阳性率为80．6％，其中16例（64％）为PML／RARα基因L型，9例（36％）为S型。16例PML／RARα融合基因L型APL患者CD117表达有14例（87．5％），9例S型CD117表达有4例（44．4％），6例PML／RARα融合基因阴性APL患者CD117表达有2例（33．3％）。结论：CD117／CD11b表型分析有助于APL与其它AML亚型及CML慢性期细胞的鉴别，CD117’CD11b一表型有助于APL细胞和APL患者缓解恢复期的良性髓系增生细胞的区分，对APL患者的治疗方案选择、预后判断以及发病机理的研究等均有重要价值。     

伴两个t(15;17)易位的四倍体核型急性早幼粒细胞性白血病的实验和临床研究

目的 探讨伴有2个t(15;17)易位的四倍体核型APL的临床和实验室特点.方法 选取5例伴有2个t(15;17)易位为特征的四倍体核型APL病例,采用骨髓细胞直接法或短期培养法制备染色体,用R显带技术进行核型分析;采用流式细胞术对1例患者进行DNA倍性分析,检测APL患者白血病细胞表面CD2、CD13、CD15、CD33和CD34的表达;采用PML/RARα双色探针和FISH技术,检测其中1例APL患者的PML/RARα融合基因;采用RT-PCR技术,检测2例APL患者的PML/RARα融合基因的转录本.结果 5例APL患者均为男性,中位年龄38岁.骨髓细胞形态学检查显示,骨髓早幼粒细胞胞体巨大、胞核畸形.R显带染色体分析显示,5例APL患者均有以2个t(15;17)(q22;q12)为特征的四倍体或近四倍体核型细胞,其中1例同时伴有t(15;17)二倍体核型细胞和1个正常细胞,2例同时伴有正常核型的细胞.5例APL患者中,1例经间期FISH检测证实,含有2个PML/RARα融合荧光信号;2例经RT-PCR检测证实PML/RARα融合基因阳性.5例APL患者中,1例患者的白血病细胞仪表达CD33;其余4例表达CD13和CD33,其中2例同时表达CD2,1例同时表达CD34.采用流式细胞术对1例患者进行DNA倍体分析,发现四倍体克隆峰,其DNA指数为1.998,变异系数为8.2%.全部病例经全反式维甲酸和(或)砷剂治疗后均获得完全缓解.结论 伴2个t(15;17)易位的四倍体APL患者的骨髓涂片中均可见到巨大畸形白血病细胞;此类患者多为短型PML/RARα转录本;此类核型异常并不影响全反式维甲酸的疗效及预后.     

荧光原位杂交技术在急性髓系白血病诊断中的应用

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)在急性髓系白血病(AML)的诊断中的意义。方法对初发的经骨髓常规形态学、细胞化学染色和免疫分型初步诊断的10例AML-M2、19例AML-M3,11例AML不能确定为M2或者M3的患者,进行FISH技术检测AML1/ETO和/或PML/RARα融合基因,进而协助诊断和指导治疗。结果10例AML-M2中AML1/ETO融合基因阳性率40%(4/10);19例AML-M3中PML/RARα融合基因阳性率89%(17/19),1例AML1/ETO融合基因阳性,确诊为AML-M2;11例AML中AML1/ETO融合基因阳性率18%(2/11),PML/RARα融合基因阳性率45%(5/11),其余4例未检测到以上两种融合基因。结论FISH是一种敏感的分子遗传学的新技术,具有高效、快速、灵敏等优点。对AML的诊断分型具有重要帮助,进一步指导临床治疗。     

急性早幼粒细胞白血病患儿PML／RARα融合基因罕见型2例

目前认为急性早幼粒细胞白血病（APL ）属于急性髓细胞白血病（AML ）的特殊类型［1］,由于 APL 细胞存在 t （15;17）（q22;q21）,该易位使第15号染色体长臂2区2带的早幼粒细胞白血病基因（PML）和第17号染色体长臂2区1带的维甲酸受体‐α（RARα）基因形成 PML ／RARα融合基因,该基因在产生过程中因断裂点不同及 mRNA 的剪切、拼接不同会产生不同的异构体并在 APL 发病中起到重要作用［2］。本院收治2例APL 患儿出现新的 PML ／RARα融合基因变异体,现报道如下。     

急性早幼粒细胞白血病PML/RARα异型的临床意义

为评价急性早幼粒细胞白血病(APL)PML／RARα异型与临床治疗及预后的相关性，对7l例诱导治疗的APL患者定期进行血像、骨髓像检查，用巢式RT—PCR检测PML／RARα不同转录本。结果表明：短型(s)和V型白细胞总数比长型(L型)显著升高，所以较易早期发生严重的出血合并症。S型和V型PML／RARα患者的复发率高于L型患者。结论：APL患者PML／RARα异型可作为独立的预后因素。     

PML-RARα及RARα融合蛋白在三硫化二砷诱导的NB4细胞凋亡中的作用研究

为研究PML-RARα及RARα融合蛋白在三硫化二砷（As2S3)诱导的人早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡中的作用，本研究应用细胞形态观察、流式细胞术测定及DNA电泳等方法观察三硫化二砷对NB4细胞的诱导凋亡作用，用染色体G显带技术、反转录PCR及Western印迹测定这一过程中PML－RARα融合基因及其表达产物、野生型RARα蛋白的变化。结果表明，三硫化二砷在0．5－2μmol/L之间能诱导NB4细胞凋亡，在此过程中PML－RARα融合基因无明显变化，但PML－RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白明显减少。结论提示PML－RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白的降解在三硫化二砷诱导的NB4细胞凋亡过程中可能起了重要作用。     

RNA干扰技术应用于急性早幼粒细胞白血病治疗的实验研究进展

急性早幼粒细胞白血病（APL）是常见的血液系统肿瘤.几乎所有APL患者均伴有特异性的染色体t（15;17）（q22;q21）易位,并形成特征性的早幼粒细胞白血病/维甲酸受体α（PML/RARα）融合基因.RNA干扰（RNAi）技术具有转录后基因沉默效应,可特异性地抑制癌基因、癌相关基因或突变基因的过度表达,因此在疾病的基因治疗方面得到广泛关注.目前,RNAi技术治疗APL可选择的靶点主要有①PML/RARα融合基因;②APL细胞与正常细胞之间的差异基因;③涉及APL髓外复发、出血及其并发症的基因.现就近年来RNAi技术应用于APL治疗的实验研究进展作一综述.     

荧光原位杂交技术在急性早幼粒细胞白血病诊断中的应用

目的　探讨临床表现急性早幼粒细胞白血病 (APL)明显特征而核型分析正常或非典型t(15 ;17)患者是否伴有分子异常及荧光原位杂交 (FISH)技术在APL诊断中的应用价值。方法　应用常规细胞遗传学分析APL初诊患者 193例 ,选取其中 32例进行FISH法检测。部分病例应用RT PCR作补充检测。结果　 193例APL患者中 132例 (6 8.4 % )常规核型分析检出t (15 ;17) (q2 2 ;q12 )。 193例中选出 32例按核型分析结果分为 3组 :第 1组 14例检出t(15 ;17) ;第 2组 13例未检出t(15 ;17) ;第 3组 5例为涉及 15和 17号染色体的变异复杂易位。第 1组病例FISH检测结果均为阳性 ,与核型分析相符。第 2组核型分析未发现t(15 ;17) ,但FISH结果证实该组病例均具有PML/RARα融合基因。第 3组FISH检测不但检出PML/RARα融合基因 ,而且确定其阳性信号不在 15 q上 ,而位于除 15 ,17号染色体外的其他染色体上。结论　临床表现APL特征的患者 ,不论核型分析是否发现典型t(15 ;17) ,FISH和RT PCR检测均存在PML/RARα融合基因。在APL的诊断方面 ,FISH法不仅具有高灵敏度和高准确度 ,而且可以精确定位复杂核型中融合信号的位置。因此对于常规细胞遗传学分析不能确定的APL初诊患者 ,FISH检测是必要的补充。     

检测PML/RARα基因的双重荧光定量PCR方法的建立

目的建立在一个反应体系中同时检测融合基因PML/RARα和内参基因ABL的双重荧光定量PCR方法。方法从DNA聚合酶含量、Mg2+浓度和引物浓度等方面进行优化,建立检测PML/RARα和ABL基因双重荧光定量PCR体系,从分析灵敏度,批内、批间精密度以及检测临床样本阳性率等方面对双重荧光定量PCR反应体系进行性能评价,并同时和北京思尔成公司荧光定量PCR试剂盒进行比较,分析两者的一致性。结果成功构建双重荧光定量PCR反应体系,检测质粒灵敏度为103copies/ml,检测NB4细胞的灵敏度为10-3,反应体系批内、批间精密度Ct值的变异系数CV都小于5%,检测20例确诊为APL病人,其检测阳性率,和北京思尔成公司的PCR反应试剂一致。结论成功开发出稳定的双重荧光定量PCR试剂盒,其操作简单,成本低,误差小,能够有效地用于APL分子生物学分型诊断、用药指导、预后观察及MRD监测。     

实时定量聚合酶链反应动态监测白血病治疗后微小残留病研究

目的建立急性早幼粒细胞白血病(APL)实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测方法,并检测APL治疗后微小残留病(MRD),评价MRD检测的意义。方法应用RQ-PCR对96例APL患者的骨髓标本进行分析,检测PML/RARa融合基因的转录水平。结果 (1)RQ-PCR与传统巢式PCR(RT-PCR)检测结果的差异有统计学意义(P<0.05),提示应用RQ-PCR检测PML/RARa融合基因转录水平的敏感性高于RT-PCR。(2)RQ-PCR可对PML/RARa融合基因进行定量检测,监测患者的PML-RARa融合基因拷贝数水平变化,结果显示初诊时较高,有效治疗后迅速下降,复发时又出现上升,提示若患者在完全缓解(CR)后PML/RARa融合基因拷贝数呈现上升趋势,其复发机率大。结论 RQ-PCR检测作为APL治疗后微小残留病检测的方法,准确可靠,可以判断治疗效果,预测疾病复发,早期给予干预治疗,有重要的临床应用价值。