色素上皮衍生因子对大鼠视网膜缺血 再灌注损伤的保护作用

目的已证实色素上皮衍生因子(pigment epithelium-deriv ed factor,PEDF)对中枢神经细胞有抗凋亡作用。本实验评价其对压力诱发的视网膜缺血再灌注的影响。方法经前房灌注维持眼压110 mm Hg (1 mm Hg = 0.133kpa),45 min,建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。 随后立即向玻璃体注射10　μ1(0.1μg/μl)PEDF,分别于2d和7d摘除眼球,测量塑 料包埋切片的平均视网膜内层厚度(mean thickness of inner retinal layer,MTIRL) 和视网膜节细胞(retinal ganglion cells,RGC)计数。结果PEDF玻璃体注射7d后治疗组的MTIRL和RGC明显高于对照组[(118.1±5．0) μm对(949±3.0)μm, P<0.05;(6.0±1．0)个/100 μm对(4.5±0.5)个/100 μm, P<0.05]。结论玻璃体内注射PEDF有助于防止视网膜缺血再灌注后神经变性和细胞死亡。(中华眼底病杂志,2001,17:138-140)     

色素上皮衍生因子对糖尿病视网膜病变神经细胞的保护作用

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）是糖尿病眼部最严重的并发症,诸多研究表明,在糖尿病早期即已发生视网膜神经元损害,逐渐危害患者视力。色素上皮衍生因子（pigment epithelium—derived factor,PEDF）是从胎儿视网膜色素上皮细胞培养液中发现的具有保护神经元和抗新生血管形成双重效能的细胞因子。PEDF可修复DR受损的视网膜神经细胞及维持视网膜内环境稳定,从而为DR治疗提供新的理论依据。本文就PEDF对DR中神经细胞保护机制的研究现状和进展作一综述。     

色素上皮衍生因子与视网膜疾病的研究进展

研究表明色素上皮衍生因子（ pigment epithelium-derived factor, PEDF） 能影响视网膜分化、发育和成熟，对视网膜缺血性损伤有促进修复作用，是新生血管的天然抑制剂。现将PEDF的研究历史、PEDF的结构、生理作用以及与视网膜疾病的关系研究现状综述如 下。（中华眼底病杂志，2003，19：68-70）     

色素上皮衍生因子对大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨色素上皮衍生因子（PEDF）对慢性高眼压条件下大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的作用。方法雌性SD大鼠36只,随机分为高眼压＋PEDF组（A组）、高眼压＋去离子水组（B组）和假手术＋PEDF组（C组）,A组、B组模型的制作应用巩膜浅层静脉烧烙法建立慢性高眼压模型,C组仅剪开球结膜,不烧烙巩膜浅静脉。A组、C组在模型建立后即刻用10μL微量注射器于大鼠角膜缘后2mm处刺入玻璃体腔,抽出玻璃体2μL,再向玻璃体腔内注射0．05g／L重组大鼠PEDF2μL,B组同法注入等量的去离子水。在3d和14d后处死动物,摘除眼球,将视网膜组织行冰冻切片,用TUNEL法及Fluoro—Jade（FJ）荧光染色检测各组RGCs的凋亡和变性。结果术后3d、14d时A组和B组眼压均明显升高,与同时间点C组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）;各组术后3d和14d间的眼压比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。TUNEL检测显示,A组、C组3d和14d RGCs的凋亡数目均明显少于同时间点B组（P〈0．05）,A组14d的凋亡细胞数明显少于3d（P〈0．05）。FJ荧光染色结果显示,A组、C组3d和14d变性RGCs数均明显少于B组（P〈0．05）,A组14d的变性细胞数较3d时明显减少（P〈0．05）。结论玻璃体腔注射PEDF可减少慢性高眼压大鼠RGCs的凋亡和变性。     

色素上皮衍生因子与增生性视网膜疾病

色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)能影响视网膜分化、发育和成熟,对视网膜缺血性损伤有促进修复作用,是新生血管的天然抑制剂.现将PEDF 在一些增生性视网膜疾病中的作用作一综述.     

腺病毒载体介导的色素上皮衍生因子对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察重组腺病毒介导的色素上皮衍生因子(Ad-PEDF)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:选用健康大鼠96只,随机分为正常组、缺血再灌注组、缺血再灌注+Ad-CMV组,缺血再灌注+Ad-PEDF组,以前房加压的方法制备大鼠视网膜缺血再灌注模型,缺血再灌注+Ad-CMV组,缺血再灌注+Ad-PEDF组分别玻璃体腔注射Ad-CMV或Ad-PEDF1μL(滴度3.8×109/PFU),每组按照时间点12,24,72,168h,为4亚组,光学显微镜观察视网膜组织切片情况,并测量视网膜内层厚度及神经节细胞层神经节细胞数量。以TUNEL方法观察大鼠视网膜神经节细胞凋亡情况。结果:Ad-PEDF组视网膜内层厚度均超过缺血组及缺血+Ad-CMV组,Ad-PEDF组神经节细胞数目多于缺血组及Ad-CMV组,Ad-PEDF组视网膜神经节细胞凋亡细胞少于缺血组及Ad-CMV组,凋亡程度减轻,上述差异均具有显著性(P<0.05)。结论:腺病毒介导的色素上皮衍生因子玻璃体腔注射能够恢复大鼠视网膜缺血再灌注损伤所致的视网膜内层厚度降低,神经节细胞密度减少,具有保护作用。     

色素上皮衍生因子在糖尿病视网膜病变中的研究进展

色素上皮衍生因子(Pigment epithelium-derived factor,PEDF)是与糖尿病视网膜病变关系密切的因子之一.PEDF通过抑制视网膜内皮细胞生长和迁移,弱化血管新生而延缓糖尿病视网膜病变病程进展和减轻视网膜的损伤.PEDF成为未来治疗糖尿病视网膜病变的新药具有广阔前景.本文就PEDF的功能及其在治疗糖尿病视网膜病变中的新进展进行综述.     

色素上皮衍生因子的表达与早期糖尿病大鼠视网膜血管形态学的改变

目的探讨色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)mRNA在不同病程糖尿病大鼠模型视网膜中的表达水平及其与早期糖尿病大鼠视网膜血管病变之间的关系。方法 48只健康Wistar大鼠随机分成糖尿病1个月组(DM1)、3个月组(DM3)和6个月组(DM6)与正常对照1个月组(CON1)、3个月组(CON3)、6个月组(CON6),每组各8只。链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠动物模型,分别于造模后1个月、3个月、6个月行视网膜血管铺片和PEDFmRNA的原位杂交,观察大鼠视网膜微血管的改变和PEDFmRNA表达情况。结果 (1)DM3和DM6组可见毛细血管迂曲,走形不规则,管腔粗细不均,以DM6组病变最重,可见无细胞毛细血管。(2)周细胞数量:DM1组与CON1组相比差异无统计学意义(CON1组6.45±0.64,DM1组6.52±0.75,P>0.05),DM3及DM6组均较CON3组、CON6组明显减少(CON3组6.51±0.70、DM3组6.06±0.65,CON6组6.47±0.60、DM6组5.45±0.80),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。(3)CON1和DM1组PEDFmRNA在节细胞层、内核层及RPE层均有阳性细胞表达,CON1组64±10、DM1组53±8,差异无统计学意义(P>0.05);CON3组和DM3组PDEFmRNA在节细胞层、内核层、RPE层阳性反应细胞表达减少,CON3组68±11、DM3组49±12,差异有统计学意义(P<0.05);CON6组和DM6组PEDFmRNA仅在内核层和节细胞层表达,RPE层只见极少阳性细胞,CON6组58±8、DM6组34±14,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论糖尿病视网膜病变的发生、发展与周细胞数量减少、PEDFmRNA表达降低密切相关,两者的表达同糖尿病视网膜病变的发生、发展存在时效和空间关系。     

色素上皮衍生因子在眼部疾病中的研究进展

色素上皮衍生因子(PEDF)是分子量为50kDa的一种分泌型糖蛋白,最初发现由色素上皮细胞分泌,随后发现其广泛分布于全身多种器官组织中并发挥多种生物学作用。近年来,大量研究已经证实PEDF在眼部组织中通过与多种受体结合启动广泛的细胞反应,具有调节血管生成、抗炎、抗氧化应激和营养神经的作用。新近的研究发现,应用外源性PEDF在干眼和角膜损伤的修复方面具有较好治疗效果。除此外,通过编码PEDF基因的治疗方法在年龄相关性黄斑变性及糖尿病视网膜病变的治疗中也展现出良好前景。本综述主要对近年来PEDF在干眼、角膜损伤、年龄相关性黄斑变性和糖尿病视网膜病变等疾病中的潜在治疗作用及局限性做简要概述,为进一步研究PEDF在诊治眼部疾病方面提供帮助。     

色素上皮衍生因子对高氧诱导的新生鼠视网膜病变的影响

目的观察色素上皮衍生因子（PEDF）对高氧诱导的新生鼠视网膜病变模型的影响。方法出生7dWistar大鼠50只,分为空气组、空气PEDF组、高氧组、高氧PBS组和高氧PEDF组5组。氧箱内饲养5d建立高氧诱导的新生鼠视网膜病变模型,12、14、16d时腹腔内注射PEDF或PBS。在鼠龄17d时,进行视网膜形态学及组织病理学检测,以及血管直径测量、周边视网膜血管覆盖率测定及视网膜新生血管计数。结果视网膜铺片可见高氧组、高氧PBS组较空气组、空气PEDF组新生血管丛增多,高氧PEDF组较高氧组、高氧PBS组视网膜新生血管减少。组织病理学检测突破视网膜内界膜的视网膜新生血管计数可见高氧PEDF组视网膜血管直径明显高于高氧组（P〈0.01）、与空气组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;高氧组周边视网膜血管覆盖率明显高于高氧PEDF组（P〈0.01）、与空气组相比差异无统计学意义（P〉0.05）;高氧组视网膜新生血管数量明显高于高氧PEDF组（P〈0.01）、与空气组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 PEDF对高氧诱导的新生鼠视网膜病变模型具有抑制作用。     

氧化损伤对体外培养人视网膜色素上皮细胞PEDF的影响

目的研究氧化损伤对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞表达色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)的影响。方法体外培养人RPE细胞,加入浓度为600μmol.L-1H2O2分别作用不同时间(2h、8h、24h),采用免疫细胞化学法检测PEDF蛋白的表达,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测PEDF mRNA。结果免疫细胞化学染色对照组即有PEDF的阳性表达,而氧化损伤2h、8h、24h PEDF蛋白阳性表达量逐渐减少,染色由棕黄色变为黄色。各时间段两组结果比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测PEDF mRNA量与PEDF蛋白表达变化一致。结论氧化损伤能促使人RPE细胞PEDF表达下调,并在一定范围内与作用时间有关。     

视网膜色素上皮损伤后相邻感光细胞及脉络膜血管的病理变化

目的:研究视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)损伤后相邻感光细胞和脉络膜血管的病理变化。方法:机械性刷除青紫蓝兔眼底髓线上方的RPE细胞,观察术后7,14,30d和90d清除区相邻感光细胞和脉络膜血管变化。结果:RPE细胞清除术后相邻的感光细胞发生退行性改变和死亡,脉络膜毛细血管萎缩。结论:RPE清除术可模拟萎缩型年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)及渗出型AMD剥膜以后的病理变化,为自体RPE移植挽救损伤的感光细胞的实验提供了良好的动物模型。     

色素上皮衍生因子与眼部新生血管

色素上皮衍生因子(PEDF)是人及动物眼中天然存在的一种糖蛋白,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族,主要来源于视网膜色素上皮细胞,也可见于角膜、房水、玻璃体及视网膜中。它具有抗血管新生和神经保护的双重作用。目前研究认为PEDF是最为有效的眼内新生血管天然抑制剂,对新生血管的形成起着重要的调控作用。     

高糖对人视网膜色素上皮细胞VEGF及PEDF表达的影响

目的 探讨高糖对人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮源性生长因子(PEDF)的干预作用.方法 采用HRPE细胞株,将细胞分为正常对照组(NG,5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,15、20、30 mmol/L葡萄糖)、高渗组(HM,24.4 mmol/L甘露醇+5.6 mmol/L葡萄糖).应用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测VEGF及PEDF mRNA的表达.用ELISA技术检测细胞上清液中VEGF蛋白的表达.结果 高糖作用下VEGFmRNA和蛋白表达显著增高,PEDFmRNA的表达受到显著抑制.结论 高糖可从转录水平及蛋白水平诱导HRPE细胞VEGF的表达,并抑制PEDF的表达.     

超声联合载色素上皮源性因子免疫纳米脂质体靶向治疗脉络膜新生血管

目的研究超声联合载色素上皮源性因子（PEDF）免疫纳米脂质体对脉络膜新生血管（CNV）的靶向治疗作用。方法以CNV内皮细胞上血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）为靶向位点,将其配体寡肽连接到纳米脂质体上,再反向装载PEDF,制备能与CNV内皮细胞特异性结合的免疫纳米脂质体。对48只BN大鼠右眼行半导体倍频激光（波长为532nm）光凝术建立CNV模型。光凝后7d,实验组鼠尾静脉分别注射游离PEDF、载PEDF脂质体、载PEDF免疫脂质体,联合眼局部超声波辐照20s,并设立玻璃体腔注射PEDF组和对照组。光凝后14d,脉络膜巩膜冰冻切片观察免疫脂质体对CNV的靶向性。FITC-右旋糖酐标记脉络膜巩膜铺片行新生血管定量分析。结果载PEDF免疫脂质体可特异性靶向结合CNV。CNV与FITC标记的PEDF免疫纳米脂质体结合而呈现绿色荧光,正常脉络膜血管不显现荧光。玻璃体腔注射PEDF组及鼠尾静脉注射游离PEDF、载PEDF脂质体、载PEDF免疫脂质体组CNV面积均较对照组减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。超声联合PEDF免疫纳米脂质体组对CNV的抑制作用强于玻璃体腔注射PEDF组（P〈0.05）。结论动物实验证实PEDF免疫纳米脂质体可特异性结合CNV细胞,超声可增强PEDF免疫纳米脂质体对CNV的抑制作用,该方法有望为眼新生血管的治疗提供新途径。     

L-cystein protects the pigment epithelium from acute sodium iodate toxicity

Intravenous sodium iodate damages the retinal pigment epithelium, causing immediate loss of the electroretinogram c-wave and eventual pigmentary retinopathy. L-cystein, an agent that enhances the c-wave, has been reported to prevent the late development of pigmentary degeneration. We found in rabbits that L-cystein given 30 min before, or simultaneously with (but not 30 min after) sodium iodate also blocks the loss of the c-wave. This result occurred at doses of L-cystein lower than those needed to produce enhancement of the c-wave, suggesting that these two actions of L-cystein may be independent. The iodate-blocking action of L-cystein may depend on chemical interaction.     

Clinical electrophysiology of the retinal pigment epithelium

There is no ideal electrophysiological test for retinal pigment epithelial (RPE) function. The light-induced responses (EOG, c-wave, fast oscillation) that require photoreception are not pure RPE signals, and even the widely-used EOG has not been associated with any specific physiological disturbance of the RPE or retina. The discovery of non-photic RPE responses (hyperosmolarity, acetazolamide and bicarbonate) has enhanced the possibility of finding tissue-specific RPE tests, but these responses have yet to be correlated with specific RPE functional activity or pathology. We may face a dilemma in our search for RPE tests, insofar as electrophysiology measures membrane changes, but RPE membrane activity is related only indirectly to many functions of the RPE cell. These concerns notwithstanding, RPE electrophysiology can be a valuable clinical tool if one accounts for the physiological limitations and assets of the procedures.Presented at the 28th ISCEV Symposium, Guangzhou, China, 10–14 March 1990.     

白蒺藜对光损伤小鼠光感受器细胞的保护作用

目的 探讨白蒺藜对小鼠视网膜光损伤的保护作用.方法 采用10 000 lux白炽光光照30 min建立视网膜光损伤模型,将BALB/c小鼠分为正常对照组、模型组和治疗组,每组各6只.光照前0.5h治疗组腹腔注射白蒺藜水煎液100 μL(生药100mg/20 g),正常对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水.光照后3h、7d分别通过OCT检测小鼠视网膜形态学改变;造模后7d处死小鼠,取眼球固定、包埋、切片进行HE染色,视紫红质和短波敏感视蛋白(short wave-length sensitivity opsin,M-opsin)的免疫荧光化学染色,观察视网膜病理改变情况.结果 正常对照组内外核层结构清楚、界限明显,视网膜视杆细胞内外节排列整齐;模型组视网膜结构层次模糊且外核层变薄,与正常对照组差异显著;治疗组小鼠视网膜结构与正常对照组没有显著差异.与正常对照组比较,模型组视紫红质和M-opsin表达降低,治疗组显著提高了视紫红质和M-opsin的表达.模型组较正常对照组视网膜外核层厚度显著变薄(P＜0.05);治疗组较模型组能显著性预防小鼠视网膜外核层变薄(P＜0.05).结论 小鼠视网膜光损伤模型造模成功,白蒺藜对光损伤视网膜具有显著的保护作用.     

新生期视网膜色素上皮细胞动态吞噬功能及其αvβ5受体表达的研究

目的观察新生期视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium,RPE）结合和内吞感光细胞外节段（photoreceptor outer segment,POS）能力的变化,为指导临床防治RPE相关病变提供依据。方法体外培养新生牛RPE,采用第3代（传2代）近融合RPE,加入异硫氢酸荧光素（fluorescein isothiocyanate-POS,FITC-POS）悬液,分别观察孵育1h、2h、3h、4h、5h、6h时RPE结合和内吞POS情况,同时检测胞膜上参与结合的整合素受体—αVβ5的表达情况。结果与POS孵育1h时,新生期RPE以结合POS为主,未见明显吞噬现象,但至第2h和第3h后,其吞噬能力迅速增强,并缓慢增加,达到平台期。而新生期RPE在前2h内未见明显的内吞现象,至第3h、4h、5h迅速增加,之后达到平台期,新生期RPE上参与结合阶段的受体-αVβ5受体表达丰富。结论在新生期RPE的吞噬周期中,孵育后的第2h和第3h主要是结合阶段,第3～5h主要是内吞阶段,提示其已具备较好的吞噬功能。