黄芪多糖对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脾细胞的免疫调节作用研究

目的:探讨黄芪多糖(APS)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脾细胞的免疫调节作用.方法:C57BL/6雌性小鼠腹腔注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)建立EAE模型,免疫后的第9天取脾,制备脾细胞,和/无APS培养48 h后,流式细胞术检测脾中CD4+T淋巴细胞表型及M1型、M2型巨噬细胞表...     

黄芪甲苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠T细胞免疫调节的影响

背景：多发性硬化初始阶段,中枢免疫细胞激活并释放大量炎症因子,引起白质脱髓鞘甚至累及灰质神经元。CD4⁺T细胞不同亚群之间的分化平衡在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的病程进展中发挥着重要作用。课题组前期研究结果表明黄芪内有效成分黄芪甲苷能够调节EAE小鼠体内免疫反应,其是否对T细胞亚群分化具有调节作用尚未明确。目的：探究黄芪甲苷对EAE小鼠治疗效果及其对T细胞的免疫调控机制。方法：将C57BL/6雌性小鼠分为正常对照组、EAE疾病模型组和黄芪甲苷治疗组,每组8只,后2组使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)制备EAE模型,免疫后第10-28天,黄芪甲苷治疗组以40 mg/(kg·d)灌胃给药。免疫当天至第28天,记录各组小鼠的体质量及临床评分;免疫后第28天取小鼠脊髓制成冰冻切片行苏木精-伊红染色、固蓝染色观察脊髓病理改变,流式细胞术检测脾脏T细胞亚群百分比,Western blot法检测脊髓组织中γ干扰素、白细胞介素17、白细胞介素6的蛋白表达,ELISA检...     

银杏内酯A对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠T细胞的免疫调节作用

目的:明确银杏内酯A(GA)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的疗效,探讨GA对T细胞的免疫调节作用.方法:将C57BL/6雌性小鼠分为用GA治疗EAE小鼠的EAE治疗组(ET)、用生理盐水治疗EAE小鼠的EAE对照组(EC)及用生理盐水处理正常小鼠的正常对照组(HC).用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG...     

EGCG对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用

目的观察绿茶提取物EGCG对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗作用及相关机制。方法取C57BL/6小鼠,随机分为对照组、EAE模型组和EGCG治疗组,对各组小鼠进行神经功能评分,并对中枢神经系统炎性浸润情况进行观察;流式细胞技术检测Th1、Th17细胞在中枢神经系统中频率变化;免疫组化观察25 d脑组织IFN-γ、IL-17和TGF-β的表达情况;ELISA检测血清中IFN-γ、、IL-17、TGF-β、IL-10、IL-4的质量浓度。结果 EGCG治疗明显缓解EAE小鼠疾病症状和中枢神经系统炎症,抑制Th1与Th17细胞向中枢神经系统浸润。与EAE模型组相比,EGCG治疗组脑IFN-γ及IL-17表达上调,而TGF-β表达下调;外周血中可溶性上述细胞因子表达情况与脑一致。结论 EGCG可能通过影响中枢神经系统及外周血中IFN-γ、IL-17、TGF-β的表达,调控T细胞亚群的分化对EAE发挥保护作用。     

地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠髓鞘保护作用的研究

目的:分析地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠炎症反应、髓鞘脱失及髓鞘再生的影响,探讨地塞米松治疗多发性硬化的新作用。方法:应用MOG35-55免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型。小鼠随机分为正常对照组、EAE组及地塞米松组,观察各组临床症状;采用HE染色、LFB染色、透射电镜扫描及免疫组化染色方法,检测免疫后第13、20、30 d各组小鼠脊髓组织炎症反应、髓鞘脱失及髓鞘再生情况。结果:地塞米松显著降低EAE小鼠发病率、延缓起病时间、减轻疾病严重程度。各个时间点地塞米松组脊髓组织炎性细胞浸润、髓鞘脱失及轴索变性程度较EAE组明显减轻。免疫后第20、30 d,EAE组Olig2阳性细胞数较正常对照组明显增加;免疫后各时间点,地塞米松组Olig2阳性细胞数较正常对照组均明显增加,第13、20 d较EAE组明显增加。结论:地塞米松可增加脊髓组织Olig2表达、促进髓鞘再生,这可能为地塞米松治疗EAE及多发性硬化的效应途径。     

银杏提取物对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的影响

目的:探讨银杏提取物(GBE)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠炎症脱髓鞘病变的影响。方法:应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白33-55(MOG33-55)配以完全弗氏佐剂(CFA)免疫小鼠,诱发EAE模型。将小鼠分为CFA对照组、EAE模型组和GBE治疗组(每日腹腔注射GBE70mg/kg)。通过神经功能评分、行为学实验以及免疫荧光染色,观察GBE对EAE小鼠的影响。结果:GBE组小鼠各时间段神经功能评分均低于EAE组(P0.05),行为学检测显示发病高峰期falling latency时间较EAE组延长10s;GBE组较EAE组视神经髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平增高,可见MBP阳性髓鞘结构包绕轴突;海马伞矢状切片免疫荧光染色证实GBE组CD11b阳性小胶质细胞较EAE组明显减少,但是GFAP阳性星形胶质细胞数量与EAE组无明显差别。结论:GBE可能通过抑制小胶质细胞激活从而延缓EAE小鼠脱髓鞘进程,提示GBE对多发性硬化具有一定的治疗作用。     

红景天苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的干预作用与机制

目的:观察不同浓度红景天苷(salidroside)对实验性自身免疫脑脊髓炎(experimental autoimmuneencephalomyelitis,EAE)小鼠模型的作用,并探讨初步的作用机制.方法:建立实验性自身免疫性脊髓炎小鼠模型,免疫当天起给予高中低剂量的红景天苷灌胃,1次/d,共给药35 d.给药完成后,进行神经功能评分,TUNEL染色检测脊髓髓鞘组织的细胞凋亡情况,ATP水平检测试剂盒检测脊髓组织ATP含量水平,免疫印迹法检测线粒体内细胞色素c氧化酶(mito cyto-c)、胞浆中细胞色素c氧化酶(cyto cyto-c)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cas-3)与活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-9(cleaved cas-9)蛋白表达水平.结果:红景天苷降低EAE小鼠的神经功能评分,后延发病时间;随红景天苷浓度升高,脊髓髓鞘组织的细胞凋亡数逐渐降低,脊髓组织ATP水平显著升高;EAE小鼠脊髓组织细胞胞浆中的cyto-c蛋白表达显著升高,同时cleavedcas-3与cleaved cas-9蛋白表达显著升高,红景天苷干预后,胞浆中cyto-c蛋白表达显著下降,同时cleaved cas-3与cleaved cas-9蛋白表达下降.结论:红景天苷对缓解实验性自身免疫性脊髓炎症状具有良好的效果,可能通过抑制内源性线粒体通路而降低脊髓组织细胞的凋亡而发挥作用.     

miR-30a对实验性自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠发病的作用

目的:探讨在体过表达miR-30a对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠脱髓鞘病变的作用。方法:构建含稳定表达miR-30a的shRNA慢病毒载体,以含有空载体的慢病毒为对照(LV-ctrl)。雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(normal)、对照慢病毒(LV-ctrl)组和miR-30a慢病毒(LV-miR-30a)组,2组慢病毒经尾静脉注射,注射7 d后用MOG35-55多肽免疫小鼠。Kono 5分法检测发病情况,快蓝(LFB)染色及透射电镜检测脊髓脱髓鞘程度及髓鞘结构的变化。结果:LV-ctrl组小鼠在MOG_(35-55)多肽免疫的第10天开始发病,到第21天,其Kono评分为2.57±0.79,LV-miR-30a组小鼠的Kono评分显著低于LV-ctrl组小鼠;miR-30a处理可显著提高小鼠体质量增长率,同时LFB评分也较LV-ctrl组显著增加;髓鞘超微结构显示LV-ctrl组小鼠脊髓髓鞘板层松解且稀疏,而LV-miR-30a组小鼠的髓鞘结构相对完好,髓鞘厚度显著大于LV-ctrl组。结论:过表达miR-30a可以明显减缓EAE的发病,减轻脊髓脱髓鞘程度。     

雷公藤内酯醇治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的免疫调节机制研究

目的:探讨雷公藤内酯醇治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的免疫调节机制。方法:用MOG35-55肽段免疫C57/BL6小鼠,建立EAE动物模型。免疫后将小鼠随机分为治疗组和对照组,治疗组在开始发病后每天给予雷公藤内酯醇(100μg/kg)治疗,对照组于同一天开始每天给予相同体积生理盐水,每天观察小鼠临床症状。疾病高峰期处死小鼠,HE染色检测脊髓炎性细胞浸润;ELISA检测血清中细胞因子含量,3H掺入法检测淋巴细胞增殖;FACS检测中枢神经系统中Th1/Th17和Treg细胞数量。结果:雷公藤内酯醇治疗能够缓解EAE发病,减轻中枢神经系统炎性细胞浸润;抑制EAE小鼠MOG特异性T细胞增殖;减少血清中炎症细胞因子含量;减少病灶处CD4+T细胞IFNγ-和IL-17的分泌;上调CD4+T细胞Foxp3的表达。结论:雷公藤内酯醇通过减少致病细胞Th1和Th17的浸润,增加Treg细胞的数量来治疗EAE。     

人羊膜间充质干细胞对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的疗效及免疫调节作用

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法分离、培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;模型动物随机分为正常对照组、模型组、培养基组、hAMSCs治疗组和泼尼松治疗组,每组6只。hAMSCs治疗组经双侧侧脑室移植5×105个hAMSCs;采用Kono评分法动态观察行为学变化;采用HE染色、免疫荧光染色观察脑和脊髓病理改变以及hAMSCs在脑和脊髓内的分布;采用FCM检测外周血淋巴细胞亚群,采用流式微球阵列法(CBA)检测血浆细胞因子的含量。结果 hAMSCs治疗后EAE大鼠行为学评分逐渐减低(P0.01),脑和脊髓炎性细胞浸润减轻。hAMSCs移植第3周,大鼠脑和脊髓组织可见较多人细胞核抗原阳性细胞即hAMSCs存活;与模型组和培养基组相比,hAMSCs治疗组外周血Treg、Th2、Tc1、Tc2淋巴细胞百分比明显升高(P0.01或P0.05),而Th17细胞显著减少(P0.01);血浆Th2型细胞因子IL-4和IL-10含量升高(P0.05或P0.01),而Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ含量降低(P0.05或P0.01)。结论 hAMSCs能改善大鼠EAE的神经功能,减轻神经组织的免疫损伤,其机制可能主要与上调FoxP3+Treg细胞和下调Th17细胞有关。     

羟基法舒地尔对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠氧化应激的影响

目的：探究羟基法舒地尔（HF）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠氧化应激的影响及可能机制。方法：将BV2细胞随机分为正常对照组、LPS组和LPS+HF组。HF预处理2 h后给予LPS刺激24 h,收取细胞上清液。将16只C57BL/6小鼠随机平均分为EAE组和HF组。HF组小鼠于免疫后第3天起以HF腹腔注射干预,剂量40 mg/（kg·d）。EAE组小鼠注射等量生理盐水。从免疫当天开始,每隔1 d记录小鼠的临床评分。DPPH法和ABTS法检测不同浓度HF对自由基的清除作用。MTT法检测BV2细胞在不同浓度HF的干预下细胞活力的改变。HE和LFB染色检测脊髓炎症和髓鞘脱失。ELISA检测细胞上清液和小鼠脊髓中RNS、ROS、MDA、SOD、CAT和GSH-Px含量。免疫荧光染色和Western blot检测小鼠脊髓中Nrf2、HO-1表达。结果：HF在3.75～60μg/ml浓度范围内对DPPH和ABTS自由基几乎没有清除作用,在0～15μg/ml浓度范围内对BV2细胞活力没有影响,HF可抑制EAE小鼠的临床症状,改善脊髓炎症和髓鞘脱失,减少氧化产物ROS、RNS和MDA产生,增加...     

银杏叶提取物对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的作用研究

目的:建立雌性Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型,观察银杏叶提取物EGb761腹腔注射对EAE大鼠的可能疗效及神经保护作用和机制。方法:建立Wistar大鼠EAE模型,腹腔注射EGb761(70 mg/kg),连续7 d,于免疫后第14 d和第31 d取颈膨大,分别进行HE、LFB和改良BLS染色,观察各组大鼠炎细胞浸润、髓鞘脱失和轴突缺失情况。结果:(1)EGb761组与EAE组相比临床评分明显减低(P0.05);(2)HE染色显示:EGb761组炎症浸润与EAE组相比明显减低(P0.01);(3)LFB染色显示:EGb761脱髓鞘评分与EAE组相比明显降低(P0.05);(4)改良Bielschowsky染色显示:EGb761组高峰期轴突平均缺失面积与EAE组相比明显下降(P0.01)。结论:EGb761通过减轻炎细胞浸润、促进髓鞘再生和防止轴突缺失,从而对EAE大鼠临床症状的改善起到一定作用。     

细胞因子在实验性自身免疫性脑脊髓炎耐受中的作用

细胞因子(CK)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的免疫机制中起着重要作用。Th细胞的不同转化决定EAE的发生、发展或抑制。由多种CK构成的免疫调节网络操纵着Th细胞的免疫应答。通过作用Th细胞使之向抑制EAE方向转化,从而寻找对EAE耐受的途径,是目前EAE研究的一个重要方面。以下就与EAE耐受相关的CK研究进行综述,探讨EAE免疫病理机制。     

B 细胞衔接蛋白BANK 在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用

目的:探讨B 细胞特异性衔接蛋白BANK(B cell adoptor protein with ankyrin repeats)在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)中的作用。方法:MOG35-55 多肽免疫C57BL/6 鼠和BANK 缺陷(BANK-deficient,BANK-/ - )鼠制备EAE 模型,观察实验动物临床症状及中枢神经系统的病理学变化;提取小鼠脑组织及脾脏,经流式细胞术检测中枢神经系统及外周免疫器官中的CD4+ T 细胞、CD8+ T 细胞及调节性T 细胞的变化。结果:BANK-/ - 鼠EAE 临床症状评分明显高于C57BL/6 鼠,且体重减轻明显(P<0.05);HE 染色结果显示,BANK-/ - 鼠较C57BL/6 鼠炎症感染灶明显增多。流式细胞术结果显示,相对于C57BL/6 鼠BANK-/ -鼠中枢神经系统中CD8+ T 细胞百分比明显增多,而脾脏中调节性T 细胞百分比明显减少,CD4/ CD8 比值倒置(P<0.05)。结论:B 细胞衔接蛋白BANK 的表达抑制EAE 炎症反应。     

骨髓间充质干细胞异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。方法全骨髓贴壁培养法获得大鼠BMSCs,流式细胞术检测细胞免疫表型,并诱导成骨方向分化。取雌性C57BL/6小鼠,随机分为3组:正常对照组、PBS组和大鼠BMSCs组,用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35~55联合完全弗氏佐剂诱导建立EAE模型。小鼠免疫后38d和48d腹腔注射PBS或大鼠BMSCs进行治疗,神经功能评分观察各组小鼠神经功能变化。二次治疗12d后取各组小鼠脊髓、脾脏和外周血。HE染色及Luxol fast blue染色观察脊髓炎性细胞浸润及髓鞘脱失情况;脾脏制成单细胞悬液,细胞CFSE标记后10mg/L刀豆球蛋白(Con A)和MOG_(35~55)刺激培养3d,观察脾细胞增殖情况。ELISA检测大鼠BMSCs移植后外周血细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)含量。结果流式细胞术显示,大鼠BMSCs第3代(P3)细胞表达抗原CD29、CD90、CD106,不表达CD45。体外诱导其能向成骨分化。小鼠发病后,大鼠BMSCs组小鼠神经功能缺损症状较PBS组减轻,评分降低。HE染色和Luxol fast blue染色结果显示,大鼠BMSCs组脊髓炎细胞浸润和脱髓鞘比同时间点PBS组减轻(P0.05)。Con A和MOG_(35~55)刺激培养后,PBS组和大鼠BMSCs组脾细胞增殖增加,而大鼠BMSCs组又较PBS组降低。与PBS组相比,大鼠BMSCs组血浆细胞因子IFN-γ、IL-17含量降低(P0.05)。结论全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化BMSCs,大鼠BMSCs异体移植对小鼠EAE模型有治疗作用。     

B细胞连接蛋白的表达抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的研究B细胞连接蛋白BLNK(B-cell linker protein)的表达对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmune encephalomyelitis,EAE)的影响并初步探讨其可能的机制。方法 MOG35-55多肽免疫BLNK缺陷(BLNK-deficient,BLNK-/-)鼠及C57BL/6鼠制备EAE小鼠模型,观察实验动物的临床症状及中枢神经系统的病理学变化;应用ELISA方法检测血清中的MOG特异性IgG和IgM抗体水平;采用流式细胞术检测脾脏中调节性T细胞的变化;分选的脾脏B淋巴细胞采用RT-PCR技术评价B细胞所分泌的细胞因子的变化。结果 BLNK-/-鼠临床症状评分明显高于C57BL/6鼠(P0.01);HE染色及LFB染色结果显示,BLNK-/-鼠与C57BL/C鼠比较炎症感染灶及脱髓鞘病灶明显增多。BLNK-/-鼠血清中的MOG特异性IgG和IgM抗体水平显著低于C57BL/C鼠(P0.005)。BLNK-/-鼠与C57BL/6鼠相比,脾脏中调节性T细胞百分比及B细胞所分泌的IL-10的表达明显减少,而IL-2的表达显著增高(P0.05);IFN-γ的表达水平在2组小鼠之间无统计学差异(P0.05)。结论 BLNK的表达抑制EAE,其机制可能是通过对B细胞分泌的Th1/Th2细胞因子的调节来实现。