地塞米松抑制哮喘小鼠肺RANTES的表达

目的 研究地塞米松对哮喘小鼠调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(RANTES)蛋白和mRNA表达的影响.方法 将30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组(每组10只):对照组、哮喘组、激素干预组,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),行白细胞和嗜酸粒细胞(EOS)计数;酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF和血清中RANTES含量;肺组织切片HE染色,光镜下计数细胞总数和EOS百分比;部分行免疫组化染色检测肺组织RANTES蛋白;用原位杂交法检测肺组织RANTES mRNA表达.结果 哮喘组白细胞总数、EOS百分比、RANTES浓度明显升高(P＜0.01),干预组明显低于哮喘组(P＜0.01);哮喘组肺组织RANTES蛋白及mRNA表达显著高于对照组(P＜0.01),主要表达于上皮细胞;干预组肺组织RANTES蛋白及mRNA表达显著低于哮喘组(P＜0.01).结论 地塞米松可抑制RANTES表达和活性而发挥抗EOS炎症作用,这可能是其控制哮喘发病的重要机制之一.     

地塞米松对哮喘小鼠肺组织中GPR43表达的调节作用

目的 研究G蛋白耦联受体43(GPR43)在哮喘小鼠肺组织内的表达,同时探讨地塞米松对GPR43表达的影响.方法 30只BALB/C6小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组,每组10只;卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型;肺泡灌洗液(BALF)细胞计数;HE染色观察各组气道炎症发生及气道结构改变情况;RT-PCR测定各组小鼠肺组织GPR43mRNA的表达变化;免疫组化观察肺中GPR43的表达及定位.结果 哮喘组BALF嗜酸性粒细胞(EOS)与对照组相比明显增高,地塞米松组明显低于哮喘组(P＜0.01);HE染色提示哮喘组气道上皮出现EOS等大量炎性细胞浸润,管壁厚度较对照组明显增加(P＜0.01);RT-PCR结果提示GPR43受体mRNA的表达量在哮喘组最低,与对照、地塞米松组相比有统计学差异(P＜0.01);免疫组化图像分析提示GPR43蛋白表达哮喘组明显降低,与对照组、地塞米松组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论 哮喘小鼠肺组织中GPR43表达下降,地塞米松能部分上调其表达,从而减轻气道炎症反应.     

地塞米松下调哮喘大鼠肺组织bFGF的表达

支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞和细胞组分参与的慢性炎症性疾病,反复炎症刺激导致气道高反应和气道重塑,目前认为气道重塑是难治性哮喘及哮喘气道不可逆损伤的主要原因。研究表明,碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob last growth factor,bFGF)参与了哮喘气道重塑过程,但目前国内外对哮喘时bFGF表达变化的研究多集中在慢性哮喘气道重塑方面,而对于哮喘急性期bFGF的表达变化却鲜见报道。本实验通过建立哮喘大鼠模型,研究bFGF蛋白和mRNA在哮喘急性期的表达并观察地塞米松治疗对其影响,探讨早期地塞米松干预抑制气道重塑的可能机制…     

地塞米松对哮喘小鼠肺组织IL-21及其受体表达的干预作用

目的研究慢性哮喘小鼠肺组织IL-21与IL-21受体(IL-21R)表达的变化,探讨地塞米松(Dex)对小鼠肺组织IL-21与IL-21R表达的影响。方法 SPF级BALB/c雌性小鼠33只,随机分为对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组,每组11只。卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠支气管哮喘模型;HE染色观察气道炎症程度;测量支气管壁厚度及平滑肌厚度;免疫组织化学和免疫印迹法分析小鼠支气管肺组织中IL-21蛋白与IL-21R蛋白的表达。结果哮喘组小鼠支气管壁厚度及平滑肌厚度较对照组增加(P<0.01),地塞米松组支气管壁厚度与平滑肌厚度低于哮喘组(P<0.01)。哮喘组小鼠肺组织IL-21蛋白与IL-21R蛋白的表达高于对照组(P<0.05),地塞米松组IL-21蛋白与IL-21R蛋白表达低于哮喘组(P<0.05)。结论哮喘小鼠肺组织IL-21与IL-21R的表达增强,地塞米松抑制哮喘小鼠肺组织IL-21与IL-21R的表达。     

地塞米松对哮喘小鼠肺组织中TWEAK及其受体Fn14表达的调节作用

目的:探讨地塞米松对哮喘小鼠模型肺组织中肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)及受体成纤维细胞生长因子诱导的早期反应蛋白14 (Fn4)表达的调节作用.方法:采用卵清蛋白致敏方法建立经典哮喘模型.将36只雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组,每组12只.HE染色评估各组小鼠气道炎症程度;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14mRNA表达水平;采用免疫组化方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14蛋白表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织TWEAK、Fn14 mRNA水平高于对照组(P＜0.01),地塞米松组TWEAK、Fn14 mRNA水平低于哮喘组(P＜0.01).TWEAK、Fn14蛋白的表达水平哮喘组较对照组明显升高(P＜0.01),地塞米松组表达量较哮喘组明显降低(P＜0.01).结论:地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织中TWEAK及Fn14表达,从而减少气道炎症反应.     

miRNA-21在支气管哮喘患儿血清及哮喘小鼠模型肺组织中表达上调

目的探讨miRNA-21在支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞及支气管哮喘小鼠模型肺组织中的表达,观察其靶基因PTEN在哮喘小鼠模型肺组织中的表达变化。方法应用real-time PCR方法检测支气管哮喘患儿与正常儿童外周血淋巴细胞miRNA-21的表达,卵蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,HE染色观察气道炎症。应用real-time PCR法检测哮喘组小鼠与对照组小鼠肺组织miRNA-21及其靶基因PTEN的表达,Western blot方法检测哮喘小鼠与对照组小鼠肺组织PTEN蛋白的表达。结果支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞miRNA-21表达水平显著高于正常儿童(P0.01)。哮喘小鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞数及肺组织炎症细胞浸润显著高于正常对照组,哮喘组小鼠肺组织miRNA-21mRNA表达水平显著高于正常对照,PTEN mRNA与蛋白水平明显低于正常对照组(P0.01)。结论 miRNA-21在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达,表明其可能参与支气管哮喘的发病机制。     

地塞米松抑制哮喘模型大鼠肺组织血管内皮生长因子表达

哮喘是一种由多种细胞和细胞组分参与的慢性气道炎症性疾病,反复炎症刺激可导致气道高反应性和气道重塑,气道细胞合成和分泌的血管内皮生长因子(vascular endothe-lial growth factor,VEGF)参与了哮喘气道重塑过程,但对哮喘急性发作期VEGF的变化及影响因素的研究却鲜见报道。本     

地塞米松对哮喘小鼠肺组织中转录因子RORγt mRNA表达的干预作用

目的:初步探讨地塞米松对哮喘小鼠模型肺组织中Th17细胞转录因子维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)mRNA表达的影响.方法:采用卵清蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,BALB/c小鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组、地塞米松治疗组各10只.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白细胞介素-17(IL-17)水平;无创肺功能体描仪检测小鼠气道反应性;HE染色评价各组小鼠气道炎症程度;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织IL-17、RORγt mRNA表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA、IL-17水平高于对照组(P<0.01),地塞米松治疗组RORγt mRNA、IL-17水平低于哮喘组(P<0.05).结论:地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织RORγt表达,阻止Th17的分化,从而减少IL-17的分泌,减轻哮喘气道炎症反应.     

Akt对哮喘小鼠肺组织VEGF表达的上调作用

目的探讨在哮喘发病机制中,PKB/Akt对哮喘小鼠肺组织VEGF表达的调节作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、PKB/Akt阻断组,免疫荧光、Western blot方法检测各组小鼠肺组织VEGF的表达。结果免疫荧光结果显示:哮喘组肺组织内VEGF阳性产物的平均光密度(MOD)显著高于正常对照组(P<0.01),而PKB/Akt阻断组与哮喘组相比,上述部位VEGF阳性反应产物的MOD值明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示:与正常对照组比较,哮喘组小鼠肺组织内VEGF的IDV( integrated density value)与内参照IDV的比值均明显升高(P<0.01),而PKB/Akt阻断组上述部位IL-1β目标带的IDV与内参照IDV的比值均明显低于哮喘组(P<0.05)。结论在NGF介导的哮喘发病机制中,Akt能上调哮喘小鼠肺组织内VEGF的表达。     

哮喘支气管黏膜中类胰蛋白酶的表达增强

目的 观察含类胰蛋白酶的肥大细胞在豚鼠支气管黏膜的表达和分布特征。方法 Dunkin Hartley豚鼠随机分为哮喘组(A组)和生理盐水组(B组)。用100m/mL卵蛋白进行致敏，并于致敏后第5周行抗原特异性支气管激发试验。激发后2h取各组豚鼠支气管组织标本，免疫组化染色以抗人类胰蛋白酶(Tryptase)单克隆抗体(AAl)为一抗，过氧化物酶标记的绵羊抗鼠IgG为二抗，并用联苯二胺(Diaminobenzidine，DAB)显色。仅选择阳性染色细胞进行计数。结果 鼠抗人Trvptase单克隆抗体即可识别人支气管Tryptase又可识别豚鼠支气管Tryptase。哮喘支气管组织中Tryptase阳性细胞数明显多于正常支气管组织。相似地，支气管激发试验后的豚鼠支气管组织中的肥大细胞数要比生理盐水吸入组多出2．0倍以上。结论 抗人Tryptase单克隆抗体可以用于识别豚鼠支气管的肥大细胞。哮喘者和激发试验阳性的豚鼠支气管肺组织中的Tryptase阳性肥大细胞数明显多于正常支气管组织，表明肥大细胞在支气管哮喘发病机制中可能起重要作用。     

Wnt5a在哮喘小鼠肺组织中的异常高表达

目的探究WNT5a在小鼠支气管哮喘模型肺组织中的表达。方法将24只脱敏饮食3周的6周龄Balb/c小鼠随机分为2组:对照组和哮喘组。哮喘组小鼠在第0、14天分别腹腔注射0.2 ml致敏液[100μg OVA,100μl PBS,100μl Al(OH)3凝胶]致敏,于第21~30天1%OVA雾化。对照组小鼠在同时间给予同剂量的PBS。于最后1次处理后masson染色观察小鼠肺组织上皮下纤维化的情况,QT-PCR检测小鼠肺匀浆中Wnt5a、TGF-β1的分子表达,Western blot检测肺匀浆中Wnt5a的蛋白表达。结果哮喘组小鼠上皮下纤维化增多,TGF-β1表达增加;肺组织中Wnt5a较对照组表达增加。结论小鼠哮喘模型肺匀浆中Wnt5a在分子和蛋白水平表达较对照组明显增加,这可能和哮喘中气道重塑相关。     

哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶表达的变化及地塞米松对其影响

p38蛋白激酶 (p38MAPK)是新近发现的与炎症、应激反应密切相关的蛋白激酶 ,参与了肥大细胞、嗜酸性粒细胞的定位迁移和淋巴细胞的发育、分化、成熟和活化的全过程 ,提示p38MAPK可能与支气管哮喘的气道炎症机制相关。为探讨p38MAPK在哮喘发病机制中的作用 ,我们选择了雄性SD大鼠 2 0只 ,体重 2 2 0± 4 0g ,2～ 3月龄。随机分成 3组 :A组为正常对照组 ,以生理盐水代替抗原进行注射和雾化吸入 ;B组为阳性对照组 ,给予鸡卵清蛋白 (OVA ,美国Sigma公司 )致敏和刺激复制哮喘模型 ;C组为地塞米松 (DEX)干预组 ,每天予以OVA雾化吸入前分…     

地塞米松对哮喘大鼠肺组织ADM及基因表达的影响

目的： 探讨地塞米松(DEX)对哮喘大鼠肺组织肾上腺髓质素(ADM)及基因表达的影响。方法: 选择30只雄性SD大鼠随机分为3组，每组10只。采用卵蛋白皮下注射及雾化吸入制成大鼠哮喘模型；采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组肺组织ADM的mRNA表达水平，同时用免疫组化方法检测ADM表达水平，并在光镜下观察支气管壁厚度(WA/Pi)、支气管平滑肌厚度(平滑肌面积/Pi)及肺组织形态学改变。结果: 哮喘组(A组)ADM的mRNA和蛋白表达明显高于对照组(C组)(P<0.05)；治疗组（B组）ADM的mRNA和蛋白表达进一步增加，明显高于哮喘组(A组)(P<0.01)。结论: 地塞米松促进肺组织ADM表达升高，可能是其治疗哮喘的机制之一。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺组织嗜酸细胞bcl-2表达的影响及意义

目的 研究哮喘豚鼠肺内不同密度嗜酸细胞（Eos）凋亡与bcl-2 mRNA表达的关系及地塞米松（DM）对它们的影响。方法 应用DM干预哮喘豚鼠,分离哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中不同密度Eos,以TUNEL法检测细胞凋亡,以原位杂交检测bcl-2 mRNA表达。结果 哮喘组Eos凋亡率较正常组明显降低（P〈0．01）,应用DM后均显著增加（P〈0．01）。正常豚鼠Eos可检测到bcl-2 mRNA表达,不同密度Eos表达无显著差异（P〉0．05）。哮喘组bcl-2mRNA明显增加,应用DM后其表达明显减少。结论凋亡调节的缺失是导致组织及血中Eos增多的重要原因,bcl-2参预了哮喘Eos凋亡的调节。DM可促进哮喘肺组织中的Eos细胞凋亡,bcl-2可能是DM调节Eos细胞凋亡的重要途径之一。     

CXCR4在哮喘小鼠肺组织中的表达及氯喹的干预作用

目的检测哮喘小鼠中趋化因子受体CXCR4的表达及其拮抗剂氯喹(CQ)的干预作用。方法将6~8周SPF级Balb/c小鼠随机分成对照组、哮喘组和氯喹干预组,哮喘组和氯喹干预组用鸡卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型,干预组于激发前30 min给予CQ,连续3 d,对照组用PBS代替。最后1次激发24 h内小鼠肺功能仪检测小鼠气道高反应;最后1次激发48 h内检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及细胞分类计数;HE染色光镜下观察肺组织的病理炎症改变,免疫组化染色检测肺组织CXCR4的表达;荧光定量PCR(Q-PCR)测定肺组织中CXCR4 mRNA的表达。结果哮喘组气道高反应及BALF中细胞总数明显高于对照组,干预组小鼠气道高反应及BALF中细胞总数与哮喘组相比显著降低;BALF中哮喘组嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和单核细胞数较空白组显著增加,而氯喹干预组较哮喘组显著减低;HE染色结果显示哮喘组肺部炎症细胞浸润明显,干预组与哮喘组相比明显减轻,病理评分降低;免疫组化显示哮喘组CXCR4在气道上皮细胞呈强阳性表达,干预组表达呈弱阳性;哮喘组CXCR4 mRNA的表达较对照组升高,氯喹干预组较哮喘组CXCR4 mRNA表达量降低;CXCR4表达量与BALF细胞总数呈正相关。结论 CXCR4可能参与哮喘小鼠的气道炎症和气道高反应的发生,氯喹能改善哮喘小鼠的气道高反应和气道炎症可能与拮抗CXCR4相关,为氯喹治疗哮喘提供理论和实验依据,为开发治疗哮喘新药提供新的思路。     

褪黑素促进哮喘小鼠肺组织STAT4的表达及抑制气道炎症

目的 探讨褪黑素(MT)对哮喘小鼠肺组织信号传导子和转录激活子4(STAT4)表达的影响及其在气道炎症中的作用.方法 最后1次雾化激发后1 h行左肺支气管肺泡灌洗计数炎性细胞;免疫组织化学和实时定量PCR分别检测右肺组织STAT4蛋白及其mRNA的表达;酶联免疫吸附试验检测外周血IL-12水平.结果 (1)模型组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞总数和EOS较对照组明显增多,肺组织STAT4蛋白及其mRNA表达较对照组明显降低;MT组以上指标均得到明显缓解(P<0.01);(2)哮喘小鼠STAT4蛋白及其mRNA的表达均与BALF中EOS呈高度负相关(r=-0.754,r=-0.755;P<0.01),外周血IL-12水平与STAT4蛋白表达呈高度正相关(r=0.742,P<0.01).结论 MT能通过诱导哮喘小鼠肺组织STAT4基因的转录、翻译,促进外周血IL-12产生,抑制EOS等炎性细胞浸润,显著抑制气道炎症.     

NGF对哮喘小鼠气道阻力和肺组织Akt/PKB表达的影响

目的探讨NGF介导的Akt/PKB信号转导通路在哮喘小鼠发病中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法随机分为正常对照组、哮喘组、NGF阻断组。利用An iRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力,运用免疫组织化学方法测定Akt/PKB的组织表达,M etamoph图像分析系统对结果进行分析。结果哮喘小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组小鼠(P<0.01),NGF阻断组小鼠吸气阻力和呼气阻力明显低于哮喘组。免疫组织化学染色结果显示哮喘组Akt/PKB在肺组织炎性细胞的表达及AK t/PKB阳性炎症细胞数明显多于正常对照组(P<0.05),而NGF阻断组则明显低于哮喘组(P<0.05)。结论NGF介导哮喘气道高反应和炎症反应,Akt/PKB参与了哮喘发病中NGF介导的信号传导。     

促红细胞生成素对哮喘小鼠肺组织VEGF及ICAM-1表达的影响

目的探讨促红细胞生成素对哮喘小鼠肺组织血管内皮生长因子(VEGF)及细胞间黏附分子(ICAM)-1的影响。方法 36只BALB/c小鼠,雌雄不限,随机分为对照组、哮喘组和促红细胞生成素组,卵蛋白致敏的方法制备哮喘小鼠模型。用乙酰甲胆碱行支气管激发试验,测定各组小鼠气道阻力的变化;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),进行细胞总数计数及嗜酸性粒细胞计数,免疫组织化学和Western blot方法检测各组小鼠肺组织VEGF与ICAM-1的表达。结果促红细胞生成素能够降低哮喘小鼠的气道阻力,降低BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞数(P0.01)。免疫组织化学和Western blot的光密度值分析结果显示,促红细胞生成素组小鼠肺组织VEGF与ICAM-1蛋白表达的平均光密度值显著低于哮喘组小鼠(P0.01)。结论促红细胞生成素可降低哮喘小鼠气道阻力及肺内炎症,与下调VEGF与ICAM-1的蛋白表达相关。     

miR-200C与miR-16在哮喘患儿血清及哮喘小鼠肺组织中的表达上调

目的探讨miR-200C与miR-16在支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞及支气管哮喘小鼠模型肺组织中的表达。方法应用real-time PCR方法检测支气管哮喘患儿与正常儿童外周血淋巴细胞miR-200C与miR-16的表达,卵蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,HE染色观察气道炎症。应用real-time PCR法检测哮喘组小鼠与对照组小鼠肺组织miR-200C与miR-16的表达。结果与正常儿童相比,支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞miR-200C与miR-16表达水平显著升高(P0.01)。哮喘小鼠模型组BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞数,炎症细胞浸润,肺组织miR-200C与miR-16表达水平显著高于正常对照组(P0.01)。结论miR-200C与miR-16在支气管哮喘患儿及支气管哮喘小鼠模型中高表达。