筛选KIAA1456抑制卵巢癌细胞增殖的靶向lncRNAs

目的筛选KIAA1456抑制卵巢癌细胞增殖的靶向lncRNAs。方法细胞免疫荧光检测KIAA1456在卵巢癌细胞HO8910PM中的表达。用基因芯片技术检测过表达KIAA1456后的卵巢癌细胞HO8910PM,与对照HO8910PM卵巢癌细胞之间差异lncRNA基因表达谱,筛选出有明显差异的lncRNAs,并验证。构建KIAA1456-RNAi慢病毒载体,干扰卵巢癌细胞HO8910/PM中KIAA1456的表达,RT-q PCR和Western blot检测KIAA1456干扰效率。用RT-q PCR再次检测KIAA1456沉默后相关lncRNAs的表达变化。结果KIAA1456主要表达于HO8910PM细胞的细胞核。过表达KIAA1456后,表达相差1.2倍以上的lncRNA有654条,表现最显著的有下调的SSX8,上调的SNORD14D,SNORA26,lncRNA-ENST00000384488,PCR验证结果与芯片趋势一致。KIAA1456-RNAi慢病毒载体成功干扰了卵巢癌细胞HO8910PM中KIAA1456的表达,KIAA1456下调后,SSX8上调,SNORD14D,SNORA26,lncRNA-ENST00000384488下调。结论 KIAA1456可通过调节SSX8,SNORD14D,SNORA26,lncRNA-ENST00000384488等相关lncRNAs的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖,为提高卵巢癌的诊断和治疗提供了一个新的靶点。     

沉默LAIR-1表达对卵巢癌细胞增殖功能的影响

沉默白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)在卵巢癌H08910细胞的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖功能的影响。构建LAIR-1的shRNA慢病毒表达载体,转染人浆液性卵巢癌细胞系H08910。RT-PCR和Western blot检测H08910细胞中LAIR-1分子的沉默效率;采用PI染色法和MTT法检测沉默LAIR-1表达对HO8910细胞周期及增殖功能的影响。成功建立沉默LAIR-1分子表达的稳定HO8910细胞株。与阴性对照组比较,转染LAIR-1-shRNA慢病毒载体的HO8910细胞中LAIR-1的mRNA及蛋白水平表达均明显降低(P<0.05)。LAIR-1-shRNA组G1期细胞数目明显低于CON组和NCshRNA组(P<0.05);沉默LAIR-1分子表达后,LAIR-1-shRNA HO8910细胞的增殖率明显高于NC-shRNA HO8910组和空白对照组(P<0.05)。沉默卵巢癌细胞HO8910LAIR-1分子表达可明显增强细胞增殖的能力,提示卵巢癌细胞表达的LAIR-1可能对癌细胞的生物学功能发挥抑制作用。     

慢病毒载体抑制FOXM1对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响与分子机制

目的:研究靶向转录因子FOXM1 shRNA慢病毒载体抑制FOXM1表达对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其分子机制。方法:应用感染复数(MOI)为20的靶向FOXM1shRNA慢病毒颗粒感染人卵巢癌SKOV3细胞,MTT比色法检测感染后SKOV3细胞的生长曲线;流式细胞术分析感染72 h后细胞周期变化;实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测感染72 h后FOXM1、Cyclin D1、PLK1等基因mRNA及蛋白表达变化。结果:MOI为20的靶向FOXM1 shRNA慢病毒颗粒能显著抑制SKOV3细胞生长,并将细胞阻滞在G0/G1期而S期细胞减少(P<0.01);显著下调FOXM1、CyclinD1、PLK1等基因mRNA及蛋白表达。结论:抑制FOXM1表达对人卵巢癌SKOV3细胞具有显著的增殖抑制作用。其作用与下调Cyclin D1、PLK1等蛋白的表达将细胞阻滞在G0/G1期有关。     

KIAA1199基因重组慢病毒载体的构建及在人胃肿瘤细胞MKN28中的表达

目的构建KIAA1199基因过表达的重组慢病毒载体,感染人胃癌细胞MKN28并使KIAA1199基因有效表达。方法将慢病毒载体GV367和KIAA1199基因序列用Age I和Nhe I双酶切、连接、筛选及测序获得重组慢病毒质粒GV367-KIAA1199。将测序正确的GV367-KIAA1199重组载体和辅助质粒Help1.0和Help2.0用Lipofectamine2000共转染293T细胞,得到重组慢病毒载体LV-KIAA1199。予荧光稀释法和药物筛选法测定重组慢病毒的感染滴度。以携带空白基因片段的慢病毒载体LV-NC为病毒对照组。将LV-KIAA1199和LV-NC以相同的病毒感染复数(MOI)分别感染人胃癌细胞株MKN28;荧光显微镜观察EGFP在细胞中的表达;实时定量PCR检测KIAA1199的m RNA在细胞中的表达水平。结果重组慢病毒载体LV-KIAA1199构建成功,LV-KIAA1199感染胃癌细胞后,荧光显微镜下可见细胞中呈现绿色荧光;KIAA1199的m RNA的表达均显著高于对照病毒组。结论重组慢病毒载体LV-KIAA1199可携带KIAA1199基因在人胃癌细胞株MKN28中进行有效过表达。     

特异siRNA下调卵巢癌H08910细胞NAC-1基因表达并抑制生长

 目的：研究小RNA干扰NAC-1 (Nucleus accumbens-1,Nac1 or NAC-1)基因表达对卵巢癌HO8910细胞增殖的影响。方法：设计、合成针对NAC-1基因的特异性小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）及阴性siRNA,并同时设立空白对照,然后用脂质体转染HO8910细胞。通过实时荧光定量RT-PCR 和Western印迹法分别检测转染前后HO8910细胞中NAC-1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖率,FCM法检测细胞周期分布。结果：针对NAC-1基因的特异性siRNA均能抑制NAC-1 mRNA和蛋白的表达,其中NAC-1-siRNA-1的沉默效率最高。转染NAC-1-siRNA-1 48h后,HO8910细胞中NAC-1 mRNA和蛋白表达水平分别下调74%和81%,而且细胞增殖明显受到抑制,细胞周期被阻滞于G1期,与转染阴性siRNA 及未转染组比较,有显著性差异(P?0.05)。结论：NAC-1特异性siRNA能够有效沉默NAC-1基因表达,并显著抑制卵巢癌HO8910细胞增殖。     

miR-221促进神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞N-MYC表达和细胞增殖

目的探讨过表达miR-221对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中N-MYC表达及其细胞增殖能力的影响。方法构建miR-221过表达慢病毒载体并建立稳定转染细胞系,实验设未处理组、空载组和miR-221组,以实时定量荧光PCR(RT-q PCR)检测miR-221表达;以RT-q PCR和Western blot检测N-MYC mRNA及蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期;CCK8法检测细胞增殖。结果经测序证实慢病毒载体构建成功,与未处理的SH-SY5Y细胞相比,稳定表达miR-221的SH-SY5Y细胞(miR-221组)miR-221表达升高约7倍(P0.01);miR-221组N-MYC mRNA和蛋白表达水平较未处理组显著增多(P0.01);miR-221组G0/G1期细胞比例明显减少(P0.05),S期细胞比例显著增多(P0.05);miR-221组细胞增殖能力明显增强(P0.01)。结论过表达miR-221能够上调神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中N-MYC的表达,并可能通过促发细胞从G0/G1期向S期转化促进细胞增殖。     

慢病毒载体介导RNA结合蛋白-5对肺腺癌细胞系H1299的增殖和凋亡的影响

目的 探讨慢病毒载体介导RNA结合蛋白-5（QKI-5）对肺腺癌细胞凋亡的影响。方法 应用GV358（过表达）和GV248（抑制表达）载体分别构建针对QKI-5基因的慢病毒过表达载体和抑制表达载体,转染293T细胞产生慢病毒颗粒,收集并测定慢病毒滴度。将经测序鉴定的QKI-5过表达的慢病毒或抑制表达的慢病毒转染到肺腺癌细胞H1299,Real-time PCR检测QKI-5 mRNA表达,集落形成实验检测H1299细胞增殖情况,膜联蛋白V（annexin V）、碘化丙啶（PI）检测H1299细胞凋亡情况,Western blotting检测促凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8表达。结果 成功构建QKI-5过表达慢病毒载体和抑制表达慢病毒载体,与对照组比较,QKI-5过表达后,QKI-5 mRNA表达增加,细胞集落形成减少,肺腺癌细胞早期凋亡增加,促凋亡蛋白Caspase-8表达增加;QKI-5抑制表达后,QKI-5 mRNA表达降低,细胞集落形成增加,但肺腺癌细胞凋亡无明显变化,然而促凋亡蛋白Caspase-8表达减少。结论 慢病毒介导 QKI-5抑制增殖,可能通过Caspase-8促进肺腺癌细胞系H1299的凋亡。     

苦参素诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡的实验研究

目的探讨苦参素对卵巢癌细胞株HO8910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法用不同浓度苦参素处理HO8910细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变;以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果随着药物浓度的升高,作用时间的延长,苦参素对HO8910细胞的生长抑制率逐渐增高;在苦参素作用下,HO8910细胞呈凋亡改变,出现凋亡小体。细胞凋亡的同时,细胞周期发生特定的改变,亚G1峰出现,S+G2～M期细胞所占比例组明显增高。结论苦参素能诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞增殖。     

慢病毒和质粒作为shRNA载体沉默人卵巢癌RhoA基因效果的比较

目的 研究慢病毒和质粒作为RNA干扰载体在沉默卵巢癌RAS同源基因家族成员A(RhoA)基因表达方面的差异.方法 分别将慢病毒及质粒载体携带的针对RhoA基因的siRNA序列感染或转染卵巢癌HO8910细胞,经过嘌呤霉素筛选建立稳定沉默RhoA基因的细胞株.通过荧光显微镜观察、实时荧光定量PCR、Western blot法、血管形成实验、细胞划痕实验研究两种载体随着细胞培养代数的增加在抑制卵巢癌RhoA基因表达及侵袭和转移能力上的差异.结果 采用质粒载体及慢病毒载体分别建立人RhoA基因稳定沉默卵巢癌细胞株,通过荧光显微镜观察,质粒组细胞绿色荧光蛋白的表达率随培养代数的增加而下降;第15代、第25代时表达率分别为70％、45％,而慢病毒组细胞绿色荧光蛋白表达率维持在95％以上,实时荧光定量PCR及Western blot法发现质粒组和慢病毒组细胞在第3代时RhoA mRNA及蛋白的表达无明显差异;随培养代数的增加,慢病毒组RhoA mRNA及蛋白持续低表达,而质粒组RhoA mRNA及蛋白的表达逐渐增高;细胞划痕实验及血管形成实验表明慢病毒较质粒作为载体介导siRNA对RhoA基因沉默更能持续稳定地抑制卵巢癌细胞的侵袭、转移(P＜0.05).结论 慢病毒较质粒作为载体介导RNA干扰能更好沉默目标基因的表达.     

三氧化二砷诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡

目的探讨三氧化二砷对卵巢癌细胞株HO8910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法用三氧化二砷处理HO8910细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解,以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果在三氧化二砷作用下,HO8910细胞呈凋亡改变,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时,细胞周期发生特定的改变,亚G1峰出现,S+G2~M期细胞所占比例组明显增高。结论三氧化二砷能诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞增殖。     

藏红花素诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡的体外实验

目的 探讨藏红花素(crocin)诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡及其作用机制.方法 MTT法分析藏红花素对卵巢癌HO-8910细胞增殖的影响;流式细胞仪检测藏红花素作用于卵巢癌HO-8910细胞后,细胞周期分布及凋亡率的改变;Western印迹法检测p53、Fas/APO-1和Caspase-3蛋白的表达.结果 MTT实验分析显示,藏红花素明显抑制卵巢癌HO-8910细胞生长;流式细胞仪检测结果显示,藏红花素作用于卵巢癌HO-8910细胞后,G0/G1期细胞数比例及细胞凋亡率升高.Western印迹法检测结果显示,p53和Fas/APO-1蛋白表达水平明显增加,Caspase-3活性增强.结论 藏红花素能明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的生长,使其被阻滞于G0/G1期,并可能通过上调p53、Fas/APO-1蛋白表达水平,进而激活Caspase-3调控的凋亡途径,从而促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡.     

过表达水通道蛋白1(AQP1)促进A549人肺腺癌细胞的增殖并抑制β联蛋白(β-catenin)磷酸化

目的探讨水通道蛋白1(AQP1)基因的过表达对A549人肺腺癌细胞增殖的影响及可能机制。方法构建和包装AQP1慢病毒过表达载体,感染A549细胞,实时荧光定量PCR检测AQP1 mRNA水平, Western blot法检测AQP1蛋白水平。在A549细胞过表达AQP1后,噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,并以Western blot法检测细胞β联蛋白(β-catenin)磷酸化水平。结果成功构建AQP1过表达慢病毒载体,病毒滴度为(2.87±0.54)×10~8 IU/mL;慢病毒载体感染A549细胞后,细胞AQP1 mRNA和蛋白水平显著增加;细胞增殖能力显著提高,细胞克隆形成数显著上升;β-catenin总蛋白水平增加,但β-catenin磷酸化显著降低。结论过表达AQP1促进A549细胞增殖并抑制β-catenin的磷酸化。     

CKS2 shRNA慢病毒表达载体的构建及其抑制卵巢癌A2780细胞增殖

目的构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,并探讨CKS2敲除对卵巢癌细胞A2780增殖的影响。方法根据siRNA原理设计两对靶向CKS2的shRNA序列(shRNA1、shRNA2)及阴性对照NC shRNA,并克隆到慢病毒表达载体PLKO.1/puro中;将上述质粒转染到293T细胞并包装出慢病毒,用慢病毒感染卵巢癌细胞A2780,实时定量PCR及Western blot检测CKS2表达;MTT法检测A2780细胞增殖;Western blot检测PARP-1的剪切;流式细胞术检测凋亡。结果成功构建CKS2 shRNA慢病毒表达载体能明显降低A2780细胞中CKS2 mRNA及蛋白表达(P0.05);能显著抑制A2780靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,并包装出慢病毒;感染A2780细胞后,细胞增殖受抑(P0.05);能诱导PARP-1蛋白的剪切及凋亡(P0.05)。结论成功构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,能显著抑制A2780细胞增殖。     

转录因子CDX2过表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖和细胞周期的影响*

 目的： 探索CDX2过表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖、生长和细胞周期的影响及其分子机制。方法: 采用携带CDX2基因的重组慢病毒颗粒（LV-CDX2-GFP）感染SGC-7901细胞,作为实验组（LV-CDX2-GFP组）;以对照慢病毒颗粒（LV-GFP）感染SGC-7901细胞,作为阴性对照组（LV-GFP组）;空白对照组常规培养,不做任何处理。分别采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组细胞周期的分布,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting技术检测细胞中CDX2、Bax、Bcl-2、cyclin D1和survivin mRNA和蛋白的表达。结果: 与LV-GFP组和空白对照组比较,LV-CDX2-GFP组细胞增殖活力明显降低(P<0.05),G0/G1期所占比例上升(P<0.05),Bcl-2、cyclin D1和survivin mRNA和蛋白的表达降低（P<0.05）,Bax mRNA和蛋白的表达上调（P<0.05）,而LV-GFP组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论: 慢病毒介导的CDX2过表达抑制胃癌细胞增殖和生长,使细胞周期停滞在 G0/G1期,其机制可能与CDX2过表达使胃癌细胞Bcl-2、cyclin D1、survivin表达下调和Bax表达上调有关。     

NAC-1特异的siRNA增强紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞凋亡

目的: 探讨 NAC-1 (nucleus accumbens-1)基因特异的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)联合紫杉醇诱导人卵巢癌HO8910细胞凋亡的协同作用及其可能机制。方法: 测定不同浓度 NAC-1 基因特异的siRNA与紫杉醇单用或者合用对HO8910细胞增殖与凋亡的作用,设立阴性siRNA对照和空白对照。以实时荧光定量RT-PCR 检测NAC-1 mRNA表达水平、Western印迹法检测NAC-1蛋白、表皮生长因子受体(EGFR)下游信号磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK),以MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡。结果: 单用 NAC-1 基因特异的siRNA作用48 h能抑制HO8910细胞NAC-1 mRNA和蛋白的表达,分别下调71.2%和80.5%,细胞周期被阻滞于G₁期,p-Akt和p-ERK蛋白水平分别下降43.7%和49.8%;作用72 h细胞增殖被抑制45.6%,与转染阴性siRNA 及未转染组比较,差异显著(P<0.05)。 NAC-1 siRNA(0.5 μmol/L)与紫杉醇(2 μmol/L)联合作用于卵巢癌HO8910细胞72 h细胞凋亡率为(30.93±4.57)%,显著高于单用紫杉醇时的细胞凋亡率[(23.85±3.65)%],P<0.05。结论: 靶向抑制 NAC-1 基因表达能显著抑制卵巢癌HO8910细胞增殖,增强其对紫杉醇的敏感性,这与部分抑制EGFR下游信号途径有关。     

Gαs慢病毒载体的构建、鉴定与表达

目的:构建Gαs慢病毒表达载体并检测其表达性能,以便应用过表达技术进一步研究Gαs功能。方法:设计针对人Gαs DNA序列的带酶切位点引物,PCR扩增获得双链DNA后,与酶切后的FUW载体片段进行连接、转化,酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒,转染293T细胞。用293T细胞制备慢病毒颗粒,感染293T细胞后收集细胞全蛋白,用QPCR、Western blot检测慢病毒系统过表达效果。结果:证实人Gαs正确插入慢病毒载体,人Gαs慢病毒过表达质粒及相应病毒颗粒能有效过表达Gαs。结论:人Gαs慢病毒表达系统的成功建立,为应用过表达技术研究人Gαs慢病毒功能打下了基础。     

泛素结合酶E2T对卵巢癌细胞增殖的影响

目的 观察泛素结合酶E2T(UBE2T)对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响,并探讨其机制。方法 构建UBE2T-shRNA和携带UBE2T基因的慢病毒载体,将其转染至经过培养传代的人卵巢癌细胞株SKOV3,筛选稳定株,分别记为下调组、上调组;另转染NC-shRNA阴性对照慢病毒载体至人卵巢癌细胞株SKOV3,记为阴性对照组;并取未转染的人卵巢癌细胞株SKOV3,记为空白对照组。培养72 h。噻唑蓝（MTT）法、流式细胞仪、反转录-实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹法（WB）分别检测细胞增殖抑制率、细胞周期、UBE2T及其下游相关基因和蛋白表达。结果 下调组细胞增殖抑制率、G1期细胞占比均高于其余3组（P<0.05）,S期和G2期细胞占比、UBE2T、蛋白激酶B(AKT)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA及蛋白表达、p-AKT水平均低于其余3组（P<0.05）,上调组细胞增殖抑制率、G1期细胞占比均低于阴性对照组与空白组（P<0.05）,S期和G2期细胞占比、UBE2T、AKT、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达、p-AKT水...     

过表达连接子蛋白40(Cx40)通过引起细胞周期阻滞抑制H9c2大鼠心肌细胞增殖

目的 建立过表达连接子蛋白40(Cx40)的H9c2心肌细胞稳定株，初步探讨慢病毒载体介导的Cx40蛋白过表达对H9c2细胞增殖的影响及其相关机制。方法 采用实时定量PCR从H9c2细胞株扩增Cx40基因片段，与慢病毒载体质粒pLVX-IRES-Puro连接，获得重组pLVX-Flag-Cx40表达载体。通过与包装质粒共转染人胚肾HEK293T细胞，获得携带Flag-Cx40的重组慢病毒颗粒。感染的H9c2细胞经嘌呤霉素(puromycin)筛选出稳定表达株(H9c2-Flag-Cx40细胞)。采用Western blot法检测Cx40蛋白表达情况；通过CCK-8法检测Cx40对H9c2细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞周期的变化；实时定量PCR检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的mRNA表达；Western blot法检测cyclin D1蛋白表达；免疫共沉淀(Co-IP)实验检测H9c2细胞Cx40和Yes相关蛋白(YAP)的相互结合情况；分离胞质、胞核蛋白，利用Western blot法检测Cx40对YAP细胞定位的影响。结果 测序结果显示成功构建重组pLVX-Flag-...     

siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的:探究siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1(CHD1L)对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移及相关分子如核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:将si-CHD1L、si-NC质粒转染至卵巢癌HO-8910PM细胞,命名为si-CHD1L组、si-NC组,以未经转染细胞作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞CHD1L mRNA表达; CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室系统检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)检测NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:与对照组、si-NC组比较,si-CHD1L组细胞CHD1L mRNA表达降低(P0.05),细胞增殖抑制率升高,细胞迁移能力降低,迁移、侵袭数量降低(P0.05)。与对照组、si-NC组相比,si-CHD1L组NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P0.05)。结论:siRNA沉默CHD1L能够抑制卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移,并能抑制NF-κB、MMP蛋白的表达,为卵巢癌的靶向治疗提供一定的理论依据。     

慢病毒介导的RASSF1A表达抑制小细胞肺癌H446细胞的生长

 目的：探讨Ras相关结构域家族1A (Ras-association domain family 1A, RASSF1A)抑制小细胞肺癌细胞生长的机制。方法：构建含有RASSF1A基因的慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒,感染H446小细胞肺癌细胞。MTT测细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期;real-time PCR和Western blotting分别检测细胞周期相关蛋白mRNA和蛋白水平的表达。结果：成功获取稳定表达RASSF1A的H446细胞（RASSF1A-H446）。RASSF1A-H446细胞生长缓慢,细胞周期阻滞在G1期。 Real-time PCR和Western blotting结果显示在RASSF1A-H446细胞中,p21和p27的表达明显升高,E2F1的表达明显降低。结论：RASSF1A通过升高p21、p27和降低E2F1的表达,抑制H446细胞的生长。