结核病患者外周血中CD4~+ CD25~+调节性T细胞水平的检测

探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞及其转录因子Foxp3在结核病发病机制中的作用。研究对象为肺结核患者22例(病例组)以及健康对照者23例(对照组)。采用FACS检测外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的百分率,采用real-time PCR检测外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达以及CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、IFN-γ和IL-4的相关性。结核病患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞的百分率,病例组(3.38±1.23)%高于对照组(1.97±0.62)%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。血清单个核细胞Foxp3 mRNA相对表达水平为134.54±6.76,高于对照组(40.98±2.34,P0.05)。CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞以及与IFN-γ和IL-4的表达呈负相关。结核病CD4~+CD25~+调节性T细胞数量增加、特异性转录因子Foxp3 mRNA表达上升,由此引发的免疫抑制效应可能是结核病发生发展的重要原因之一。     

肺动脉高压大鼠肺部炎症与CD4+ T 淋巴细胞上Cx40、Cx43 的相关性研究

目的:探讨肺动脉高压大鼠肺组织炎症的变化与CD4~+T淋巴细胞上连接蛋白(Cx) 40、43表达的相关性研究。方法:选取12周龄雄性SD大鼠12只,随机分为对照组和肺动脉高压(PAH)组,野百合碱(MCT)溶液一次性腹腔注射60 mg/kg,4周造模成功后,记录右心室肥厚指数(RVHI),HE染色观察大鼠肺脏病理学变化,ELISA方法检测肺组织中IL-6、TNF-α的表达,流式细胞术检测T淋巴细胞CD4/CD8的表达比率以及CD4~+T淋巴细胞上Cx40、Cx43的表达变化。结果:与对照组比较,PAH组右心室重量与RVHI升高; PAH组肺脏中小动脉血管壁增厚,炎性细胞浸润,PAH组大鼠肺中小型动脉的管壁厚度占血管外径的百分比(WT%)和肺动脉管壁面积与管总面积的百分比(WA%)均增高(P0. 05);肺动脉高压大鼠肺组织匀浆中细胞因子IL-6和TNF-ɑ表达水平上调(P0. 05); PAH组CD3~+T淋巴细胞比例升高(P 0. 05),PAH组CD4~+/CD8~+升高(P0. 05); PAH组CD4~+T淋巴细胞上Cx40、Cx43表达显著增高(P0. 01),肺组织匀浆中细胞因子IL-6、TNF-α与CD4~+T淋巴细胞上Cx40和Cx43高表达呈显著正相关(P0. 05)。结论:MCT诱导的肺动脉高压引起的肺部炎性改变可能与T淋巴细胞上连接蛋白表达增高有关。     

Th1、Th2样细胞因子对CD158+细胞比率的调节作用

目的:观察Th1、Th2样细胞因子对外周血CD158+细胞比率的调节作用,为寻找干细胞移植免疫耐受的方法提供论理依据。方法:将Th1样细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2样细胞因子(IL-4、IL-6),单独或联合与人外周血单个核细胞(PBMC)培养72h,用流式细胞法分析总CD158a+、CD158b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+ CD56+细胞亚群中CD158a+、CD158b+细胞的比率。结果:①细胞因子对CD3+、CD4+、CD8+细胞及CD16+ CD56+细胞的影响:IL-2和IFN-γ均可增加上述细胞的百分率(P<0.05),但IL-2的作用大于IFN-γ(P<0.05)。IL-2+IFN-γ联合处理的效应高于IFN-γ单独处理(P<0.05)。IL-4+IL-6可降低上述细胞的百分率(P<0.05)。IL-2+IL-4对上述细胞百分率的影响,高于IL-4(P<0.05)但低于IL-2(P<0.05)。②细胞因子对CD158a+/b+细胞的影响:IL-2可增加总的CD158a+/b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+ CD56+细胞中的CD158a+/b+细胞的百分比率(P<0.05);IL-2+IFN-γ可增加CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05),但与IL-2单独处理无明显区别,IL-4+IL-6可降低CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05)。IL-2+IL-4可增加总的CD158a+/b+细胞及各亚群中CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05),但低于IL-2单独处理(P<0.05)。结论:IL-2有促进CD158基因表达或使CD158a+、CD158b+     

程氏蠲痹汤加减方降低佐剂性关节炎大鼠外周血T细胞cAMP水平和CD4~+/CD8~+T细胞比值

目的探讨程氏蠲痹汤加减方(CJBD)对佐剂性关节炎(AA)大鼠T淋巴细胞中的环腺苷酸(c AMP)水平和CD4~+/CD8~+T细胞比值的影响。方法将成年雄性SD大鼠分为正常对照组、AA组、CJBD组和雷公藤多苷片(TGT)组。用吹风冷水和Freund完全佐剂制备大鼠风寒湿痹AA模型,对照组给予生理盐水灌胃,其他组分别给予对应药品,持续7 d。各组大鼠经眼眶取血,分离外周血单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠分选技术分选T淋巴细胞,应用c AMP检测试剂盒检测各组T淋巴细胞的c AMP水平,用流式细胞术检测各组大鼠外周血T细胞中的CD4~+和CD8~+T细胞数,计算CD4~+/CD8~+T细胞比值。结果与正常对照组比较,CJBD组大鼠T淋巴细胞的c AMP表达水平显著降低,TGT组的c AMP含量与正常对照组无显著性差异;CJBD组的CD4~+/CD8~+T细胞比值显著降低。结论 CJBD可降低AA大鼠T淋巴细胞c AMP的水平和CD4~+/CD8~+T细胞比值。     

γ干扰素上调人胎盘间充质干细胞PD-L1表达并增强其诱导脐血和外周血T细胞向IL-10~+T细胞的分化

目的比较人胎盘间充质干细胞(h PMSC)对脐血和外周血IL-10~+T细胞分化的调节作用,并探讨γ干扰素(IFN-γ)在其中的作用机制。方法应用酶消化法分离、培养h PMSC;反转录PCR和流式细胞术分别检测程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)在h PMSC的表达;Ficoll密度梯度离心法分离脐血和健康成人外周血单个核细胞,并用红细胞花环法纯化T细胞;用植物血凝素(PHA)活化T细胞并与h PMSC进行共培养,流式细胞术分别检测在阻断型PD-L1 m Ab和IFN-γ预刺激的条件下h PMSC对脐血和外周血T细胞向CD4~+IL-10~+T细胞、CD8~+IL-10~+T细胞分化的诱导作用。结果 h PMSC可诱导脐血和外周血T细胞向CD4~+IL-10~+T细胞、CD8~+IL-10~+T细胞分化,且对外周血T细胞向IL-10~+T细胞分化的诱导能力明显高于对脐血T细胞向该细胞分化的诱导能力;IFN-γ预处理h PMSC后,h PMSC促进脐血和外周血T细胞向IL-10~+T细胞分化能力明显增强;h PMSC高表达PD-L1,IFN-γ可明显上调其在h PMSC上的表达;阻断PD-L1在h PMSC上表达后,脐血、外周血中CD4~+IL-10~+T细胞、CD8~+IL-10~+T细胞比例均明显降低。结论 h PMSC诱导外周血T细胞向IL-10~+T细胞分化的能力明显高于其诱导脐血T细胞向该细胞分化的能力。IFN-γ可通过上调PD-L1在h PMSC上的表达,增强h PMSC对脐血和外周血T细胞向IL-10~+T细胞分化的诱导能力。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+CD25~+Treg与CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞亚群的相关研究

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的含量和CD4+CD8+T淋巴细胞亚群分布,两者之间相关性及与HBV的相关性。方法:采用流式细胞术检测50例慢性乙型肝炎患者和20例健康对照者外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达及CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群,荧光定量PCR法检测HBV DNA含量。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25highTreg明显高于健康对照组(P0.01),且随HBV DNA载量增加,患者外周血中CD4+CD25highTreg细胞的水平逐渐升高。慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞也相应增高,且与CD4+CD25highTreg细胞的变化成正相关(r=0.890,P0.001)。与健康对照组比较,患者组CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值均降低,而CD3+T细胞和CD8+T细胞百分率差异无显著性(P0.05)。CD4+CD25highTreg细胞与HBV DNA取对数后成正相关(r=0.782,P0.001),与谷丙转氨酶(ALT)成正相关(r=0.432,P0.005);与CD3+、CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+/CD8+比值均无相关性(P0.05)。CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值与HBV DNA载量之间亦无相关性(P0.05)。结论:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞增高,且与HBV的复制水平及ALT增高具有一致性,而T细胞亚群是否可作为监测CHB患者免疫状态的指标需进一步探讨。     

原发免疫性血小板减少症患者CD4+T细胞CD28的表达及其与IFN-γ/IL-10比率的关系

目的 研究原发免疫性血小板减少症(ITP)患者治疗前、后,外周血CD4+的T淋巴细胞中共刺激分子CD28的表达及与IFN-γ/IL-10比率的关系.方法 采用流式细胞术分析30例ITP患者糖皮质激素治疗前、后和26例正常对照外周血CD4+T细胞上CD28表达率,用ELISA双夹心法检测外周血血清中IFN-γ和IL-10的水平,评价CD4+ CD28+与IFN-γ/IL-10平衡状态、血小板计数之间的关系.结果 ITP患者治疗前CD4+ CD28+的表达显著高于正常对照组(P＜0.05),治疗后与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);ITP患者治疗前IFN-γ水平较正常对照组显著增高,IL-10水平显著降低,IFN-γ/IL-10比值显著增高(P＜0.01),治疗后与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);ITP患者治疗前CD4+ CD28+与IFN-γ/IL-10比值呈正相关(P＜0.05),与血小板计数呈负相关(P＜0.05).结论 共刺激分子CD28与ITP免疫紊乱密切相关,可能通过参与Th1优势状态形成而在ITP的发病中发挥一定作用.     

强直性脊柱炎患者外周血CD4+ CD25high CD127low 、CD8+ CD28- 调节性 T 细胞水平变化及临床意义

目的:探讨CD4~+CD25~(high)CD127~(low)、CD8~+CD28~-调节性T细胞(Treg)在强直性脊柱炎(AS)患者外周血中的表达及临床意义。方法:选取2017年9月～2019年3月于我院初次就诊的AS患者77例(非活动期47例、活动期30例)及健康对照者59例。流式细胞术(FCM)检测外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)、CD8~+CD28~-Treg比例,流式细胞微球芯片捕获技术(CBA)检测血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-17A水平,分析Treg细胞与AS疾病活动度和临床炎症活动指标的相关性。结果:AS活动组CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg细胞比例低于AS非活动组和正常对照组(P0.05,P0.01);AS活动组和非活动组CD8~+CD28~-Treg细胞比例较健康对照组显著降低(P0.01)。AS活动组CD8~+CD28~+Tc细胞比例和CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-明显高于AS非活动组和健康对照组,且AS非活动组CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-高于健康对照组(P0.05)。与健康对照组相比,AS活动组和AS非活动组血清IL-6、TNF-α、IL-17A水平显著升高,且AS活动组血清IL-6、IL-17A水平显著高于AS非活动组(P0.05);3组志愿者IL-2水平差异无统计学意义(P0.05)。AS活动组血清IFN-γ水平显著高于AS非活动组和健康对照组(P0.05,P0.01),但AS非活动组与健康对照组差异无统计学意义(P0.05)。AS患者CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg细胞比例与BASDAI、ESR、Hs-CRP呈负相关(r=0.654、0.517、0.577,P0.01)。CD8~+CD28~+Tc细胞比例及CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-与BASDAI呈正相关(r=0.276、0.246,P0.05)。结论:降低AS患者外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)和CD8~+CD28~-Treg细胞比例、提高炎症细胞因子水平可能在AS疾病发生发展中起重要作用。     

丙种球蛋白输注对川崎病患儿外周血CD4~+CD25~+调节T细胞与淋巴细胞亚群分布的影响

目的探讨丙种球蛋白输注对川崎病患儿外周血CD4~+CD25~+调节T细胞(Treg)与淋巴细胞亚群分布的影响及临床意义。方法流式细胞术检测40例川崎病患儿和30例体检健康儿童外周血中CD4~+CD25~+Treg细胞的表达水平以及108例川崎病患儿和41例体检健康儿童外周血中淋巴细胞亚群分布。ELISA法检测川崎病患儿血浆中TGF-β1浓度。108例川崎病患儿中有30例收集到对应的丙种球蛋白(IVIG)治疗后全血,流式细胞术检测CD4~+CD25~+Treg、TGF-β1及淋巴细胞亚群在川崎病患儿丙种球蛋白(IVIG)治疗前后表达水平的差异。结果与健康体检组相比,川崎病患儿CD4~+CD25~+Treg细胞及血浆TGF-β1的表达水平明显降低,外周血CD3+、CD8~+T细胞及NK细胞的表达水平明显降低,CD4~+T细胞、B细胞及CD4~+/CD8~+水平明显增高,差异均有统计学意义(均P0.01)。与IVIG治疗前相比,川崎病患儿IVIG治疗后外周血CD4~+CD25~+Treg细胞及血浆TGF-β1的表达水平明显增高(均P0.05),外周血CD3+、CD8~+T细胞及NK细胞的表达水平明显增高(均P0.05),CD4~+T细胞、B细胞及CD4~+/CD8~+水平明显降低(均P0.05)。治疗后患儿外周血CD4~+CD25~+Treg水平、血浆TGF-β1浓度及淋巴细胞亚群表达水平与健康对照相比无差异(P0.05)。结论 Treg细胞与淋巴细胞比例失常是导致儿童川崎病免疫紊乱的重要原因。检测CD4~+CD25~+调节T细胞及淋巴细胞亚群分布对评估川崎病患儿的细胞免疫状况,辅助诊断和指导治疗具有重要的临床价值。     

CD200 与CD4+ CD25+ CD127low Treg 在强直性脊柱炎中的意义

目的:研究强直性脊柱炎(AS)患者外周血淋巴细胞中CD200的表达水平,分析CD200及Treg与IL-6、SAA的相关性,探讨CD200与AS免疫功能的关系以及诊断效能,为辅助AS的诊断、免疫评估提供帮助。方法:从74例AS患者和50例健康志愿者中收集外周血。流式细胞术检测淋巴细胞亚群、Treg的百分率及CD200的表达率,并用ELISA法检测血清中CD200的浓度,上转发光法测定IL-6的浓度,胶乳免疫比浊法测定SAA的浓度。结果:与对照组相比,AS活动组CD4~+T细胞、CD19~+B细胞的百分率均增高(P0.05),CD8~+T细胞、Treg的百分率均减低(P0.05),CD3~+T细胞的百分率无明显差异;稳定组CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、CD19~+B细胞、Treg的百分率与对照组均无显著差异。与对照组比较,活动组(CD3~+、CD4~+、CD8~+)T细胞中CD200的表达率和血清中CD200的浓度以及稳定组(CD3~+、CD4~+)T细胞中CD200的表达率和血清中CD200的浓度均减低(P0.05);而稳定组CD8~+T细胞、CD19~+B细胞中CD200的表达率及活动组CD19~+B细胞中CD200的表达率无显著差异。与对照组比较,活动组血清中IL-6、SAA的浓度明显升高(P0.05);而稳定组IL-6的浓度轻度升高(P0.05),SAA的浓度无差异。活动组CD3~+T淋巴细胞中CD200的表达率与Treg呈正相关,与IL-6呈负相关,但与SAA不相关;Treg的百分率与IL-6负相关,与SAA不相关。CD200对AS的诊断优于Treg、SAA,而与IL-6的诊断效能相当。结论:AS活动期患者存在淋巴细胞亚群紊乱,CD200和Treg的表达率降低,两者可能参与了AS的发病,为辅助AS的诊断和免疫功能的判断提供理论依据。     

甲状腺与外周血T淋巴细胞亚群比例差异

目的观察正常甲状腺与外周血T淋巴细胞亚群,包括调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)、辅助性T细胞1(T helper 1 cells,Th1 cells)和辅助性T细胞2(T helper 2 cells,Th2 cells)的分布,Treg细胞中干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白介素-4(interleukin-4,IL-4)及其mRNA的表达。方法 20名良性甲状腺肿物患者、3名胸腺手术及3名脾脏切除术患者,术前当天留取外周空腹静脉血,术中分别留取甲状腺、胸腺及脾脏标本,分离单个核细胞,流式细胞术检测标本组织及外周血T淋巴细胞亚群差异。磁珠分离法分离甲状腺及外周血CD25+T细胞,RT-PCR检测Treg中IFN-γ和IL-4 mRNA的表达。NKT细胞受体激动剂α-Galcer刺激Treg 7 d后,RT-PCR检测Treg中IFN-γ、IL-4、CD1d、Vα24及Vβ11 mRNA的表达。结果 1)甲状腺组织Th1、Th2细胞比例低于外周血(P0.001),而Th0、Treg细胞比例高于外周血(P0.001)。2)在甲状腺内,几乎所有的CD4+CD25+Foxp3+细胞可以同时分泌IL-4、IFN-γ,RT-PCR提示其IL-4、IFN-γmRNA表达明显高于外周血,而在外周血中,CD4+CD25+Foxp3+细胞并不表达IL-4或IFN-γ。3)在胸腺和脾脏中,未检测到同时表达IL-4、IFN-γ的CD4+CD25+Foxp3+细胞。4)甲状腺内Treg在α-GalCer刺激前后均不表达NKT细胞的表面标志CD1d、Vα24及Vβ11 m RNA,而IL-4和IFN-γmRNA的表达在刺激前后无明显差异。结论正常甲状腺与外周血T淋巴细胞亚群分布存在差异,甲状腺内Treg特异性的同时表达IL-4及IFN-γ。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞移植对自身免疫性脑脊髓膜炎大鼠的保护作用

目的观察输注CD4~+CD25~+调节性T细胞对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)模型大鼠后脑和脊髓组织的保护作用及相关机制。方法取SD大鼠30只,随机均分为空白对照组、模型组(实验性自身免疫性脑脊髓炎模型)和实验组(CD4~+CD25~+调节性T细胞输注),对EAE大鼠进行神经功能评分及体质量测量,通过病理学HE染色和免疫组化观察脑和脊髓炎症浸润,实时荧光定量PCR(qPCR)检测鼠脑和脊髓IFN-γ、IL-17、IL-23和Foxp3 m RNA水平表达。结果实验组SD大鼠神经功能评分明显改善,体质量明显增加;与模型组比较,实验组神经症状和病理改变减轻,鼠脑和脊髓IFN-γ、IL-17、IL-23 mRNA表达下降,而Foxp3 mRNA表达增加(P0.05)。结论 CD4~+CD25~+调节性T细胞通过调节免疫系统的脑和脊髓IFN-γ、IL-17、IL-23和Foxp3 mRNA水平的表达对EAE起保护作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血细胞CD40+、CD40L+及CD8+/CD28+表达的研究

目的检测慢性乙型肝炎(简称慢乙肝)患者外周血淋巴、单核细胞表面CD40+、CD40L+及淋巴细胞表面CD8+/CD28+、CD8+/CD28-的表达,评价患者的细胞免疫状态,为临床治疗提供指导.方法流式细胞仪测定慢乙肝患者单核细胞、淋巴细胞表面CD40+、CD40L+表达的百分率及淋巴细胞表面CD8+/CD28+、CD8+/CD28-表达的百分率.结果慢乙肝组外周血淋巴、单核细胞表面CD40+、CD40L+及淋巴细胞表面CD8+/CD28+的表达明显低于正常对照组(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01),乙肝肝硬化组(简称肝硬化)均明显低于正常对照组(均P＜0.01),而慢乙肝组、肝硬化组CD8+/CD28-的表达高于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01).慢乙肝组与肝硬化组均无显著差异(均P＞0.05).慢乙肝轻、中、重度和肝硬化三组间均无显著差异(均P＞0.05).相关性分析结果显示,慢乙肝患者淋巴、单核细胞表面CD40+和CD40L+的表达之间存在正相关,淋巴细胞CD40+、CD40L+表达与CD8+/CD28+表达存在正相关,而与CD8+/CD28-表达相关性不明显.结论慢乙肝患者外周血淋巴、单核细胞CD40+、CD40L+及淋巴细胞CD8+/CD28+表达低下,而CD8+/CD28-的表达增加.检测外周血CD40+、CD40L+及CD8+/CD28+的表达可评估患者的细胞免疫状态,对临床的抗病毒治疗提供新思路.     

八肽胆囊收缩素对经钥孔戚血蓝蛋白免疫小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的：探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）对经钥孔戚血蓝蛋白（KLH）免疫小鼠T淋巴细胞亚群的影响。方法：雌性BALB/c小鼠KLH免疫同时分别给予不同剂量CCK-8。流式细胞法检测小鼠外周血及脾细胞中CD4+、CD8+T细胞阳性百分率；RT-PCR法检测脾细胞中Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-4 mRNA表达；ELISA法检测其培养上清中IFN-γ、IL-4水平；HE染色观察小鼠肺组织病理变化。结果：CCK-8下调KLH免疫小鼠外周血及脾细胞中上升的CD4+、CD8+T细胞阳性百分率，降低CD4+/CD8+比值；进一步提高其IFN-γ mRNA表达和培养上清中IFN-γ分泌量，同时下调上升的IL-4 mRNA表达和培养上清中IL-4分泌量；减轻KLH免疫所致小鼠肺部炎症。结论：CCK-8可调节适应性免疫应答，抑制T细胞尤其是CD4+T细胞活性；抑制Th2功能，提高Th1功能，因此可能在变态反应性疾病的发病和防治中具有一定作用。     

NOD小鼠人源化后CD4~+T和CD8~+T细胞及其分泌IFN-γ与IL-17的频率变化及意义

目的 观察分析NOD小鼠和NOD.β2mnullHHD小鼠Ⅰ型糖尿病(Type1 diabetes,T1D)发病情况以及脾T细胞亚群的频率及功能差异,揭示CD4+T和CD8+T细胞亚群在HLA-A*0201转基因NOD小鼠和NOD小鼠的T1D发病中作用的异同。方法采用测量血糖的方法观察2种小鼠的发病情况,采用流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞CD3+CD4+T、CD3+CD8+T细胞亚群频率以及这2群细胞分泌IL-17和IFN-γ频率的差异。结果 NOD.β2mnullHHD小鼠较NOD小鼠发病早且严重;NOD.β2mnullHHD小鼠脾淋巴细胞的CD3+CD4+T细胞亚群显著高于NOD小鼠,NOD.β2mnullHHD小鼠脾淋巴细胞的CD3+CD8+T细胞亚群显著低于NOD小鼠;2种小鼠的脾淋巴细胞中CD3+CD4+IL-17+T细胞亚群与CD3+CD8+IL17+T细胞频率无差异;NOD.β2mnullHHD小鼠脾淋巴细胞的CD3+CD4+IFN-γ+T和CD3+CD8+IFN-γ+T细胞亚群频率显著高于NOD小鼠。结论 HLA-2.1分子转入NOD小鼠后HLA-2.1分子加速了HLA-A*0201转基因NOD小鼠T1D的发病进程;NOD.β2mnullHHD小鼠相对NOD小鼠的T1D发病更早、病情更重,这与CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞分泌的IFN-γ显著相关,而与IL-17无关,为T1D防治的临床转化基础研究提供实验数据。     

传染性单核细胞增多症患儿外周血淋巴细胞亚群的分布及意义

探讨传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)患儿外周血中淋巴细胞亚群的分布及临床意义。采用流式细胞术检测131例IM患儿和50例体检健康儿童外周血中淋巴细胞亚群的表达,131例IM患儿中有26例患儿收集到对应的丙种球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)治疗后全血,流式细胞术检测淋巴细胞亚群在IM患儿IVIG治疗前后分布比例的差异。结果显示,与健康对照组相比,IM患儿CD3~+T细胞和CD8+T细胞的表达水平明显增高(均P<0.000 1),CD4~+T细胞、NK细胞、B淋巴细胞及CD4~+/CD8+T细胞比值水平明显降低(均P<0.000 1)。IM患儿急性期CD4~+、CD8~+T细胞及CD4~+/CD8~+T细胞比值升高及降低水平与患儿外周血异型淋巴细胞升高的百分率呈现正相关趋势。与IVIG治疗前相比,IM患儿IVIG治疗后外周血CD3~+T细胞和CD8~+T细胞的表达水平有所减低,但仍高于健康对照组(均P<0.01),治疗后CD4~+T细胞、NK细胞、B淋巴细胞及CD4~+/CD8~+T细胞比值水平增高,但其中治疗后CD4~+T细胞、B淋巴细胞及CD4~+/CD8~+T细胞比值水平仍显著低于健康对照组(均P<0.01)。综上所述,检测淋巴细胞亚群对IM患儿的细胞免疫状况评估、辅助诊断和指导治疗具有重要的临床意义。     

活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能CD4+和CD8+T淋巴细胞的特征研究

目的 研究活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征.方法 利用γ干扰素释放试验和多色流式细胞术分析了13例活动性结核病患者、11例肺部感染性/肿瘤疾病患者以及14例健康对照者外周血中结核分枝杆菌抗原特异性(ESAT-6和CFP-10)CD4+Th1和CD8+Tc淋巴细胞表达细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的情况.结果 与肺部感染性/肿瘤疾病组和健康对照组相比:(1)活动性结核病组具有较低比例的分泌TNF-α+的CD4+Th1细胞、较高比例的分泌IFN-γ+和IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD4+Th1细胞;(2)活动性结核病组具有较高比例的分泌IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD8+Tc细胞.结论 实验结果提示活动性结核病患者中表达IFN-γ+TNF-α+IL-2+的多能CD4+Th1及CD8+Tc细胞,可能在区别活动性结核病与肺部感染性/肿瘤疾病方面具有一定的临床参考价值.     

CRTH2~+CD4~+T细胞在特应性皮炎儿童外周血中的表达和意义

探讨CRTH2~+CD4~+T细胞在特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)儿童外周血中的比例变化及意义。选取2015年6月至2015年10月间我院皮肤科门诊就诊的AD患儿22例和同龄正常对照组儿童30例,采用流式细胞术检测两组儿童外周血中CRTH2~+CD4~+T细胞的比例和该细胞分泌的IL-4、IFN-γ水平;采用粉尘螨刺激PBMC,利用CCK-8增殖试验结合流式细胞术检测两组CRTH2~+CD4~+T细胞的比例变化。结果显示,AD组儿童外周血中CRTH2~+CD4~+T细胞比例明显高于对照组(P0.05),且在AD组中这一比例大小与血清IgE浓度呈正相关(r=0.602,P0.05);CRTH2~+CD4~+T细胞主要分泌IL-4,基本不分泌IFN-γ;粉尘螨刺激后,PBMC中CRTH2~+CD4~+T细胞比例升高,并且AD组的刺激前后细胞比例差值明显高于对照组(P0.05),提示CRTH2~+CD4~+T细胞参与了儿童特应性皮炎的发病过程。     

HDAC抑制剂丙戊酸对小鼠T淋巴细胞表达细胞因子的影响

目的分析组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸(Valproic acid,VPA)对小鼠T细胞亚群IL-2、IFN-γ和IL-6表达的影响,探讨其抗炎免疫调节作用的机制。方法经VPA处理小鼠淋巴细胞,并在佛波醇酯(PDB)和离子霉素刺激后,以流式细胞术分析CD3+、CD4+和CD8+T细胞表达IL-2、IFN-γ和IL-6的情况。结果淋巴细胞受刺激后,IL-6的表达水平仅稍有提高,而IL-2在CD4+和CD8+T细胞表达率分别为35.49%和5.50%,IFN-γ表达率分别为3.47%和38.60%。经VPA处理后,CD3+T细胞IL-6+、IFN-γ+和IL-6+IFN-γ+的表达均受剂量依赖性抑制(P<0.01)。同样,VPA能够剂量依赖性地降低小鼠CD4+和CD8+T细胞亚群内表达IL-2+、IFN-γ+的细胞比例(P<0.01),对于IL-2+IFN-γ+双阳性细胞的比例也具有明显抑制作用(P<0.01);此外,VPA对CD8+T细胞表达IFN-γ的抑制程度高于CD4+T细胞。结论 HDAC抑制剂VPA通过抑制IL-2和IFN-γ而发挥其抗炎和免疫调节效应。     

HIV-1感染过程中CD8~+T细胞PD-1水平增高与其活化状态正相关

目的分析人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者CD8+T细胞程序性死亡蛋白1(PD-1)、CD38、人白细胞抗原DR(HLA-DR)及KI-67抗原(ki67)的表达水平,探讨HIV-1感染过程中CD8~+T细胞PD-1表达水平与免疫活化和免疫耗竭的关系及意义。方法收集HIV-1感染者87例,健康志愿者22例,密度梯度法分离外周血单个核细胞;采用流式细胞术分析其CD8+T细胞PD-1、CD38、HLA-DR、ki67的表达水平;观察用抗PD-L1 m Ab阻断PD-1/PD-L1通路后CD8~+T细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的水平变化。结果 HIV-1感染者CD8~+T细胞PD-1表达水平显著高于健康对照组;CD8~+T细胞PD-1水平与病毒载量呈正相关,与CD4~+T细胞数呈负相关;CD8~+T细胞PD-1与CD38、HLA-DR表达呈正相关,与ki67表达无相关性;体外阻断PD-1/PD-L1通路后TNF-α、IFN-γ的表达量增加。结论 HIV-1感染者外周血CD8~+T细胞PD-1表达增加;PD-1过表达与HIV感染过程中CD8~+T细胞功能受抑、免疫耗竭及疾病进程相关;体外阻断PD-1/PD-L1通路可恢复CD8~+T细胞功能。