Gli2基因沉默逆转肝癌细胞系SMMC-7721的上皮间质转化

目的探讨胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)对肝癌细胞系SMMC-7721上皮间质转化(EMT)和侵袭能力的影响及机制。方法合成shRNA-Gli2、shRNA-NC病毒载体,实验设shRNA-Gli2组、shRNA-NC组和空白组,转染SMMC-7721细胞。用Transwell小室和细胞黏附实验观察细胞侵袭及黏附能力;用qRT-PCR和Western blot检测细胞间Gli2、E-cadherin、N-cadherin及vimentin基因和蛋白的表达。结果在不同肝癌细胞系中,随着肝癌细胞系侵袭能力的增强,Gli2的表达逐渐增高,shRNA-Gli2组与对照组相比侵袭能力降低,同种黏附能力增加,异种黏附能力降低(P0.05)。shRNA-Gli2组与对照组相比,E-cadherin表达明显增高而N-cadherin和vimentin表达明显降低(P0.05)。结论沉默Gli2的表达能够促进肝癌细胞SMMC-7721 EMT的反转,并降低其侵袭能力,机制可能与E-cadherin的上调和N-cadherin、vimentin的下调有关。     

MYH9在人肝癌组织中的表达及其对肝细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨非肌肉肌球蛋白重链(MYH9)在肝癌组织中的表达及通过沉默MYH9基因对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖及凋亡的影响。方法收集50组人肝癌组织及癌旁组织,选用人肝癌细胞系SMMC-7721和Hep G2及人正常肝细胞系LO2,免疫组织化学方法及Western blot检测肝癌组织及癌旁组织中MYH9蛋白的表达,Western blot检测SMMC-7721、Hep G2及LO2中MYH9蛋白的表达;将MYH9 siRNA转染SMMC-7721,CKK8法及流式细胞术检测沉默MYH9对肝癌细胞增殖及细胞凋亡的影响。结果 MYH9蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁(P0.05);MYH9蛋白在SMMC-7721及Hep G2中的表达均明显高于LO2(P0.05);沉默MYH9基因可抑制细胞增殖(P0.001),促进细胞凋亡(P0.05)。结论 MYH9蛋白在肝癌组织的表达显著高于癌旁组织;MYH9低表达能有效抑制肝癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

miR-204通过下调Bcl-2和Sirt1表达抑制肝癌细胞生长

目的探讨微小RNA 204(miR-204)在肝细胞癌中的表达、临床意义及可能分子机制。方法收集手术切除的60例肝细胞癌及对应癌旁肝组织,实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-204在肝癌及癌旁组织中的表达,免疫组织化学染色检测miR-204下游潜在靶点Bcl-2与组蛋白脱乙酰酶1(Sirt1)的表达;用人工合成的miR-204模拟物转染人SMMC-7721肝癌细胞,MTT法及流式细胞术检测SMMC-7721细胞的增殖、凋亡的情况,qRT-PCR、Western blot法分别检测Bcl-2与Sirt1的mRNA和蛋白表达。结果 miR-204在肝癌组织中表达水平显著低于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-204低表达与肿瘤大小、肿瘤个数、肿瘤TNM分期显著相关;miR-204低表达组Bcl-2与Sirt1蛋白表达显著高于miR-204高表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-204与Bcl-2、Sirt1蛋白表达呈显著负相关;miR-204可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖并促进其凋亡,并下调Bcl-2与Sirt1的mRNA与蛋白表达水平。结论 miR-204在肝癌组织中表达下调并与肝癌恶性临床病理特征有关,miR-204抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡的作用可能与下调Bcl-2和Sirt1表达有关。     

miR-26a对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖和迁移的影响

目的观察miR-26a在人肝癌细胞中的表达情况及高表达的miR-26a对SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响。方法生物信息学分析miR-26a在肝癌及正常肝组织中表达水平分布;化学合成miR-26a寡聚核苷酸,并行测序确认;利用pc DNA6.2-GW/Em-GFP-miR质粒构建miR-26a真核表达载体;pc DNA6.2-GW/Em-GFP-miR-26a质粒载体瞬时转染SMMC-7721细胞,实时荧光定量PCR检测miR-26a的mRNA表达水平;高表达miR-26a后,CCK8法和划痕实验分别检测SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的变化。结果 miR-26a在肝癌组织中表达水平显著低于正常组织(P0.001);设计的miR-26a序列与寡核苷酸测序结果比对,匹配程度达100%;pc DNA6.2-GW/Em-GFPmiR-26a质粒瞬转后人肝癌SMMC-7721细胞miR-26a的表达量与对照组相比显著增加(P0.05);miR-26a过表达SMMC-7721细胞的增殖能力与对照组相比均显著下降(P0.05);miR-26a过表达组细胞迁移速度低于对照组。结论 miR-26a在肝癌组织中低表达,而上调的miR-26a可抑制人肝癌细胞系SMMC-7721的增殖、迁移能力。     

靶向抑制miR-20b降低肝癌HuH-7细胞增殖、迁移和侵袭能力

目的探讨miR-20b对肝癌HuH-7细胞增殖、迁移、侵袭的影响和机制。方法在肝癌HuH-7细胞中转染miR-20b inhibitor,分别采用Real-time PCR评估下调效果,MTT法评估细胞增殖变化,Transwell小室评估细胞侵袭能力,Western blot法评估细胞中MMP-2、E-cadherin、MMP-9和vimentin蛋白水平。应用生物信息学软件预测TCF21可能是miR-20b的靶基因,以双荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在肝癌HuH-7细胞中共转染TCF21 siRNA和miR-20b inhibitor,评估细胞增殖、侵袭、迁移与细胞中MMP-2、E-cadherin、MMP-9、vimentin蛋白的表达水平。结果转染miR-20b inhibitor后HuH-7细胞中miR-20b表达水平降低[(1.02±0.11)vs(0.43±0.05)];细胞增殖[(0.57±0.06)vs(0.34±0.02)]、迁移[(125.64±13.65)vs(92.14±6.94)]和侵袭[(88.15±9.32)vs(63.48±6.2)]能力下降;MMP-2、vimentin、MMP-9蛋白表达水平降低;E-cadherin蛋白表达水平升高。miR-20b靶向负调控TCF21表达。共转染TCF21 siRNA和miR-20b inhibitor可以显著提高HuH-7细胞增殖[(0.40±0.05)vs(0.56±0.06)]、迁移[(89.62±9.25)vs(115.26±10.84)]和侵袭[(68.25±4.15)vs 95.21±6.51)]能力;提高细胞中MMP-2、vimentin、MMP-9蛋白表达水平,降低E-cadherin蛋白水平;与共转染siRNA control和miR-20b inhibitor的细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论下调miR-20b表达,可通过靶向TCF21抑制肝癌HuH-7细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化。     

miR-133a-3p 通过抑制氧化还原因子1 抑制肝癌细胞恶性生物学行为

目的:通过多种实验途径探讨miR-133a-3p通过调节氧化还原因子1(Ref-1)对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:收集2017年2月～2018年12月来本院就诊的肝癌手术患者的癌组织和癌旁相邻正常组织标本,用qRT-PCR检测miR-133a-3p在癌组织和癌旁相邻正常组织中以及在肝癌细胞系HepG2、Huh-7、SK-Hep1、SMMC-7721和肝正常细胞Hep-3B中的表达;构建miR-133a-3p-mimics(miR-mimics组、miR-NC转染质粒组和正常对照组(Control),qRT-PCR检测转染前后miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验检测HepG2细胞转染前后增殖能力变化;细胞划痕和Transwell实验分别检测转染前后HepG2细胞的迁移和侵袭能力变化;RNA转录组测序检测HepG2细胞转染前后转录组RNA表达差异并作通路富集分析;qRT-PCR检测筛选RNA-seq中RNA表达差异较大的基因;qRT-PCR和Western blot检测Ref-1在HepG2细胞转染前后中的表达。免疫组化和qRT-PCR分别检测Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中表达;最后HepG2细胞同时转染了miR-mimics和Ref-1 miR-inhibitors,进行联合干预,随后CCK-8、细胞划痕和Transwell分别检测了联合干预后细胞增殖、迁移和侵袭能力变化。结果:miR-133a-3p在肝癌患者癌组织中的表达显著低于癌旁组织,同时其在肝癌细胞HepG2中的表达最低;qRT-PCR结果表明miR-mimics可有效促进miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验结果显示miR-133a-3p过表达后可以显著抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为;RNA-seq结果显示HepG2转染前后Ref-1的表达差异最大;qRT-PCR和Western blot结果显示HepG2转染成功后,Ref-1表达随miR-133a-3p的过表达而降低。免疫组化和qRT-PCR结果显示Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达均显著高于阴性对照组;联合干预后HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学抑制作用更加强烈。结论:miR-133a-3p可能通过抑制Ref-1表达从而抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。     

miR-21通过PDCD4调控肝癌细胞的生长和侵袭

目的探讨miR-21在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织和细胞中的表达及其可能调控的靶基因。方法检测miR-21在HCC组织和细胞系中的表达,使用miR-21抑制剂后,观察HCC细胞活力和侵袭能力的变化;运用生物信息学分析预测miR-21可能的靶基因。应用miR-21抑制剂后,双荧光素酶报告基因系统检测其对靶基因活性的影响。结果HCC组织中miR-21表达水平显著高于癌旁组织(P0.05);HCC细胞中miR-21的表达水平显著高于肝细胞(P0.01)。抑制miR-21后,HCC细胞的活力和侵袭能力降低(P0.01)。抑癌基因程序性死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织(P0.01),在肝癌细胞中的表达水平显著低于肝细胞(P0.01)。干扰PDCD4后,肝癌细胞的活力和侵袭能力提高(P0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,使用miR-21抑制剂后,PDCD4表达上调(P0.01),肝癌细胞的侵袭和增殖能力降低(P0.01)。干扰PDCD4后,肝癌细胞的侵袭和增殖能力升高(P0.001)。结论miR-21可通过PDCD4调控肝癌细胞的生长和侵袭。     

miR-100靶基因BAZ2A在肝癌迁移侵袭中的机制研究

目的:探讨miR-100和BAZ2A基因在肝癌细胞中的表达及对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。方法:以qRT-PCR检测和Western blot分析miR-100与BAZ2A在肝癌细胞中的表达情况;以miR-100 mimics转染肝癌细胞SMMC-7721,检测miR-100对BAZ2A表达的影响,细胞划痕实验和Transwell小室实验验证miR-100对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果:miR-100在肝癌细胞中呈低表达,BAZ2A表达与其呈负相关,上调miR-100可以降低BAZ2A的表达,抑制肝癌细胞的迁移侵袭能力。结论:miR-100可以通过抑制BAZ2A的表达来降低肝癌细胞的迁移侵袭能力,达到抗肿瘤的效果。     

羟基红花黄色素A抑制人肝癌细胞系Huh7发生上皮-间质转化

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人肝癌细胞系Huh7迁移及侵袭的影响,并通过体内外实验探究其是否影响肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)。方法体外培养Huh7细胞,分为对照组、HSYA 80和160μmol/L实验组,分别处理24 h,用transwell小室法和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测细胞vimentin和E-cadherin蛋白表达;建立Huh7细胞裸鼠皮下移植瘤模型,HE染色观察移植瘤和肝脏组织形态;免疫组化检测移植瘤组织TGF-β1、vimentin和E-cadherin表达情况。结果与对照组相比,HSYA实验组Huh7细胞迁移与侵袭能力明显下降,E-cadherin蛋白表达升高,vimentin蛋白表达下降(P0.05);与移植组相比,HSYA实验组(2.25 mg/kg)肝内无肿瘤细胞转移,移植瘤组织出现肿瘤细胞坏死,E-cadherin表达升高,vimentin和TGF-β1表达下降(P0.05)。结论 HSYA通过抑制肝癌细胞发生EMT,抑制肝癌细胞的迁移及侵袭能力。     

miR-125b 调控ART4 蛋白对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨miR-125b 对ART4 蛋白的调控作用及在肝癌细胞中对其增殖和侵袭能力的影响。方法:qPCR 检测肝癌组织和肝癌细胞中miR-125b 的表达情况;过表达miR-125b 后qPCR 检测ART4 的表达;双荧光素酶实验检测miR-125b和ART4 的关系;MTT 实验检测过表达miR-125b 对肝癌细胞增殖能力的影响;Transwell 侵袭实验检测miR-125b 的过表达对肝癌细胞侵袭能力的影响;MTT 实验检测过表达ART4 后逆转miR-125b 对肝癌细胞增殖能力的影响;Transwell 侵袭实验检测过表达ART4 后逆转miR-125b 对肝癌细胞侵袭能力的影响。结果:miR-125b 在肝癌细胞中表达水平较低,过表达miR-125b可以有效抑制ART4 蛋白的表达;过表达miR-125b 可以抑制肝癌细胞的增殖侵袭能力;过表达ART4 后可以逆转肝癌细胞被miR-125b 抑制的增殖侵袭能力。结论:miR-125b 在肝癌中表达下调,同时miR-125b 可以调控ART4 的表达影响肝癌细胞增殖和侵袭能力。     

miR-32-5p靶向ZEB1、ZEB2基因调控乳腺癌增殖和侵袭能力的机制

目的探讨ZEB1和ZEB2在乳腺癌中的作用及miR-32-5p对乳腺癌调控的分子机制。方法通过Western blot和qRT-PCR检测乳腺癌和癌旁组织中ZEB1、ZEB2和miR-32-5p的表达,筛选出ZEB1和ZEB2高表达的乳腺癌细胞系,采用Western blot和qRT-PCR检测敲减效率。应用克隆形成、迁移和侵袭实验检测敲减ZEB1或ZEB2后对乳腺癌细胞生物学行为的影响,Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达。双荧光素酶报告系统检测miR-32-5p与ZEB1或ZEB23′UTR区域的结合。Western blot、迁移和侵袭实验检测抑制miR-32-5p后对上皮-间质转化相关蛋白、迁移和侵袭的影响。结果乳腺癌组织中ZEB1、ZEB2和miR-32-5p mRNA表达高于癌旁组织。乳腺癌组织中miR-32-5p表达和ZEB1、ZEB2表达呈正相关。MCF-10A、MDA-MB-231和MCF-7三种细胞中,MCF-7细胞ZEB1和ZEB2表达水平较高。敲减ZEB1或ZEB2后,形成的克隆数目减少,迁移和侵袭能力减弱,E-cadherin蛋白表达增加,vimentin蛋白表达降低。ZEB1或ZEB23′UTR区域存在miR-32-5p的结合位点,抑制miR-32-5p会增加迁移和侵袭能力,E-cadherin蛋白表达增加,vimentin蛋白表达降低。增加ZEB1或ZEB2表达会使抑制作用减弱。结论miR-32-5p通过靶向ZEB1和ZEB2调控E-cadherin和vimentin蛋白表达,抑制乳腺癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。     

缺氧微环境调控Twist促进人肝癌细胞株SMMC-7721的上皮间质转化

目的探讨缺氧条件下,Twist基因的表达及其在人肝癌SMMC-7721细胞株上皮间质转化中的作用机制。方法模拟缺氧微环境,分别在常氧(21%O_2)和缺氧(1%O_2)条件下培养SMMC-7721细胞24 h。在倒置光学显微镜下检测SMMC-7721细胞形态学的改变;RT-PCR和Western blot法检测细胞中HIF-1α、Twist、上皮表型标记蛋白E-cadherin及间质表型标记蛋白Vimentin的表达;Transwell小室侵袭实验检测缺氧条件和常氧条件下细胞侵袭能力的变化。使用Twist1靶向siRNA抑制其表达后,进一步采用RT-PCR和Western blot检测HIF-1α、Twist、E-cadherin和Vimentin的表达水平,Transwell法检测细胞侵袭能力变化。结果在缺氧模拟条件下,人肝癌SMMC-7721细胞中Twist基因表达水平显著升高,同时细胞发生上皮-间质转化和侵袭能力增强。靶向沉默Twist基因后,低氧诱导的上皮间质转化过程被逆转,同时细胞侵袭能力显著减弱。结论低氧条件下Twist基因异常激活,进而促进SMMC-7721细胞上皮-间质转化的发生和侵袭能力的增强。     

miR-433-3p 靶向MAPK8 对肝癌细胞MHCC97H 增殖、凋亡和迁移的 调控作用

目的:探究miR-433-3p对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK8)的靶向调控作用及其对肝癌细胞MHCC97H增殖、凋亡和迁移的调控作用。方法:RT-PCR检测了SMMC-7721、HepG2、MHCC97H、Hep3B肝癌细胞株和HL-7702人正常肝细胞株中miR-433-3p的表达。荧光素酶报告实验检测miR-433-3p和MAPK8的相互作用。将MHCC97H细胞分为空白对照(Control)组、阴性对照(NC)组、miR-433-3p组、pc-MAPK8组和miR-433-3p+pc-MAPK8组,按照分组分别转染miR-433-3p mimic或pc-MAPK8,RT-PCR检测miR-433-3p和MAPK8转录水平,CCK8法检测细胞增殖,Hoechst法检测细胞凋亡,划痕愈合法检测细胞迁移,Transwell法检测细胞侵袭,Western blot检测MAPK8、增殖细胞核抗原(PCNA)、活化半胱天冬酶3(cl-CASP3)、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)蛋白表达。结果:与正常肝细胞株HL-7702比较,肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2、MHCC97H、Hep3B中miR-433-3p表达显著降低。在荧光素酶报告实验中,与MAPK8野生型(WT)+NC比较,MAPK8 WT+miR-433-3p组荧光素酶活性显著降低。在细胞实验中,与Control组比较,miR-433-3p组miR-433-3p表达升高,MAPK8转录和蛋白表达降低,MHCC97H细胞的增殖水平降低,凋亡水平升高,迁移和侵袭能力下降,PCNA和N-cadherin蛋白表达下降,cl-CASP3和E-cadherin蛋白表达升高;pc-MAPK8组MAPK8蛋白表达升高,MHCC97H细胞的增殖水平升高,凋亡水平降低,迁移和侵袭能力提高,PCNA和N-cadherin蛋白表达升高,cl-CASP3和E-cadherin蛋白表达降低。与pc-MAPK8组比较,miR-433-3p+pc-MAPK8组MAPK8蛋白表达降低,MHCC97H细胞的增殖水平降低,凋亡水平升高,迁移和侵袭能力下降,PCNA和N-cadherin蛋白表达降低,cl-CASP3和E-cadherin蛋白表达升高。结论:miR-433-3p可靶向作用于MAPK8,抑制肝癌细胞MHCC97H的增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。     

MiR-486-5p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长的影响

本研究旨在探讨肝癌中miR-486-5p的表达及其对肝癌细胞生长的影响。首先,通过qRT-PCR对40例肝癌患者的肝癌组织及其癌旁组织、以及肝癌细胞系(QGY-7701、QGY-7703、BEL-7404、SMMC-7721、Huh7、HepG2和PCL/PRF/5)进行miR-486-5p表达水平的验证;然后,合成miR-486-5p模拟物及其阴性对照物NC,分别转入上述七种肝癌细胞,采用CCK8试剂检测miR-486-5p对肝癌细胞生长的影响;最后,采用流式细胞术检测miR-486-5p对肝癌细胞周期和细胞凋亡的影响。结果显示,与miRNA第二代高通量大规模平行测序(miRNomes MPSS)结果一致,miR-486-5p在肝癌组织和肝癌细胞中显著低表达(P0.05)。CCK8检测结果表明,转染miR-486-5p模拟物能有效、稳定的抑制上述七种肝癌细胞的生长(P0.05)。流式细胞仪检测发现,过表达miR-486-5p能促进肝癌细胞凋亡(QGY-7703细胞,P0.001;QGY-7701细胞,P0.01),及诱导细胞周期阻滞在G1期(P0.01)。研究结果表明,miR-486-5p在肝癌组织中低表达;重建肝癌细胞内miR-486-5p的表达,可有效诱导肝癌细胞周期阻滞和凋亡,从而抑制肝癌细胞生长,提示miR-486-5p可能在肝癌的发生发展中起着重要作用。     

shRNA下调Paxillin表达对SMMC-7721肝癌细胞增殖、侵袭的影响

目的采用RNA干扰技术转染shRNA下调SMMC-7721肝癌细胞中Paxillin的表达,探讨Paxillin下调对SMMC-7721细胞迁移、侵袭力的影响。方法采用Paxillin shRNA转染肝癌细胞株SMMC-7721,分别设未处理SMMC-7721肝癌细胞组(未处理组)、shRNA Paxillin阴性组(对照组)和shRNA Paxillin组(实验组)。以GAPDH为内参,采用qRT-PCR、Western blot、ELISA法分别检测各组SMMC-7721细胞中Paxillin与FAK的表达;筛选出稳定转染Paxillin shRNA的肝癌细胞株,采用MTT、Transwell侵袭小室法分别检测各组细胞的增殖情况和侵袭力差异。结果 qRT-PCR和ELISA结果均显示Paxillin表达明显下调(P0.05),FAK表达各组间差异无显著性(P0.05);Western blot法检测结果显示实验组Paxillin的相对表达量明显低于未处理组和对照组;成功构建Paxillin稳定表达的SMMC-7721肝癌细胞株;MTT细胞增殖与Transwell细胞侵袭力检测显示Paxillin下调肝癌细胞的增殖、侵袭能力明显低于未处理组和对照组(P0.05)。结论 shRNA干扰技术可以下调Paxillin的表达;Paxillin表达下调抑制SMMC-7721肝癌细胞的增殖、侵袭能力;Paxillin有望成为肝癌复发、转移预测和基因治疗的新靶点。     

Per2对肝癌患者预后及肝癌细胞生长和凋亡的作用

目的探讨周期昼夜节律调节因子2(Per2)在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达和对患者生存的影响,分析Per2对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法应用免疫组化法检测HCC组织和癌旁肝组织中Per2的表达;对肝癌细胞系SMMC-7721转染Per2真核表达质粒后,Western blot检测Per2蛋白表达,MTS法和流式细胞计量术检测细胞增殖和凋亡。结果 117例HCC组织中,Per2阳性表达率70.94%,显著低于对应癌旁肝组织的87.18%;癌组织中Per2染色评分为2.14±1.76,显著低于癌旁肝组织的6.39±3.84(P0.01);Per2表达与HCC患者的肿瘤直径、门脉侵袭和TNM分期相关(P0.05);Per2低表达的患者总体生存期(OS)和无复发生存期(RFS)较Per2高表达的患者短(P0.05)。转染Per2真核表达质粒组细胞与对照组细胞相比细胞增殖显著受抑制(P0.05),同时细胞凋亡水平显著增加(P0.05)。结论 HCC组织中Per2表达显著下调,Per2对肝癌的进展发挥了抑制作用,可能是通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡实现。     

miR-185靶向Six1对肺癌上皮-间质转化过程的影响及其机制

目的探讨miR-185影响人肺癌细胞迁移和侵袭能力的分子机制。方法在肺癌细胞系H520和A549中转染miR-185mimic获得miR-185过表达,利用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞的迁移和侵袭能力;荧光素酶报告实验验证miR-185靶向Six1基因;采用qRT-PCR和Western blot法检测miR-185对细胞中Six1基因表达水平的影响;Western blot法检测miR-185过表达对肺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的影响。结果 miR-185过表达降低肺癌细胞的迁移和侵袭能力(P0.05),上皮细胞标志物E-cadherin表达升高(P0.01),间质细胞标志物vimentin表达降低(P0.01),H520细胞过表达miR-185后,Six1基因表达水平降低(P0.01),miR-185调控肺癌细胞的迁移和侵袭是通过靶向Six1基因实现的。结论 miR-185靶向Six1基因调控人肺癌细胞EMT途径。     

HOTAIR-siRNA通过miR-21对肝癌侵袭、转移的影响

目的探讨长链非编码HOTAIR靶控miR-21对肝癌细胞侵袭的影响及相关机制。方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测30例肝癌组织中miR-21的表达,及其与临床病理特征的相关性;HOTAIR的siRNA转染人肝癌HepG2细胞,采用Transwell小室法检测HepG2细胞的侵袭活性;应用qRT-PCR法检测HepG2细胞中miR-21的表达;采用Western blot法检测MMP-2蛋白的表达,并分析其与miR-21的相关性。结果 qRT-PCR检测发现miR-21在肝癌组织中的表达水平均明显高于癌旁组织(P0.05);miR-21表达与肿瘤恶性程度、分化程度及侵袭转移均呈正相关;与患者AFP、肿瘤大小及肿瘤数目无关。沉默HOTAIR基因后,HepG2细胞侵袭能力下降,miR-21基因和MMP-2蛋白的表达均下调且两者呈正相关。结论 miR-21在肝癌组织中呈高表达,并与肝癌恶性程度、肿瘤分化、门静脉癌栓及侵袭转移有关;HOTAIR可能通过靶控miR-21的表达抑制肝癌细胞的侵袭与转移。     

微小RNA-138-5p抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的机制研究

目的:探讨微小RNA-138-5p(miR-138-5p)抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的相关机制。方法:以肺癌细胞A549和H460作为研究对象,分别转染miR-NC(对照组)或miR-138-5p(实验组);生物信息学技术预测miR-138-5p的靶基因;RT-qPCR检测转染后细胞miR-138-5p、叉头框蛋白C1(FOXC1)mRNA和波形蛋白(vimentin)mRNA的相对表达量;Western blot法检测FOXC1、vimentin、E-cadherin、N-cadherin和β-catenin蛋白表达变化;MTS法和集落形成实验分别检测细胞的增殖能力;划痕愈合实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。结果:miR-138-5p过表达显著降低FOXC1和vimentin的mRNA及蛋白的表达(P0.05),E-cadherin和β-catenin蛋白表达上调,N-cadherin蛋白表达下调,显著抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P0.05)。结论:miR-138-5p可以通过靶向干扰FOXC1和vimentin的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,可能是肺癌基因治疗的潜在靶点。     

MicroRNA-145通过ADAM28抑制人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化功能

目的:探讨微小RNA(miR-145)对人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化(EMT)功能的影响及其相关机制。方法:将A-498肾癌细胞株分别转染miR-145模拟物(M145)和模拟物阴性对照(MNC),分别作为M145组和MNC组,并设立空白对照(MC)组,采用RT-qPCR法检测各组细胞miR-145水平。Transwell实验检测3组细胞侵袭能力的变化。Western blot法检测3组细胞波型蛋白(vimentin)、E-cadherin和ADAM28表达水平。应用生物信息学方法预测miR-145的靶基因。采用Western blot法检测ADAM28过表达对miR-145抑制EMT的拮抗作用。双萤光素酶报告基因实验验证miR-145与ADAM28的关系。结果:与MC组相比,M145组miR-145的表达水平显著上调(P0.05)。M145组侵袭细胞数量显著低于MC组(P0.05)。M145组细胞vimentin蛋白表达量显著降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达量显著升高(P0.05),ADAM28蛋白表达量显著降低(P0.05)。ADAM28过表达M145组肾癌细胞中vimentin蛋白表达量显著升高(P0.05),E-cadherin蛋白表达量显著降低(P0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果显示ADAM28为miR-145的下游靶基因。结论:miR-145可能通过降低下游靶基因ADAM28水平影响EMT相关蛋白表达,从而抑制人肾癌细胞A-498的EMT过程。