RNA干扰沉默Bax基因对线粒体途径软骨细胞凋亡的影响

 【摘要】 目的 利用体外培养的鼠软骨细胞,研究RNA干扰沉默Bax基因表达对经线粒体途径细胞凋亡的影响。方法 体外分离培养SD大鼠软骨细胞;Bax siRNA干扰沉默Bax基因表达。RT-PCR和Western blot检测mRNA及蛋白表达水平;MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Cytochrome C蛋白的表达。结果 Bax siRNA干扰24h后,Bax的mRNA和蛋白的表达水平均明显降低。细胞凋亡受到明显抑制,细胞存活率增高。并且,在Bax基因沉默的细胞中,Cytochrome C蛋白表达水平降低,同时Bcl-2蛋白表达水平升高。结论 RNA干扰沉默Bax基因可抑制鼠软骨细胞凋亡并且促进其存活,其机制可能与线粒体途径相关。     

MACC1表达沉默对胶质瘤细胞U87增殖凋亡的影响

目的探讨MACC1基因表达沉默对脑胶质瘤细胞U87增殖凋亡的影响。方法应用RT-PCR和Western blot检测55例不同病理级别胶质瘤标本MACC1表达;转染MACC1siRNA到U87细胞沉默MACC1基因表达,Western blot检测MACC1,Bcl-2/Bax,caspase-3,c-Met蛋白的表达;MTT法检测细胞生长增殖能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。结果MACC1基因在胶质瘤标本组织表达随病理级别升高而增多;MACC1表达沉默后U87生长增殖能力明显下降,细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡显著增加,MACC1蛋白表达明显下降,Bcl-2/Bax比值降低,caspase-3表达上调,c-Met表达下降。结论下调MACC1表达可促进胶质瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,MACC1可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

沉默Apaf-1 基因对氧糖剥夺/ 复氧复糖PC12 细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默Apaf-1基因对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞线粒体凋亡通路的影响。方法:PC12细胞随机分为3组:正常组(Control)、模型组(Model)、Apaf-1基因沉默组(Apaf-1-siRNA)。正常组于CO2培养箱内正常培养,其余2组给予氧糖剥夺2 h、复氧复糖24 h处理,Apaf-1-siRNA组于造模前将化学合成的siRNA通过脂质体转染于PC12细胞靶向沉默Apaf-1基因。用荧光标记的siRNA检测Apaf-1转染效率,Western blot检测转染后PC12细胞Apaf-1蛋白表达,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL染色检测细胞凋亡指数,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光染色检测Bax/Bcl-2比值,Western blot检测线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达。结果:Apaf-1-siRNA可有效沉默PC12细胞Apaf-1蛋白表达(P<0.05)。与Control组相比,Model组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡指数和凋亡率显著升高(P<0.05),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05),线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达显著升高(P<0.05);与Model组相比,Apaf-1-siRNA组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡指数和凋亡率显著降低(P<0.05),Bax/Bcl-2比值降低(P<0.05),Apaf-1、caspase-9、caspase-3蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:靶向沉默Apaf-1基因可有效降低氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达,抑制细胞凋亡,提高细胞存活率。     

S100A4基因沉默对人胃癌细胞中P13K/AKT/mTOR信号通路及VEGF表达的影响

目的探讨用RNA干扰技术沉默人胃癌细胞株MGC-803细胞中钙结合蛋白S100A4的基因,对PI3K/AKT/mTOR信号通路及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及与胃癌血管生成的关系。方法采用RNA干扰技术将针对S100A4和非特异性阴性对照序列的siRNA分别转染至人胃癌MGC-803细胞,利用Real-time RT-PCR和Western blot检测S100A4基因和蛋白的表达,筛选S100A4基因沉默组和阴性对照组细胞。采用Western blot方法检测Akt、mTOR磷酸化水平和VEGF蛋白表达情况。结果成功建立S100A4基因沉默的人胃癌MGC-803细胞。S100A4基因沉默的MGC-803细胞中Akt、mTOR磷酸化水平明显降低,同时VEGF蛋白表达亦显著降低。结论 S100A4能通过PI3K/AKT/mTOR信号通路上调VEGF表达,进而促进胃癌血管生成。     

鲨鱼软骨制剂对胃癌细胞生长及Bcl-2表达的调控

目的通过研究鲨鱼软骨制剂(SCP)对人胃癌MGC-803细胞Bcl-2的影响,探讨其对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法以不同浓度SCP加入体外培养的MGC-803细胞中,MTT法检测SCP对细胞生长抑制作用;Hoechst33342/PI荧光染色分析细胞死亡特征;流式细胞仪测定细胞凋亡水平;免疫细胞化学染色法检测Bcl-2蛋白的表达。结果 SCP明显抑制MGC-803细胞生长,且抑制作用呈浓度和时间依赖性(P0.05),其24、48和72h的IC 50值分别为1.61,1.04和0.54mg/ml。1mg/ml SCP处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,细胞凋亡比例增大呈时间依赖性(P0.05)。SCP诱导细胞凋亡过程中Bcl-2表达明显降低。结论 SCP抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖及诱导细胞凋亡,下调Bcl-2蛋白表达。     

沉默PARP-1对乳腺癌细胞MCF-7顺铂耐药的影响

目的:探究沉默多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)对乳腺癌细胞MCF-7顺铂耐药的影响及可能的作用机制。方法:Western blot及real-time PCR实验检测乳腺癌细胞株MCF-7及相应耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达情况。采用转染PARP-1小干扰RNA(siRNA)的方法沉默乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测PARP-1、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、caspase-3、细胞色素C(Cyto-C)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化ERK(p-ERK)的蛋白水平。结果:耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株(P0.05);并且在亲本细胞株MCF-7中加入顺铂刺激后,PARP-1的蛋白表达水平明显升高(P0.05)。沉默PARP-1可诱导乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP的凋亡,增强细胞对顺铂的敏感性,还可下调Bcl-2/Bax和p-ERK的蛋白水平,同时上调cleaved caspase-3及Cyto-C的蛋白水平。而应用ERK特异性抑制剂U0126后,PARP-1沉默组的细胞活力进一步降低。结论:沉默乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP中PARP-1的表达可恢复细胞对顺铂的敏感性,促进细胞经线粒体途径的凋亡,其机制可能与其抑制ERK的磷酸化,进而阻断该信号通路有关。     

bcl-3基因通过cyclin D1及Bax蛋白影响人结肠癌RKO细胞的凋亡

目的:研究bcl-3基因对人结肠癌RKO细胞迁移及凋亡的影响及机制。方法:采用人bcl-3基因的RNA干扰慢病毒载体沉默人结肠癌RKO细胞bcl-3基因的表达后,划痕实验观察bcl-3基因沉默前后RKO细胞迁移能力的变化,Annexin V/PI双染色法检测bcl-3基因沉默前后RKO细胞凋亡率的变化,Western blot法检测bcl-3基因沉默前后细胞周期蛋白cyclin D1及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的变化。结果:划痕实验显示,划痕后36 h,bcl-3基因沉默前后RKO细胞划痕愈合率分别为84.00%及40.00%,差异具有统计学意义(P0.05)。Annexin V/PI双染色法流式细胞术分析显示,bcl-3基因沉默前后的RKO细胞均经5μmol/L顺铂处理24 h后,沉默前后的RKO细胞凋亡率分别为12.89%及59.67%,差异具有统计学意义(P0.05)。Western blot法检测显示bcl-3基因沉默后cyclin D1蛋白表达显著下降(P0.05),Bax蛋白表达显著上升(P0.05),但Bcl-2表达无明显变化(P0.05)。结论:沉默bcl-3基因后,RKO细胞迁移能力下降,凋亡率增加,并伴细胞周期蛋白cyclin D1及凋亡相关蛋白Bax表达的变化。bcl-3基因可能通过改变cyclin D1及Bax蛋白的表达而影响RKO细胞的凋亡。     

扶正解毒通络方对人肝癌HepG2 细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨扶正解毒通络方对人肝癌HepG2 细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:MTT 法观察细胞增殖能 力;RT鄄PCR 检测细胞内Bax 和Bcl鄄2 mRNA 水平;免疫印迹(Western blot)检测细胞中Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、SIRT3、P53 及Fas 蛋白水平。结果:扶正解毒通络方能明显诱导减少HepG2 细胞内Bcl-2 基因转录,增加Bax 基因转录;扶正解毒通络方 能明显诱导减少HepG2 胞内Bcl-2 蛋白表达,增加Bax、活化的caspase-3、SIRT3、P53 及Fas 蛋白表达。结论:与正常对照组比 较,正常血清组人肝癌细胞HepG2 细胞内Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、基因及蛋白表达水平无明显改变;与正常血清组比较, 扶正解毒通络方低、中和高剂量含药血清和阳性对照组HepG2 细胞内Bcl鄄2 基因转录减少,蛋白表达减少;Bax 基因转录增 加,蛋白表达增加,活化的caspase鄄3 蛋白表达增加。     

p62在喉癌Hep-2细胞化疗耐药中的作用

目的:探讨p62在喉癌细胞Hep-2化疗耐药中的作用及潜在的作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)及Western blot法检测喉癌耐药细胞Hep-2/5-FU及其亲本细胞Hep-2中p62的表达水平。在Hep-2/5-FU细胞中转染p62 siRNA敲减p62的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞生存率及细胞凋亡状态;检测细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性来反映细胞氧化应激水平。Western blot检测细胞凋亡相关调控因子Bcl-2、Bax、caspase-8/cleaved caspase-8、caspase-3/cleaved caspase-3的蛋白水平及抗氧化通路Keap1/Nrf2的活性。结果:耐药细胞株Hep-2/5-FU中p62的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株Hep-2;并且在亲本细胞株Hep-2中,p62和Nrf2的蛋白表达水平随着顺铂的浓度增加不断升高。沉默p62可抑制喉癌耐药细胞Hep-2/5-FU的生存,促进其凋亡,上调MDA的含量,降低SOD和GSH-Px的活性,同时上调Bax、cleaved caspase-8、cleaved caspase-3和Keap1的蛋白水平,下调Bcl-2、Nrf2及HO-1的蛋白表达。结论:喉癌耐药细胞Hep-2/5-FU中沉默p62可恢复细胞对5-FU的敏感性,其机制可能与抑制Keap1/Nrf2信号通路的活化、调控细胞内氧化应激反应及细胞凋亡有关。     

siRNA介导S100A4基因沉默对胃癌细胞中MMP-2和E-cadherin表达及细胞侵袭能力的影响

目的观察用RNA干扰技术沉默人胃癌细胞株MGC-803中钙结合蛋白S100A4的基因,对基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和E-钙黏素(E-cadherin)表达变化,探讨S100A4对胃癌细胞侵袭能力的影响及作用机制。方法采用RNA干扰技术将针对S100A4和非特异性阴性对照序列的si RNA转染至人胃癌MGC-803细胞,利用荧光实时定量RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测S100A4基因和蛋白的表达,筛选S100A4基因沉默组和阴性对照组细胞。采用Western Blot方法检测MMP-2和E-cadherin蛋白表达。利用Transwell Matrigel方法检测各实验组中MGC-803细胞体外侵袭能力。结果成功建立S100A4基因沉默的人胃癌MGC-803细胞。S100A4基因沉默的胃癌MGC-803细胞中MMP-2蛋白表达降低,而E-cadherin蛋白表达明显上调;细胞体外侵袭能力亦显著下降。结论 S100A4能通过调控MMP-2和E-cadherin的表达影响胃癌细胞MGC-803的侵袭能力。     

动脉粥样硬化中CARHSP1基因的表达对缺氧诱导的血管内皮细胞活力凋亡及免疫因子的影响

目的:探讨动脉粥样硬化斑块中钙调节热稳定蛋白1(CARHSP1)基因的表达对缺氧诱导的血管内皮细胞活力、凋亡及白细胞介素6(IL-6)和C-反应蛋白(CRP)表达的影响。方法:用Western blot检测动脉粥样硬化斑块中CARHSP1的蛋白表达;缺氧处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs),将细胞分为正常培养组、缺氧组、缺氧+CARHSP1-siRNA组和缺氧+pc DNA3. 1-CARHSP1组,用CCK-8法及流式细胞术分别检测各组细胞活力及凋亡率; RT-PCR检测IL-6和CRP的表达; Western blot检测凋亡蛋白caspase-3、cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:CARHSP1在动脉粥样硬化斑块中的蛋白表达显著高于对照组(P 0. 05);缺氧可明显增加CARHSP1的表达。缺氧组HUVECs活力及Bcl-2表达显著低于正常培养组,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著高于正常培养组(P 0. 05);与缺氧组比较,缺氧+CARHSP1-siRNA组的活力及Bcl-2表达显著升高,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著降低(P 0. 05),pc DNA3. 1-CARHSP1组的细胞活力及Bcl-2表达显著降低,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax表达显著升高(P 0. 05)。结论:CARHSP1在动脉粥样硬化斑块中表达升高,抑制CARHSP1表达可提高HUVECs的活力,降低细胞凋亡,下调免疫因子IL-6和CRP的表达,而过表达CARHSP1则反之。     

沉默GRP94 基因对乳腺癌MCF7 细胞增殖和凋亡的影响

目的： 研究沉默葡萄糖调节蛋白GRP94 (Glucose regulated protein,GRP94)对乳腺癌MCF7细胞增殖、凋亡的影响及潜在机制。方法：设计并化学合成靶向沉默GRP94基因的小干扰RNA,通过脂质体转染入MCF7细胞中,采用qRT-PCR和Western blot分别检测GRP94、cyclinD1、Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平;通过流式细胞术检测细胞凋亡比例变化,Hoechst 33258染色检测凋亡细胞核变化、CCK8实验检测细胞增殖能力的变化。结果： GRP94 siRNA组GRP94基因的表达水平被有效抑制;与对照组相比,GRP94-siRNA转染组的细胞凋亡比例明显增加;凋亡细胞核形态发生变化;增殖能力明显下降;mRNA及蛋白水平cyclinD1、Bcl-2表达明显下调,Bax表达增加。结论：沉默GRP94基因可明显抑制乳腺癌MCF7细胞增殖能力,促进细胞凋亡的发生,且其可能通过下调cyclinD1、Bcl-2和上调Bax表达参与其中。     

小檗碱增强阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡

 目的:研究小檗碱对阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡的影响及机制。方法:将膀胱癌T24细胞分为对照组、阿霉素组、阿霉素+小檗碱组和小檗碱组。采用CCK-8试剂盒测定膀胱癌T24细胞的增殖抑制率。采用Hoechst 33258染色剂检测细胞凋亡,同时测定caspase-3和caspase-9活性以及Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:小檗碱呈剂量和时间依赖性地促进阿霉素诱导的T24细胞凋亡。与阿霉素组比较,小檗碱+阿霉素组caspase-3、caspase-9活性和Bax蛋白的表达水平明显增加,而Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:小檗碱可进一步增强阿霉素对T24细胞增殖的抑制作用,其机制与小檗碱增强阿霉素诱导的T24细胞凋亡有关。     

下调Bcl-2家族蛋白促进MTB感染的小鼠巨噬细胞系凋亡

目的探讨Mcl-1shRNA靶向下调Mcl-1的表达后,Bcl-2家族蛋白对不同毒力结核杆菌感染的小鼠Raw264.7巨噬细胞凋亡的调控作用。方法用XJ-MTB、H37Rv、H37Ra和卡介苗(BCG)感染小鼠Raw264.7巨噬细胞,并用Mcl-1 shRNA作用于感染的巨噬细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2家族蛋白Mcl-1和Bax的表达;实时荧光定量PCR检测Mcl-1、Bcl-2、Bax、caspase-3与细胞色素C mRNA的表达。结果 1)不同毒力的MTB感染可诱导小鼠Raw264.7巨噬细胞的凋亡,靶向下调Mcl-1的表达可显著提高XJ-MTB和H37Rv感染的宿主巨噬细胞的凋亡率。2)XJ-MTB和H37Rv感染可显著上调Bcl-2家族抗凋亡成员Mcl-1与Bcl-2的表达,应用Mcl-1 shRNA沉默Mcl-1基因后Mcl-1与Bcl-2水平显著下降,同时增高Bax的表达。3)不同毒力的MTB感染小鼠Raw264.7巨噬细胞后caspase-3和细胞色素C表达升高,靶向下调Mcl-1可以进一步上调感染组caspase-3和细胞色素C的表达。结论 MTB感染后小鼠Raw264.7巨噬细胞中Bcl-2家族蛋白与基因的表达水平与菌株毒力相关,应用Mcl-1shRNA下调Mcl-1的表达可以促进宿主巨噬细胞的凋亡。     

TGM2 对甲状腺癌干细胞紫杉醇化疗敏感性的影响及作用机制

目的:探究转谷氨酰胺酶2(TGM2)对甲状腺癌干细胞(TCSC)紫杉醇化疗敏感性的影响及作用机制。方法:收集甲状腺癌患者新鲜肿瘤组织,分离培养原代甲状腺癌细胞,经无血清培养成悬浮肿瘤细胞球时,流式细胞仪筛选出CD133~+表型的TCSC进行后续实验。Western blot检测TCSC中干性基因Nanog、Sox2蛋白表达水平。小干扰RNA技术转染TCSC,分为si-TGM2组和si-NC组,MTS检测TGM2 siRNA转染的TCSC对紫杉醇的敏感性;qRT-PCR法检测紫杉醇处理TCSC后细胞TGM2 mRNA表达。软琼脂克隆实验检测TGM2 siRNA转染对紫杉醇处理的TCSC肿瘤球形成能力的影响;Tunnel凋亡和流式细胞仪检测TGM2 siRNA转染对紫杉醇处理的TCSC凋亡的影响。裸鼠实验检测TGM2对紫杉醇处理TCSC敏感性的影响。Western blot检测TGM2 siRNA转染对紫杉醇处理的TCSC凋亡蛋白caspase-3、Bcl-2表达的影响。结果:流式细胞仪分选出CD133~+细胞占全部细胞的1.21%,CD133~+细胞中Nanog、Sox2蛋白表达水平显著高于CD133~-细胞;沉默TGM2表达可显著提高TCSC对紫杉醇的敏感性;紫杉醇处理的TCSC中TGM2 mRNA表达水平显著高于未经紫杉醇处理的TCSC;沉默TGM2表达显著抑制紫杉醇处理的TCSC肿瘤球形成能力,显著增加紫杉醇处理的TCSC凋亡,提高TCSC对紫杉醇的敏感性,提高紫杉醇处理的TCSC凋亡蛋白caspase-3、Bax表达(P0.05)。结论:TGM2基因可能通过抑制凋亡信号通路,降低TCSC的紫杉醇化疗敏感性。     

NLRP2-caspase-1 炎性小体在脑缺血损伤中的表达量及作用

目的:探究NOD样受体家族蛋白2-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(NLRP2-caspase-1)炎性小体与脑缺血损伤的关系及作用机制。方法:荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中NLRP2基因的表达;采用小RNA干扰(siRNA)技术沉默NLRP2的表达,将其分为对照组、模型组、空载体组、siRNA NLRP2组,RT-PCR和Western blot观察转染后细胞中NLRP2的表达量;流式细胞术检测细胞的凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、核转录因子k B(NF-κB) p65、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)、caspase-1前体(Pro-caspase-1)、磷酸化p65(pp65)蛋白水平。结果:结果显示,氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中NLRP2基因的表达量显著增加(P0. 05),促进细胞凋亡(P0. 05),显著降低Bcl-2蛋白水平(P0. 05),显著增加Bax、caspase-3蛋白水平(P0. 05)。沉默NLRP2表达较模型组显著抑制细胞的凋亡(P0. 05),上调Bcl-2蛋白水平(P0. 05),下调Bax、caspase-3蛋白水平(P0. 05); siRNA NLRP2组细胞中caspase-1、IL-1β、P65、p-P65蛋白显著低于模型组(P0. 05)。结论:NLRP2在氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中显著上调,可能通过调控细胞的炎症反应、凋亡信号通路以及NF-κB信号通路参与脑缺血损伤神经细胞的凋亡。     

沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响

目的:观察沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响.方法:以Lipofectamine 2000介导miR-21抑制剂转染Ishikawa/DDP细胞株,同时设置阴性组和耐药组.采用反转录PCR检测miR-21、多药耐药基因MDR1、促凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2的表达.采用蛋白印迹法检测多药耐药蛋白P-gp、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.采用噻唑蓝比色法检测细胞对顺铂的敏感性.采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果:与耐药组和阴性组比较,抑制剂组miR-21,MDR1和Bcl-2 mRNA表达显著下调(P＜0.0l),而Bax mRAN表达显著上调(P＜0.00l);抑制剂组P-gp和Bcl-2蛋白表达显著低下调(p＜0.05),而Bax蛋白表达显著上调(P＜0.001).与耐药组和阴性组比较,顺铂对抑制剂组的IC50值显著(P＜0.001);顺铂对抑制剂组细胞的诱导凋亡率显著增加(P＜0.00l).结论:沉默miR-21可显著提高Ishikawa/DDP细胞株对顺铂的敏感性,并促进细胞凋亡,其具体机制可能与下调MDR1,P-gp和Bcl-2表达,以及上调Bax表达有关.     

抑制miR-421表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性

目的:研究抑制miR-421表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法:运用脂质体2000将miR-421 inhibitor转染4株宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A和CaSki,以转染阴性核苷酸为对照,real-time PCR检测子宫内膜上皮细胞ESC细胞和4株宫颈癌细胞中miR-421的表达水平;转染的细胞经不同剂量电离辐射(0、2、4、6和8 Gy)处理48 h后运用MTT法、ELISA和Annexin V-FITC/PI染色法联合流式细胞术分别测定细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率和细胞凋亡率;运用Western blot检测细胞中cleaved caspase-9、caspase-9、cleaved PARP、PARP、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果:miR421在ESC细胞中低表达,而在4株宫颈癌细胞中高表达,转染miR-421 inhibitor后miR-421显著低于阴性对照组(P0.05)。相同条件下,辐照后低表达miR-421的宫颈癌细胞活力和LDH漏出率显著低于阴性对照组,72 h的细胞凋亡率明显增加(P0.05)。Western blot结果显示,电离辐射后与阴性对照组比较,低表达miR-421的宫颈癌细胞中cleaved caspase-9、cleaved PARP和Bcl-2的蛋白水平明显增高,而Bax蛋白水平显著降低(P0.05)。结论:miR-421在正常子宫内膜上皮ESC细胞中低表达,而在宫颈癌细胞系中高表达;下调miR-421表达能抑制宫颈癌细胞的活力,显著增强宫颈癌细胞的辐射敏感性,其机制至少部分通过激活caspase-9细胞凋亡通路进而促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达和抑制促凋亡蛋白Bax表达而实现。     

下调NCAPG表达对Burkitt淋巴瘤Raji细胞的影响及其机制

目的 探讨下调Burkitt淋巴瘤Raji细胞NCAPG表达对细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 应用shR-NCAPG慢病毒载体转染Raji细胞,qRT-PCR及Western blot验证细胞中NCAPG表达是否下调。应用CCK-8方法检测shR-NCAPG对Raji细胞增殖的影响,流式细胞术Annexin V-PE/7AAD双染检测细胞凋亡。Western blot法检测shR-NCAPG转染前后Bcl-2和Bax的表达变化。结果 shR-NCAPG转染Raji细胞后,NCAPG在基因及蛋白水平表达减少,明显抑制Raji细胞的增殖,增加细胞早期凋亡比例,抑制Bcl-2表达,上调Bax表达。结论 下调NCAPG表达抑制Burkitt淋巴瘤细胞Raji增殖诱导其凋亡,与Bcl-2家族蛋白相关。     

光敏化促进姜黄素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡

目的: 探讨光敏化促进姜黄素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及其机制。方法: 用MTT法检测光敏化姜黄素对胃癌MGC-803细胞株的增殖抑制率,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态的变化,流式细胞术检测细胞的凋亡率、线粒体膜电位、细胞内活性氧和Ca²⁺;比色法检测caspase-3、8和9酶活性;Western blotting分析细胞色素C、Bcl-2、Bax和热休克蛋白70(HSP70)水平。结果: 单纯姜黄素(5.0μmol/L)对MGC-803细胞增殖抑制率为(29.74±2.30)%,在光学显微镜下可见部分凋亡细胞,凋亡率为(12.54±1.75)%。而光敏化姜黄素组细胞增殖抑制率则为(44.93±3.61)%,在光学显微镜下能见明显细胞核形态改变,染色质凝集,凋亡小体形成,凋亡率为(26.58±2.67)%,细胞周期主要阻滞于G₀/G₁期。光敏化姜黄素显著降低线粒体膜电位,显著增加细胞色素C、细胞内活性氧和Ca²⁺以及caspase-3、8和9酶活性,与单纯姜黄素组比较,差异显著(P<0.01)。Western blotting结果显示光敏化姜黄素同时显著抑制Bcl-2和HSP70蛋白表达水平。结论: 光敏化姜黄素通过Bcl-2和线粒体途径增强其诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。