lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的探讨lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测34例结直肠癌组织及相应的癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中lncRNA RAB11B-AS1的表达水平。构建稳定过表达RAB11B-AS1的SW480细胞系,MTT方法检测SW480细胞的增殖能力变化;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率;Transwell检测SW480细胞侵袭能力变化,划痕实验检测SW480细胞迁移能力变化;Western blot检测SW480细胞中细胞周期蛋白1(cyclin D1)和CDK6的表达水平。结果 RAB11B-AS1在结直肠癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P0.01);在SW480中的表达显著低于NCM460细胞(P0.01)。RAB11B-AS1过表达后,SW480细胞的增殖、侵袭与迁移能力显著降低,凋亡率显著升高,cyclin D1与CDK6的蛋白表达降低(P0.01)。结论 lncRNA RAB11B-AS1在结直肠癌组织中表达降低,过表达RAB11B-AS1能够抑制SW480细胞的增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。     

IncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 探讨IncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及可能机制.方法 qRT-PCR方法检测34例结直肠癌组织及相应的癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中IncRNA RAB11B-AS1的表达水平.构建稳定过表达RAB11B-AS1的S...     

敲低丝酶抑制蛋白E2(serpin E2)抑制SW480结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的探讨丝酶抑制蛋白E2(serpin E2)对结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法免疫组织化学染色对30名结肠癌患者癌组织和癌旁组织中serpin E2的表达量进行差异性检测,通过转染serpin小干扰RNA(si-serpin)至SW480细胞中,实时定量PCR检测SW480细胞中serpin E2 mRNA水平,Western blot法检测serpin E2蛋白水平,CCK-8法和平板克隆形成实验检测SW480细胞的增殖,TranswellTM实验分别检测SW480细胞的侵袭与迁移能力。结果结肠癌组织中serpin E2表达明显增加,敲低SW480细胞serpin E2水平后,SW480细胞的增殖、侵袭、迁移能力均显著降低。结论下调SW480细胞中serpin E2水平抑制SW480细胞的增殖、侵袭和迁移。     

结直肠癌组织和SW480细胞系中SKA3蛋白的表达及对PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨结直肠癌组织中SKA3的表达及临床意义,观察转染SKA3-siRNA对结直肠癌SW480细胞增殖、迁徙的影响及在PI3K/AKT信号通路中的作用。方法采用免疫组化法观察69例结直肠癌和癌旁组织中SKA3蛋白的表达水平。结直肠癌SW480细胞转染SKA3-siRNA干扰后,应用Western blot法观察细胞中SKA3蛋白的表达;MTT法和细胞克隆实验观察细胞增殖改变,细胞划痕法观察细胞迁徙改变,Western blot法检测PI3K/AKT信号通路蛋白在细胞中的表达。结果结直肠癌组织中的SKA3表达水平比癌旁组织显著增加(P0.01),且SKA3蛋白表达水平与结直肠癌分化程度、淋巴结转移等有关(P0.05);结直肠癌SW480细胞转染SKA3-siRNA后,SKA3表达水平明显降低(P0.05);同时,结直肠癌SW480细胞增殖能力受抑,迁徙能力降低(P0.05);p-AKT、p-PI3K蛋白水平显著下降(P0.05)。结论 SKA3在结直肠癌中呈高表达,与患者预后相关;敲减SKA3表达可抑制结直肠癌SW480细胞的增殖和迁徙,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞药物敏感性及侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨通过小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)技术敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞活力、药物敏感性、凋亡、细胞周期及侵袭和迁移能力的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine 3000将NOB1 siRNA转染至SW480细胞,采用real-time PCR和Western blot检测转染后SW480细胞中NOB1 mRNA和蛋白表达的变化;采用MTT法检测敲减NOB1基因表达后SW480细胞活力及其对不同化疗药物(顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨)敏感性的变化;流式细胞术检测敲减NOB1基因表达对SW480细胞凋亡和周期的影响;Transwell方法检测敲减NOB1基因表达对结肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:转染NOB1 siRNA后,SW480细胞中NOB1的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05);与对照组和阴性对照siRNA组相比,NOB1 siRNA转染组的SW480细胞在24～72 h的细胞活力显著降低,顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨对该细胞的半数抑制浓度均显著降低,细胞凋亡率显著增加,细胞周期受到阻滞,细胞侵袭和迁移能力显著降低(P0.05)。结论:NOB1 siRNA转染能够抑制结肠癌SW480细胞活力及侵袭和转移能力,并增强细胞对药物的敏感性,促进细胞凋亡。NOB1能够成为结肠癌诊断和治疗的新靶点。     

过表达miR-5195-3p对结直肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-5195-3p对Runx相关转录因子3(RUNX3)的靶向调节作用及对结直肠癌细胞凋亡的影响。方法 RT-qPCR和Western blot分别检测结直肠癌组织与癌旁组织中miR-5195-3p和RUNX3蛋白的表达。将人结肠癌细胞系SW480随机分为5组:对照组(control)、miR-5195-3p mimic组、mimic control组、miR-5195-3p inhibitor组、inhibitor control组。Wetsern blot检测RUNX3的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。在SW480细胞中转染RUNX3过表达质粒后检测细胞凋亡。结果与癌旁组织中相比,miR-5195-3p在结直肠癌组织中的表达显著升高,RUNX3的蛋白表达明显降低(P0.05)。过表达miR-5195-3p显著下调了SW480细胞中RUNX3的表达,并降低细胞凋亡水平(P0.05);抑制miR-5195-3p明显上调RUNX3的表达,并上调细胞凋亡水平(P0.05)。此外与miR-5195-3p mimic组相比,RUNX3过表达质粒的共转染组显著降低细胞凋亡水平(P0.05)。结论 miR-5195-3p可能作为促癌基因在结直肠癌中发挥作用,其作用与靶向调节RUNX3相关。     

上调miR-433表达抑制结直肠癌细胞系增殖

目的研究miR-433在结直肠癌中的表达,并初步探讨其功能。方法选择不同分期结直肠癌癌组织(CRC)、癌旁组织与正常结直肠组织,用实时定量PCR检测miR-433表达并比较;体外培养结直肠癌细胞系HT-29、HCT-116和SW480以及正常结直肠细胞系NCM460,用实时定量PCR检测miR-433表达。随后将miR-433模拟物转染SW480细胞,CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;流式细胞测量术检测细胞周期。结果与癌旁组织相比,miR-433在结直肠癌组织中表达显著降低(P0.05)。在结肠癌患者血清中miR-433水平也显著低于健康人群(P0.05)。此外,从TNM分期Ⅰ期～Ⅳ期,结直肠癌组织内miR-433表达逐渐降低(P0.05)。与NCM460相比,HT-29、HCT-116和SW480中,miR-433表达下调(P0.05)。SW480转染miR-433模拟物后,与对照miRNA组相比,在SW480细胞增殖水平明显降低(P0.05),G_2和M期细胞比例增多。上调miR-433后,细胞侵袭和迁移明显减弱(P0.05)。结论 miR-433在结直肠癌中表达降低。在SW480细胞中上调其表达后,可抑制细胞系增殖、侵袭与迁移。     

MiR-21在大肠癌中的表达及其对SW480细胞增殖侵袭的影响

目的检测microRNA-21(miR-21)在大肠癌患者中的表达情况,并探讨miR-21对大肠癌SW480细胞增殖和侵袭的影响。方法收集大肠癌患者标本32例,同时收取癌组织及相应的癌旁组织。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测各组织中miR-21的表达水平。以脂质体为载体将miR-21抑制剂转染至SW480细胞,分别用MTT方法与Transwell实验检测转染后SW480细胞的增殖侵袭能力变化,利用qRT-PCR和免疫印迹实验检测第10号染色体同源缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)mRNA和蛋白水平的改变。结果 miR-21在32例患者癌组织及正常黏膜组织中的表达量分别为(1.57±0.79)与(0.56±0.32),差异有统计学意义(P0.01)。下调miR-21的表达能够显著抑制SW480细胞的增殖和侵袭能力,PTEN mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P0.01)。结论 microRNA-21在大肠癌中高表达,下调microRNA-21表达抑制大肠癌SW480细胞增殖和侵袭可能与上调PTEN表达相关。     

串联siRNA干扰沉默结肠癌SW480细胞APRIL基因表达

目的 检测串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体(APRIL)基因的影响.方法 设计并筛选针对APRIL基因的4条shRNA片段(sh644、sh1451、sh1938、sh2231),分别将其连接至pGenesil-1.1质粒表达载体,形成pGsh644、pGsh1451、pGsh1938、pGsh2231单一表达载体,同时将4条shRNA连接至pGenesil4-T质粒形成pG4串联siRNA表达载体.阳离子脂质体法转染至结直肠癌细胞株SW480.实时荧光定量PCR和Western blot技术检测SW480细胞中APRIL mRNA和蛋白表达水平.结果 经酶切和测序鉴定,构建的串联siRNA质粒载体符合要求.几条siRNA均可有效抑制SW480细胞APRIL基因的表达,APRIL mRNA的抑制率分别是pGsh644(56.2％)、pGsh1451(49.5％)、pGsh1938 (50.9％)、pGsh2231 (49.2％)、pG4(79.3％).蛋白质表达抑制率分别为pGsh644(56.9％)、pGsh1451(48.7％)、pGsh1938(50.1％)、pGsh2231 (46.4％)、pG4 (87.5％) (P＜0.05).其中以pG4抑制效应最强.结论 与传统单一的siRNA表达载体相比,串联siRNA表达载体大大地敲低了结直肠癌细胞株中APRIL基因的表达,为针对结直肠癌APRIL基因的基因治疗提供研究基础.     

MicroRNA-10b在大肠癌中的表达及其对SW480细胞侵袭转移的影响

目的检测microRNA-10b(miR-10b)在大肠癌患者中的表达情况,并探讨miR-10b对大肠癌SW480细胞侵袭和转移的影响。方法收集大肠癌患者标本32例,同时收取癌组织及相应的癌旁组织。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测各组织中miR-10b的表达水平。以脂质体为载体将miR-10b抑制剂转染至SW480细胞,Transwell实验检测转染后SW480细胞的侵袭和迁移能力变化,利用qRT-PCR和免疫印迹实验检测Kriippel样因子4(KLF4)mRNA和蛋白水平的改变。结果miR-10b在32例患者癌组织及正常黏膜组织中的表达量分别为(0.24±0.09)与(0.67±0.28),差异有统计学意义(P0.01)。下调miR-10b的表达能够显著抑制SW480细胞的侵袭和迁移能力,KLF4 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高,P0.01。结论MicroRNA-10b在大肠癌中低表达,并可能通过上调KLF4的表达抑制大肠癌SW480细胞侵袭和转移。     

层黏素受体靶向RNA干扰在削弱直肠癌免疫逃逸中的作用探讨

为探讨层黏素受体(laminin receptor,LNR)靶向RNA干扰在直肠癌免疫逃逸中的作用,将pGenesil-3-shLNR重组质粒转染SW480细胞,对比干扰组、对照组和空载组细胞中LNR mRNA和蛋白表达情况。建立SW480细胞与人Jurkat细胞Transwell小室旁分泌共培养模型,检测共培养48 h后SW480细胞和Jurkat细胞的凋亡率,并检测2种细胞Fas、FasL、Caspase-8 mRNA和蛋白表达情况。结果显示,重组质粒转染效率为(65.30±6.03)%。与对照组、空载组比较,干扰组LNR mRNA和蛋白相对表达量均较低(P0.05);SW480细胞凋亡率较高(P0.05),Jurkat细胞凋亡率较低(P0.05);SW480细胞Fas、Caspase-8 mRNA和蛋白相对表达量均较高,FasL mRNA和蛋白相对表达量较低,Jurkat细胞Fas、Caspase-8 mRNA和蛋白相对表达量均较低,FasL mRNA和蛋白相对表达量较高(P0.05)。对照组与空载组LNR mRNA及蛋白相对表达量,SW480细胞和Jurkat细胞凋亡率,SW480细胞和Jurkat细胞Fas、FasL、Caspase-8 mRNA及蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P 0.05)。以上结果提示LNR靶向RNA干扰可抑制直肠癌细胞中LNR表达,可能通过调节SW480细胞和Jurkat细胞中Fas/FasL信号通路使SW480细胞诱导Jurkat细胞凋亡率降低,同时增强Jurkat细胞杀伤SW480细胞能力,削弱直肠癌细胞的免疫逃逸能力。     

趋化因子SDF-1调控结直肠癌细胞上皮-间质转化

目的通过检测Twist、SDF-1、E-cadherin在结直肠癌及癌旁组织中的表达,探讨三者与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的相关性,为肿瘤的分子靶向治疗提供可能的靶标。方法收集结直肠癌和对应癌旁正常新鲜标本组织40例和结直肠癌组织及对应癌旁组织蜡块90例,利用免疫组化SP法和qRT-PCR法检测结直肠癌组织中SDF-1及EMT相关因子E-cadherin、Twist的表达,统计学分析SDF-1表达与E-cadherin、Twist表达之间的相关性。结果 qRT-PCR结果显示,与对应癌旁组织相比,结直肠癌组织中SDF-1、Twist mRNA的表达水平明显升高,而Ecadherin mRNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P0.05);结直肠癌组织中SDF-1、Twist的阳性率分别为75.56%、62.22%,明显高于对应癌旁组织,而E-cadherin在肿瘤中的阳性率为28.89%,显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。SDF-1表达与E-cadherin表达呈负相关,而与Twist表达呈正相关。结论趋化因子SDF-1高表达可能参与结直肠癌细胞的EMT过程,Twist高表达和Ecadherin低表达提示EMT现象参与结直肠癌的形成及转移过程,并促进肿瘤的生成和转移。     

miR-23a和ESRP1在直肠癌中的作用

目的:研究miR-23a和上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)在直肠癌组织及细胞系中的表达,以及对体外直肠癌细胞活力和凋亡的作用。方法:采用RT-q PCR分析miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁组织中的表达,免疫组化检测ESRP1在直肠癌组织中的表达,分析miR-23a和ESRPl在直肠癌组织中的相关性;利用RT-q PCR检测miR-23a在直肠癌Caco-2和SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a inhibitor和inhibitor阴性对照(inhibitor NC),并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞活力的影响,流式细胞术检测转染后细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭;通过Western blot技术检测SW480细胞中ESRPl蛋白的表达;构建野生型pGL3-ESRP1-3’UTR(wt-pGL3-ESRP1-3’UTR)或突变型pGL3-ESRP1-3’UTR(mut-pGL3-ESRP1-3’UTR)质粒,并分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染至HEK293和SW480细胞中,利用双萤光素酶报告基因检测试剂盒说明检测双萤光素酶活性;将ESRP1 mimic或mimic NC瞬时转染SW480细胞后,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡;Western blot法检测瞬转ESRP1 mimic后对ESRP1、caspase-3、Smac和XIAP蛋白表达的影响。结果:miR-23a和ESRP1在直肠癌组织的表达较癌旁正常组织分别上调和下调,两者呈明显负相关(P0.01);miR-23a的表达与直肠癌的淋巴结转移和肿瘤浸润深度相关;与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调(P0.01);转染miR-23a inhibitor后,SW480细胞活力较inhibitor NC组显著下降(P0.01);转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显升高,同时细胞体外侵袭能力受到抑制;萤光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高;ESRP1 mimic转染SW480细胞后可抑制细胞活力并诱导细胞凋亡,同时上调caspase-3和Smac的表达,下调XIAP的表达。结论:miR-23a可通过负向调控下游靶基因ESRP1从而影响直肠癌细胞生长和凋亡。     

分泌型卷曲相关蛋白2抑制人结直肠癌细胞系SW480的增殖和迁移

目的探究分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)抑制人结直肠癌细胞系SW480增殖、迁移的分子机制。方法在人正常结肠上皮细胞HCoEpiC和结直肠癌细胞系SW480中采用Western blot和RT-qPCR检测SFRP2的表达;构建shSERP2稳转SW480细胞株;在shNC SW480和shSFRP2 SW480细胞中采用Western blot和RT-qPCR检测SFRP2、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Twist的表达;HIF-1α抑制剂(IDF-11774)刺激shSFRP2 SW480细胞后,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭。结果 SW480细胞中SFRP2的表达量低于HCoEpic细胞(P0.01);敲降SFRP2后,SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力显著提高(P0.001);而细胞内HIF-1α和Twist表达水平显著提高(P0.01);HIF-1α抑制剂(IDF-11774)刺激后,其增殖、迁移、侵袭能力显著回降(P0.001)。结论 SFRP2通过调控HIF-1α-Twist信号轴发挥其抑癌作用。     

多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制的探讨

目的:观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制探讨。方法:用不同浓度(5、10、20nmol·L-1)多烯紫杉醇处理人结肠癌SW480细胞后,采用MTT法观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响,并使用流式细胞术及Hoechst33258染色检测多烯紫杉醇对SW480细胞的凋亡影响,采用RT-PCR检测SW480细胞Bcl-2mRNA表达。结果:经不同浓度(5、10、20nmol·L-1)多烯紫杉醇处理后,MTT结果显示SW480细胞生长抑制率显著上升,流式细胞术检测显示SW480细胞凋亡发生显著升高,并且Hoechst33258染色检测SW480细胞呈凋亡状态。此外,RT-PCR检测T-24细胞Bcl-2mRNA表达水平降低。结论:多烯紫杉醇通过诱导凋亡能抑制人结肠癌SW480细胞的生长,这可能与其下调Bcl-2mRNA表达有关。     

FAK基因表达对人结直肠癌细胞增殖及运动的影响

目的:探讨黏着斑激酶(FAK)表达水平对结直肠癌细胞增殖及运动的影响.方法:针对FAK基因不同靶点设计siRNA序列, 构建siRNA重组子, 转染Caco-2细胞, 以RT-PCR和免疫细胞化学方法检测FAK mRNA和蛋白表达变化及时间效应, 同时检测FAK基因敲低对Caco-2细胞的凋亡、增殖及迁移的影响.结果:FAK siRNA导入Caco-2细胞后, FAK mRNA和蛋白表达水平明显下调, 细胞增殖及迁移能力受抑, 呈时间依赖关系, FAK mRNA水平下调在转染后48 h达到最大.结论:FAK siRNA可有效抑制靶基因表达, FAK表达水平下调后Caco-2细胞的增殖及运动明显受抑制.     

Th22细胞及相关因子在结直肠癌的表达

目的通过检测Th22细胞及相关因子在结直肠癌的表达,探讨Th22细胞在结直肠癌发病机理中的作用。方法采用流式细胞技术检测50例结直肠癌患者肿瘤组织以及癌旁组织中Th22细胞比例的表达差异,同时采用qRT-PCR方法检测IL-22、AHR、CCL27、CCL22、CCL20在结直肠肿瘤微环境中的mRNA相对表达量。结果结直肠肿瘤组织中的Th22细胞比例明显高于癌旁组织(P0.05),Dukes A+B期患者的Th22细胞比例显著低于Dukes C+D期(P0.05);qRT-PCR结果显示IL-22、AHR、CCL22C、CL20在肿瘤组织的mRNA表达水平明显高于癌旁组织(P0.05),而CCL27在肿瘤组织的表达水平也较癌旁组织增高,但无统计学差异(P0.05)。结论 Th22细胞在结直肠恶性肿瘤中聚集,并与肿瘤的分期进展相关,可能与肿瘤微环境分泌的趋化因子作用有关。     

基因沉默PRDX1 表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭迁移的影响

目的:探讨RNA 干扰过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭转移能力的影响。方法:筛选RNA 干扰PRDX1 的慢病毒质粒,与阴性对照慢病毒质粒分组转染结直肠癌SW480 细胞,转染后的SW480 细胞可分为PRDX1 基因沉默组(si-PRDX1)和阴性对照组(Vector)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测两组细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白表达;采用Transwell 侵袭和迁移实验检测基因沉默PRDX1 表达对结直肠癌细胞侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot 检测两组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)家族部分蛋白表达水平。结果:基因沉默PRDX1 表达可有效抑制结直肠癌SW480 细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白水平的表达,与阴性对照组相比(Vector),差异均具有统计学意义(P<0.01),说明基因沉默PRDX1 的SW480 细胞系构建成功;Transwell 侵袭和迁移实验显示si-PRDX1组细胞的侵袭及迁移能力较对照组均明显降低(P<0.01);Western blot 结果显示,与Vector 组相比,si-PRDX1 组细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达明显增加,而MMP-2 及MMP-9 的表达显著下降,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因沉默人结直肠癌SW480 细胞的PRDX1 表达可有效抑制细胞的侵袭、迁移及转移能力,其机制可能会通过调控TIMP-2、MMP-2 及MMP-9 的表达介导。     

miR-204通过下调Bcl-2和Sirt1表达抑制肝癌细胞生长

目的探讨微小RNA 204(miR-204)在肝细胞癌中的表达、临床意义及可能分子机制。方法收集手术切除的60例肝细胞癌及对应癌旁肝组织,实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-204在肝癌及癌旁组织中的表达,免疫组织化学染色检测miR-204下游潜在靶点Bcl-2与组蛋白脱乙酰酶1(Sirt1)的表达;用人工合成的miR-204模拟物转染人SMMC-7721肝癌细胞,MTT法及流式细胞术检测SMMC-7721细胞的增殖、凋亡的情况,qRT-PCR、Western blot法分别检测Bcl-2与Sirt1的mRNA和蛋白表达。结果 miR-204在肝癌组织中表达水平显著低于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-204低表达与肿瘤大小、肿瘤个数、肿瘤TNM分期显著相关;miR-204低表达组Bcl-2与Sirt1蛋白表达显著高于miR-204高表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-204与Bcl-2、Sirt1蛋白表达呈显著负相关;miR-204可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖并促进其凋亡,并下调Bcl-2与Sirt1的mRNA与蛋白表达水平。结论 miR-204在肝癌组织中表达下调并与肝癌恶性临床病理特征有关,miR-204抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡的作用可能与下调Bcl-2和Sirt1表达有关。     

干扰IGF2BP2下调MYC表达抑制结直肠癌细胞增殖、迁移并促进肿瘤免疫

目的 探究胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)对结直肠癌细胞增殖、迁移能力和肿瘤免疫微环境的影响及其可能的分子机制。方法 使用癌症基因图谱(TCGA)数据库分析结直肠癌及癌旁组织的IGF2BP2和MYC表达水平。采用RNA干扰技术(RNAi)沉默HCT-116和SW480人结直肠癌细胞的IGF2BP2表达，实时定量PCR检测沉默效果。敲低IGF2BP2后，集落形成实验、 CCK-8实验、 5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测细胞集落形成和增殖能力，Transwell^TM实验检测细胞迁移能力，实时定量PCR检测IGF2BP2、 MYC、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素10(IL-10)的mRNA表达。Western blot法测定IGF2BP2、 MYC的蛋白表达，RNA免疫共沉淀后实时定量PCR(RIP-qPCR)检测HCT-116细胞中IGF2BP2与MYC mRNA结合能力。结果 TCGA数据库结果表明，IGF2BP2和MYC在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织，且IGF2BP2高表达的结直肠...