白蛋白超载诱导近端肾小管上皮细胞表达α-平滑肌肌动蛋白

目的：探讨白蛋白超载是否可以诱导近端肾小管上皮细胞（PTCs）向成肌纤维细胞转化（EMT）。方法：大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK52E培养至70％融合或完全融合时，用不同浓度（0-30 g/L）去脂牛血清白蛋白(dBSA)超载144 h。NRK52E形态和结构改变用光镜和电镜观测。上皮细胞标记抗原E-钙黏蛋白和β-连环蛋白，以及成肌纤维细胞标记抗原α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达用免疫荧光和Western 印迹法检测。结果：dBSA超载可诱导未完全融合NRK52E表达α-SMA，少数细胞变为长梭形，但α-SMA 的表达不呈剂量依赖性。dBSA超载处理不能诱导完全融合的NRK52E表达α-SMA，细胞形态也无改变。dBSA超载完全或未完全融合NRK52E均不能抑制E-钙黏蛋白和β-连环蛋白表达，电镜显示这些细胞仍保持上皮细胞结构，包括微绒毛和紧密连接。结论：白蛋白超载可以诱导PTCs表达α-SMA，促进EMT，但不能诱导PTCs完全转化为成肌纤维细胞，细胞完全融合可抑制白蛋白超载诱导PTCs表达α-SMA。     

红景天抑制阿霉素肾病大鼠肾小管间质α平滑肌肌动蛋白表达

目的探讨红景天对阿霉素肾病大鼠肾小管上皮细胞表型转化的作用。方法用阿霉素诱导制成大鼠肾病模型,红景天治疗组第4周起喂服诺迪康胶囊[即圣地红景天0.672g/(kg.d)],对照组及肾病组喂水[3mL/(kg.d)],于第4、8、12、16和20周末分批处死大鼠,观察肾组织病理变化,检测肌成纤维细胞(MFB)的标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾小管间质中的表达。结果16周肾病组大鼠肾小管间质α-SMA半定量为6.24±0.57,明显高于红景天治疗组3.84±0.28(P<0.01),且与小管间质损害程度相关(r=0.872,P<0.01)。结论红景天能抑制肾小管间质细胞表型转化,对肾间质的纤维化有较好的防治作用。     

人腹主动脉瘤平滑肌细胞表型变化

目的:研究腹主动脉瘤(AAA)中血管平滑肌细胞(VSMC)表型改变,探讨其在AAA发病中的作用。方法:选取人体AAA、动脉闭塞性疾病(AOD)和正常腹主动脉(NA)组织,采用α-肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白(desmin)及肌球蛋白重链3种表型(SM1、SM2和SMemb)单克隆抗体,利用免疫组化及电镜技术,检测VSMC收缩型与合成型。结果:AOD及NA中VSMC以收缩表型α-SMA、desmin、SM1和SM2表达为主,SMemb在AOD的表达较低,而在NA无表达。AAA中VSMC以合成表型SMemb为主,α-SMA、SM1和SM2明显低于AOD及NA,desmin不表达;其中破裂者的SMemb和SM2低于非破裂者。结论:VSMC表型变化参与腹主动脉壁损伤重构,促进AAA形成和发展。     

ET-1促进人血管平滑肌细胞的表型变化和增殖

目的：研究ET-1与VSMC表型变化和增殖的关系。方法：用MTT法研究ET—1对平滑肌细胞增殖的影响，^3H-TdR法测定ET-1对平滑肌细胞DNA合成的作用，流式细胞仪法观察对平滑肌细胞增殖周期的影响，逆转录聚合酶链法观察对平滑肌细胞表型变化的影响。结果：与对照组比较，ET-1明显促进平滑肌细胞增殖；促进平滑肌细胞DNA合成；促进平滑肌细胞从G0期向S期的转变，G0／G1期细胞百分比明显降低，而S期细胞百分比增加；促进平滑肌细胞的表型转化，从第2d到第7d随时间延长1-Caldesmon表达逐渐增高。结论：ET-1促进平滑肌细胞表型转化，同时对平滑肌细胞增殖亦有明显的促进作用。     

人脑桥静脉平滑肌细胞α-肌动蛋白的表达

方法:人脑标本12例,共计62支桥静脉.应用H-E染色、丽春红-维多利亚蓝组合染色观察桥静脉SMC的组织学特点,运用免疫组织化学显色、免疫荧光化学显色和免疫印迹法检测平滑肌特异标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果:桥静脉管壁中膜可见散在、孤立的SMC,大多呈纵切面,α-SMA在桥静脉中免疫反应阳性;桥静脉流出端硬脑膜侧α-SMA表达高于蛛网膜侧.结论:桥静脉管壁中有SMC的存在,且分布不对称.     

哮喘小鼠气道重塑中α平滑肌肌动蛋白的表达

目的:用屋尘螨提取液(House DustMite Extract,HDM)构建哮喘小鼠气道重塑模型,检测肺组织中α平滑肌肌动蛋白(Smooth Muscle Actin-α,α-SMA)的表达。方法:BALB/c小鼠随机分为空白组、HDM低、高剂量三组,每组再分为3、6、9周3个亚组。用不同浓度的HDM皮下/腹腔致敏,滴鼻激发。用医学图像软件分析气道重塑的病理改变,分别用qRT-PCR和IH检测肺组织中α-SMAmRNA和蛋白的表达。结果:与空白组对比,HDM高、低剂量组肺组织病理炎症计分增加,气道内外径比值降低,α-SMA蛋白及其mRNA表达增加,随激发时间延长改变越来越显著;高剂量组较低剂量组更显著。结论:HDM诱导BALB/c小鼠支气管哮喘气道重塑中,α-SMA随气道重塑的加剧而表达增加。     

剪切应力增加致肾小管上皮细胞megalin／cubilin mRNA表达的变化及效应

目的检测剪切应力作用下肾小管上皮细胞megalin/dcubilin mRNA表达的变化，探讨糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）早期肾小管间质病变的发生机制。方法应用流室系统（flow chamber）提供0．5、1Pa（5、10dyn／cm^2）的剪切应力处理培养的肾小管上皮细胞，分别作用1、3、6h后，用RT-PCR法检测megalin／cubilin mRNA的表达。结果剪切应力以大小、时间依赖性的方式下调肾小管上皮细胞megalin／cubilin mRNA的表达。结论DN早期流体剪切应力的增加可下调肾小管上皮细胞megalin／cubilin mRNA的表达，从而减少了肾小管对蛋白质的重吸收,表明DN早期微量白蛋白尿的发生可能与肾小管间质的早期损伤有关。     

α-平滑肌肌动蛋白在人胚心流出道早期发育中的表达

目的 探讨人胚早期心流出道心肌和流出道心内膜垫内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达规律及其意义. 方法 32例C10～C16期[Carnegie分期法,受精后(22±1～37)d]人胚心连续切片,经抗α-SMA、抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)、抗肌球蛋白重链(MHC)抗体免疫组织化学染色,观察流出道重塑过程中α-SMA在心肌与心内膜垫内的表达规律. 结果 人胚发育C10～C15期,心包腔背侧脏壁上皮不断分化为心肌细胞添加至流出道远端,这些心肌细胞α-SMA的表达早于α-SCA和MHC.C16期,流出道嵴近心肌处出现α-SMA强阳性细胞,相邻的心肌细胞伸出突起与其相连.C12～C15期,α-SMA阳性细胞逐渐迁入流出道心内膜垫内,同时可见流出道内皮转为α-SMA阳性,向间充质细胞分化.不同来源的间充质细胞共同参与形成螺旋状流出道嵴. 结论 α-SMA可作为心肌细胞早期分化的标志;流出道嵴内α-SMA阳性细胞可能部分来自神经嵴,部分为正在向间充质细胞分化的内皮细胞.     

不同频率张应变对大鼠血管平滑肌细胞α-肌动蛋白表达的影响

目的研究不同频率张应变对血管平滑肌细胞表型转换的影响。方法应用FX-4000T细胞应变加载系统,对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞施加10％应变,频率分别为0．5Hz、1Hz和2Hz,加载时间12h和24h后,采用Real time RT-PCR、Western blot、免疫荧光化学等技术检测不同频率张应变下血管平滑肌细胞的alpha-肌动蛋白（α-actin）的表达变化。以未加载张应变的血管平滑肌细胞为对照组。结果血管平滑肌细胞的α-actin的蛋白和RNA表达量在1Hz条件下比相同时相点的其他频率组均高。结论 不同频率的张应变可以影响血管平滑肌细胞α-actin的表达量,提示应变频率的改变可能参与血管平滑肌细胞表型转换的调节。     

活化型肝星状细胞中miRNA-193下调α-平滑肌肌动蛋白的表达

目的:研究活化型肝星状细胞(HSC)中miRNA-193(miR 193)下调肝纤维化相关基因的表达。方法:将大鼠miR-193的前体序列(pre-miR-193)克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切和DNA测序鉴定,获得质粒pcDNA3.1-miR-193;通过脂质体转染法将质粒转染到大鼠的活化型肝星状细胞(HSC-T6)中,采用荧光素酶报告基因分析法和免疫印迹检测肝纤维相关基因的表达。结果:构建的真核表达载体pcDNA3.1-miR-193经酶切鉴定及DNA测序显示,目的片段的大小与预期结果一致;荧光素酶报告基因分析法和免疫印迹检测显示,重组质粒转染到活化型H-SC-T6中后,肝纤维化相关基因的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达呈明显下降趋势,而胶原蛋白Ⅰα1和Ⅰα2的下调作用不明显。结论:miR-193能抑制活化型肝星状细胞中肝纤维化相关基囚α-SMA的表达。     

实验性肾小管间质纤维化中肾小管上皮细胞表型转化的研究

目的 观察和研究肾小管间质纤维化过程中肾小管上皮细胞发生表型转化的现象及其形态特点。方法 结扎大鼠一侧肾静脉,制作大鼠肾小管间质纤维化模型,连续饲养25d。每5d杀检5只,对肾脏重点检查,未结扎肾静脉的对侧肾作为对照,采用光镜、透射电镜、偏振光显微镜及免疫组织化学方法[链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶(sP)法]观察肾组织的病理变化以及肾小管上皮细胞的表型转化情况。结果肾静脉结扎侧肾逐渐出现肾小管萎缩,肾间质淋巴、单核细胞浸润和纤维化等肾小管间质纤维化的典型病变。免疫组织化学观察发现,随着病变的发展,损伤的肾小管上皮细胞角蛋白表达逐渐减弱,而a平滑肌肌动蛋白、波形蛋白、转化生长因子β1和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达逐渐增强,肾间质中也出现角蛋白阳性的间质细胞。透射电镜下可见肾小管上皮细胞内线粒体减少,内质网和微丝增多,并可见肾小管上皮细胞突破基底膜游离到肾间质中。天狼星红染色偏振光显微镜观察显示早期肾间质中Ⅲ型胶原增生为主,后期以Ⅰ型胶原为主。结论 在大鼠肾小管间质纤维化病变的发生和发展中,肾小管上皮细胞可转化为间质成纤维细胞,是成纤维细胞的来源之一。     

胆固醇诱导人血管平滑肌细胞表型转化

目的观察胆固醇对人血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响。方法体外培养人血管平滑肌细胞株,分别用(12.5、25.0、50.0)mg/L浓度的胆固醇作用细胞48 h;50.0 mg/L的胆固醇分别作用细胞24、48、72 h。采用实时定量PCR检测VSMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;采用Western blot法检测胆固醇对VSMC中α-SMA、SM22α及单核细胞趋化蛋白-1诱导蛋白(MCPIP)表达的影响;CCK-8法检测VSMC增殖。结果 (12.5、25.0、50.0)mg/L胆固醇作用VSMC 48 h较对照组相比,α-SMA及SM22αmRNA水平及蛋白水平表达均降低(P0.05),50.0 mg/L胆固醇作用后表达水平最低,存在剂量依赖效应;用50.0 mg/L胆固醇分别作用VSMC 48、72 h后,α-SMA及SM22αmRNA及蛋白表达与对照组相比均降低(P0.05)。与对照组相比,胆固醇作用均明显促进VSMC增殖(P0.05)。50.0 mg/L胆固醇作用VSMC48 h可诱导MCPIP蛋白表达增加。结论胆固醇作用VSMC后可降低收缩型标志蛋白α-SMA及SM22α的表达、促进VSMC增殖,提示胆固醇可诱导VSMC表型转化。     

α-平滑肌肌动蛋白在良、恶性卵巢肿瘤中的表达

肌动蛋白是能聚合成微丝含量丰富的细胞内蛋白质。微丝对骨骼细胞的结构、细胞能动性及形成是必不可少的。在脊椎动物细胞中至少有6种肌动蛋白。α-平滑肌肌动蛋白(α-SmA)是其中之一种。 本文通过免疫组化染色法及使用抗α-SmA单克隆抗体对α-SmA行免疫过氧化物酶法分析,研究了3例人正常卵巢及14例赘生性卵巢肿瘤,3例非赘生性卵巢肿瘤,比较α-SmA在人良、恶性卵巢组织中的表达。发现在正常人卵巢中,α-SmA存在于血管壁、肌纤维及卵泡周围的基质细胞中,良性卵巢肿瘤中的α-SmA主要来源于血管壁,整个肿瘤的血     

缺氧复氧诱导人肾小管上皮细胞蛋白质组表达变化的初步研究

目的:采用将人肾小管上皮细胞置于缺氧环境中然后复氧的方法模拟缺血再灌注(ischemia reper-fusion,IR)所致肾损伤的发生和发展过程,研究IR对人肾小管上皮细胞表达蛋白质组的影响。方法:人肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)常规培养,随机分为2组,IR组缺氧培养8h,然后复氧培养24h,对照组常规培养,裂解细胞,提取全细胞蛋白。双向电泳(2-DE)分离,ImageMaster2D Platinum V5.0软件进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质。结果:通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,与HK-2缺氧复氧诱导的差异表达蛋白斑点为109个;经质谱鉴定的7个差异表达的蛋白斑点包括:核糖体蛋白S2、普通转录因子ⅡH亚基1变体、双链断裂修复蛋白rad-21同源物、富含亮氨酸重复序列蛋白-45、DNA依赖性蛋白激酶、丝/苏氨酸蛋白激酶Chk1和程序性细胞死亡蛋白-4。结论:IR组与对照组的表达蛋白质组相比较存在明显差异;7个与HK-2缺氧复氧诱导表达改变的蛋白质的功能涉及细胞增殖、细胞凋亡、细胞信号转导、抗细胞损伤等,提示IR的发生发展与相应的病理生理过程相关。     

枸杞多糖增加缺氧肺血管平滑肌细胞SIRT1表达并降低MMP-9及HIF-1α表达

目的监测在缺氧条件下进行枸杞多糖处理后肺血管平滑肌细胞中沉默接合型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达。方法血管平滑肌细胞分为常氧(200 m L/L O2)培养的正常细胞、2μmol/m L枸杞多糖处理的常氧细胞、DMSO处理的常氧细胞、DMSO处理的缺氧(100 m L/L O2)细胞、(0.5、1、2)μmol/m L枸杞多糖处理的缺氧细胞、SIRT1的特异性激动剂10μmol/L白芦藜醇处理的缺氧细胞、非特异性激动剂1μmol/L SRT-1720处理的缺氧细胞、SIRT1抑制剂0.5μmol/L EX-527处理的缺氧细胞,培养于6、12、24 h,实时定量PCR、Western blot法分别检测SIRT1、MMP-9及HIF-1α的mRNA和蛋白表达;在缺氧的血管平滑肌细胞中加入枸杞多糖处理12 h,实时定量PCR、Western blot法分别检测血管平滑肌细胞中SIRT1、MMP-9及HIF-1α的表达。结果缺氧条件下血管平滑肌细胞SIRT1mRNA和蛋白水平降低,MMP-9及HIF-1αmRNA和蛋白水平升高。缺氧条件下用枸杞多糖处理后,SIRT1的含量随枸杞多糖剂量的增加而增加,同时MMP-9、HIF-1α的含量降低。SIRT1的特异性激动剂白藜芦醇可抑制MMP-9的表达。结论枸杞多糖增加缺氧肺血管平滑肌细胞SIRT1水平、降低MMP-9及HIF-1α的水平。     

IL-18对肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的：研究IL-18对体外培养肾小管上皮细胞表型转化的影响，以明确IL-18在慢性肾脏疾病中的可能作用机制。方法：应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞侏（HK-2）。应用RT-PCR技术检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA水平，用免疫细胞化学方法（ICC）及Western blot技术分别检测IL-18对HK-2细胞表达仪-SMA蛋白的影响。结果：（1）IL-18可促进HK-2细胞表达α-SMA、TGF-β1 mRNA，且两者之间呈正相关（P〈0．05）。（2）IL-18增加α-SMA阳性HK-2细胞百分数（P〈0．05）。（3）IL-18使HK-2细胞α-SMA蛋白表达水平增加。结论：IL-18可剂量和时间依赖性地促进肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞，促进肾间质纤维化。     

TNF-α和IFN-γ对肾小管上皮细胞趋化因子表达的影响

目的探讨细胞因子TNF-α和IFN-γ对肾小管上皮细胞趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11表达的影响。方法分别以TNF-α以及IFN-γ和TNF-α联合作用肾小管上皮细胞HK-2不同时间后,用Real-time PCR和ELISA分别检测CXCL9、CXCL10和CXCL11 mRNA和蛋白水平。用流式细胞术检测淋巴细胞表面CXCR3表达情况,通过趋化实验检测细胞培养上清对淋巴细胞的趋化作用。结果肾小管上皮细胞在TNF-α作用12 h后能够诱导趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11mRNA表达上调,CXCL9 mRNA的表达在48 h达到高峰,而CXCL10和CXCL11 mRNA表达高峰在12 h;CXCL9、CXCL10和CXCL11蛋白的基础分泌水平均较低,在TNF-α作用12 h后,分泌水平也逐渐升高,CXCL9、CXCL10在48 h时分泌达到高峰,CXCL11分泌高峰在72 h。与TNF-α单独作用组和IFN-γ单独作用组相比,TNF-α和IFN-γ联合作用使肾小管上皮细胞趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11 mRNA表达和蛋白分泌明显增强(P<0.05)。与新鲜分离的淋巴细胞相比,活化的淋巴细胞表面的CXCR3表达明显升高(P<0.05)。TNF-α以及IFN-γ和TNF-α联合作用HK-2细胞培养上清对活化的淋巴细胞具有明显的趋化作用(P<0.05)且能被抗CXCR3抗体所阻断(P<0.05)。结论细胞因子TNF-α能诱导肾小管上皮细胞趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11表达,且与IFN-γ联合作用对趋化因子的表达具有协同作用。     

PDGF-BB对血管平滑肌细胞表型标志物表达的影响

目的:观察血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及分化相关基因表达的影响,探讨其可能的机制。方法:分离体外培养的SD大鼠胸腹主动脉VSMCs,分为空白对照组和不同浓度PDGF-BB处理组。分别采用MTT法、流式细胞术和伤口愈合实验检测PDGF-BB对VSMCs增殖、细胞周期和迁移活性的影响;用W estern b lotting分析检测VSMCs表型标志物的表达;用免疫沉淀和免疫共沉淀分析检测Krüppel样因子4(KLF4)磷酸化及与其它转录因子的相互作用。结果:PDGF-BB促进VSMCs增殖和迁移;上调增殖相关蛋白PCNA的表达,下调增殖抑制蛋白p27、分化相关蛋白SM22α的表达。PDGF-BB诱导KLF4的表达和磷酸化,促进KLF4与NF-κB的相互作用,抑制KLF4与Sm ad3、HDAC2的结合。结论:PDGF-BB可能通过影响KLF4磷酸化及其与不同转录调节因子的相互作用而诱导VSMCs表型转化。     

去甲肾上腺素促进血管平滑肌增殖和细胞表型转化

目的:研究去甲肾上腺素(NE)对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和增殖的影响及作用机制.方法:用NE分别作用体外培养和血清饥饿的血管平滑肌细胞,用5-BrdU标记VSMC的增殖、RT-PCR检测VSMC表型标志基因SM22a和增殖负性调控基因高血压相关基因-1(HRG-1)的表达.结果:NE和OX-LDL分别作用血清培养的VSMC后,SM22α和HRG-1表达下凋,5-BrdU标记的阳性增殖细胞增多;NE分别与α1-肾上腺素受体拮抗剂(α1-R-)和β1-肾上腺素受体拮抗剂(β1-R)共作用时,SM22α和HRG-1的表达明显上调.而当NE作用血清饥饿VSMC时,NE上调SM22α和HRG-1的表达.结论:NE对VSMC有促表型转化和增殖作用,且这种作用呈现像神经样的可逆性调节作用.其作用机制主要通过肾上腺索受体α1和β1来实现的.