β-葡聚糖对不同诱导来源的小鼠骨髓树突状细胞生物学功能的影响题录

目的研究在不同诱导条件下β-葡聚糖对小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs)活化和功能的影响。方法取小鼠胫骨和腓骨的骨髓在体外分别用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt-3L)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)和IL-4诱导成FL-DCs、GM-DCs, 经全葡聚糖颗粒(whole glucan particles, WGP)刺激后, 流式细胞术分析FL-DCs和GM-DCs表面分子CD40、CD80、MHCⅠ、MHCⅡ、CD8α、CD11b的表达;ELISA检测细胞上清液中IL-12p40、TNF-α、IL-6、IL-10的含量;实时荧光定量PCR检测各细胞因子及趋化因子受体的mRNA水平;OT-Ⅰ、OT-Ⅱ小鼠经磁珠分选试剂盒分选出CD8+、CD4+T细胞, 加入特异性抗原卵清蛋白(ovalbumin, OVA)与FL-DCs、GM-DCs共培养, 流式细胞术检测T细胞的增殖分化情况。结果经WGP刺激后, FL-DCs和GM-DCs中CD40、CD80、MHCⅠ、MHCⅡ、CD8α的表达均显著上调(P<0.05);细胞因子IL-12p40、TNF-α的分泌显著增多(P<0.05), 而IL-6、IL-10含量在FL-DCs、GM-DCs间存在差异;实时荧光定量PCR结果显示, WGP促进GM-DCs中趋化因子受体CXCR5和CCR7的表达(P<0.001和P<0.01), FL-DCs中CCR7的改变更为显著(P<0.000 1);在两种不同的培养方式中, WGP均能促进CD4+T细胞产生更多的IFN-γ和IL-17α(P<0.05)。结论 WGP可诱导BMDCs的成熟, 提高BMDCs对效应T细胞的活化能力, 且可促使不同诱导来源的BMDCs向不同的Th细胞分化。     

前列腺素E2对小鼠骨髓来源树突状细胞迁移的调节作用

目的研究前列腺素E2(PGE2)对小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的表型及趋化功能的影响。方法分离并培养小鼠BMDC,分为(0、 1、 5)μg/mL PGE2组、(0、 1、 5)μg/mL PGE2联合1μg/mLLPS组。流式细胞术检测BMDC表面分子CD40、 CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)及CC趋化因子受体7(CCR7)的表达, Western blot法检测BMDC的CCR7蛋白水平, Transwell~(TM)检测BMDC的迁移能力, CCK-8法检测BMDC存活率的变化。结果 1μg/mL PGE2上调BMDC表面分子及CCR7表达,并促进BMDC迁移, 5μg/mL PGE2下调BMDC表面分子及CCR7表达并抑制BMDC迁移; PGE2剂量变化并不影响BMDC的存活率。结论低剂量PGE2促进BMDC的迁移,高剂量PGE2抑制BMDC的迁移, PGE2对BMDC的迁移有双重调节作用。     

lncRNA2753在β-葡聚糖诱导小鼠树突状细胞成熟中的作用

目的:研究lncRNA12753在β-葡聚糖诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)成熟和免疫应答中的作用及可能机制.方法:通过转录组测序和实时定量PCR,研究经β-葡聚糖诱导成熟的DC中差异表达的lncRNA;转染小干扰RNA(siRNA)敲低lncRNA12753的表达;流式细胞术检测DC表面主要组织相容性复合体Ⅱ(MH...     

OCILRP2-Fc抑制小鼠骨髓来源的树突状细胞分化成熟

目的:采用OCILRP2胞外段蛋白OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体,探讨OCILRP2对小鼠树突状细胞发育成熟的影响及其机制。方法:分离培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC),荧光定量RT-PCR和流式细胞术分析OCILRP2在不成熟BMDC和LPS诱导的成熟BMDC的表达差异;流式细胞术分析OCILRP2-Fc对BMDC细胞表面标志分子的表达以及对BMDC抗原摄取能力的影响;ELISA检测培养上清中细胞因子的浓度,分析OCILRP2-Fc对BMDC分泌炎性细胞因子的影响;Western blot检测转录因子NF-κB的活化,分析OCILRP2-Fc影响BMDC分化成熟的分子机制。结果:荧光定量RT-PCR和流式细胞术结果均表明LPS可以显著上调OCILRP2在BMDC的表达(P0.05);与对照组相比,OCILRP2-Fc可以明显抑制MHCⅡ类分子及共刺激分子CD80在LPS诱导的成熟BMDC的表达;和成熟BMDC相比,OCILRP2-Fc组BMDC经LPS诱导24 h后仍然具有较强的抗原吞噬能力;而且,OCILRP2-Fc组BMDC培养上清中炎性细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α的浓度明显低于对照组(P0.05)。Western blot结果表明OCILRP2-Fc抑制了LPS诱导的I-κB降解和NF-κB p65的磷酸化。结论:OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体信号,通过抑制LPS诱导的NF-κB活化影响小鼠BMDC分化成熟。提示OCILRP2受体在树突状细胞的分化成熟过程中具有促进作用。     

肠道菌群失调促进小鼠肺树突状细胞成熟并增强TLR2和TLR4表达

目的 观察卵清蛋白(OVA)雾化吸入激发对抗生素所致肠道菌群失调小鼠肺组织中树突状细胞(DC)成熟度和Toll样受体2(TLR2)、TLR4表达的影响.方法 将64只3周龄雌性BALB/c小鼠随机分为4组,菌群失调组、菌群失调加激发组、激发组、对照组,每组16只.于实验第14天用流式细胞术检测肺组织中DC成熟度(MHC-Ⅱ类分子)及其膜表面TLR2、TLR4的表达水平,采用免疫组织化学法检测肺组织中转化生长因子p1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β1、IL-6的产生水平.结果 与对照组和激发组比较,菌群失调组及菌群失调加激发组小鼠肺组织中DC细胞膜表面MHC-Ⅱ类分子及TLR2、TLR4的表达均增加,但这些分子在上述2组中的表达无差异(P＞0.05).与其他3组比较,菌群失调加激发组小鼠肺组织及BALF中TGF-β1、IL-6水平增高.结论 肠道菌群失调使肺部DC成熟度增高,TLR2、TLR4表达增强.     

Toll样受体4在β2GPI诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟过程中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在β2糖蛋白I(β2GPI)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)成熟过程中的作用。方法体外联合使用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)诱导TLR4正常(C3H/HeN)及TLR4缺陷(C3H/HeJ)小鼠的骨髓细胞为未成熟树突状细胞(iDC)。用β2GPI或LPS(阳性对照)对iDC进一步刺激后,采用倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术分析细胞表面分子变化,ELISA测定细胞因子IL-12和TNF-α的分泌水平。结果同C3H/HeJ小鼠相比,C3H/HeN小鼠iDC经β2GPI或LPS刺激后,细胞突起较多,形态上更成熟;细胞表面分子CD11c和MHC-Ⅱ的表达量更高(P0.05);细胞因子IL-12和TNF-α的分泌更强(P0.01)。结论 TLR4在β2GPI诱导小鼠骨髓细胞来源的树突状细胞成熟过程中起重要作用。     

α黑素细胞刺激素基因转染对小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟的影响

为观察转染α黑素细胞刺激素(-αMSH)基因的树突状细胞(DC)的功能和特性,以腺相关病毒(AAV)为载体将α-MSH基因导入小鼠骨髓来源的未成熟DC(-αMSH-DC),用ELISA检测-αMSH-DC培养上清中-αMSH及IL-12水平,用流式细胞仪分析-αMSH-DC表面分子的表达,以-αMSH-DC提呈OVA抗原刺激致敏T细胞,通过ELISA测定IL-2水平来观察其抗原提呈功能。结果显示,在-αMSH-DC培养上清中检测到-αMSH的分泌,-αMSH-DC表面分子表达下调,分泌IL-12的能力降低,抗原提呈功能被抑制。-αMSH-DC可部分抵抗LPS上调表面分子表达和促进IL-12分泌的作用。表明-αMSH基因可籍AAV载体导入未成熟DC,并有效地表达,α-MSH基因修饰的DC成熟受到抑制。     

再生丝素蛋白对小鼠骨髓来源树突状细胞分化、成熟的影响

体外研究再生丝素蛋白材料对小鼠骨髓来源树突状细胞分化、成熟的影响,探讨丝素蛋白的免疫原性及作为生物材料的意义。体外分离培养小鼠骨髓来源树突状细胞,接种于铺有再生丝素蛋白生物材料的细胞培养板中培养,在光学显微镜下观察细胞形态;FCM分析细胞表面相关分子的表达。同时用 MTT 法测小鼠骨髓来源树突状细胞细胞株 DC2．4在所选各种材料表面的生长增殖情况。结果表明：（1）再生柞蚕丝素蛋白和家蚕丝素蛋白均可支持小鼠骨髓来源的 DCs 生长和聚集;（2）MTT 结果表明再生柞蚕丝素蛋白与再生家蚕丝素蛋白相比可促进小鼠 BM来源 DC2．4的增殖;（3）再生柞蚕丝素蛋白和再生家蚕丝素蛋白上的小鼠 BM来源 DCs 表面低表达 CD11c、CD40、CD80、CD86、MHC -Ⅱ分子,与空白对照组 DCs 的表达谱相比无明显差别。再生柞蚕丝素蛋白与再生家蚕丝素蛋白相比,可较好地支持小鼠 BM来源 DC2．4的生长和增殖;再生丝素蛋白无刺激小鼠 BM来源 DCs 成熟的生物学效应。     

小鼠骨髓来源树突状细胞的分离与扩增培养

目的 :探讨树突状细胞 (DC)分离纯化及其体外扩增的方法。方法 :无菌制备C57BL/6小鼠骨髓 ;依次用红细胞裂解液去除红细胞 ,通过半粘附法去除T、B细胞 ,又在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)和白细胞介素 4 (IL 4 )协同诱导下培育 ,DC前体分化发育成DC并扩增。在第 7天用脂多糖 (LPS)和肿瘤坏死因子 a (TNF a)刺激 4 8h ,检测细胞因子白介素 12 (IL 12 )浓度及细胞表面标志CD11c、CD80、CD86和MHCⅡ。结果 :DC细胞数增加 ,其形态在光镜下多为特征性星形 ,也有梭形和多角形 ;至培养第 9天DC细胞表面标志CD11c、CD80、CD86、MHCⅡ阳性率分别为 86 .32± 12 .14 %、76 .4 2± 8.4 5%、77.12± 9.0 5%、6 8.4 5± 6 .84 % ,IL 12浓度较未用LPS和TNF a组明显增加 (P <0 .0 1)。结论 :①结果所得细胞的形态和功能符合DC ;②用LPS和TNF a刺激可以获得成熟DC。     

小鼠骨髓成熟与不成熟树突状细胞中RelB基因的表达

目的:探讨体外分离培养的小鼠骨髓来源的成熟与未成熟DC中核转录因子RelB(avianreticuloendotheliosisviral(v-rel)oncogenerelatedB)基因的表达。方法:无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导骨髓前体细胞产生未成熟的DC,未成熟的DC在培养结束前18h经LPS刺激获得成熟的DC,用流式细胞术分析它们的表型,用RT-PCR和免疫荧光染色法检测成熟与未成熟DC中,RelBmRNA和其蛋白的表达。结果:流式细胞术分析显示未成熟的DC中MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子(CD86和CD40)呈低水平表达;而成熟的DC则呈高水平表达。RT-PCR和免疫荧光染色法检测结果均显示,RelB基因在未成熟的DC中呈低水平表达;而在成熟的DC中呈高水平表达,两者比较具有统计学意义(P<0.01)。结论:RelB基因的表达与小鼠骨髓来源的DC的成熟状态密切相关。抑制DC中RelB基因的表达,有可能诱导产生具有耐受原性的未成熟的DC。     

LPS持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响

目的　研究LPS持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞 (DC)成熟的影响。方法　小鼠骨髓细胞用GM CSF培养 7d ,持续刺激组全程加入LPS ,短期刺激组在最后 48h加入LPS ,对照组不加LPS。流式细胞仪检测细胞表型和细胞摄取抗原的能力 ,ELISA检测细胞产生的细胞因子 ,混合淋巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力。结果　用LPS持续刺激的小鼠骨髓DC表达MHCⅡ、CD86、CD80和CD11c等分子和分泌TNF α和IL 12 (p70 )的能力并未增加 ,吞噬FITC OVA的能力显著升高 ,刺激同种异基因T细胞和刺激同种同基因T细胞增殖的能力亦显著低于LPS短期刺激组。结论　LPS持续刺激可抑制DC的发育成熟 ,可能是持续严重感染时免疫功能低下的原因     

HBeAg对小鼠骨髓源性树突状细胞成熟的影响

目的 探讨HBe Ag对LPS诱导小鼠骨髓源性树突状细胞(DC)成熟的影响。方法 体外诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞分化成未成熟树突状细胞,经CD11c磁珠分选纯化后将DCs随机分为空白对照组、LPS刺激组、HBe Ag+LPS刺激组。流式检测DC表型变化,混合淋巴反应(MLR)检测DC促T淋巴细胞增殖能力,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液中IL-12的分泌水平,Western blot检测p38磷酸化水平,并设置SB203580组为阳性对照探讨细胞IL-12分泌的可能调节机制。结果 LPS刺激未成熟DC引起细胞表面MHC-Ⅱ、CD86表达升高,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力增强,IL-12分泌量增高。HBe Ag可抑制LPS促进DC表面MHC-Ⅱ、CD86表达升高和促淋巴细胞增殖能力增强的作用。LPS刺激DC可引起p38磷酸化水平升高,并呈时间依赖性;HBe Ag或SB203580预处理细胞再予LPS刺激,磷酸化p38表达和IL-12分泌较单纯LPS刺激组明显下降。结论 HBe Ag对LPS引起的树突状细胞的成熟有一定的抑制作用,且HBe Ag可能通过抑制p38MAPK信号通路下调LPS诱导的树突状细胞IL-12的产生。     

鸟苷酸结合蛋白2调控β-葡聚糖诱导的小鼠树突状细胞成熟北大核心CSCD

目的研究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)对树突状细胞(DC)成熟和功能的影响。方法通过基因芯片和实时定量PCR研究β-葡聚糖诱导的DC基因的变化情况,转染GBP2小干扰RNA(si RNA),敲低GBP2的表达,流式细胞术检测DC表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平,ELISA检测细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、IL-12p70、TNF-α和IL-10水平。T细胞增殖实验检测全葡聚糖颗粒(WGP)刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对卵清蛋白(OVA)特异性CD4+T细胞的促增殖效应。结果β-葡聚糖诱导后,DC的GBP2 m RNA水平显著降低;敲低DC的GBP2水平后,其表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平降低,同时,IL-6、IL-12、TNF-α分泌下降;经WGP刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对OVA特异性CD4+T细胞的促增殖效应降低。结论 GBP2能调控β-葡聚糖诱导的DC成熟,进一步抑制T细胞的增殖。     

蛋氨酸脑啡肽对GM-CSF诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟及TLR-4表达的协同作用

观察蛋氨酸脑啡肽(MENK)对巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)成熟及TLR-4表达的影响,探讨蛋氨酸脑啡肽对小鼠骨髓来源DCs免疫功能的调节机制。体外制备小鼠骨髓细胞用GM-CSF协同MENK诱导培养7d后用RT-PCR法检测TLR-4的mRNA表达,用western-blot检测TLR-4蛋白的表达,同时用流式细胞仪(FACS)分析DC表型特征,混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC的功能。结果显示MENK协同诱导组树突状细胞TLR-4和共刺激分子的表达高于正常对照组(P<0.01)和GM-CSF诱导组(P<0.05)并具有强的激发MLR的能力。提示MENK可以促进DC成熟及TLR-4的表达,增强DC免疫功能。     

IL-27促进外周血单个核细胞来源树突状细胞分化成熟

目的:研究IL-27体外对人外周血单个核细胞(PBMC)的来源树突状细胞(DC)分化、成熟及其免疫活性的影响。方法:采集健康成人外周血,密度梯度离心法获得PB-MC,给予GM-CSF、IL-4诱导DC,第5天后根据不同处理因素将DC分为3组:IL-27组、TNF-α组和阴性对照组。倒置显微镜和透射电镜下观察DC形态;流式细胞术(FCM)检测DC表面分子CD1a、CD80、CD83和CD86的表达情况;MTT法检测DC刺激T细胞增殖的能力。结果:IL-27刺激后PB-MC来源DC呈现典型的成熟DC形态学特征。IL-27组DC表面CD1a、CD80、CD83和CD86表达水平较对阴性对照组均明显上调(P<0.05),与TNF-α组DC相比无显著差异。IL-27组DC诱导T细胞增殖的能力较对照组DC明显增高(P<0.05)。结论:IL-27可刺激PBMC来源DC的成熟。     

脂多糖、转化生长因子-β1对小鼠骨髓来源树突状细胞的生物学作用

目的:探讨加入LPS、TGF-β1体外刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的方法及其对生物学特性的作用.方法:GM-CSF和IL-4诱导培养小鼠BMDC 6 d后,分别用培养基(对照组)、LPS、TGF-β1、LPS+TGF-β1,刺激BMDC48 h后进行形态学观察,流式细胞术检测细胞表型CD11C、CD80、CD86、MHC Ⅱ,混合淋巴细胞反应检测其抗原提呈功能,收集上清液用ELISA检测IL-6,IL-12 p70.结果:LPS组具有最典型的成熟样DC形态,CD80、CD86及MHC Ⅱ的表达水平显著升高,混合淋巴细胞反应和分泌IL-4、IL-12 p70能力最强,与对照组,TGF-β1组,LPS+TGF-β1组比较差异具有统计学意义(P<0.05),TGF-β1组成熟样DC形态最不典型,CD80、CD86和MHC Ⅱ的表达水平最低,混合淋巴细胞反应和分泌IL-4、IL-12 p70能力最弱,与对照组,LPS组比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论:LPS在DC的分化晚期可以刺激其成熟,并且具有更高的生物学特性,TGF-β1不抑制DC的分化,但可以抑制DC的成熟,从而降低其生物学特性.     

Lewis大鼠骨髓来源成熟和未成熟树突状细胞的提取与鉴别

背景：树突状细胞在未成熟阶段表现出极强的抗原吞噬功能,它可以在免疫耐受、癌症的免疫治疗等方面都表现出极大的优越性。但由于未成熟树突状细胞在生物体内含量极微,这就严重限制了它在临床、科研方面的应用。目的：提取鉴别Lewis大鼠骨髓来源成熟和未成熟树突状细胞。方法：从Lewis大鼠骨髓中分离骨髓前体细胞,应用20 ng/m L粒细胞集落刺激因子、10 ng/m L白细胞介素4培养7 d诱导为未成熟树突状细胞,然后在未成熟树突状细胞中加入1μg/m L脂多糖继续培养2 d诱导为成熟树突状细胞。采用荧光倒置显微镜观察树突状细胞形态,流式细胞仪鉴定成熟和未成熟树突状细胞表面特异性分子,ELISA检测成熟和未成熟树突状细胞培养上清白细胞介素10、白细胞介素12和白细胞介素17A因子的分泌水平,混合淋巴细胞反应检测成熟和未成熟树突状细胞对T淋巴细胞的刺激反应。结果与结论：(1)普通荧光倒置显微镜下观察树突状细胞具有明显的突起结构;(2)流式细胞仪可见未成熟树突状细胞低表达CD40、CD86等共刺激分子;相反,成熟树突状细胞高表达上述共刺激分子;(3)未成熟树突状细胞的白细胞介素10、白细胞介素17A...     

MRP8、MRP14及MRP8/14促进体外培养的小鼠骨髓来源树突状细胞的表型成熟

目的探讨髓样相关蛋白8(MRP8)、MRP14及其异二聚体MRP8/14对小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC)表型成熟的影响。方法体外培养及纯化小鼠BMDC,分为对照组、1μg/m L MRP14处理组、1μg/m L MRP8处理组、1μg/m L MRP8/14处理组。采用流式细胞术检测刺激后BMDC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)的表达情况。结果 MRP14、MRP8及MRP8/14均能促进BMDC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86表达,MRP14、MRP8均能促进BMDC表面共刺激分子MHCⅡ表达,且MRP14和MRP8/14促进BMDC表达CD80、CD86的能力强于MRP8。结论 MRP14、MRP8及MRP8/14通过增加BMDC表面共刺激分子的表达而促进BMDC的表型成熟,且MRP8、MRP14及MRP8/14三者促进DC表达各种共刺激分子的能力不同。     

MyD88 RNA干扰抑制小鼠骨髓树突状细胞成熟的实验研究

目的：针对小鼠骨髓树突状细胞（DC）髓性分化因子88（MyD88）,采用RNA干扰技术抑制其合成,观察脂多糖（LPS）刺激后DC生物学活性的变化,探讨获得耐受性DC的方法,为DC的临床应用提供新思路和理论依据。方法：培养小鼠骨髓源性DC,分为对照组、LPS组及RNA干扰组,对照组不予任何处理,LPS组加入终浓度为1μg/ml的LPS,RNA干扰组于加入MyD88 siRNA12小时后给予1μg/mlLPS刺激,继续培养3天。免疫细胞化学检测DCMyD88、核因子-κB（NF-κB）的表达,Western blot检测DCMyD88的表达;流式细胞术检测DC细胞表面CD80、CD86及MHC-Ⅱ分子的变化,ELISA法检测各组DC分泌TNF-α。IFN-γ和IL-12的浓度,混合淋巴细胞培养检测T细胞增殖能力。结果：LPS促进DC高表达CD80、CD86及MHC-Ⅱ分子,促进Th1型细胞因子释放、MyD88高表达及NF-κB核移位,并诱导T细胞增殖,MyD88 siRNA可阻断LPS的这些效应。结论：MyD88 siRNA可抑制DC成熟,产生耐受性DC,增强同种未成熟DC的免疫耐受诱导作用,为进一步研究DC的临床应用奠定了基础。