肝癌中少量侧群细胞的分离、纯化及在体内荷瘤能力

目的从侧群(side population,SP)表型细胞具有干细胞特性的角度出发,对肝癌细胞系中的SP细胞进行检测、分离和评价。方法利用SP细胞能将荧光染料Hoechst33342泵到细胞外的特性,结合流式细胞技术进行分离纯化。结果在肝癌细胞系PLC、Huh7、Hep3B、SMMC7721及1例临床肝癌组织中检测到SP细胞的比例依次为0.8%、0.3%、0.6%、0.3%、0.4%;未在HepG2中检测到SP细胞。NOD-SCID荷瘤实验发现SP细胞较非SP细胞具有更高的成瘤性。结论肝癌细胞系及标本组织含有少量的SP细胞,这些SP细胞比非SP细胞具有更强的成瘤性,为进一步分析SP细胞的肿瘤干细胞特性奠定了基础。     

鼻咽癌细胞株侧群细胞染色条件的优化及其表面标记物的测定

目的探讨鼻咽癌细胞株侧群细胞所需荧光染料Hoechst33342最佳的孵育时间和浓度;研究细胞密度对侧群细胞比例的影响;测定其表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达。方法荧光染料Hoechst33342孵育细胞,选择不同的时间(30、60、90、120、150、180min)及不同的浓度(3、4、5、6、7、8mg/L),用流式细胞仪检测,倒置荧光显微镜观察选择合适的孵育时间和浓度。选取不同生长密度(70%、100%)的细胞,流式细胞仪检测侧群细胞比例的变化。荧光抗体CD133和ABCG2共孵育Hoechst33342,流式细胞仪测定细胞表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达。结果Hoechst33342孵育时间为70min,侧群细胞染色效果较佳。不同的鼻咽癌细胞株,合适孵育终浓度不同,如CNE2为6mg/L,而CNE1为2mg/L。另外,侧群细胞的比例呈生长密度依赖性。CD133蛋白总含量恒定在0.1%～0.2%,侧群细胞和主群细胞表达量没有显著差异,CD133并不富集于侧群细胞中。而侧群细胞ABCG2蛋白较主群细胞优势表达,比例达80%以上。结论鼻咽癌细胞株侧群细胞最佳的荧光染料染色时间为70mi...     

侧群细胞与卵巢癌干细胞

侧群细胞(side population,sP)是一类具有干细胞特性,能够排出活性污染Hoechst33342而具有弱荧光染色特性的细胞.利用这一特性,sP细胞可以通过免疫荧光激活细胞法结合流式细胞仪被分选,目前在人、鼠多种卵巢癌细胞株及患者腹水中成功分选、鉴定、培养,证实了sP细胞的存在,并证实其与肿瘤干细胞之间存在一致性.基于对sP细胞生物学特性的研究,进一步了解肿瘤干细胞在基因调控、信号转导等方面的研究,并且为研究卵巢癌干细胞创造有价值的细胞模型.本文就sP细胞在卵巢癌干细胞中的研究进展作一综述.     

卵巢癌侧群细胞流式分选方法的建立及探讨

目的:探讨分选卵巢癌细胞株SKOV3中的侧群(side population,SP)细胞的荧光染料Hoechst33342的最佳染色浓度及SKOV3的最适细胞密度.方法:制备SKOV3细胞悬液,以荧光染料Hoechst33342和7-AAD染色,维拉帕米拮抗对照,选择不同浓度的Hoechst33342(2.5,3,4,5,6 mg/L)孵育1×106个/mL SKOV3细胞90 min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例;选取不同细胞密度的SKOV3细胞悬液(6×105,7×105,8×105,9×105,1×106个/mL),3 mg/L的Hoechst33342孵育90 min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例.结果:通过Hoechst33342蓝光和红光双参数图,SP细胞位于左下角两种荧光均很弱的区域.Hoechst33342浓度不变时,SP细胞比例随细胞密度的增加而升高;SKOV3细胞密度不变时,SP细胞比例及细胞活性随hoechst33342浓度升高而降低.卵巢癌SKOV3细胞株在细胞密度为8×105个/mL,加入终浓度为3 mg/L的Hoechst33342,37℃水浴90 min,为最佳染色条件,此时SP细胞比例为(1.12±0.104)％,且细胞保持良好的活性.结论:人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞,Hoechst33342浓度及SKOV3细胞密度是影响SP细胞比例及细胞活性的重要因素.     

甲状腺癌中类干细胞的侧群细胞的分离及鉴定

目的:研究不同甲状腺肿瘤细胞中是否存在具备干细胞特性的侧群(side population,SP)细胞,同时比较侧群细胞和非侧群(non-SP)细胞生长?成瘤及侵袭性的差异?方法:以多种人甲状腺未分化癌细胞株为对象,利用干细胞高表达ABCG2转运体,可将荧光染料Hoechst泵出胞外的特性,运用双波长流式细胞仪从不同的甲状腺肿瘤细胞株中分选出具有干细胞特性的侧群细胞,进而通过半定量PCR及免疫荧光染色比较侧群和非侧群细胞的干细胞标志OCT4及肿瘤耐药基因ABCG2?MDR1表达的情况,采用克隆形成率及细胞侵袭迁移实验比较两组细胞群的克隆形成能力和侵袭转移能力?结果:人甲状腺未分化癌细胞株中存在具有干细胞特性的侧群细胞,该群细胞高表达干细胞标志OCT4及肿瘤耐药基因ABCG2和MDR1;同时在体外培养中,此侧群细胞可产生侧群细胞和非侧群细胞;侧群细胞比非侧群细胞具有更强的体外克隆形成能力和侵袭转移能力?结论:甲状腺肿瘤细胞中存在具有干细胞特性的侧群细胞,此群细胞可生成普通的瘤体细胞,提示该群细胞可能是肿瘤耐药和复发的根源?     

Huh7细胞中边缘群细胞分选及其增殖分裂能力的研究

目的:探讨Huh7细胞中边缘群细胞的分选及边缘群细胞在增殖及分裂能力方面与非边缘群细胞的差异,为肝癌的治疗探索新的思路。方法:采用流式细胞仪分选Huh7细胞中的边缘群细胞和非边缘群细胞,用荧光显微镜观察其胞内Hoechst33342荧光染色强度差异;以半定量RT-PCR测定ABCG2 mRNA表达水平的差异;应用免疫荧光染色检测ABCG2蛋白表达的差异并观察其增殖和不对称分裂能力的差异。结果:非维拉帕米处理组边缘群细胞比例约为2.22%,经维拉帕米阻断后边缘群细胞比例减少至0.74%;边缘群细胞中Hoechst33342的荧光强度明显较非边缘群细胞弱,在边缘群细胞中ABCG2 mRNA表达水平是非边缘群细胞的4.32倍(P<0.01),增殖能力是非边缘群细胞的2.7倍(P<0.01),且边缘群细胞能产生ABCG2(+)和ABCG2(-)子代细胞,而非边缘群细胞只能产生ABCG2(-)子代细胞。结论:Huh7细胞中存在少量边缘群细胞(2.22%),其增殖能力较非边缘群细胞强且具有不对称分裂能力(自我更新和定向分化),具有肿瘤干细胞的特性;因此边缘群细胞分选可以作为肿瘤干细胞分离的一种方法,并且在肿瘤的耐药和进展...     

胃癌侧群细胞检测分选及其增殖能力的初步分析

 目的 检测和分选胃癌细胞系中的侧群细胞（side population,SP）,并对其体外增殖能力进行初步分析。方法 选择3株不同分化程度的人胃癌细胞系MKN-28、SGC-7901、BGC-823,以Hoechst 33342 / 碘化丙啶（propidium iodidc,PI）荧光染料双染,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞仪荧光激活分选法检测SP细胞比例;通过细胞生长曲线（CCK-8法）对SP细胞体外增殖能力进行初步分析。结果 3株胃癌细胞中均存在含量极少的SP细胞,比例在0.8%～2.7%之间;SP细胞比例随着胃癌细胞分化程度降低而下降（2.20% vs 1. 57% vs 0.93%, P=0.023）人胃癌细胞系MKN-28来源的SP细胞体外培养1周、2周后的增殖倍数分别为22.67和290,明显高于非SP细胞培养后的13.68和124。细胞生长曲线显示,SP细胞体外增殖能力明显强于non-SP细胞及未经分选的MKN-28细胞（P=0. 044）。结论 胃癌细胞系中存在比例相对稳定的SP细胞,SP细胞比例随着胃癌细胞分化程度增高而上升。胃癌SP细胞体外增殖能力明显高于非SP细胞。     

SP技术在肿瘤干细胞研究中的应用

大量的试验证实肿瘤中存在肿瘤干细胞。要特异地研究肿瘤干细胞的特性和分子机制，首先就是分离出高纯度肿瘤干细胞。其中最常用的分离技术就是side population(SP)技术，但是SP技术仍有自己的局限，此仍需改进这一技术，从而突破SP技术在肿瘤干细胞分离的应用的局限性，并且需和其他技术相结合从而分离出高纯度所有肿瘤干细胞，以利于进一步全面地探讨肿瘤干细胞的特性和分子机制     

人卵巢癌OVCAR3细胞系中侧群细胞的分离及其成瘤性、侵袭性的实验研究

目的  分离卵巢癌细胞系OVCAR3中的侧群(SP)细胞,并观察其成瘤性和侵袭性。 方法  利用流式细胞荧光激活分选法将卵巢癌OVCAR3细胞系分成SP和非侧群(non-SP)细胞两个亚群。对两个亚群细胞分别采用软琼脂克隆形成实验和细胞球形成实验观察其体外成瘤能力;Transwell小室法检测两个亚群细胞的体外侵袭力。  结果  OVCAR3细胞株中外排Hoechst33342的SP细胞占13.1％,加入维拉帕米SP细胞的比例为1.8%。SP细胞的体外克隆形成率为(46.17±23.27)％,non-SP细胞仅为(6.17±3.06)％,SP细胞克隆形成率高于non-SP细胞(P<0.05);细胞球形成实验结果显示,SP细胞能在无血清的培养液中形成细胞球,而non-SP细胞则不能;Transwell侵袭实验结果显示,SP表型细胞穿过Matrigel基底膜的细胞数为(215.9±30.9)个,non-SP表型细胞仅为(60.9±10.5)个。  结论  卵巢癌OVCAR3细胞系中存在外排Hoechst33342荧光染料的SP细胞,其成瘤性、侵袭力均强于non-SP亚群细胞,表明SP表型的肿瘤细胞在卵巢癌的生长、侵袭及转移中具有重要的地位。     

甲状腺侧群细胞研究进展

侧群细胞(SP)是一类具有干细胞特性,能够排出活性染料Hoechst33342具有弱荧光染色特性的细胞。利用此特性SP细胞可以通过流式细胞仪被分选;其排出染料的能力与其细胞膜上的ATP结合盒转运子有关。目前已经在许多组织、器官中分离出SP细胞,且不同来源的SP细胞具有某些共性。本文就甲状腺SP细胞的分类、表面标志物以及相关特征作一综述。     

胰腺肿瘤干细胞研究进展

胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma, PDAC)是最常见的胰腺癌病理类型,亦是预后最差的恶性肿瘤。近年来胰腺肿瘤干细胞(pancreatic cancer stem cell, PCSC)的研究取得了诸多进展,PCSC与胰腺肿瘤的侵袭、转移及复发都有着直接联系。本研究将从PCSC的相关标志物、肿瘤微环境及靶向治疗等角度对近年来PCSC的相关研究进展作一综述。     

胃癌干细胞研究进展

目的胃癌是全球第四最常见的癌症,具有高死亡率和较低的5年生存率。肿瘤干细胞（CSC）是一群具有自我更新能力和多向分化潜能的肿瘤细胞,许多研究已证实在多种实体瘤中存在CSC。虽然CSC在肿瘤细胞总数中只占很小比例,但在肿瘤的起源、发展、转移及复发等方面均有重要的作用。胃癌肿瘤干细胞的研究进展为胃癌治疗提供新的思路。     

前列腺癌肿瘤干细胞研究进展

肿瘤干细胞理论的建立为肿瘤研究开辟了全新的视角,肿瘤的无限增殖及复发、转移的生物学特性可能是由于占肿瘤内极少数的肿瘤干细胞的存在,其他肿瘤细胞占瘤体的绝大多数,但无或只有有限的增殖潜能.最近研究发现前列腺癌中亦存在具有干细胞特性的肿瘤细胞.本文就前列腺癌干细胞的相关研究进展进行综述.     

xCT与肿瘤和肿瘤干细胞关系的研究进展

胱氨酸/谷氨酸逆向转运体（system xc^-）是细胞膜上的逆向转运氨基酸的异源二聚体,参与氧化还原和氨基酸转运的调控。胱氨酸/谷氨酸反向运输溶质载体家族7成员11（SLC7A11）也称为xCT,为其主要功能性亚基。由于肿瘤组织中氧化应激的增强及营养代谢需求的增加,xCT在多种肿瘤细胞中呈异常表达。在肿瘤细胞中,xCT通过摄取胱氨酸还原为半胱氨酸用于谷胱甘肽的合成,参与肿瘤耐药;同时胞浆内多余的半胱氨酸分泌到细胞外,提供细胞信号传导和细胞间通讯所需的还原微环境,有利于肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。在肿瘤干细胞（CSC）中,xCT促进CSC表面标记蛋白的表达,与维持CSC的干性特征密切相关,是肿瘤治疗的潜在靶点之一,并且有望应用于肿瘤的临床筛查。现通过回顾近年来xCT的相关研究,就xCT在肿瘤和CSC中的生物学作用及其作用机制进行综述。     

肿瘤干细胞(CSCs)放疗抵抗机制的研究进展

 近年来越来越多的研究表明肿瘤治疗后复发的根源在于肿瘤干细胞(cancer stem cells ,CSCs)的存在,它能抵抗各种治疗方法并最终导致治疗失败。CSCs在放疗中的作用和意义也成为研究热点之一,其特殊的DNA损伤修复机制、和周围小生境相互依存的特殊关系及DNA损伤后其损伤修复信号通路的开放等都是肿瘤放疗抵抗和复发的根源。探明CSCs产生放疗抵抗的机制将为肿瘤治疗带来新的希望。     

间充质干细胞与肺癌的相关研究进展

肺癌是世界发病率最高的恶性肿瘤,已成为癌症致病死的最主要原因.间充质干细胞是一种无造血功能的干细胞,具有多向分化的潜能,可以分化为脂肪、软骨、骨等多种组织.近年的研究发现间充质干细胞能促进肺癌组织的血管生成、肺癌的转移能力及肿瘤细胞对药物的抵抗能力,但目前其在肺癌中的具体作用机制及临床意义尚不明确,本文就近年来有关间充质干细胞和肺癌的相关研究进展进行综述.     

基于生物技术的肠道干细胞研究进展

肠道干细胞对于肠上皮各类细胞稳态的维持十分重要。正常情况下,位于隐窝基底部的肠道干细胞会不断向隐窝顶部迁移,在迁移过程中会分化形成不同的肠上皮细胞。肠道干细胞大约3-5天更新一次以维持肠道上皮的更新和损伤后修复。其中,在肠道上皮完整的条件下维持肠上皮动态平衡的主要是活跃型肠道干细胞,在肠道上皮损伤后发挥修复作用的主要是静止型肠道干细胞。近年来,随着生物技术的发展,关于肠道干细胞的研究一直在不断更新与发展。本文以国内外相关文献为基础,对应用于肠道干细胞研究中的主要生物技术、新发现的肠道干细胞标记物和调控因子进行综述。     

干细胞外泌体在骨科创伤中的修复机制及研究进展

创伤是骨科常见的受伤机制，伤口、软组织及骨组织愈合慢、延迟愈合甚至不愈合给患者及家属带来巨大的心理和经济负担，也为临床医生的工作添加了难度。创面和软组织愈合不良，不仅对患者的外观造成影响，而且对患者的功能和生活质量造成直接影响，创伤后骨组织愈合延迟和不愈合的风险也会大大增加，甚至坏死的几率也会大大增加。故而在既往治疗骨科创伤的基础之上，早期干预、促进修复会取得更好的治疗效果。外泌体(exosomes，exos)是间充质干细胞(MSC)分泌的多泡体(mesenchymalstemcell，MSC)，是一种可作为细胞间媒介参与细胞通信、细胞迁移、细胞免疫和肿瘤细胞生长等过程的载体，含有多种调控细胞代谢因子。近年来，随着干细胞外泌体研究的逐步深入，人们发现MSC-EXOS可以作为一种非细胞手段参与组织修复，而MSC-EXOS强大的非细胞治疗潜能为治疗创伤修复提供了新的研究方向。现就MSC-exos对于创伤修复的作用机制进行综述。