新疆维吾尔自治区喀什地区亚洲璃眼蜱携带病原菌研究

目的 采用16S rDNA V3-V4区高通量测序,并结合特异基因的PCR检测,研究新疆维吾尔自治区喀什地区亚洲璃眼蜱体内菌群特征及常见病原菌携带情况,为当地蜱传疾病防控提供理论依据。方法 于2021年5月在喀什地区巴楚县采用布旗法采集游离蜱342只,经形态学和特异性16S rDNA检测鉴定蜱种;除228只用于分离培养外,其余114只提取全基因组DNA,采用Illumina Novaseq测序平台进行16S rDNA V3-V4区高通量测序,分析喀什地区亚洲璃眼蜱携带菌的种类及其相对丰度水平;根据新疆地区既往报道常见蜱媒病原菌分布情况及蜱种带菌特征,选取6种常见病原菌对其特异性基因进行PCR检测,分析各病原菌的携带情况,并与高通量测序结果进行比较分析。结果 16S rDNA V3-V4区高通量测序分析显示1个样本携带贝纳柯克斯体;所有样本在属水平均检出立克次体属,16个样本检出无形体属,但缺少种水平注释;所有样本均未检出疏螺旋体。PCR法检测表明14只蜱携带伯氏疏螺旋体,7只蜱携带米氏疏螺旋体,3只蜱携带嗜吞噬细胞无形体,2只蜱携带贝纳柯克斯体,斑点热立克次体及查菲埃立克体未检出。结论...     

亚洲璃眼蜱和小亚璃眼蜱新疆地理株各发育阶段生物学特性的比较分析

目的 分析比较亚洲璃眼蜱（Hyalomma asiaticum）和小亚璃眼蜱（H. anatolicum）新疆地理株不同发育阶段生物学特性和形态差异。方法2019年4—5月,于新疆奇台和吐鲁番2个蜱流行地采集硬蜱,利用形态学特征鉴定蜱种,提取全蜱总DNA, PCR扩增蜱虫线粒体细胞色素氧化酶亚基1 (CO1)基因保守片段,使用pEASY R-T1载体系统对目的基因进行克隆,挑取单菌落无菌扩大培养,培养后的菌液进行测序。采用NCBI中Blast在线分析软件,对测序后的靶基因序列与其他序列的同源性进行比对,分析CO1基因序列并进行系统进化树分析。将12只新西兰大白兔随机均分为2组,每组6只,分别供血饲喂不同发育阶段的亚洲璃眼蜱和小亚璃眼蜱,分别为幼蜱（200只）、若蜱（150只）和成蜱（50只）,每个发育期分别取2只大白兔进行供血饲喂。采用饲蜱装置将蜱接种于兔子耳部饲血,每天对吸血蜱进行观察,直至各发育期蜱饱血脱落,记录各个阶段的发育时间,观察各蜱种不同发育期的生物学特性。结果于奇台和吐鲁番两地共采集317和291只硬蜱,分别为亚洲璃眼蜱（317只）和小亚璃眼蜱（291只）。经生物学特性的...     

非洲钝缘蜱和波斯锐缘蜱同工酶的研究

本文首次报道两种软蜱不同发育期的同工酶酶谱研究。 非洲钝缘蜱Ornithodoros moubata Murray雄虫和雌虫: 苹果酸脱氢酶同工酶(MDH)分别显示4和3条酶带。其相对活性分别为3.8、21、67.5、7.7％和5.5、17.1、77.4％。酯酶同工酶(Est)分别显示6和6条酶带。其相对活性分别为18.2、23.6、6、29.6、     

亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP15的克隆和分析

目的 通过扩增Ha7．7，获得包含该EST的基因全长，以便研究该基因的生物学功能。方法 以Ha7．7-GSP-和Ha7．7-GSPz和Ha7．7-GSP。为引物，RACE法扩增亚洲璃眼蜱雌成蜱唾液腺总RNA，获得基因的5’-端。根据Ha7．7和5’-端序列设计全长引物（Ha7．7-FLP^＋和Ha7．7-FLP-），扩增cDNA第1链获，得全长cDNA。结果 分析表明，基因大小为449bp，由吸血诱导亚洲璃眼蜱成蜱唾液腺表达。结论 与数据库资料比对显示，GP15为新纪录（Genbank登录号DQ020265）。     

长角血蜱、嗜群血蜱经期传播莱姆病螺旋体Borrelia garinii的实验研究

目的　探讨长角血蜱、嗜群血蜱经期传播莱病螺旋体的可能性。方法　通过皮下注射KM鼠建立实验感染动物模型 ,以此阳性感染鼠感染试蜱非感染种群 ,观察试蜱的感染能力以及以莱姆病螺旋体的保持能力。结果　通过剌叮阳性KM鼠 ,长角血蜱、嗜群血蜱幼蜱饱血后分别获得 6 1 3%、75 0 %的阳性感染 ,但所感染的螺旋体在感染后 2d即死亡消解 ,不能重新获得分离 ,PCR扩增阳性也只能持续到饱血后 8d ,幼蜱蜕化为若蜱后 ,所有检测结果均为阴性 ;这两种蜱的若蜱也都可通过吸血获得 70 0 %的检测阳性率 ,感染后长角血蜱、嗜群血蜱可分别在在饱血后 5、10d内保持螺旋体的活性 ,PCR检测阳性率可延迟至饱血后 15d。此后直至蜕化成为成蜱 ,所有血、蜱检测结果均呈阴性 ;长角血蜱、嗜群血蜱的不同种群在感染和保持螺旋体能力上表现一致。结论　长角血蜱、嗜群血蜱的幼蜱和若蜱虽可以感染莱姆病螺旋体但不能经期传播到下一发育阶段 ,不具备经期传播能力 ,作为莱姆病主要媒介的可能性不大。     

吐鲁番地区首次发现小亚璃眼蜱的报告

吐鲁番盆地位于新疆东部天山南坡,北以高耸的博格达山为屏障,南抵低缓的觉罗塔格山,西起喜拉乌成山麓,东至七角井山口,隔十三间房戈壁与哈密盆地相同,为一东西长约250 km,南北宽约75 km,面积约18 500 km2的闭塞洼地.     

长角血蜱两性生殖株和孤雌生殖株幼蜱发育零点及有效积温的研究

目的研究长角血蜱两性生殖株和孤雌生殖株幼蜱在不同温度下的发育零点和有效积温。方法将长角血蜱两性生殖株和孤雌生殖株饱血幼蜱置于不同温度的环境中,观察发育历期和积温,采用拟合模型方程求出两性株和孤雌株幼蜱发育的零点温度,计算幼蜱发育的有效积温。结果长角血蜱两性株和孤雌株的发育零点分别为14.89℃和14.95℃,平均积温分别为(265.08±99.37)日度和(306.90±176.24)日度,有效积温分别为(101.44±147.66)日度和(116.51±116.79)日度。结论长角血蜱饱血幼蜱的发育历期随温度升高而缩短,两性株比孤雌株发育快,研究结果可以作为长角血蜱生物学的基础理论参数之一。     

亚东璃眼蜱的产卵与温度和湿度的影响

将亚东璃眼蜱的饱食雌蜱放在不同温度和湿度的环境中进行观察。饱食雌蟀在20～40℃之间均可产卵,在15℃和45℃未产卵。产卵的温度低阈为16.8℃,有效积温为72.2日度.在20～40℃的产卵前期天数与温度有非常显著的负相关。寿命、产卵期和产卵高峰等所需天数在20～30℃范围内,随温度升高而明     

长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库的构建及免疫学筛选

目的 构建长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库,筛选长角血蜱功能性抗原基因。 方法 在无RNA酶污染的条件下提取长角血蜱总RNA,进而纯化mRNA,以寡脱氧胸腺核苷酸［oligo（dT）］为引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将cDNA分子定向克隆至具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体。用噬菌体包装蛋白对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,转化大肠埃希菌（Escherichia coli）ER1647,从而构建长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库。使用兔抗长角血蜱全蜱血清对该文库进行免疫学筛选,经过2次筛选得到的阳性噬菌体转化E. coli BM25.8亚克隆为重组质粒,转化E. coli JM109,提取重组质粒进行PCR和测序分析。 结果 长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库的基础库容量为1.8×106 pfu,重组率为100%,扩增后的滴度为2.4×109 pfu/ml。筛选获得42个阳性克隆,序列分析表明有12个新cDNA序列,其编码蛋白与长角血蜱原肌凝蛋白、环状扇头蜱幼蜱未知蛋白、黑腹果蝇染色体2R、褐黄血蜱线粒体DNA、青海血蜱HqL09、Hq05和肌球蛋白轻链mRNA等具有同源性。 结论 构建了长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库,获得的阳性克隆为长角血蜱功能性抗原的研究奠定基础。     

小五台山地区长角血蜱若虫日间寻求节律

目的 旨在了解长角血蜱若虫日间寻求活动节律及其变化原因,为研究者规划合理采样时间,从而准确评估蜱传疾病风险提供理论依据。方法 在河北省小五台山地区选取半封闭山路设置3处样带,于长角血蜱种群数量高峰期内,连续5 d从6∶00-19∶00,每隔1 h采用拖旗法对处于寻求状态若虫进行有放回抽样调查,同时记录气温,相对温度和露点温度。结果 不同样带间蜱采样数量差异显著(F=66.50,P<0.01),离居住地越近蜱数量越多;各样带间长角血蜱若虫均表现出相同寻求活动节律,受气温和露点温度影响,6∶00-8∶00若虫数量下降,8∶00-12∶00有一起伏,随后逐渐上升至16∶00趋于稳定并于19∶00达到最大,16∶00-19∶00为日间长角血蜱若虫采集数量最高时段,占总采集数量的48.4%。结论 宿主活动强度对蜱数量分布有较大影响;蜱寻求节律与空气中水汽含量有关,清晨水汽含量过大植被凝集露水,中午水汽含量过小,空气干燥,都可降低蜱寻求活动,导致不同时间下采样可造成蜱种群密度估计和蜱传疾病风险评估误差,16∶00-19∶00环境条件适宜,蜱寻求活动强烈,是最接近蜱种群密度的采样时间,建议在制定林间蜱种群密度调查方案时,应统一采样时间以便数据具有可比性。     

湖北省长角血蜱携带嗜吞噬细胞无形体的调查

目的调查湖北省长角血蜱是否携带嗜吞噬细胞无形体。方法运用聚合酶链反应方法对湖北随州地区采集的蜱标本进行嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因片段进行扩增和序列分析,将扩增序列与GenBank注册的基因序列进行比较。结果共检测游离蜱72只,蜱种鉴定均为长角血蜱,嗜吞噬细胞无形体最小感染率为4.22%;所检出的嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因与我国已在GenBank注册的24个相对应序列同源性100%。结论湖北省长角血蜱携带嗜吞噬细胞无形体。     

亚洲璃眼蜱(Hyalomma asiaticum)经卵传递新疆出血热病毒的初步实验

用新疆出血热病毒A7003株人工感染绵羊后确定绵羊出现病毒血症时,使饥饿的雌性成蜱叮咬吸血。饱血后的雌蜱单个饲养,产卵后用卵、幼蜱和稚蜱进行病毒分离。结果从4批幼蜱中分离出2株病毒。证实新疆出血热病毒在亚洲璃眼蜱中可经传递病毒至子代幼蜱。     

亚东璃眼蜱的延迟交配对吸血时间和生育力的影响

本文报道亚东璃眼婢的延迟交配对吸血时间、饱食后的体重以及产卵数的影响。雌虫在延迟交配的条件下,吸血时间显著延长,饱食后的体重较轻,因而导致产卵量降低。未交配雌虫的吸血时间比延迟交配     

长角血蜱感染汉赛巴尔通体后血淋巴超氧化物歧化酶变化的初步研究

目的测定长角血蜱（Haemaphysalis longicornis）感染汉赛巴尔通体（Bartonella henselae）后不同时间段超氧化物歧化酶的活性。方法用Hamilton 10μL微量进液器将汉赛巴尔通体菌液悬浮液（浓度为10^5cfu／μ）,通过假头与盾板间缘凹处注入已部分吸血的未交配的长角血蜱成蜱血腔内,在染毒后1h,6h,12h,24h及48h后收集长角血蜱的血淋巴,使用南京建成超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒测定其血淋巴中SOD的活性。同时设立生理盐水对照组,对比两组之间及两组内各时间点是否存在差异。结果对收集到的不同时间段的血淋巴测定超氧化物岐化酶的活性后发现,实验组在感染后48h内,酶活性一直处在平稳的水平;生理盐水对照组SOD酶活性随着时间的延长先升高后又降低,在12h达到（11．1999±1．3248）U／mL,并且与实验组此时间段的酶活性相比有统计学差异（P=0．036）;而在48h降为最低,与1h的酶活性相比有统计学差异（P=0．000）。结论长角血蜱受到一定浓度的汉赛巴尔通体攻击后,血淋巴SOD酶活性在一段时间内受到了抑制。     

长角血蜱雌雄个体间共生菌多样性比较

目的了解长角血蜱雌雄个体间共生细菌多样性的差异。方法采用QIAamp DNA Stool Mini Kit基因组提取试剂盒提取长角血蜱总DNA,PCR扩增16SrDNA V3和V4区。构建基因文库,利用Illumina MiSeq测序技术对未吸血雌、雄成蜱的共生细菌情况进行测序分析。结果基于399只长角血蜱的分析结果表明,变形菌门(Proteobacteria)在雌、雄蜱标本丰度为94.0%,其次为厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)。柯克斯体属(Coxiella)在雌雄个体中所占比例均90%。雌、雄蜱组间比较菌群多样性差异有统计学意义(R=0.01,P0.05)。雌、雄个体中均检测出埃立克体属(Ehrlichia)、包柔氏螺旋体(Borrelia)和无形体属(Anaplasma)3种人兽共患病原体。结论雌、雄长角血蜱共生细菌组成和多样性上均有显著区别,雌蜱的共生菌群多样性低于雄蜱。     

辽宁省东部山区长角血蜱中SFGR DNA的检测和序列分析

目的调查辽宁省东部地区蜱类携带斑点热群立克次体(SFGR)情况及种型分布。方法采集辽宁省本溪、宽甸长角血蜱,提取DNA,采用PCR扩增SFGR ompA基因,并进行测序和聚类分析。结果 65份(368只)长角血蜱标本有7份扩增出SFGR OmpA基因片段,阳性率为10.77%。对其中3份标本的扩增片段(BH36、BH30、KD9)测序后进行聚类分析,ompA基因序列与SFGR河北株暂定种Candidatus R.hebeiii(HQ651815、HQ651817)同处于一个分支,同源性为99.83%~100%;与R.heilongjiangensis和R.japonica遗传距离较近,与其他SFGR遗传距离较远。结论辽宁省东部地区长角血蜱携带SFGR Candidatus R.hebeiii,且感染较普遍。     

从中哈边境亚洲璃眼蜱中检测到弗朗西斯氏菌样内共生体核酸

目的对中哈边境铁路线区域的亚洲璃眼蜱中弗朗西斯菌属及内共生体检测。方法 2015年在中哈边境采集的游离蜱进行形态学与分子学鉴定后,扩增弗朗西斯菌属及共生体16SrRNA和sdhA基因,对阳性产物测序后进行Blast分析,用Mega 6.0构建分子遗传进化树。结果对243只游离蜱经形态学与分子学鉴定为亚洲璃眼蜱后,经PCR病原学检测及测序得到35份(只)阳性,阳性率为14.4%。分析得到两株(Seq1和Seq2)不同基因型的序列,遗传进化树显示,这两株弗朗西斯菌属内共生体聚到1支,未检测到土拉弗朗西斯菌。结论在中哈边境铁路线区域亚洲璃眼蜱中首次检测到弗朗西斯菌样核酸。     

不同气候模式下我国长角血蜱潜在适生区预测

［摘要］　目的　分析环境和气候因子对我国长角血蜱适生区分布的影响,并预测不同气候模式下长角血蜱的潜在分布区。方法　从文献中获取我国长角血蜱分布点信息,结合环境和气候因子数据,运用MaxEnt最大熵模型,分析年均温、昼夜温差日均值、等温性、温度季节性变化标准差、最暖月最高温、最冷月最低温、年均温变化范围、最湿季度平均温度、最干季度平均温度、最暖季度平均温度、最冷季度平均温度、年均降水量、最湿月降水量、最干月降水量、降水量变异系数、最湿季度降水量、最干季度降水量、最暖季度降水量、最冷季度降水量等19个气候因子及海拔、坡度、坡向、植被覆盖率等4个环境因子对长角血蜱潜在分布的影响,并预测当前和未来不同气候模式下（RCP 2.6和RCP 8.5）长角血蜱潜在地理分布区。结果　在影响我国长角血蜱地理分布的环境和气候因子中,贡献率均超过10%的因子主要包括最干月降水量（26.0%）、年均温（11.2%）、年均降水量（10.0%）和海拔（24.2%）。当前气候模式下,我国长角血蜱高、中、低适生区面积分别为123.19万、169.62万、185.44万km2。在RCP 2.6气候模式下,2050和2070年我国长角血蜱分布区面积分别增加33.61万km2和36.73万km2;在RCP 8.5气候模式下,2050年和2070年我国长角血蜱分布区面积分别增加38.10万km2 和35.80万km2。结论　降水、温度和海拔等气候和环境因子对我国长角血蜱分布区影响较大;在未来不同气候模式下,我国长角血蜱适生区面积均可能增加。     

草原革蜱中肠抗原诱导宿主产生的抗长角血蜱的交叉免疫

用同种抗原诱导动物宿主产生的免疫反应防治同一种蜱已有研究[1,2],媒介硬蜱间的交叉免疫抵抗报道不多,研究内容仅限于对吸血量的影响[2],为了探讨异种媒介硬蜱间的交叉免疫现象,作者等进行了草原革蜱(D.Nuttalli)中肠抗原诱导的免疫反应对长角血蜱(H.longicornis)的交叉免疫抵抗研究.     

草原革蜱中肠抗原诱导宿主产生的抗长角血蜱的交叉免疫

用同种抗原诱导动物宿主产生的免疫反应防治同一种蜱已有研究，媒介硬蜱间的交叉免疫抵抗报道不多，研究内容仅限于对吸血量的影响，为了探讨异种媒介硬蜱间的交叉免疫现象，作者等进行了草原革蜱(D．Nuttalli)中肠抗原诱导的免疫反应对长角血蜱(H．longicornis)的交叉免疫抵抗研究。