无心跳供体中供肝微循环的动态变化

目的 探讨不同热缺血时间下大鼠无心跳供体肝组织微循环的变化规律，预测供肝耐受热缺血的安全时限。方法 实验动物按供肝热缺血时间分别为0、15、30、45、60min，随机分为5组。然后按各组条件分别作原位肝移植．对肝移植术后各组血清透明质酸(HA)的水平进行动态检测，以及观察肝组织微循环超微结构的动态变化。结果 在热缺血30min以内，移植肝组织复流后能逐渐恢复至正常的微循环结构和功能。热缺血45min，复流后大部分肝血窦腔可逐渐恢复通畅。但部分血窦仍充满较多的膜浆泡和血细胞积滞；热缺血45min以前各组术后3d血清HA可基本恢复。热缺血60min，复流后内皮细胞损伤不但不能恢复，且出现加重、扩大趋势。结论 供肝经受30min以内热缺血损伤，肝组织微循环的变化处在可复性阶段。45min的热缺血时间可能县供肝微循环功能耐受热缺血损伤的极限．热缺血60min以后．呈现不可逆性的微循环障碍．     

肝细胞凋亡与肝移植中热缺血损伤关系的实验研究

目的：探讨肝细胞凋亡是否参与肝移植中热缺血再灌注这一病理损伤过程。方法：实验以大鼠供肝获取前供体所经历的心脏停搏时间0、30和60min将实验动物分为3组：HB组、NHBD－30组和NHBD－60组，而后行大鼠原位肝移植，每组各20对。于术后1、3、6和24h处死取材。移植肝标本采用HE染色、TUNEL技术和透射电镜进行观察，并采集血样以测定TNF－α。结果：HB组几乎未出现肝细胞凋亡。移植术后3－6h，NHBD－30组出现了少量肝细胞凋亡，而NHBD－60组则出现了大量肝细胞凋亡。移植术后24h，NHBD－30组和NHBD－60组则分别出现了局灶性和大片肝细胞坏死。随着供肝遭遇的热缺血时间不断延长，术后TNF－α呈上升趋势，在术后3h达到峰值。结论：肝细胞凋亡参与肝移植中热缺血再灌注损伤，肝细胞凋亡可能是坏死的原因，并且肝细胞凋亡与TNF－α表达关系密切。     

热缺血损伤对大鼠移植肝组织能量代谢及存活期的影响

目的：探讨不同热缺血时间下大鼠肝组织能量代谢变化规律,预测供肝耐受热缺血的安全时限。方法：实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45和60min,随机分为7组。采用反相高效液相色谱法测定单纯热缺血后肝组织能量代谢指标并进行超微结构的观察。然后按各组条件分别作原位肝移植,观察移植后24、48h各组肝组织能量代谢指标的恢复性变化,并统计生存时间。结果：供肝经受热缺血损伤后,肝组织ATP含量和EC水平远逐渐下降,其中前30min下降比较急剧,以后趋向平缓。热缺血30min内肝组织ATP含量和EC水平在肝移植再复流24h后基本得到恢复,术后大鼠仍可以获长期存活。45min组,移植肝在48h后能量代谢的功能也基本恢复,虽不足以影响术后的1周存活率,但对大鼠肝移植术后的3个月存活率影响显著。60min组,肝脏能量代谢储备功能难以恢复,大鼠术后生存天数显著降低。结论：供肝组织三磷酸腺苷（ATP）含量和能荷（EC）水平以及其移植术后恢复的潜能是衡量供肝质量的重要标准。供肝热缺血损伤的时间与肝组织能量代谢功能的恢复及术后动物生存情况密切相关。     

供肝热缺血与肝移植术后肺损伤关系的实验研究

目的：探讨心脏停搏供体肝移植中，供肝热缺血与肝移植术后肺损伤的关系。方法：实验以供肝获取前经历的心脏停搏时间0、30和60min分为3组，分别为有心跳组（HB组）、心脏停搏30min组（NHBD－30组）和心跳停搏60min组（NHBD－60组），而后行大鼠原位肝移植。比较术后血清中肿瘤坏死因子（TNF）－α细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的变化，并观察肺组织病理和肺组织中ICAM－1免疫组织化学表达。结果：随着供肝热缺血时间的延长，肺组织损害也逐渐回重，术后血清中TNF－α和ICAM－1的值呈上升趋势，各组间差异有显著性。术后6h NHBD-60组出现肺组织中ICAM－1的强表达。结论：在心脏停搏供体肝移植中，TNF－α和ICAM－1的表达上调与术后肺组织损伤有关。     

不同热缺血时间对大鼠移植肝功能状态及存活期的影响

目的：探讨不同热缺血时间条件下，大鼠原位肝移植术后肝脏功能和组织形态变化规律，并对动物远期存活情况进行观察，预测无心跳供体（NHBD）中供肝耐受热缺血的安全时限。方法：实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45、60min，随机分为7组。然后按各组条件分别作原位肝移植，观察肝移植后24、48h、3和5d各组肝脏功能和组织形态的恢复性变化，并统计生存时间。结果：供肝经受30min以内热缺血损伤，各组移植术后生存天数差异无显著性，热缺血30min组，肝移植术后1周的存活率达到83.3％（10/12），1个月和3个月存活率分别为58.3％（7/12）和50.0％（6/12）。热缺血45min组，术后1周的存活率为66.7％（8/12），但1个月和3个月存活率分别为33.3％（4/12）和8.3％（1/12）。至于热缺血60min组，1周的存活率仅为8.3％（1/12）。结论：大鼠的供肝可以安全地耐受30min以内的热缺血。45min的热缺血损伤，虽对术后1周存活率无明显影响，但大鼠肝移植术后的远期存活时间明显缩短。60min以后，移植肝组织的结构和功能均难以恢复，大鼠术后生存天数显著降低。     

肝移植热缺血损伤与ICAM-1表达的实验研究

目的：探讨细胞粘附分子是否参与肝移植热缺血再灌注这一病理损伤过程。方法：实验以大鼠供肝获取前经历的心脏停搏时间0、30、和60min分为3组，分别为HB组，NHBD－30组和NHBD－60组，而后行大鼠原位肝移植，每组各20对，于术后1，3，6和24h处死取材，分别检测血清中TNF－α和ICAM－1的表达，以及肝组织中ICAM－1的表达。结果：随着供肝经历的热缺血时间的不断延长，术后血清中TNF－α和ICAM－1的表达，以及肝组织中ICAM－1的表达呈上升趋势.天经地义:ICAM-1颂与肝移植中热缺血再灌注损伤。     

肝移植热缺血损伤与细胞因子表达的研究

目的　探讨心脏停搏供体肝移植中 ,供肝热缺血损伤与肝移植术后细胞因子的表达。方法　将实验鼠以供肝获取前经历的心脏停搏时间 0、30和 6 0min分为 3组 ,每组 2 0只 ,分别为HB组、NHBD 30组和NHBD 6 0组 ,而后行大鼠原位肝移植。比较术后各组肝移植大鼠血清中TNF α、IL 6和CINC的变化。结果　随着供肝遭受的热缺血时间延长 ,肝移植大鼠术后血清中TNF α、IL 6和CINC均呈上升趋势 ,并分别于术后 3、6和 6h达到峰值 ,各组间差异有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　在心脏停搏供体肝移植中 ,供肝的热缺血损伤与TNF α、IL 6和CINC的表达上调有关     

供体热缺血时间对移植肝的影响

目的 探讨大鼠动脉化原位肝移植中供体热缺血时间对移植肝的影响.方法 实验分为4组:对照组(C)和移植组,移植组根据供肝获取前经历供体心脏停搏时间的不同分为三组:热缺血0 min(W0)、热缺血15 min(W15)和热缺血30 min(W30),其后建立近交系大鼠动脉化原位肝移植模型,每组均为30只大鼠,分别于术后3、7、14和30 d处死,每个时间点各取6只大鼠,分别测定移植肝组织学、肝功能的变化.此外,移植组各组随机选取6只大鼠观察长期生存率(＞100 d).结果 随着供肝热缺血时间的延长,移植肝损伤加重,恢复过程延长.移植组和对照组术后3、7、14和30 d血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化无显著性差异.血清碱性磷酸酶(ALP)随着供肝热缺血时间的延长逐渐增高,14 d达到高峰后逐渐下降.术后3、7、14和30 d ALP与供肝热缺血时间具有显著相关性.术后热缺血0、15、30 min长期生存率组分别为100.0%(6/6)、83.3%(5/6)、66.7%(4/6),3组间比较差异无统计学意义(P=0.285).结论 肝移植过程中供肝热缺血主要损伤肝细胞,并随着供肝热缺血时间的延长移植肝细胞损伤加重,肝细胞功能恢复早于其形态学恢复.肝移植术后早期存在胆汁淤积,供肝热缺血时间的延长明显加重胆汁淤积的程度,胆汁淤积的恢复明显晚于肝细胞损伤指标的恢复.在热缺血30 min内来自于心脏停搏的供肝肝移植术后是安全的.     

移植肝热缺血损伤后糖原及酶组织化学活性的动态变化

目的：探讨不同热缺血时间下大鼠移植肝组织糖原及酶组织化学活性变化规律，预测供肝耐受热缺血性的安全时限。方法：用组织化学和细胞化学的方法，对大鼠移植肝组织进行动态观察，按热缺血时间随机分为0、15、30、45、60min5组，观察肝移植后的恢复性变化。结果：随热缺血时间的延长，肝组织琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞色素氧化酶（CO）和三磷酸腺苷酸（Mg^2 ,ATPase)活性逐渐降低，糖原减少，热缺血30min以前各组酶活性变化轻微，而45、60min组均出现明显的酶活性降低和高碘酸－无色品红（PAS）反应减低，15、30min组，在复流后24h糖原颗粒逐渐增多，呈明显的恢复，酶活性逐渐恢复至接近正常水平，45、60min组，复流后24hPAS反应和酶活性仍无明显恢复趋势，结论：移植肝热缺血在30min以内，肝组织损伤仍处在可复性阶段，复流后能逐渐恢复至正常的形态和功能，移植肝糖原含量，酶组织化学活性的变化以及术后其恢复性的潜能可作为衡量供肝质量的重要标准。     

供肝热缺血损伤对大鼠肝移植术后胆汁淤积的影响

目的探讨肝移植中供肝热缺血损伤对肝移植术后胆汁淤积的影响。方法实验分为4组：对照组（C）和移植组,移植组根据供肝获取前经历供体心脏停搏时间的不同分为三组：热缺血0min（W0）、热缺血15rain（W15）和热缺血30min（W30）,其后建立大鼠动脉化原位肝移植模型,每组均为30只大鼠,分别于术后3d、7d、14d和30d处死,每个时间点各取6只大鼠,分别测定移植肝组织学、血清ALP和ALT变化。此外,移植组各组随机选取6只大鼠观察长期生存率（〉100d）。结果随着供肝热缺血时间的延长,术后血清ALP逐渐增高,14天达到高峰后逐渐下降。术后第3d、7d、14d、30d血清ALP与供肝热缺血时间具有显著相关性。随着供肝热缺血时间的延长,移植肝损伤加重,并且恢复过程也延长。移植组和对照组术后血清ALT无显著性改变。W0、W15和W30术后长期生存率无明显差别。结论肝移植术后存在胆汁淤积,供肝热缺血时间的延长明显加重胆汁淤积的程度。但是,供肝热缺血30min以内造成的大鼠肝移植术后胆汁淤积并不影响预后。     

大鼠肝脏热缺血损伤后组织学与超微结构变化的动态观察

目的：观察大鼠肝脏热缺血损伤后组织学与超微结构的动态变化特点，探讨肝脏耐受热缺血的安全时限。方法：对42例不同热缺血时间条件下的大鼠肝脏标本进行组织学、组织化学与超微结构变化的动态观察。结果：光镜下，热缺血30min以后，开始出现肝细胞轻度水肿，灶性的空泡变性，并随热缺血时间的延长而加重，未见明显坏死。电镜下可见，线粒体肿胀尤为明显，但直至热缺血60min，大部分细胞仍为可逆性变化，仅少数细胞出现染色质边集、核碎裂和核溶解等。组织化学染色显示，热缺血30min始出现肝糖原颗粒减少，并有逐渐加重趋势。琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶和三磷酸腺苷酶在热缺血60min后才发生明显的酶活性降低。结论：从组织学与超微结构方面证实，肝脏在单纯热缺血损伤时，缺血时间在60min以内，肝细胞损伤大多仍处在可复性阶段，仅部分缺血细胞发生不可复性的损伤。     

Synergistic effect of cold and warm ischemia time on postoperative graft function and outcome in human liver transplantation

Prolonged cold ischemia time (CIT) during graft preservation and warm ischemia time (WIT) during rewarming time have been reported to cause postoperative graft dysfunction after orthotopic liver transplantation (OLT). However, the effects of both CIT and WIT in combination on patient and graft survivals are not yet defined. The aim of this study was to determine whether simultaneously prolonged CIT and WIT were associated with early graft outcomes after clinical OLT. For analysis of liver graft survival within 90 days of OLT and postoperative graft function, 186 consecutive OLT cases were divided into four groups as follows: group A, CIT < 12 hours and WIT < 45 minutes; group B, CIT > 12 hours and WIT < 45 minutes; group C, CIT < 12 hours and WIT > 45 minutes; and group D, CIT > 12 hours and WIT > 45 minutes. The graft loss rates were 5.4% in group A, 9.8% in group B, 11.1% in group C, and 42.9% in group D. The mean highest aspartate aminotransferase (AST) value after OLT in group D (3352.3 +/- 569.4 U/L) was significantly greater than those in groups A (1411.7 +/- 169.2 U/L) and B (1931.3 +/- 362.6 U/L). The simultaneously prolonged cold and warm ischemia times significantly caused hepatic allograft injury and failure, suggesting some cumulative effects of CIT and WIT on postoperative graft function.     

梗阻性黄疸SD大鼠肝热缺血再灌注损伤模型的建立

目的构建阻塞性黄疸合并肝热缺血再灌注损伤的SD大鼠模型。 方法选择SD大鼠40只随机分为4组：假手术组（Sham组）、梗阻7天组（7 d组）、梗阻14天组（14 d组）及梗阻21天组（21 d组）,每组10只。通过双重结扎并切断胆总管建立SD大鼠阻塞性黄疸模型,探索最佳梗阻时间。梗阻7 d后另择SD大鼠62只,再随机分为4组：未缺血组（0 min组,10只）、缺血15 min组（15 min组,12只）、缺血30 min组（30 min组,16只）、缺血45 min组（45 min组,24只）,分别行肝门部血管阻断0、15、30、45 min后再灌注,建立后续肝热缺血再灌注损伤模型,观察生化指标、生存率及病理学改变。 结果梗阻7 d时适合下一步建模。建立阻塞性黄疸模型后,随着肝门部血管阻断时间的延长,肝功能进行性下降,大鼠死亡率逐渐升高,各组间的差异具有统计学意义（P<0.05）;随阻断时间的延长,肝脏损害的病理学表现更为严重。其中肝门部血管阻断30 min时24 h死亡率50%,再灌注2 h后病理学上出现严重的肝细胞变性、坏死改变。 结论对于梗阻性黄疸的SD大鼠,在梗阻7 d后行肝门部血管阻断30 min再恢复血流,可有效建立梗阻性黄疸大鼠的肝缺血再灌注损伤模型。     

Continuous Resuscitation for Porcine Liver Transplantation From Donor After Cardiac Death

BackgroundTo solve the serious donor shortage, the demand is increasing for developing a new method to use the marginal donors, including donors after cardiac death (DCD). Continuous machine perfusion from ex vivo to in situ is a novel technique to overcome warm ischemia during organ grafting as an ischemia-free transplantation. Herein, we tested orthotopic and heterotopic ischemia-free liver transplantation in pigs and evaluated the perfusion characteristics of DCD grafts from ex vivo preservation to implantation.Materials and MethodsThe demonstration of ischemia-free transplantation was conducted using both orthotopic and heterotopic transplantation models. Warm ischemia time (WIT) was set at 60 minutes or 120 minutes in the DCD models. Recipients were humanely killed 3 days after transplant. Flow rates of portal vein and hepatic artery were set to 0.06 to 0.15 mL/min/g and 0.04 to 0.06 mL/min/g for the liver weight ratio, respectively.ResultsUnder the stable perfusion rate by machine perfusion, the average hepatic artery pressure of the liver graft after a WIT of 120 minutes was approximately 80 mm Hg higher than after WIT of 60 minutes. The recipient with liver graft of WIT of 60 minutes could not survive overnight. In heterotopic model, the recipient with 1 hour DCD liver survived until humanely killed.ConclusionsThe results of pressure monitoring in our DCD liver graft model indicate that pressures are influenced not only by thrombus formation but also by postmortem rigidity at 2 hours after cardiac death.     

Susceptibility of hepatic microcirculation to reperfusion injury: a comparison of adult and suckling rats

Primary graft failure and vascular thromboses are frequent complications of liver transplantation, yet the mechanisms responsible remain unclear. Previous work from our laboratory has shown that hepatic reperfusion injury results in damage at the microvessel level. The present study was performed to determine whether an increased susceptibility of immature animals to microvascular injury during reperfusion might be a contributing factor in these complications. Suckling (35 to 50 g) or adult (250 to 400 g) rats were subjected to 30 or 60 minutes of hepatic ischemia to the left and median lobes followed by 90 minutes of reperfusion. Control animals were sham-operated, time-matched rats. At the end of reperfusion, fluorescein-labeled albumin was injected systemically to mark perfused sinusoids. Frozen sections of liver biopsies were viewed under fluorescence microscopy. The perfused sinusoid density was determined by point count analysis and expressed as the number of intersections of perfused sinusoids with 25 randomly oriented points superimposed on the sinusoid field. In sham-operated rats, at both 30 and 60 minutes, there were no differences between sucklings and adults. After 30 minutes of ischemia and 90 minutes of reperfusion, adults showed a significantly decreased density of perfused sinusoids (4.5 +/- 0.1 intersections per field) when compared with suckling rats (6.0 +/- 0.3 intersections per field, P less than .001). However, in rats subjected to 60 minutes of ischemia followed by 90 minutes of reperfusion, the microvascular injury was more severe in suckling rats (2.7 +/- 0.2 intersections per field) than in adults (4.7 +/- 0.2 intersections per field, P less than .001).(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

阿霉素预处理对大鼠供肝热缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨阿霉素预处理对无心跳大鼠供肝热缺血再灌注损伤的保护作用。方法根据阿霉素预处理与否及供肝获取前经历的供体心脏停搏时间30min或45min，将实验动物分为4组，即非预处理的30min（N-30）组和45min（N-45）组，阿霉素预处理的30min（tN-30）组和45min（tN-45）组行原位肝移植，观察存活状况，取材行光学显微镜及电子显微镜检查，移植术后1、3、7d采集血样检测肝功能。结果N-30组和N-45组的1周存活率分别为50．0％和16．7％，而tN-30组和tN-45组的1周存活率分别为83．3％和66．7％，预处理组移植肝脏的病理及肝功能明显好于非预处理组。结论阿霉素预处理能够减轻供肝的热缺血再灌注损伤。改善肝功能，减轻病理损害，提高大鼠肝移植的存活率。