无心跳供体中供肝微循环的动态变化

目的 探讨不同热缺血时间下大鼠无心跳供体肝组织微循环的变化规律，预测供肝耐受热缺血的安全时限。方法 实验动物按供肝热缺血时间分别为0、15、30、45、60min，随机分为5组。然后按各组条件分别作原位肝移植．对肝移植术后各组血清透明质酸(HA)的水平进行动态检测，以及观察肝组织微循环超微结构的动态变化。结果 在热缺血30min以内，移植肝组织复流后能逐渐恢复至正常的微循环结构和功能。热缺血45min，复流后大部分肝血窦腔可逐渐恢复通畅。但部分血窦仍充满较多的膜浆泡和血细胞积滞；热缺血45min以前各组术后3d血清HA可基本恢复。热缺血60min，复流后内皮细胞损伤不但不能恢复，且出现加重、扩大趋势。结论 供肝经受30min以内热缺血损伤，肝组织微循环的变化处在可复性阶段。45min的热缺血时间可能县供肝微循环功能耐受热缺血损伤的极限．热缺血60min以后．呈现不可逆性的微循环障碍．     

增加供肝的肝糖原贮备减轻心脏停搏大鼠供肝的热缺血再灌注损伤

目的探讨肝移植术前增加供肝的肝糖原贮备能否减轻心脏停搏大鼠供肝的热缺血再灌注损伤。方法雄性SD大鼠作为肝移植的供、受者被随机分为A、B、C三组。A组供者正常饮水；B组供者术前连续4d饮糖水；C组供者在B组的基础上于供肝获取前3～4h注射500g／L的葡萄糖。A、B、C三组再按供者经历的心脏停搏时间（心脏停搏60min、90min、120min和150min）各分为4个小组，行原位肝移植术并检测移植肝组织中肝糖原和ATP的含量；同时观察受者术后1周存活率以及血清丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的水平。结果B、C两组供肝的肝糖原贮备和ATP含量均明显高于A组（P〈0．01）；B-60min、B-90min、B-120min和C-90min、C-120min、C-150min组受者的1周存活率分别为80％、50％、1（）％和70％、60％、20％，部分受者可长期存活；B、C两组受者MDA水平明显低于A组，SOD水平明显高于A组（P〈0.05）。结论术前增加大鼠供肝的肝糖原贮备能明显减轻供肝的热缺血再灌注损伤，减少了术后原发性移植肝无功能的发生，提高了心脏停搏供肝移植术后的存活率。     

己酮可可碱预处理对大鼠供肝冷缺血损伤影响的实验研究

目的　探讨已酮可可碱预处理供者及肝脏对供肝冷缺血损伤的影响。方法　Wistar大鼠按处理方法的不同分为 4组 :对照组、供者预处理组 (实验 1组 )、供肝预处理组 (实验 2组 )、供者及供肝联合预处理组 (实验 3组 ) ,预处理使用己酮可可碱。各组动物均在供肝冷保存 6h后行原位肝移植 ,门静脉血流恢复后第 30min、3h及 2 4h取门静脉血测定肿瘤坏死因子 (TNF α)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶 (AST)及谷胱甘肽S转移酶 (GST)的水平。结果　门静脉复流后 30min、3h时血清TNF α水平 ,各实验组明显低于对照组 ,实验 3组显著低于实验 1组及实验 2组 (P <0 .0 5) ;30min及 3h时血清GST水平 ,各实验组明显低于对照组 (P <0 .0 5) ,实验 3组显著低于实验 1组及实验 2组 (P <0 .0 5) ;30min及 3h时血清ALT水平 ,各实验组明显低于对照组 ,实验 3组显著低于实验1组及实验 2组 (P <0 .0 5) ;2 4h时前述各指标各实验组明显低于对照组 ,实验 3组显著低于实验 2组 (P <0 .0 5) ;30min时血清AST水平 ,各实验组明显低于对照组 ,实验 3组显著低于实验 1组及实验 2组 (P <0 .0 5)。结论　己酮可可碱预处理对供肝的冷缺血再灌注损伤有一定的保护作用     

缺血后处理对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨在体条件下缺血后处理对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法采用SD大鼠原位肝移植模型,供肝冷保存时间100min,无肝期控制于18min以内,60只雄性健康SD大鼠随机分为3组,对照组12只,缺血再灌注损伤组和后处理组各24只。对照组开腹后仅游离肝周韧带;缺血再灌注损伤组受体大鼠供肝切除前仅以肝素化生理盐水经门静脉灌注;后处理组供肝植入后完全再灌注前,给予多次短暂复灌复停作为缺血后处理。缺血再灌注损伤组、后处理组受体一半（6只）于再灌注后2h留取血液及肝组织,另一半（6只）于再灌注后6h留取肝组织。对照组于关腹后相应时间留取血液及肝组织。各组分别检测肝功能,采用酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子Or．和中性粒细胞弹性蛋白酶。根据酶促反应原理,利用分光光度仪测定肝脏谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛、髓过氧化物酶、超氧化物歧化酶。肝组织HE染色后光镜下观察组织学变化。结果缺血再灌注损伤组和后处理组血清肝功能指标、炎性细胞因子水平及肝组织过氧化物含量均高于对照组（P〈0．05）,而后处理组较缺血再灌注损伤组则明显低（P〈0．05）;缺血再灌注损伤组和后处理组肝组织抗氧化酶活力显著低于对照组（P〈0．05）,而后处理组较缺血再灌注损伤组则明显高（P〈0．05）。结论缺血后处理对大鼠移植肝的缺血再灌注损伤有明显的保护作用。提高组织的抗氧化能力和降低炎性细胞因子水平可能是缺血后处理保护作用的机制之一。     

脂肪变性供肝缺血再灌注损伤的机制研究进展

缺血再灌注损伤会影响肝移植术后肝功能恢复, 脂肪供肝则会加重上述情况。本文从细胞和分子角度分析了脂肪肝缺血再灌注损伤的发生机制, 包括线粒体功能障碍, 内质网应激和自噬的启动, 泛素-蛋白酶体系统的失衡及各种效应分子等, 为减少并预防肝脏移植术后缺血再灌注损伤的发生提供新的研究思路。     

灯盏花素预处理供肝减轻大鼠肝移植后早期缺血再灌注损伤

目的 研究应用灯盏花素对供肝进行预处理,减轻大鼠肝移植术后早期缺血再灌注损伤的作用.方法 以SD大鼠作为肝移植供、受者,采用随机数字表法将受鼠分为4组.A组和C组供肝未经灯盏花素预处理,B组和D组供肝经含20 mg/L灯盏花素的UW液预处理;A组和B组供肝冷缺血时间为30～40 min,C组和D组为12 h.术后检测各组受鼠的凝血功能、肝功能、血清血栓调节蛋白(TM)含量、凋亡蛋白酶-3 (Caspase-3)活性及核因子-kB(NF-kB)相对表达量,观察各组移植肝组织病理学变化和肝细胞凋亡情况.结果 术后3d,C组与D组受鼠死亡率分别为40.0％(8/20)和29.4％(5/17),差异无统计学意义(P＞0.05);术后4组间凝血功能无明显变化(P＞0.05).与C组比较,术后早期D组肝功能、肝组织病理学改变及肝细胞凋亡均明显改善(P＜0.01),血清TM含量、Caspase-3活性及NF-kB表达量均明显降低(P＜0.01).术后A组和B组的缺血再灌注损伤明显较轻,两组间上述指标的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 应用灯盏花素对供肝进行预处理,能够减轻大鼠肝移植术后由冷保存时间较长引起的缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制凋亡相关的信号通路和减轻肝脏微循环内皮细胞损伤有关.     

供肝不同程度的缺血再灌注损伤对大鼠肝移植后急性排斥反应的影响

目的 探讨大鼠供肝不同程度的缺血再灌注损伤(IRI)对肝移植后急性排斥反应(AR)的影响.方法 用随机数字表法将大鼠分为6组,每组供、受者各12只,同系移植组供肝热冷缺血时间分别为0～2和80 min,同种移植1～4组供肝热冷缺血时间分别为0～2和80 min、0～2 min和10 h、15和80 min及15 min和10 h,假手术组仅开腹游离肝脏后关腹,不行肝移植.肝移植采用改良的Kamada二袖套法.术后1、3、5、7 d,分别处死每组3只受者,取移植肝组织,行病理学检杏观察病理改变和IRI程度,按照Banff系统分级标准对AR进行评分,采用免疫组织化学法和实时聚合酶链反应法检测移植肝组织Fas、穿孔素及颗粒酶B的蛋白和mRNA表达,采用原位末端标记法检测移植肝细胞的凋亡情况.结果 假手术组、同系移植组及同种移植1～4组移植肝组织病理学改变及IRI损伤程度依次加重.术后1、3、5、7 d,假手术组、同系移植组及同种移植4组未发现AR,同种移植1～3组AR明显;随着术后时间延长,同种移植1～3组AR评分均逐渐升高,各组内不同时间点的差异均有统计学意义(P<0.05);术后相同时间点,同种移植1～3组AR评分依次升高,组间差异均有统计学意义(P<0.05).术后各时间点,假手术组、同系移植组移植肝组织中Fas、穿孔素和颗粒酶B的蛋白及mRNA均无表达,F组仅有少量表达,同种移植1～3组较其他组的表达明显升高(P<0.05);术后相同时间点,同种移植1～3组的表达量依次升高,两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 肝移植后AR的程度与一定程度内的IRI呈正相关,但如IRI造成移植肝严重损伤,则AR的发生明显降低,Fas/FasL和穿孔素/颗粒酶B细胞凋亡途径在其中发挥重要作用.     

依布硒林减轻无心跳大鼠供者供肺的缺血再灌注损伤

目的 探讨依布硒林减轻大鼠无心跳供者(NHBD)肺缺血再灌注损伤(IRI)的作用及其机制.方法 取SD大鼠20只作为无心跳供者,获取供肺.取SD大鼠20只作为受者,并按配对比较法随机分为依布硒林组和移植对照组,每组10只,两组受鼠于移植前1h分别给予含依布硒林(剂量为500 mg/kg)和环孢素A的生理盐水和仅含环孢素A的生理盐水.移植后1h,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白质含量、白细胞数量及中性粒细胞(PMN)百分比,测定移植肺组织中丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)含量,并计算移植肺组织干/湿质量比(W/D).结果 两组肺移植手术均获得成功,术后1h受鼠存活率均为100％.依布硒林组和移植对照组BALF中蛋白质含量分别为(0.41±0.12)和(0.93±0.32) rmg/ml,PMN百分比分别为(3.3±2.0)％和(5.1±2.3)％,移植肺组织中MDA含量分别为(0.631±0.23)和(0.766±0.82) nmol/mg蛋白,MPO含量分别为(25.09±1.19)％和(35.14±0.92)％,W/D分别为(0.359±0.017)和(0.339±0.011),两组间上述指标的比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 依布硒林可能通过抑制氧化应激反应,从而有效减轻大鼠NHBD肺的缺血再灌注损伤.     

大鼠肝脏热缺血损伤后组织学与超微结构变化的动态观察

目的：观察大鼠肝脏热缺血损伤后组织学与超微结构的动态变化特点，探讨肝脏耐受热缺血的安全时限。方法：对42例不同热缺血时间条件下的大鼠肝脏标本进行组织学、组织化学与超微结构变化的动态观察。结果：光镜下，热缺血30min以后，开始出现肝细胞轻度水肿，灶性的空泡变性，并随热缺血时间的延长而加重，未见明显坏死。电镜下可见，线粒体肿胀尤为明显，但直至热缺血60min，大部分细胞仍为可逆性变化，仅少数细胞出现染色质边集、核碎裂和核溶解等。组织化学染色显示，热缺血30min始出现肝糖原颗粒减少，并有逐渐加重趋势。琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶和三磷酸腺苷酶在热缺血60min后才发生明显的酶活性降低。结论：从组织学与超微结构方面证实，肝脏在单纯热缺血损伤时，缺血时间在60min以内，肝细胞损伤大多仍处在可复性阶段，仅部分缺血细胞发生不可复性的损伤。     

供体热缺血时间对移植肝的影响

目的 探讨大鼠动脉化原位肝移植中供体热缺血时间对移植肝的影响.方法 实验分为4组:对照组(C)和移植组,移植组根据供肝获取前经历供体心脏停搏时间的不同分为三组:热缺血0 min(W0)、热缺血15 min(W15)和热缺血30 min(W30),其后建立近交系大鼠动脉化原位肝移植模型,每组均为30只大鼠,分别于术后3、7、14和30 d处死,每个时间点各取6只大鼠,分别测定移植肝组织学、肝功能的变化.此外,移植组各组随机选取6只大鼠观察长期生存率(＞100 d).结果 随着供肝热缺血时间的延长,移植肝损伤加重,恢复过程延长.移植组和对照组术后3、7、14和30 d血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化无显著性差异.血清碱性磷酸酶(ALP)随着供肝热缺血时间的延长逐渐增高,14 d达到高峰后逐渐下降.术后3、7、14和30 d ALP与供肝热缺血时间具有显著相关性.术后热缺血0、15、30 min长期生存率组分别为100.0%(6/6)、83.3%(5/6)、66.7%(4/6),3组间比较差异无统计学意义(P=0.285).结论 肝移植过程中供肝热缺血主要损伤肝细胞,并随着供肝热缺血时间的延长移植肝细胞损伤加重,肝细胞功能恢复早于其形态学恢复.肝移植术后早期存在胆汁淤积,供肝热缺血时间的延长明显加重胆汁淤积的程度,胆汁淤积的恢复明显晚于肝细胞损伤指标的恢复.在热缺血30 min内来自于心脏停搏的供肝肝移植术后是安全的.     

肝移植术中应用S-腺苷-L-蛋氨酸对供肝热缺血损伤的影响

目的探讨术中S-腺苷-L-蛋氨酸（SAMe）加入UW液和血浆冲洗液对热缺血损伤供肝及其恢复的影响。方法建立10min热缺血大鼠肝移植模型，分为A组：UW液灌注＋乳酸钠林格氏液冲洗、B组：UW液灌注＋血浆冲洗、C组：SAMe加入UW液灌注＋血浆冲洗和D组：UW液灌注＋SAMe加入血浆冲洗4组，观察肝组织组织病理学变化和电子显微镜下超微结构变化，并检测血清AST和透明质酸。结果C组和D组术后24h血清AST均低于B组（P〈0．05）。A组术后3h和24h血清HA高于B组（P〈0．05），B组复流后3h及24h血清HA均高于C组和D组（P〈0．05）。组织病理学表现B组复流后3h和24h肝细胞损伤和微循环紊乱较C组和D组明显；超微结构表现，A组复流后3h线粒体肿胀，肝窦内皮细胞肿胀，细胞核不规则，可见内皮细胞凋亡，大部分区域肝窦状隙明显狭窄，内皮层结构模糊，红细胞淤积，受压变形，白细胞附壁，可见内皮层完整性破坏；复流后24h，可见线粒体嵴断裂，核融解。B组内皮细胞损伤较A组轻，C组和D组超微结构表现微循环紊乱和肝细胞损伤表现较B组轻。结论供肝切取术中UW液中加入SAMe灌注保存，血浆冲洗液中加入SAMe可改善热缺血供肝微循环，减轻缺血再灌注损伤，并减轻肝细胞热缺血损伤，有利于10min热缺血供肝功能的恢复。     

Lazaroid U-74389G预处理对大鼠心脏停搏供体肝移植缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨在心脏停搏供体肝移植中 ,LazaroidU 74 389G预处理对大鼠供肝热缺血损伤的保护作用。方法实验以U 74 389G预处理与否、以及供肝获取前经历的心脏停搏时间 4 5或6 0min分为 4组 ,分别为N 4 5组、N 6 0组、tN 4 5组和tN 6 0组 ,而后行大鼠原位肝移植 ,比较各组术后存活率、肝功能、MDA和肝脏病理学改变。结果N 4 5组、N 6 0组、tN 4 5组和tN 6 0组肝移植术后1周的存活率分别为 2 5 % (2 / 8)、0 (0 / 8)、5 8% (7/ 12 )和 33% (4/ 12 )。U 74 389G的预处理可以显著提高心脏停搏供体肝移植的存活率 ,并能够改善术后肝功能和减轻肝脏病理学改变 ,降低MDA的表达。结论在心脏停搏供体肝移植中 ,U 74 389G预处理可以减轻热缺血再灌注对供肝造成的损伤 ,提高肝移植存活率     

肝移植热缺血损伤与细胞因子表达的研究

目的　探讨心脏停搏供体肝移植中 ,供肝热缺血损伤与肝移植术后细胞因子的表达。方法　将实验鼠以供肝获取前经历的心脏停搏时间 0、30和 6 0min分为 3组 ,每组 2 0只 ,分别为HB组、NHBD 30组和NHBD 6 0组 ,而后行大鼠原位肝移植。比较术后各组肝移植大鼠血清中TNF α、IL 6和CINC的变化。结果　随着供肝遭受的热缺血时间延长 ,肝移植大鼠术后血清中TNF α、IL 6和CINC均呈上升趋势 ,并分别于术后 3、6和 6h达到峰值 ,各组间差异有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　在心脏停搏供体肝移植中 ,供肝的热缺血损伤与TNF α、IL 6和CINC的表达上调有关     

热缺血损伤对大鼠移植肝组织能量代谢及存活期的影响

目的：探讨不同热缺血时间下大鼠肝组织能量代谢变化规律,预测供肝耐受热缺血的安全时限。方法：实验动物按供肝热缺血时间分别为0、10、15、20、30、45和60min,随机分为7组。采用反相高效液相色谱法测定单纯热缺血后肝组织能量代谢指标并进行超微结构的观察。然后按各组条件分别作原位肝移植,观察移植后24、48h各组肝组织能量代谢指标的恢复性变化,并统计生存时间。结果：供肝经受热缺血损伤后,肝组织ATP含量和EC水平远逐渐下降,其中前30min下降比较急剧,以后趋向平缓。热缺血30min内肝组织ATP含量和EC水平在肝移植再复流24h后基本得到恢复,术后大鼠仍可以获长期存活。45min组,移植肝在48h后能量代谢的功能也基本恢复,虽不足以影响术后的1周存活率,但对大鼠肝移植术后的3个月存活率影响显著。60min组,肝脏能量代谢储备功能难以恢复,大鼠术后生存天数显著降低。结论：供肝组织三磷酸腺苷（ATP）含量和能荷（EC）水平以及其移植术后恢复的潜能是衡量供肝质量的重要标准。供肝热缺血损伤的时间与肝组织能量代谢功能的恢复及术后动物生存情况密切相关。     

丙酮酸乙酯预先给药对原位肝移植术大鼠肝损伤的影响

目的 评价丙酮酸乙酯预先给药对原位肝移植术大鼠肝损伤的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠40只,体重220～ 250 g,作为肝移植术的供体和受体.采用随机数字表法,将受体大鼠随机分为3组(n=8):假手术组(S组)、肝移植组(LT组)和丙酮酸乙酯组(EP组).S组仅行单纯开关腹手术,LT组和EP组分别采用二袖套法建立大鼠原位肝移植模型,EP组于切皮前1h时尾静脉注射丙酮酸乙酯40 mg/kg.于新肝期2h时采集静脉血样,检测血清ALT和AST的活性;取肝中叶组织检测MDA含量和SOD活性.结果 与S组比较,LT组和EP组血清ALT、AST的活性和肝组织MDA含量升高,SOD活性降低(P＜0.05或0.01);与LT组比较,EP组血清ALT、AST的活性和肝组织MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05或0.01).结论 丙酮酸乙酯预先给药可减轻原位肝移植术大鼠肝损伤.     

肝移植缺血再灌注损伤的比较蛋白质组学研究

目的 研究肝移植手术中供体肝组织缺血一再灌注损伤的蛋白质变化规律.方法 2009年3月,对3例肝移植供肝于3个时间点切取肝组织标本进行对照研究:(1)新鲜的供肝组织;(2)经过缺血降温保存后修整完毕,但未经血管吻合的肝脏组织；(3)复流后的供肝组织.通过2DE-MALDI-TOF和质谱技术,对上述3个时间点的蛋白表达作出比较.结果 本研究共分离出1580个蛋白点,其中与缺血再灌注损伤有关的蛋白19个.结合19个蛋白质的功能,对这些蛋白质的变化特征进一步分析.结论 我们发现了与肝移植手术中供肝缺血性损伤和再灌注损伤相关的蛋白质,并首次揭示了这些蛋白质在不同损伤阶段独立的变化规律.     

XBP1信号转导通路对大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤的影响及其机制

目的 探讨内毒素(LPS)激活X盒结合蛋白1(XBP1)信号转导通路对移植肝缺血再灌注损伤的影响及其机制.方法 以雄性SD大鼠为供、受者,分为冷缺血转染组、活体转染组和对照组,以两袖套法建立肝移植模型.冷缺血转染组大鼠于冷缺血期经门静脉灌注转染携带XBP1短发夹干扰RNA的质粒(pSIXBP1);活体转染组大鼠在门静脉袖套吻合完成后经门静脉分支注入pSIXBP1;对照组不予任何处理.分别于移植肝门静脉恢复再灌注后60和180 min处死大鼠,光镜观察肝组织病理损害程度,逆转录聚合酶链反应及蛋白免疫印记法测定肝组织XBP1 mRNA和XBP的表达水平;酶连免疫吸附试验检测肝组织核因子κB(NF-κB)的活性及血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果 再灌注后180 min,冷缺血转染组病理损害程度、XBP1 mRNA含量和XBP1含量低于活体转染组和对照组(P＜0.05),该组TNF-α的表达水平为(584.94±15.97)pg/ml,低于活体转染组和对照组(P＜0.05).而再灌注后180 min时,3组NF-κB活性的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 XBP1通路与NF-κB通路在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中对TNF-α基因的调控作用是两个相对独立的环节,XBP1短发夹RNA干扰技术能有效减轻肝移植时的缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To explore the regulation mechanism of X box binding protein 1 (XBP1)signal transduction pathway for TNF-α and effective approach in ischemia/reperfusion (I/R) injury of liver transplantation for short hairpin RNA (shRNA) interference used to gene therapy in liver graft.Methods Male Sprague-Dawley rats were divided into three groups: the cold ischemia transfection group (CIT), the in vivo transfection group (IVT) and the control group. Experiments of orthotopic liver transplantation were performed by two cuff method. The rats in CIT were perfused with XBP1-shRNA plasmid (pSIXBP1) during cold ischemia phase, those in IVT received the equivalent volume (2 ml) of pSIIRAK 4 after portal vein inoculation, and those in the control group were not subjected to any treatment. Rats were killed at 60 or 180 min after restoring reperfusion of hepatic portal vein.Histopathological damage degree of graft liver was observed by light microscope. The expression levels of XBP1 gene and protein were detected by RT-PCR and Western blotting. The activities of NF-κB and the serum TNF-α level were detected by ELISA. Results All the indexes including the degree of histopathological damage, the expression levels of XBP1 mRNA and protein and the TNF-α level were significantly decreased in CIT as compared with IVT and control group (P＜0. 05). However,there was no significant difference in NF-κB activity among the three groups (P＞0. 05). Conclusion The role of XBP1 pathway in TNF-α gene regulation and that of NF-κB pathway in rat liver I/R injury are two relatively independent aspects, and the depression of XBP1 expression with XBP1 shRNA through portal vein perfusion during cold ischemia phase could effectively alleviate graft hepatic I/R