小檗碱药理作用对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响

目的研究中药小檗碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与代谢的影响,探讨小檗碱治疗或改善乳腺癌的可能机制。方法 2015年4—10月分别用50、100μmol/L的小檗碱处理乳腺癌MDA-MB-231细胞12、24、36 h,检测小檗碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及TNF-α及IL-8的分泌的影响,检测细胞组蛋白脱乙酰酶4(hi stone deacetylase4,HDAC4)及P21的表达水平。计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,P0.05为差异有统计学意义。结果与对照组相比,24及36 h时50和100μmol/L小檗碱组均抑制MDA-MB-231的增殖,差异有统计学意义(P0.05);不同浓度小檗碱组的细胞增殖率比较,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,12与24 h低浓度小檗碱对细胞增殖均有抑制作用,差异均有统计学意义(均P0.05);与24 h比较,12、36 h高浓度小檗碱对细胞增殖有影响,差异均有统计学意义(均P0.05)。24和36 h时不同浓度的小檗碱组与对照组的TNF-α含量相比,差异有统计学意义(P0.05),且小檗碱的浓度越高,TNF-α的分泌受到抑制的程度越大。36 h时低浓度小檗碱组IL-8含量明显减少,差异有统计学意义(P0.05);不同时间段高浓度小檗碱组IL-8的分泌与对照组比较,差异均有统计学意义(均P0.05)。24 h时小檗碱组与对照组比,HDAC4的表达均下调,P21的表达上调,差异均有统计学意义(均P0.05),高浓度小檗碱组相对低浓度小檗碱组HDAC4表达量的下调及P21的上调更明显。36 h时小檗碱组与对照组比HDAC4的表达下调的,且小檗碱浓度越高,相对表达量越低,P21则相应上调。12与24及36 h小檗碱组HDAC4及P21的表达比较,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论小檗碱可抑制乳腺癌细胞的增殖与代谢,可能机制是抑制HDAC4的表达,同时上调P21的表达,从而抑制乳腺癌的发展与转移。     

TAT-N24对乳腺癌细胞迁移的影响及其机制

目的 观察融合多肽TAT-N24对乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的影响.方法 用纯化的融合多肽TAT-N24处理MDA-MB-231细胞,通过细胞迁移实验检测其对细胞迁移能力的影响,明胶酶谱实验观察其对肿瘤转移相关基因MMP9和uPA表达的影响.结果 轻TAT-N24处理的MDA-MB-2311细胞,其迁移能力明显低于对照组细胞;TAT-N24明显抑制MDA-MB-231细胞中活化型MMP9的表达,但对uPA的表达没有影响.结论 融合多肽TAT-N2抑制乳腺癌细胞的运动迁移能力,抑制活化型MMP9的表达可能是其作用的分子机制.     

Hedgehog信号通路阻断剂Cyclopamine对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的影响

目的探讨Hedgehog信号通路阻断剂Cyclopamine对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法 2016年6—12月体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,用Hedgehog信号通路阻断剂Cyclopamine作用于MDA-MB-231细胞24 h后,分别采用划痕实验和Transwell小室实验检测MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力,ELISA检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。计量资料组间两两比较采用t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果与对照组相比,Cyclopamine能显著抑制实验组MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭,对比差异有统计学意义(P0.05)。Hedgehog信号通路被Cyclopamine阻断后,MDA-MB-231细胞中血管内皮生长因子的表达水平显著下降,对比差异有统计学意义(P0.05)。结论阻断Hedgehog信号通路可以抑制MDA-MB-231细胞的侵袭,其作用机制可能与降低VEGF的表达有关。     

过表达TGIF1对侵润性小鼠乳腺癌细胞体外迁移能力的影响

目的 探讨过表达TGIF1对侵润性小鼠乳腺癌细胞体外迁移能力的影响。方法 用非脂质体转染法构建稳定TGIF1过表达的小鼠乳腺癌细胞株及空质粒细胞株;用MTT实验检测细胞增殖;用免疫印迹检测蛋白表达;划痕实验和Transwell实验用于评价细胞体外迁移能力。结果 过表达TGIF1对小鼠乳腺癌细胞体外增殖没有明显影响,但能明显增加小鼠乳腺癌细胞迁移能力。过表达TGIF1降低小鼠乳腺癌细胞上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达,而升高Twist1蛋白表达。过表达TGIF1对神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达没有明显影响。结论 过表达TGIF1在体外能够促进侵润性小鼠乳腺癌细胞迁移。     

Parkin蛋白抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的有氧糖酵解和增殖迁移

目的 评估Parkin蛋白对乳腺癌MDA-MB-231细胞有氧糖酵解和生长增殖的影响。方法 首先采用Western blot检测Parkin蛋白在人乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达。随后构建高表达Parkin的乳腺癌MDA-MB-231细胞株为实验组,以转染空载体的MDA-MB-231细胞为对照组,分别采用葡萄糖、乳酸和ATP检测试剂盒检测两组细胞葡萄糖摄取量,乳酸和ATP生成量,并通过Western blot检测糖酵解相关蛋白GLUT1、PKM2和LDHA表达水平;运用细胞增殖实验、平板克隆及细胞划痕实验评估细胞的增殖和迁移能力;采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的表达水平。结果 与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞Parkin蛋白表达水平显著下降（P<0.01）。高表达Parkin可使乳腺癌MDA-MB-231细胞的葡萄糖摄取和乳酸生成下降,ATP水平上升（P<0.05）,其增殖和迁移能力下降（P<0.01）;与对照组相比,Parkin组细胞糖酵解相关蛋...     

PTEN抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖及其机制的探讨

目的:观察PTEN对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖和迁移的影响,进一步探讨其可能机制.方法:选用人乳腺癌细胞MDA-MB-231并体外培养,质粒转染技术建立过表达PTEN的稳定细胞株MDA-MB-231/PTEN作为实验组,空载体细胞株MDA-MB-231/pcDNA3.1作为阴性对照组,以未转染细胞为正常对照组,RT-PCR检测各组细胞PTEN的表达水平,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖能力,Transwell小室迁移实验检测各组MDA-MB-231细胞的迁移能力.结果:PTEN在MDA-MB-231/PTEN细胞中表达稳定,且其表达量明显高于阴性对照组和正常对照组,而阴性对照组和正常对照组PTEN表达量差异无统计学意义.转染PTEN基因可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移能力.结论:PTEN与乳腺癌的增殖和迁移有关,对乳腺癌细胞的体外增殖和迁移能力起到抑制作用.     

MicroRNA-21与乳腺癌细胞MDA-MB-231放射敏感性之间关系的研究

目的:研究MicroRNA-21与乳腺癌细胞MDA-MB-231放射敏感性之间关系及其表达规律。方法:①对乳腺癌细胞MDA-MB-231分别转染miR-21 mimics、miR-21 mimics Scramble(阴性对照)、miR-21 inhibitor、miR-21 inhibitorScramble(阴性对照),转染后进行集落形成实验,通过存活分数(Surviving Fraction SF)的变化检测其辐射敏感性是否发生变化;②时程实验:3Gy X-Ray照射后,分别于0、4、8、12、24 h后,实时荧光定量PCR检测miR-21的表达;③量效实验:0、1、2、4、6Gy X-Ray分别照射细胞24 h后,实时荧光定量PCR检测miR-21的表达。结果:MDA-MB-231细胞转染miR-21mimics后,SF明显升高,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);MDA-MB-231细胞转染miR-21 inhibitor后,SF明显降低,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);3GyX射线照射乳腺癌细胞株MDA-MB-231后,miR-21表达量上调,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05),并在12 h时达到峰值,24 h时恢复到照前水平;miR-21的表达量随着照射剂量的增加而发生变化,2Gy时达到峰值,照射剂量进一步加大,miR-21表达量开始下调,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05),6Gy时miR-21表达量明显低于未照射组。结论:miR-21对于增加乳腺癌细胞株MDA-MB-231的辐射抗性具有一定作用。     

三氧化二砷对人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231教化单核细胞的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231教化单核细胞的影响.方法 于体外分别用不同浓度的As2O3处理MDA-MB-231细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测巨噬细胞集落刺激因子1(CSF1)表达水平的差异,利用Transwell共培养体系检测不同浓度As2O3处理组MDA...     

雌激素受体对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的影响研究

目的:通过使用三氧化二砷(As2O3)诱导雌激素受体(estrogen receptor,ER)的再次表达,通过对乳腺癌细胞生长曲线的研究来探讨ER在阴性乳腺发展过程中的作用。方法:本研究以ER阴性的人乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,采用免疫组化、生长曲线检测法等生物学方法来检测ER在阴性乳腺癌发展过程中的作用。结果:以MCF-7作为阳性对照,免疫组化结果显示,As_2O_3可以诱导ER的再次产生。进一步观测MDA-MB-231细胞的生长曲线,发现ER可明显抑制其生长,与对照组相比,有显著性差异(P0.05)。结论:ER的再表达可抑制阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长。     

甘草提取物(Gc34)对MDA-MB-231乳腺癌细胞体外促凋亡作用研究

目的观察甘草提取物Gc34对MDA-MB-231细胞的体外促凋亡作用。方法 MTT法检测不同时间(24、48、72h),不同浓度(25、50、75、100μg/ml)Gc34对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;采用AO/EB染色、透射电镜实验判断凋亡;流式细胞仪检测其凋亡率。结果 MTT结果显示,随着Gc34作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降,Gc34对MDA-MB-231细胞体外增殖抑制呈明显的剂量-时间依赖性,72h半数抑制浓度(IC50)为65.38μg/ml;AO/EB染色表明药物组细胞出现明显凋亡迹象,而阴性对照组中细胞形态完好;透射电镜结果显示,75μg/ml Gc34处理72h后细胞出现典型凋亡形态学改变;流式细胞仪分析结果显示,随Gc34剂量增加细胞凋亡率逐渐上升,呈明显的剂量依赖性。结论甘草提取物Gc34在体外能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖并诱导其凋亡。     

SGK1基因沉默对人乳腺癌细胞生长抑制作用

目的观察血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)基因沉默对人乳腺癌细胞生长抑制作用,为探讨乳腺癌治疗靶点提供实验依据。方法采用RNA干扰技术,以pGenesil 3为载体,建立针对SGK1的短发卡RNAC(shRNA)干扰质粒pGen-3-siSGK1和阴性对照质粒pGen-3-control,转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,经筛选得到稳定SGK1基因沉默的乳腺癌细胞模型;采用实时定量PCR法、免疫荧光法以及蛋白免疫印迹法,检测shRNA干扰组、阴性对照组及未转染组细胞中SGK1的表达;采用体外浸润实验、细胞迁移实验检测各组细胞的侵袭和转移能力,噻唑蓝比色法检测细胞体外生长能力。结果成功构建针对SGK1基因的shRNA干扰质粒,建立稳定的SGK1基因沉默乳腺癌细胞模型;模型细胞中SGK1蛋白表达量与对照组相比下降了60%(P<0.01);β-catenin与SGK1表达条带亮度均明显下降;PGen-3-siSGK1组SGK1 mRNA相对含量(RQ) 为0.35,低于其他2组(分别为0.96、1.00),与pGen-3-control组相比下降了65.5%,差异有统计学意义(P<0.05),高倍显微镜视野下,pGen-3-siSGK1组的穿膜细胞数为22个/HPF,其他2组分别为66、62个/HPF;pGen-3-siSGK1组的细胞迁移率为17.01%,其他2组分别为72.22%、68.47%;凝血酶不同浓度下pGen-3-siSGK1组细胞生长均受到抑制,生长速度缓慢,其中0.1、1.0 U/mL浓度下,细胞含量(吸光度)分别为0.10、0.05,远低于其他2组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论SGK1基因沉默可抑制SGK1基因表达,可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231株的浸润能力、迁移能力下降,抑制乳腺癌细胞生长。     

Phytosterols reduce in vitro metastatic ability of MDA-MB-231 human breast cancer cells

Metastasis plays a major role in morbidity and mortality from breast cancer. Differences in the incidence and mortality of breast cancer between societies suggest that environmental factors such as diet may play a role in the disease. Previous work from this laboratory suggests that dietary phytosterols (PS) may offer protection from breast cancer by inhibiting growth of the tumor and its metastasis in severe combined immunodeficient mice. Because metastasis is a multistep process, the aim of the present study was to investigate the effect of PS on some steps of the metastatic process: tumor cell invasion, adhesion, and migration. In addition, cell growth and cell cycle progression were evaluated. MDA-MB-231 cells were supplemented with cholesterol, beta-sitosterol, and campesterol. Cells were treated for 3 days with 16 microM sterol that was loaded on 5 mM cyclodextrin. beta-Sitosterol inhibited tumor cell invasion through Matrigel and adhesion of cells to plates coated with collagen I, collagen IV, fibronectin, and laminin compared with cholesterol treatments and controls. Cholesterol treatment resulted in increased adhesion to laminin and collagen IV, two basement membrane (BM) components that are implicated in signaling tumor cell invasion in this cell line. Only cholesterol treatment increased cellular migration. beta-Sitosterol inhibited cell growth by 70% compared with controls and induced cell cycle arrest at the G2/M phase. It is concluded that, among PS, beta-sitosterol may offer protection from breast cancer metastasis by inhibiting cell invasion of the BM, which may be mediated by its ability to limit the adhesive interaction of the tumor cell and the BM.     

乳腺癌易感基因1在散发性乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 研究乳腺癌易感基因1(BRCA1)在散发性乳腺癌中的表达与各病理学指标之间的相关性.方法 应用SABC免疫组化染色法对30例乳腺纤维腺瘤和42例乳腺癌患者的病变组织中BRCA1的表达进行检测,并与腋窝淋巴结转移、肿瘤大小、组织学类型和组织学分级进行相关分析.结果 BRCA1在乳腺纤维腺瘤中的阳性表达率为85.7%(36/42),在乳腺癌中的阳性表达率为52.4%(22/42),乳腺癌中腋窝有淋巴结转移的BRCA1阳性表达率明显低于无淋巴结转移的BRCA1阳性表达率(P<0.05),BRCA1在乳腺癌中的阳性表达率随着组织学分级的升高有逐渐下降趋势,其中Ⅰ级和Ⅲ级、Ⅱ级和Ⅲ级比较差异有统计学意义(P<0.05),Ⅰ级与Ⅱ级比较差异无统计学意义(P>0.05),BRCA1的表达与肿瘤的组织学类型、肿块大小无关(P值均>0.05).结论 BRCA1在乳腺癌的发生、发展过程中有重要的作用,它有可能成为临床对乳腺癌治疗和判断预后的一个生物学指标.     

不同的游离脂肪酸对人乳腺癌细胞凋亡和侵袭的影响

目的探讨不同游离脂肪酸(FFAs)对MDA-MB-231人乳腺癌细胞凋亡和迁移的影响.方法用50、200、500 umol/L三种不同浓度的油酸(0A)和棕榈酸(PA)分别刺激MDA-MB-231细胞,采用实时定量PCR分析细胞中PTEN的mRNA含量,蛋白免疫印迹法检测PTEN和Bcl-2的蛋白表达,原位末端标记法(TUNEL)观察细胞的凋亡情况,小室迁移实验测定细胞的迁移能力.结果OA使MDA-MB-231细胞中PTEN的mRNA和蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达升高(P均＜0.05);PA则使PTEN的mRNA和蛋白表达水平上升,Bcl-2蛋白表达下降(P均＜0.05).显微镜下观察到PA刺激后的MDA-MB-231细胞凋亡增加.迁移实验显示OA和PA都能使乳腺癌细胞侵袭能力增强.结论PA可能通过上调PTEN的表达促进MDA-MB-231人乳腺癌细胞凋亡,但同时也增强细胞的侵袭能力.OA也可增强癌细胞侵袭能力.     

Inorganic sulfur reduces the motility and invasion of MDA-MB-231 human breast cancer cells

This study investigated the effects of inorganic sulfur on metastasis in MDA-MB-231 human breast cancer cells. MDA-MB-231 cells were cultured in the absence or presence of various concentrations (12.5, 25, or 50 µmol/L) of inorganic sulfur. Cell motility, invasion, and the activity and mRNA expression of matrix metalloproteases (MMPs) were examined. Numbers of viable MDA-MB-231 cells did not differ by inorganic sulfur treatment from 0 to 50 µmol/L within 48 h. Inorganic sulfur significantly decreased cell motility and invasion in the MDA-MB-231 cells in a dose-dependent manner (P < 0.05), as determined using a Boyden chamber assay and a Matrigel chamber. The activities of MMP-2 and MMP-9 were significantly reduced by inorganic sulfur in a dose-dependent manner (P < 0.05). The inorganic sulfur also significantly inhibited MMP-2 and MMP-9 expression in the cells (P < 0.05). These data suggest that inorganic sulfur can suppress cancer cell motility and invasion by inhibiting MMP-2 and MMP-9 activity and gene expression in MDA-MB-231 cells.     

对甲状腺疾病的再认识及其处理桥本病及其边缘疾病的再认识和处理

桥本病即桥本甲状腺炎，为器官特异性的自身免疫病，1912年由桥本首先报道，为甲状腺炎中最常见的临床类型，是引起甲状腺功能减退症（甲减）和甲状腺肿的最常见病因。