高效液相色谱法测定藏药结血蒿中熊果酸含量

目的 建立藏药结血蒿药材中活性成分熊果酸的定量分析方法 ,测定熊果酸含量。方法 采用高效液相色谱法（HPLC法）,色谱柱为Aglient XDB C18（4．6mm×150mm,5μm）,流动相为甲醇-0．1％磷酸溶液,体积流量1．0mL/min,检测波长210nm。结果 熊果酸在60-190μg的质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9997）：平均回收率为93．22％,RSD为2．64％。结论 所建立的HPLC法简便快捷、准确。可用于结血蒿药材成分的定量测定及质量控制,为安全、合理、有效用药及制定藏药结血蒿的药材质量标准提供科学依据。     

敲减TLR2基因对结直肠癌细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：应用慢病毒RNA干扰技术敲减结直肠癌细胞中Toll样受体2（TLR2）基因,探讨其对结直肠癌细胞增殖的作用,并阐明其作用机制。方法：将处于对数生长期的结直肠癌HCT116细胞和HT29细胞分为未感染对照组、阴性对照组及基因敲减组（TLR2-RNAi组）,分别给予无慢病毒感染、慢病毒RNAi及慢病毒TLR2-RNAi稳定转染。感染后采用蛋白印迹法检测各组细胞中TLR2蛋白表达水平,采用CCK-8法和流式细胞术检测各组细胞增殖活性及不同细胞周期细胞百分率,蛋白印迹法检测各组细胞中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶（PI3K/Akt）和核因子κB（NF-κB）细胞信号通路相关蛋白及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin D3蛋白表达水平。结果：与未感染对照组和阴性对照组比较,TLR2-RNAi组HCT116细胞和HT29细胞中TLR2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与未感染对照组和阴性对照组比较,TLR2-RNAi组HCT116细胞和HT29细胞增殖活性明显降低（P<0.05）,S期和G₂期细胞百分率明显降低（P<0.05）,G₁期细胞百分率明显升高（P<0.05）。与未感染对照组和阴性对照组比较,TLR2-RNAi组HCT116细胞和HT29细胞中PI3K、p-Akt、p-NF-κβ、cyclin D1和cyclin D3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论：敲减TLR2基因可以通过调控PI3K/Akt和NF-κB细胞信号通路及细胞周期相关蛋白cyclin D1和cyclin D3的表达而抑制结直肠癌细胞的增殖。     

滨蒿内酯对豚鼠哮喘模型的炎性介质抑制作用

目的：研究滨蒿内酯（Seo）对豚鼠哮喘的抗炎作用及机制。方法：制备迟发性哮喘豚鼠模型，免疫组化法检测豚鼠血浆和支气管肺泡灌洗液（BALF）中白介素5（IL-5）含量；电镜法对豚鼠肺组织细胞溶酶体磷脂酶A：（PLA2）进行染色，井通过图像分析定量检测其含量。结果：哮喘组IL-5及PLA2的含量与正常对照组比较明显增高（P〈0．05）；提前雾化给予42mg／L，340mg／L的Seo组与哮喘模型组比较明显降低IL-5及PLA2含量（P〈0．05）。结论：Seo可能通过抑制IL-5及PLA2发挥其对支气管哮喘的作用。     

脑瘫对血细胞免疫粘附功能的影响

目的探讨脑瘫患儿的血细胞免疫粘附功能的表达。方法根据文献关于脑性瘫痪诊断以及分型标准,我们于2001年5月~2002年12月采集儿童医院住院确诊的脑瘫患儿100例,其中男65例,女35例,年龄1.5~6岁;痉挛型45例,手足徐动型25例,混合型17例,暂不定型13例。采用新鲜血细胞免疫粘附肿瘤细胞花环试验法分别测定了脑瘫组、对照组血细胞自然免疫粘附率。结果脑瘫患儿血细胞粘附率的表达与正常儿童比较,脑瘫组TRR(14.68±3.02)、TLR(34.26±3.72),均明显低于正常对照组TRR(20.26±3.67)、TLR(43.68±3.92),差异有非常显著性(P<0.01)。脑瘫组TGR(16.72±2.67),低于对照组(17.64±2.21)。结论脑瘫患儿血细胞自然免疫粘附功能处于失衡状态,其中以红细胞及淋巴细胞免疫粘附功能低下最为明显。     

升血方剂对结直肠癌化疗患者免疫功能及骨髓抑制的影响

目的：探讨升血方剂对结直肠癌化疗患者免疫功能及骨髓抑制的影响。方法以2011年2月至2015年6月在贵州省中医院肛肠科住院治疗的94例转移性结直肠癌患者为研究对象,根据治疗方案的不同分成观察组和对照组,每组各47例,对照组采用常规的XELON方案进行化疗,观察组在对照组化疗方案的基础上给予升血方剂治疗,治疗两个周期后检测两组治疗后的免疫功能及骨髓抑制情况。结果观察组治疗后稳定率为63．83％,明显高于对照组42．55％（ P＜0．05）;观察组治疗后CD4＋、CD4＋／CD8＋及NK细胞活性明显高于对照组（P＜0．05）,而对照组治疗后CD4＋、CD4＋／CD8＋及NK细胞活性于治疗前相比差异无统计学意义（P＞0．05）;观察组治疗后CD4＋、CD4＋／CD8＋及 NK细胞活性明显高于对照组治疗后CD4＋、CD4＋／CD8＋及NK细胞活性（P＜0．05）;观察组治疗后白细胞、中性粒细胞、血小板、血红蛋白减少的发生率分别是70．21％、70．21％、17．02％、14．89％,低于对照组对照组白细胞、中性粒细胞、血小板、血红蛋白减少的发生率,分别是85．11％、87．23％、25．53％、23．40％,观察组白细胞、中性粒细胞减少发生率明显低于对照组（ P＜0．05）;观察组和对照组治疗后生活质量K PS评分均高于治疗前（P＜0．05）;观察组治疗后生活质量KPS评分明显高于对照组治疗后（P＜0．05）,观察组G‐CSF使用率低于对照组（P＜0．05）。结论升血方剂能有效提高晚期转移性结直肠癌患者的免疫功能,减轻骨髓抑制作用,提高生活质量。     

结直肠癌循环血游离miRs分子诊断标志物研究进展

微小RNAs（microRNAs,miRs）是一类非编码小分子单链RNA,主要在翻译水平负性调控基因表达。近年来研究发现,循环血游离miRs对结直肠癌（colorectal cancer,CRC）具有潜在的诊断作用。CRC患者具有特异性的循环血游离miRs表达谱,其中,miR-18a、miR-21、miR-29a和miR-92a等miRs均具有潜在的CRC诊断价值,而miR-7具有潜在的CRC早期诊断价值。这些研究结果表明,循环血游离miRs有可能成为新的CRC分子诊断标志物。     

结直肠腺瘤相关的细胞因子研究进展

结直肠癌是临床常见的恶性肿瘤之一，腺瘤-癌序贯学说认为结直肠腺瘤是结直肠癌的癌前病变。目前慢性炎症以及部分适应性免疫细胞在结直肠癌发生中的作用已经确定，同时在腺瘤到癌的演变过程中，多种免疫细胞及细胞因子在病变组织和血浆中的水平均可发生变化。本综述从机制以及临床研究两方面总结了白介素（interleukin,IL）-6、IL-17、IL-8、IL-29、成纤维细胞生长因子21、趋化因子配体20、趋化因子配体1、趋化素与结直肠腺瘤以及结直肠癌的相关性，为进一步探究其临床价值提供参考。     

长链非编码RNAH19促进结直肠癌细胞株增殖的研究

目的 研究长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA) 家族分子母源性印迹基因19 转录因子(H19 )在结直肠癌组织及细胞株中的表达情况及其对人结直肠癌SW620细胞增殖的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测20例结直肠癌组织及其癌旁组织,以及结直肠癌细胞株SW480、HCT116、SW620和正常结直肠上皮NCM460细胞中H19的表达。结直肠癌SW620细胞分别转染H19 siRNA(si-H19 组) 和阴性对照序列(si-NC组) ,分别采用流式细胞技术、细胞克隆形成实验和CCK8检测两组细胞的增殖情况。qRT-PCR和Western blot检测两组细胞G₁/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)和细胞周期素依赖激酶（cyclin dependent kinase 4, CDK4）的表达情况。结果 与癌旁组织和正常结直肠上皮NCM460细胞相比较,结直肠癌组织和细胞株中H19的表达水平升高（ P＜0.05);si-H19组细胞H19表达水平低于si-NC组,且细胞活力和细胞克隆数均低于si-NC组,以上差异均有统计学意义（ P＜0.05);同时,相较于si-NC组,si-H19组CyclinD1和CDK4基因和蛋白的表达受到了明显抑制（ P＜0.05)。结论 结直肠癌组织及细胞株中H19 呈高表达,沉默H19 表达能明显抑制结直肠癌细胞的增殖能力,为结直肠癌的靶向治疗提供了潜在策略。     

四妙勇安汤水提物大鼠吸收入血成分研究

目的通过对四妙勇安汤水提物入血成分的研究,初步阐明该复方的药效物质基础。方法采用高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱(LCMS-IT-TOF)联用技术,在电喷雾离子源的正、负离子模式下,对四妙勇安汤水提物、大鼠灌胃给药后的血清和空白血清进行检测。以甲醇对血清样本进行前处理,采用Inertsil ODS-3色谱柱,以乙腈(A)-水(含0.1%甲酸)(B)为流动相进行梯度洗脱,根据化合物的多级质谱碎片,结合参考文献和对照品初步确定四妙勇安汤水提物入血成分。结果四妙勇安汤灌胃给药后在大鼠血清中发现14个入血成分,其中10个来自该复方的原型成分,其余4个可能为代谢产物。9个色谱峰被确认为哈巴苷、绿原酸、马钱苷、当药苷、甘草苷、金丝桃苷、安格洛苷C、异绿原酸C和哈巴俄苷。结论四妙勇安汤入血成分是各组方药味配伍后共同作用的结果,本研究可为四妙勇安汤的药效物质基础和进一步的体内代谢研究提供参考。     

血必净注射液在重症肺炎中对机体免疫功能的调控研究

目的观察应用血必净注射液对重症肺炎患者血清中白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)水平以及外周血中CD4~+T、CD8~+T细胞频率变化,以明确其对机体免疫功能的影响。方法收集武汉大学人民医院ICU的46例需要机械通气的重症肺炎患者,应用随机方法分为血必净组各23例,两组患者基本治疗均予以积极液体复苏、抗感染、机械通气、维持水电解质平衡及营养支持等综合治疗。血必净组患者在上述综合治疗基础上加用血必净静脉输注治疗,用法为血必净100m L加入100m L生理盐水中,使用频率为q12h,连续应用7d。收集患者治疗前后外周静脉血,应用ELISA方法测定血清中IL-6、IL-10、TNF-a分子水平,应用FACS方法测定外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4~+T、CD8~+T细胞频率的变化。同时监测治疗前后患者血气分析、胸片、应用呼吸机时间等变化,评价其治疗效果。结果血必净组与对照组相比,其血清中IL-6、TNF-a水平在血必净组较对照组显著降低,差异具有统计学意义(P0.05);IL-10水平在血必净治疗组较对照组升高,差异具有统计学意义(P0.01);CD4~+T、CD8~+T细胞频率在血必净治疗组较对照组均升高,差异具有统计学意义(P0.01)。血必净治疗组患者应用呼吸机时间较对照组患者明显缩短,差异具有统计学意义(P0.01);两组患者氧合指数(PaO_2/FiO_2)治疗后均有明显改善,但血必净治疗组较对照组改善效果更为显著,血必净治疗组急性生理与慢性健康评分(APACHE II)较对照组降低,临床肺部感染评分(CPIS)较对照组降低,差异均具有统计学差异(P0.01或P0.05)。结论应用血必净治疗能够明显改善机体免疫功能,控制肺部炎症反应,提高治疗效果。     

蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的研究蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响。方法传代培养的HSC-T6与蕲艾提取液药物血清共同培养24h后,采用MTT法检测其对HSC增殖的影响,Elisa法检测TGFβ1蛋白表达情况。结果不同浓度蕲艾提取液药物血清(5%、10%、20%)与空白对照组及生理盐水血清组比较,能显著抑制HSC-T6增殖(P0.01)及TGFβ1蛋白的表达(P0.01)。结论蕲艾提取液药物血清可显著抑制HSC-T6增殖。     

猪胸腺免疫抑制提取物超滤组分2对细胞免疫的影响

目的　探讨猪胸腺免疫抑制提取物超滤组分 2 (简称U2 组分 )对细胞免疫的影响。方法　用3H TdR掺入DNA法检测了不同剂量的U2 组分注射BALB c小鼠后的淋巴细胞增殖情况和U2 组分对PHA诱导的正常人外周血淋巴细胞增殖的影响。结果　注射 0 .2mgU2 组分的试验组小鼠淋巴细胞增殖能力比对照组降低 (P<0 .0 5 ) ;注射 1mg和 3mg两个试验组小鼠淋巴细胞增殖能力均比对照组显著降低 (P <0 .0 1) ;5 0 μg和 10 0 μg的U2 组分对PHA诱导的正常人外周血淋巴细胞增殖也均具有显著抑制作用 (P <0 .0 1)。结论　用一定量的U2 组分对体内和体外淋巴细胞增殖均具有显著抑制作用     

Effect of Artemisia annua Extract on Treating Active Rheumatoid Arthritis: A Randomized Controlled Trial

Objective

To investigate the effect and safety of the complementary use of the extract of Artemisia annua L. (EAA) on treating active rheumatoid arthritis (RA).

Methods

A randomized controlled clinical trial was performed. All the 159 participates with active RA were randomly assigned to the control group (80 cases) and EAA group (79 cases) using concealed random allocation method. In the control group, patients were medicated with leflflunomide and methotrexate for 48 weeks; and patients in the EAA group were administrated with leflflunomide, methotrexate plus EAA (30 g/d). At the time points of 0, 12, 24 and 48 weeks, the clinical outcome measures, including objective pain score, tenderness score, number of painful joints, number of swollen joints, health assessment questionnaire (HAQ) score for quality of life, levels of serum rheumatoid factor (RF), anti-cyclic citrullinated protein antibodies (CCP-Ab), erythrocyte sedimentation rate (ESR), C reactive protein (CRP), visual analogue score for pain (VAS), and the overall effificacy were detected and recorded.

Results

The objective pain score, number of painful joints and ESR at 12 weeks, tenderness score and HAQ at 24 weeks, and the tenderness score, number of painfull joints, number of swollen joints, HAQ, CRP, RF and CCP-Ab at 48 weeks were signifificantly improved in the EAA group compared with the control group (P<0.01 or P<0.05). At 24 and 48 weeks, the overall effificacy of the EAA group was signifificantly higher than the control group (P<0.01). There were signifificantly higher withdrawal rate of corticosteroids within 12 weeks post-treatment and lower incidence rate of adverse effects in the EAA group compared with the control group (P<0.01 or P<0.05).

Conclusion

EAA plus methotrexate and leflflunomide were more effective and safer than the routine use of methotrexate and leflflunomide in the treatment of active RA.

     

艾叶二氧化碳超临界萃取物巴布剂对类风湿性关节炎大鼠的治疗作用

研究艾叶二氧化碳超临界萃取物巴布剂对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠体重、足趾部肿胀程度、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）血清水平以及骨关节病理改变的影响,探讨其疗效以及作用机制。[方法]雄性SD大鼠50只,随机分为正常组、模型组、低剂量治疗组、中剂量治疗组和高剂量治疗组,每组10只。模型组及各治疗组采用完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)造模。造模成功后,正常及模型组每天以空白巴布剂给药,各治疗组分别以不同剂量的萃取物巴布剂给药。测量各组肿胀程度,治疗两周后测大鼠体重并评估关节炎得分;给药21d后取血测IL-1β、IL-17、TNF-α含量并观察病理切片。[结果]治疗组在一般行为、体重、病变关节炎症反应、关节肿胀缓解程度、关节炎评分降低等指标上较模型组有显著改善。艾叶二氧化碳超临界萃取物巴布剂能够明显地下调AA大鼠血清中的因子IL-1β、IL-17和TNF-α的水平。病理学结果显示,治疗组大鼠滑膜组织增生、血管翳形成减轻,炎细胞浸润较模型组明显减少。[结论]艾叶二氧化碳超临界萃取物巴布剂可有效减轻AA大鼠的关节病变。其可能机理在于萃取物干涉了RA所导致的免疫紊乱。     

苦豆碱对小鼠免疫细胞功能的影响

苦豆碱（ａｌｏｐｅｒｉｎｅ）为苦豆子中的生物碱。对多种致炎剂引起的急性炎症和Ⅲ，Ⅳ型变态反应有显著的抑制作用。为了探讨其作用机理，应用淋巴细胞增殖反应及细胞因子测定法，从免疫学角度对其进行了研究。苦豆碱有抑制巨噬细胞产生白细胞介素１（ＩＬ－１）的作用（Ｐ＜０．０１）。并能直接抑制小鼠脾细胞增殖反应，同时也抑制脾细胞对刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）诱导的Ｔ细胞增殖反应（Ｐ＜０．０１），也明显降低脾细胞产生白细胞介素２（ＩＬ－２）的能力（Ｐ＜０．０１）。对细菌脂多糖（ＬＰＳ）诱导的Ｂ淋巴细胞增殖反应也同样有抑制作用（Ｐ＜０．００１）。初步实验结果证明苦豆碱是一种以抑制方式起主要作用的中草药。     

去氧萍蓬草碱在体外对免疫功能的影响

本实验发现去氧萍篷草碱（ｄｅｏｘｙｎｕｐｈａｒｉｄｉｎｅ，ＤＯＮ）在体外能浓度依赖性地抑制小鼠脾细胞和人扁桃体单个核细胞（ｈＴＭＮＣ）因丝裂原刺激的增殖反应，台盼蓝拒染法证明这种作用并非ＤＯＮ的细胞毒作用；ＤＯＮ对同种异型小鼠脾细胞诱导的增殖反应（双向或单向混合淋巴细胞反应）也有抑制作用。进一步研究表明，ＤＯＮ对小鼠脾细胞或ｈＴＭＮＣ培养上清中ＩＬ－２水平无明显影响，但对小鼠腹腔Ｍφ因ＬＰＳ刺激而产生ＩＬ－１和ＴＮＦ的水平有减低作用，该抑制作用可部分地解释ＤＯＮ抗炎作用的免疫学机理。     

沙漠嘎种子的TLC鉴定及超临界CO2萃取物的GC-MS测定

目的研究沙漠嘎种子化学成分及药材鉴定方法.方法采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)测定超临界CO2萃取物化学成分;药材鉴定采用薄层色谱(TLC)法.结果从哲里木盟产沙漠嘎种子超临界CO2萃取物中,共检出72个成分,鉴定了其中60个,并测定了各化合物在挥发油中的百分含量.结论超临界CO2萃取物中,9,12-十八碳二烯酸含量最高,达28.52%,其次是n-十六酸;建立了沙漠嘎种子TLC鉴定方法.     

啤酒酵母多糖对小鼠免疫细胞功能的影响

目的：探讨啤酒泥中酵母多糖对小鼠免疫功能的影响。方法：采用体外给药法，观察药物对小鼠T、B淋巴细胞增殖及对巨噬细胞产生细胞因子的影响。结果：与未给药对照组相比，酵母多糖能显著促进小鼠T、B细胞的增殖反应和促进IL—1、IL—2的产生。结论：啤酒泥酵母多糖在体外对免疫细胞有促进作用。     

艾叶乙醇提取物对糖尿病小鼠血糖和血脂的影响

为评价艾叶乙醇提取物对高脂饮食联合链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病模型小鼠血糖血脂的影响，采用腹腔注射STZ（35 mg/kg）加高糖高脂饲料喂养ICR小鼠，建立糖尿病小鼠模型。糖尿病小鼠随机分成3组，模型组（5 mL/kg 0.5% CMC-Na）、艾叶乙醇提取物低剂量组（100 mg/kg）和高剂量组（400 mg/kg）。连续给药6周，每天记录小鼠的饮水量及摄食量，每周记录并比较小鼠的血糖指标。测定给药6周后小鼠血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密脂蛋白胆固醇（LDL-C）和糖耐量（OGTT）水平。结果显示，艾叶乙醇提取物高剂量组小鼠的饮水量、摄食量、体重及空腹血糖和血糖浓度-时间曲线下面积（AUC）明显降低（P < 0.01），口服葡萄糖耐量也显著改善（P < 0.01），艾叶乙醇提取物低剂量组小鼠的TG、TC和LDL-C显著降低（P < 0.01）。实验结果提示艾叶乙醇提取物对糖尿病小鼠糖脂代谢具有显著调节、改善作用，且呈现一定的剂量依赖性。