高效液相色谱法测定冬虫夏草和赤芝子实体中腺苷的含量

冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ）与灵芝〔赤芝ＧａｎｏｄｅｒｍａＬｕｃｉｄｕｍ（Ｌｅｙｓｓ．ｅｘＦｒ）子实体〕属于真菌类中药。冬虫夏草具有镇静、抑菌、抑制小鼠腹水癌、增强机体免疫功能等药理作用。近年来，随着人们对冬虫夏草化学成分的深入研究，认为核苷类物质...     

响应面法优化赤芝、紫芝子实体总三萜提取工艺

目的 优化《中华人民共和国药典》收载的灵芝品种赤芝、紫芝子实体中总三萜超声提取工艺。方法 以香草醛-冰醋酸法测定吸光度并计算总三萜得率,首先通过单因素考察提取溶剂、溶剂容积分数、超声时间、超声温度及料液比5个因素对灵芝中总三萜得率的影响,再采用Design-Expert软件通过响应面法优化其超声提取工艺。结果 赤芝子实体总三萜最佳提取条件：提取溶剂为无水甲醇,料液比为1∶38 g/mL,超声时间为30 min,超声温度为53 ℃;紫芝子实体总三萜最佳提取条件：提取溶剂为无水甲醇,料液比为1∶28 g/mL,超声时间为30 min,超声温度为53 ℃。验证试验结果表明赤芝、紫芝子实体中总三萜得率的平均值分别为1.202 3%、0.923 7%,与预测值比较,其RSD值分别为1.13%,0.86%,表明优化所得的提取工艺真实可靠。结论 优化所得的赤芝、紫芝两个品种的最佳超声提取工艺真实、可靠,可为灵芝品种的后续研究奠定基础。     

赤芝子实体化学成分的研究

目的研究赤芝子实体的化学成分。方法应用多种色谱方法进行分离和纯化,并用NMR和MS等波谱方法解析其化学结构。结果从赤芝子实体的醋酸乙酯提取物中分离得到7个化合物,分别被鉴定为麦角甾-7,22-二烯-3β-醇十五酸酯(ergosta-7,22-dien-3β-yl pentadecanoate,)、麦角甾醇棕榈酸酯(ergosteryl palmitate,)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(ergosta-7,22-dien-3β-ol,)、麦角甾醇(ergosterol,)、灵芝酸C2(ganoderic acid C2,)、ganodermanontriol()及邻苯二甲酸二异丁酯[1,2-benzenedicarboxylic acid bis(1-methylpropyl)ester,]。结论化合物为新化合物,化合物为从本植物中首次分离得到。     

青钱柳中五环三萜成分的研究

从胡桃科植物青钱柳Cyclocaryapaliarus的叶中首次分出3个五环三萜成分经理化常数和光谱分析分别鉴定为2α－hydroxyursolicacid（Ⅰ），3－oxo－2α，23－dihydroxyolean－12－en－28－oicacid（Ⅱ），arjunolicacid（Ⅲ），其中Ⅱ为一新化合物，命名为青钱柳酸B（cyclocaricacidB）。     

HPLC法测定灵芝子实体和孢子粉中灵芝酸C2、灵芝酸G和灵芝酸A

目的 建立灵芝子实体和孢子粉中3种灵芝酸类成分的HPLC测定方法,为全面评价灵芝药材和孢子粉的质量提供依据。方法 采用HPLC方法测定,Diamonsil（钻石）C8色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相乙腈–0.03%磷酸（28∶72）,体积流量1.2 mL/min,检测波长250 nm;柱温35 ℃。结果 灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝酸A分别在0.40～10.06 μg（r=0.999 99）、0.40～10.00 μg（r=0.999 99）、0.40～10.00 μg（r=0.999 99）线性关系良好,平均回收率分别为101.04%、99.39%、101.22%,RSD值分别为1.64%、1.86%、2.20%（n=6）;灵芝子实体中3种灵芝酸的质量分数分别在0.06～0.29 mg/g、0.12～0.37 mg/g、0.19～0.41 mg/g,灵芝孢子粉供试品中3种灵芝酸的质量分数分别在0～0.01 mg/g、0、0～0.03 mg/g。结论 本方法简便,稳定,可用于灵芝三萜类成分C2、灵芝酸G、灵芝酸A的定量分析。     

糙海参中三萜皂苷活性成分的研究

目的:研究糙海参(Holothuria scabra Jaeger)的三萜皂苷类抗癌活性成分.方法:应用大孔树脂柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、正相硅胶柱层析、反相硅胶柱层析和HPLC进行三萜皂苷成分的分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定其结构.并对提取到的化合物进行了稻瘟霉和体外细胞毒(针对MKN-45人胃癌肿瘤细胞和HCT-116人肠癌肿瘤细胞)的活性检测.结果:分离鉴定了5个三萜皂苷化合物,分别为24-dehydroechinoside A (1),echinoside B(2),echinoside A(3),holothurin B(4)和holothurin A(5).化合物1～5对稻瘟霉的最小活性浓度分别为＜7.9、＜15.7l、＜7.9、＜15.7、＜7.9 μg/ml,对MKN-45人胃癌肿瘤细胞的IC50值分别为1.60、0.18、1.86、1.59、2.37 μmol/L,对HCT-116人肠癌肿瘤细胞的IC50值分别为1.46、3.31、1.98、1.60、0.24 μmol/L.结论:化合物1为首次以原生产物形式得到的单体天然产物,2～5为首次从糙海参中分离得到.5个化合物均显示显著的体外细胞毒活性.     

匙羹藤中三萜皂苷类成分及其药理活性

目前已从匙羹藤中分离鉴定出60余个化合物。大部分为三萜皂苷类。齐墩果烷型皂苷是其降血糖、抑制甜味反应、抗龋等作用的活性物质。对匙羹藤中所含有的三萜皂苷类成分的化学和药理研究情况做一综述，为进一步开发利用该植物资源提供参考。     

不同产地连钱草中三萜酸类及黄酮类成分的分析与评价

目的连钱草中化学成分分析及品质评价。方法运用HPLC-ELSD、固相萃取预处理等方法首次建立了连钱草中三萜酸类、黄酮类成分的分析测定方法。结果不同产地连钱草中熊果酸与齐墩果酸的含量分析结果表明:江苏盱眙产者含量高于安徽固始,其中熊果酸含量显著高于齐墩果酸,同产地野生品含量高于栽培品;不同产地、不同来源样品中黄酮类成分分析表明:黄酮含量差别较大,同产地野生品与栽培品含量无明显差异。结论以三萜酸及其主成分熊果酸、总黄酮及其主成分木犀草素和芹菜素多指标分析评价了不同产地、不同来源连钱草的品质,对保证其药材质量、指导其栽培生产,以及相关制剂产品的质量控制具有重要意义和应用价值。      

从雷公藤中分离出一种新成分——雷藤三萜酸A

从雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook f.)的根皮中分离出一种新的单体。该单体系由柱层析分离出的一种粗结晶,经用无水乙醇重结晶,得白色针状结晶,mp 304～308℃ (分解)。根据其化学反应、红外光谱、核磁共振氢谱以及高分辨质谱等数据,确定其分子量为472,分子式为C_(30)H_(48)O_4,并推定其化学结构为3β,15β     

点柄乳牛肝菌子实体中抗HIV-1活性成分

目的研究点柄乳牛肝菌的化学成分,并对分离鉴定的化合物进行抗HIV-1的活性研究。方法将野外采集的点柄乳牛肝菌子实体用溶剂提取,采用硅胶柱色谱进行分离,通过波谱技术(NMR,MS,IR等)对结构进行鉴定。结果分离鉴定了9个化合物,分别为:酒渣碱(Ⅰ)、5α,8α-过氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(Ⅱ)、麦角甾-5,7,22-三烯-3β-醇(Ⅲ)、麦角甾-5,7,22-三烯-3β-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ)、尿嘧啶(Ⅴ))、硫代乙酸酐(Ⅵ)、硬脂酸(Ⅶ)、3-吡啶甲酸(Ⅷ)和D-阿洛糖醇(Ⅸ)。结论化合物Ⅰ为首次从高等真菌中分离。经生物活性测试,该化合物具有抗HIV-1活性,对C8166细胞的毒性较小,CC50为87.86μg/mL,对HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体抑制的EC50为7.27μg/mL,治疗指数(TI值)为12.09。     

超声循环提取灵芝中三萜类化合物的研究

目的 研究超声循环技术在灵芝中三萜类化合物提取中的应用。方法 在常规提取方法的基础上，增加超声循环的处理步骤。结果 通过试验对比，超声循环提取所需各种溶剂用量减少，提取时间缩短，目的产物提取率提高了40%。与常规方法提取得到的目的产物之间存在着良好的相关性。结论 超声循环技术用于灵芝中三萜类化合物的提取具有良好的应用前景。     

灵芝液体发酵产漆酶最佳培养基和培养条件研究

目的研究灵芝液体发酵产漆酶的最佳培养基和培养条件。方法以灵芝S3号菌株为试验材料,以灵芝漆酶活性为衡量指标,通过正交试验分别对灵芝液体发酵培养基及培养条件进行优化筛选。结果筛出最佳培养基组成为葡萄糖30g/L、棉花0.2%、磷酸氢二铵0.66g/L、干酪素0.5%、聚山梨酯-800.15%;优化培养条件为初始pH5.5、装液量75mL、接种量12.5%、菌龄5×24h、培养时间9×24h。结论优化培养基及培养条件后,发酵液中灵芝漆酶活性显著提高。     

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞蛋白激酶A活性的影响

为观察灵芝多糖（ＧＬＢ７）体外对小鼠腹腔巨噬细胞（ＭΦ）蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）活性的影响,采用反相离子对高效液相色谱法测定ＭΦ中ＲＫＡ活力。结果表明ＧＬＢ７（４０ｍｇ／Ｌ）能引起小鼠腹腔ＭΦ中ＰＫＡ活性明显升高,１０ｍｉｎ达峰值,３０ｍｉｎ恢复到基础水平。提示灵芝多糖的免疫增强作用与其增强ＭΦ中ＰＫＡ活性有关。     

灵芝菌发酵培养基的优化及灵芝胞外多糖的分离纯化

用正交法研究了不同条件对灵芝菌生长影响,从中选出了灵芝 菌液体深层发酵的优化 培养基：葡萄糖 3.6%,蛋白胨 0.4%,pH 6.0,酵母膏 0.2%,KH2PO40.1%,MgSO 4· 7H2O 0.05%,Vit B1 0.005%,每升发酵液产干菌丝体 15.6 g,粗多糖 0.72 g。 经葡 聚糖凝胶层析对灵芝胞外多糖进行了分离纯化,共有 5 个组分,并用红外光谱、紫外光谱 ,气相色谱等手段进一步分析了灵芝胞外多糖的组成,结果表明灵芝胞外多糖系由甘露糖、 果糖、葡萄糖通过糖 β-D 糖苷键构成。     

RP—HPLC法测定不同部位灵芝中灵芝酸B含量

目的：测定灵芝中具有苦味的成分灵芝酸B在灵芝中不同部们的含量,方法：采用RP－HPLC法测定灵芝菌盖的表皮层,木栓层,菌柄,孢子粉,菌盖子实体等部位分中灵芝酸B的含量,结果：灵芝药材中灵芝酸B主要集中在灵芝的表皮部位,其它部位则较少,结论：为寻找灵过的有效成分分布规律提供了客观依据。     

灵芝复方诱导HL-60白血病细胞凋亡的研究

应用体外集落与液体培养、细胞形态学观察、ＤＮＡ片段凝胶电泳及ＤＮＡ片百分率测定等方法观察灵芝复方对人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ生长及ＨＬ－６０细胞增殖和凋亡的作用。发现灵芝复方在一定浓度范围内对人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ生长有促进作用，而对白血病系ＨＬ－６０细胞集落生长则表现了剂量依赖性抑制；细胞形态学经为芝复方对ＨＬ－６０细胞凋亡具有剂量和时间依赖性诱导作用。８和１６ｍｇ／ｍｌ灵芝复方作用４８ｈ，可使ＨＬ－６０细     

基于双向固体发酵技术的灵青菌质发酵动态变化研究

目的:确定灵芝菌固体发酵青木香的发酵终点,为灵青菌质的制备工艺提供实验依据。方法:运用双向固体发酵技术,青木香与灵芝菌共同发酵后,定期取样,测定基质转化率,并分别采用反相高效液相色谱法和紫外分光光度法测定发酵产物灵青菌质中马兜铃酸Ⅰ和总马兜铃酸的含量。结果:基质转化率、样品中马兜铃酸Ⅰ和总马兜铃酸的含量随发酵时间呈现动态变化:发酵至第28天灵青菌质的基质转化率小幅下降,第28~35天相对稳定,此后又大幅下降;HPLC法测定结果表明,0~28 d马兜铃酸Ⅰ含量基本无变化,28 d后含量开始明显下降;UV法测定结果表明,0~28 d总马兜铃酸的含量保持下降的趋势,28~35 d含量基本保持恒定,35 d后开始上升。结论:灵芝发酵青木香药材的发酵终点基本可判定为第28~35天。双向固体发酵技术可有效地应用于青木香的减毒。     

灵芝复方剂对K562白血病细胞增殖、分化的影响

用细胞培养、细胞形态学及联苯胺染色法观察中药灵芝复方对K562 白血病细胞的增殖抑制及分化诱导作用。结果显示:灵芝复方在一定浓度范围内对正常人骨髓CFUGM 生长有促进作用( P < 0 .05) ,而对白血病细胞系K562 细胞增殖表现出剂量和时间依赖性抑制( P < 0 .05) ;在诱导分化剂量下,灵芝复方可促进K562 细胞向红系分化。可见,灵芝复方有望成为一种抗白血病中药     

草栽与段木栽培的灵芝活性成分的分离与鉴定 I.多糖肽成分的提取、纯化及性质

目的　研究草栽和段木栽培灵芝的多糖性质和含量 ;考察以草代木栽培灵芝的可行性的研究。方法　提取、分离、逆相透析方法研究二者子实体多糖。应用气相色谱、凝胶渗透色谱法测定多糖的组成、摩尔比和相对分子质量。 IR,1 H- NMR和 1 3C- NMR等光谱确定多糖肽化合物结构。结果　草栽灵芝多糖肽 ( GL PG )和段木多糖肽( GL PW)的重均相对分子质量 ( Mw)分别为 5 .13× 10 5和 5 .85× 10 5;黏均相对分子质量 ( Mη)分别为 6 .2 1× 10 5和6 .96× 10 5,二者具有相同的相对分子质量分布及光谱数据。从光谱分析中看出各单糖间的苷键构型相似 ,均以β-苷键为主 ;糖肽部分均含有相同的 16种氨基酸 ,糖的组份为鼠李糖、木糖、果糖、半乳糖、葡萄糖等 ,GL PW还含有微量甘露糖。结论　草栽灵芝与段木灵芝多糖肽的主要理化特性相似 ,其提取率比段木灵芝约高 2 .8倍 ,为草栽灵芝的综合开发与药用提供了科学依据。     

光质对灵芝生长及抗氧化酶系统的影响

目的 以飞船搭载的灵芝Ganoderma lucidum菌株为材料,研究不同光质对灵芝生长形态及抗氧化酶活性的效应,找出适于灵芝生长的最佳光质,为光质选择提供理论依据。方法 栽培灵芝时进行不同光质处理,在灵芝不同生长发育时期观测其形态变化,并测定抗氧化酶体系中主要酶活性。结果 不同光质处理的弹孢前期灵芝菌盖厚度与菌盖表面环纹数与对照差异显著。不同光质处理对灵芝子实体产量和灵芝孢子粉产量均有影响。红色、蓝色光质处理提高了过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性。蓝色光质处理提高了可溶性蛋白量,并且使丙二醛（MDA）在生长末期保持相对较低水平,从而延缓了灵芝子实体衰老。绿色、黄色光质抑制了抗氧化酶活性,导致灵芝子实体可溶性蛋白量下降及MDA量上升,加速了灵芝子实体的衰老过程。结论 蓝色光质可以使灵芝子实体维持较高的抗氧化酶水平,促进可溶性蛋白合成,从而增强灵芝代谢,延缓灵芝衰老。