磁微粒化学发光法的肝纤四项检测限与功能灵敏度研究

目的 评价磁微粒化学发光法检测肝纤维化血清学标志物(透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原N端肽、Ⅳ型胶原)的空白限、检出限和功能灵敏度.方法 参照美国临床和实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)文件,利用空白样品及系列梯度稀释样品在AutoLumo A2000全自动化学发光测定系统上进行检测,确定该方法配套试剂的空白限、检出限及功能灵敏度.结果 透明质酸的空白限为7.59ng/mL、检出限为16.17ng/mL、20％变异系数(coefficient of variation,CV)功能灵敏度为18.72ng/mL;层粘连蛋白的空白限为1.38ng/mL、检出限为3.53ng/mL、20％ CV功能灵敏度为4.16ng/mL;Ⅲ型前胶原N端肽的空白限为0.89ng/mL、检出限为2.40ng/mL、20％ CV功能灵敏度为2.48ng/mL;Ⅳ型胶原的空白限为2.42ng/mL、检出限为6.49ng/mL、20％ CV功能灵敏度为9.21ng/mL.结论 全自动化学发光测定肝纤四项的空白限、检出限和功能灵敏度的建立为临床诊断和治疗提供了更有价值的信息.     

血清总胆汁酸及其肝纤维化五项指标检测在慢性肝病诊断中的价值

目的 :探讨血清总胆汁酸 (TBA)、Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )、Ⅳ型胶原 (Ⅳ -C)、透明质酸 (HA)、甘胆酸 (CG)及层粘连蛋白 (LN)联检在慢性肝病诊断中的价值。方法 :1 1 8例乙型肝炎患者和 31例健康对照组采用放射免疫分析法 (RIA)测定PCⅢ、Ⅳ -C、HA、CG及LN和全自动酶法测定血清TBA。结果 :肝纤维化组血清TBA及肝纤维化五项指标水平较正常组明显升高 (p <0 0 1 ) ,而各组间随肝病组织炎症程度增加 ,检测指标水平也相应增高。结论 :血清TBA与肝纤维化五项指标的联检对肝纤维化的诊断、治疗及预后判断有重要意义。     

骨碱性磷酸酶(BAP)酶联免疫吸附分析方法的建立及初步应用

目的 建立骨碱性磷酸酶（BAP）酶联免疫吸附分析方法（ELISA）.方法 使用两株抗体,一株包被微孔板,另外一株用HRP标记.显色系统使用TMB显色.结果 测定范围在5～ 120ng/mL,最低检测限在1.5ng/mL,回收率在96.4％～ 102％之间,批内和批间变异分别为5.6％和7.9％,正常参考值为＜10ng/mL,用502份临床样本考核本试剂盒,与参比试剂盒有很好的临床符合性,与参比试剂盒具有同等的临床使用价值.     

肝活素酶联免疫吸附分析方法的建立及应用

目的 建立肝活素(Hepassocin)酶联免疫吸附分析方法(ELISA).方法 使用两株抗体,一株包被微孔板,另外一株用HRP标记.显色系统使用TMB显色.结果 测定范围在20 ～ 1000ng/mL,最低检测限在10ng/mL,回收率在93.9％～ 103.1％之间,批内和批间变异为9.7％和7.8％,正常参考值为＜20ng/mL.结论 用1000份临床样本考核本试剂盒,与参比试剂盒有很好的临床符合性,与参比试剂盒具有同等的临床使用价值.     

血清HA、CG、C-Ⅳ联检对肝硬化的诊断价值

目的：探讨血清中透明质酸（HA）、甘胆酸（CG）和Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）定量检测用于早期肝硬化诊断标志的价值。方法：采用放射免疫分析和固相酶联免疫法检测46例急性肝炎患者、45例慢性肝炎患者、74例肝硬化患者及58例健康人血清中HA、CG、C-Ⅳ的含量。均数比较采用t检验。结果：肝硬化组血清中HA、CG和C-Ⅳ的含量均显著高于急性肝炎组、慢性肝炎组和对照组（P〈0．05）,且血清中HA、CG和C-Ⅳ的平均水平与肝硬化严重程度呈正相关。结论：患者血清中HA、CG和C-Ⅳ含量的进行性升高可以作为早期诊断肝硬化的有用指标。     

肝病甘胆酸RIA

关于甘胆酸测定的临床意义,国内外已有报告。临床应用以来观察肝病患者胆汁酸升高比转氨酶、胆红素更特异、灵敏,而且完全、简便。因而甘胆酸放射免疫分析为肝胆疾病的诊断开辟了新的途径。我院从1991年4月～1992年6月测定了185例肝胆疾病患者血清甘胆酸,现叙述如下。材料和方法一、正常人:选自普查人群中肝功能检查均正常者及献血员,共120例,患者选自1991年4月～1992年6月住院的肝、胆疾病患者。二、血清甘胆酸正常值:我院研制的甘胆酸放免试剂盒,其正常值的上限量为300μg/dl,>300μg/dl为异常。     

一种国产乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂不同检测平台上的验证情况分析

目的 将圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)在不同荧光定量PCR系统进行性能验证,以给出该试剂盒在不同检测平台上的性能评价.方法 依据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)颁布的EP系列文件和《医学实验室质量和能力认可准则》相关文件,应用Roche LightCycler(R)480 Ⅱ实时荧光定量PCR系统及美国ABI 7500型实时荧光定量PCR系统对圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行临床样本精密度、正确度、可报告范围和检测下限的性能验证实验.结果 LightCycler(R)480 Ⅱ实时荧光定量PCR系统:2×106 IU/mL浓度水平批内精密度为1.38％,批间精密度为0.25％;2×104IU/mL浓度水平批内精密度为0.35％,批间精密度为0.79％.正确度验证可溯源标准品,偏倚均小于7.5％,符合厂家说明及文件要求.HBV DNA定量结果在2.1×102IU/mL至2.1×107IU/mL浓度水平范围内线性关系良好(R2=0.9994),临床可报告范围为2.1×102IU/mL～2.1×108IU/mL.该系统检测下限为148 IU/mL.ABI 7500型实时荧光定量PCR系统:2×106IU/mL浓度水平批内精密度为0.70％,批间精密度为1.34％.2.5×104IU/mL浓度水平批内精密度为1.18％,批间精密度为3.01％.正确度验证可溯源标准品,偏倚均小于7.5％,符合厂家说明及文件要求.HBV DNA定量结果在2×102IU/mL至2×10sIU/mL浓度水平范围内线性关系良好(R2 =0.9991),临床可报告范围为2×102IU/mL ～2×109IU/mL.该系统检测下限为203 IU/mL.结论 圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)在Roche LightCycler(R)480 Ⅱ实时荧光定量PCR系统及美国ABI 7500型实时荧光定量PCR系统上的性能验证结果均符合试剂说明书性能范围,检测结果无明显差异,均可准确快捷的对HBV DNA定量检测,为后续超敏定量工作奠定基础.     

三氯乙烯药疹样皮炎患者肝功能与肝纤维化指标变化

目的 :探讨三氯乙烯药疹样皮炎患者肝功能损害和肝纤维化标志物的变化。方法 :选择 30名三氯乙烯药疹样皮炎患者及 30名健康者作为对照组 ,采用放射免疫分析 (RIA)检测血清透明质酸 (HA)、层粘连蛋白 (LN)、Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )、Ⅳ型胶原 (Ⅳ .C)及甘胆酸 (CG)水平 ;化学法显色测定血清单胺氧化酶 (MAO) ;全自动生化仪测定转氨酶 (ALT)、转酞酶 (GGT)、总蛋白 (TP)、白蛋白 (Alb)胆汁酸 (TBA)等肝功能变化指标 ;分析各项指标的相关性。结果 :三氯乙烯药疹样皮炎患者各项肝功能指标变化明显 ;肝纤维化指标MAO、HA、PCⅢ、Ⅳ、CG水平明显增高 (P <0 0 1) ,与ALT、GGT、TP、Alb有良好的相关性。结论 :三氯乙烯药疹样皮炎患者早期肝脏损害严重并伴有肝脏纤维化现象。     

ELISA定量检测Ⅳ型胶原方法的建立

利用双抗体夹心法研制Ⅳ型胶原ELISA诊断试剂，检测血清中的Ⅳ型胶原。结果表明，标准曲线工作范围为16-1000ng／mL，灵敏度可达8ng／mL，批内及批间变异系数小于12％。本法灵敏、准确和特异性好。     

透明质酸、甘胆酸和前白蛋白联合测定诊断肝硬化的应用

为探讨透明质酸(HA)、甘胆酸(CG)和前白蛋白(PA)在肝实质损伤中的临床意义,采用放射免疫法和免疫比浊法测定了85例肝病患者和20名正常人血清HA、CG和PA浓度,并分析和比较三者联合测定在肝病的诊断、疗效及预后判断中的临床应用.现报道如下.     

糖类抗原CA72-4化学发光定量免疫分析方法的建立

目的 建立糖类抗原CA72-4化学发光定量免疫测定方法.方法 一株抗CA72-4单克隆抗体经微孔板固相包被与另一株酶标单克隆抗体建立双夹心反应体系,检测样品中CA72-4抗原的含量.通过与国外权威试剂盒血样测值的对比,分析该方法临床应用的可行性.结果 该分析方法线性范围为0～ 160 U/mL,灵敏度为0.55U/mL.批内CV值为:5.49％,4.53％;批间CV值为:8.12％,7.81％;回收率为:99.74％ ～ 104.11％;与CEA,CA125,CA19-9无交叉反应;与法国Cisbio analysis公司所生产的CA72-4免放药盒血清测值对比分析后,发现两者相关性较高,并确定了本分析方法的正常范围.结论 该分析方法的测定结果与参比试剂盒结果有较高符合率,可用于临床血清中CA72-4的检测.     

三种HBV荧光定量PCR检测试剂的比较及结果分析

目的 评估3种HBV DNA荧光定量PCR检测试剂的临床应用性能.方法 通过平行检测1001例临床血清样本及梯度稀释的阳性样本,从定量线性范围、准确性、灵敏度、特异性等方面,比较分析A试剂（磁珠分离法）、B试剂（免核酸提取的＂一步法＂）与目前国内临床广泛应用的优质试剂C的相关性和差异,并与免疫学结果进行比较.结果 767例均有数值的标本中,三种试剂均值差异无统计学意义.但在低病毒载量组中,结果相差较大,A试剂灵敏度最高,B试剂次之,C试剂排后.结论 采用了＂一步法＂免核酸提取的B试剂,核酸得率高,具有较宽的检测范围和定量准确性,操作极其简单,不失为一种上佳的选择.     

人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法的初步建立及应用

目的:建立人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法并在临床检测中的应用。方法:使用CY-FRA21-1定量测定试剂盒（化学发光法）检测308例临床血清标本,并与CYFRA21-1电化学发光全自动免疫分析方法进行对比。结果:灵敏度0.04μg/L,线性范围（1.5～100）μg/L,与NSE及CEA无交叉反应,样本中抗凝剂量的柠檬酸钠、肝素、EDTA-Na₂对测定结果没有影响。添加回收率和稀释回收率为90%～110%,分析内和分析间变异系数均<10.0%。该方法正常参考值为（0～3.4）μg/L（95%可信限）。ECLA测定结果与本法相比,临床总符合率为96.65%。结论:该方法灵敏度高、特异性好、稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性,完全可替代进口化学发光试剂用于临床样本的检测。     

游离甲状腺素化学发光免疫分析方法的建立

目的 采用二抗-甲状腺素抗体固相两步包被法,使用鲁米诺-双氧水-辣根过氧化物酶化学发光体系作为检测体系,建立测定血清中游离甲状腺素的化学发光免疫分析方法.方法 利用竞争法建立游离甲状腺素的检测体系,分别对该体系进行分析性能评估、2016年度内分泌室间质评,并与进口全自动发光试剂盒检测结果进行一致性检验.结果在4~64pmol/L的校准曲线范围内相关系数0.9995,最低检出限为0.54pmol/L,批内和批间精密度均小于7.0%,稳定性结果良好,不影响检测结果.2016年全国室间质评测定结果均在允许范围内,与进口西门子发光试剂盒有很好的临床符合性,两种试剂盒的样本测值差异不具有统计学意义.结论 本方法利用二抗-甲状腺素抗体固相两步包被法,在节约包被原料的同时改善了精密度且提高了灵敏度,最后通过临床血样的一致性评价,与参比试剂盒具有同等的临床使用价值.     

高通量酶免系统定量检测甲胎蛋白的临床应用评估

目的 对高通量酶免系统定量检测血清甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)进行临床应用评估.方法 收集肝癌、肝炎、肝硬化患者血清共184份,健康查体者血清200份.验证高通量酶免系统测定AFP的重复性和正确度,与电化学发光法(electrochemiluminescence immunoassay,ECLIA)结果进行比对,评价其临床应用价值.结果 高通量酶免系统测定4种浓度AFP的总变异系数(coefficient of variation,CV)分别为13.1％、13.7％、11.4％、10.3％,正确度能力比对试验(proficiency testing,PT)结果为100％,线性范围是(0.0 ～200.0)μg/L.高通量酶免系统和ECLIA检测结果呈直线相关(Y=1.14X+0.83,R2 =0.92),两方法检测标本的阳性率分别为67.39％和69.02％,差异无统计学意义(P =0.453).检测血清AFP诊断原发性肝癌的最佳临界值为195.7 μg/L.原发性肝癌与转移性肝癌患者的诊断界值为99.44μg/L,与肝炎肝硬化患者的诊断界值为379.15 μg/L.结论 高通量酶免系统测定血清AFP结果可靠、稳定,可用于筛查和诊断原发性肝癌.     

胰岛素定量标记免疫分析试剂盒行业标准的建立和验证

目的：建立胰岛素定量标记免疫分析试剂盒的行业标准,并进行试验验证。方法：选择不同方法的8种胰岛素定量标记免疫分析试剂盒,按照拟定行业标准规定,对外观、线性、最低检出限、准确性、精密度和稳定性等项目进行验证。结果：除某些试剂盒的个别指标不能满足要求外,大部分试剂盒均能满足拟定行标中的所有要求。结论：胰岛素定量标记免疫分析试剂盒行业标准制定合理、可操作性强。该标准的制定有助于统一胰岛素定量标记免疫分析试剂盒的质量标准,为其生产、检验、流通及临床应用及其他领域的监管提供依据。     

快速诊断用超敏C反应蛋白检测试剂盒的研制及性能评价

目的 研发一种配套床边快速散射比浊仪使用的全血检测超敏C反应蛋白试剂盒.方法 根据乳胶增强散射比浊法的原理,用溯源至NIBSC标准品的工作校准品制定射频卡,含有表面活性剂的试剂1及含有致敏胶乳的试剂2与样品反应后,根据射频卡的标准曲线换算浓度.结果 本试剂盒线性范围0.05 ～ 30mg/L,灵敏度为0.05 mg/L,批内CV值分别为0.85％和0.42％,日间CV值分别为1.85％和1.65％,对血红蛋白、胆红素、甘油三酯有较强的抗干扰能力.结论 本试剂盒与商品化试剂配套生化仪检测系统比对,结果相关性较好,符合临床快速诊断的要求.     

Multicenter evaluation of five commercial rubella virus immunoglobulin G kits which report in international units per milliliter.

In a multicenter study, the consistency of international units expressed by five commercially available rubella virus immunoglobulin G kits was evaluated. The linearity and within-run and between-run precision were determined for each kit. All kits demonstrated good linearity and had within-run and between-run precision coefficients of variation ranging from 5.1 to 21.7% and from 9.5 to 51.0%, respectively. To compare the international units expressed, the results from 40 samples tested in duplicate were compared with the results of a reference enzyme immunoassay calibrated with World Health Organization international standard serum and a hemagglutination inhibition test. The results of the kits were plotted against those of the reference tests, and linear regression analysis was applied. The Pearson correlation coefficient ranged from 0.64 to 0.75 when the commercial kit results were compared with those of the reference enzyme immunoassay, indicating only a moderate degree of correlation. Therefore, the international units expressed by the commercial kits are insufficiently consistent to be of practical use in diagnostic clinical microbiology.     

Comparison of two commercial microimmunofluorescence kits and an enzyme immunoassay kit for detection of serum immunoglobulin G antibodies to Chlamydia pneumoniae

We compared the MRL and the Labsystems Chlamydia pneumoniae microimmunofluorescence (MIF) immunoglobulin G (IgG) kits and the Labsystems enzyme immunoassay (EIA) kit in a blinded study of 83 serum samples in which we evaluated titers, cross-reactivity to other species, and reproducibility. There was no statistically significant difference between the MRL and the Labsystems MIF kits in the endpoint titers of IgG antibody to C. pneumoniae. The correlation between the results obtained with these two MIF kits was excellent (r = 0.95; P = 0.001). The cross-reactivity of the C. pneumoniae-positive sera with C. trachomatis- and C. psittaci-positive sera was assessed for each MIF kit. For C. pneumoniae-positive sera with titers of > or =32, the Labsystems MIF kit exhibited more cross-reactivity to C. psittaci than the MRL kit did. The values obtained with the Labsystems EIA kit represented single dilutions of serum specimens expressed as enzymeimmuno units on a continuous scale. The results obtained with the Labsystems EIA kit correlated moderately well with those obtained with each MIF kit when they were compared for their abilities to detect IgG antibodies to C. pneumoniae (for the MRL MIF kit, r = 0.79 [P = 0.001]; for the Labsystems MIF kit, r = 0.78 [P = 0.001]). The results obtained with the commercial MRL and Labsystems MIF kits and the Labsystems EIA kit tested were reproducible; and the kits were standardized, had quality control reagents, and are suitable for detection of C. pneumoniae antibodies in serum and for use in interlaboratory studies. Validation of the use of these kits for clinical diagnosis still needs further evaluation.