促红细胞生成素在成骨细胞分化中的实验研究

目的 研究促红细胞生成素(EPO)对成骨细胞分化和功能的影响以及EPO-EPO受体(EPOR)信号在成骨细胞中的作用,探讨EPO在骨稳态中的作用及其机制.方法 体外培养小鼠骨髓基质细胞系(ST2),加入EPO蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链式反应方法检测成骨分化相关基因的变化,采用碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色方法观察成骨细胞骨形成功能.采用RNA干扰技术沉默EPOR基因,检测阻断EPO-EPOR信号通路后成骨细胞分化和功能的变化.结果 骨髓基质细胞表达EPOR,EPO与受体EPOR结合后,可诱导其向成骨细胞分化,增加Runx2、Alp和Coll等成骨细胞相关基因的表达,同时增加ALP蛋白的表达和钙结节的沉积.EPOR基因沉默后,成骨相关基因的表达受到抑制.结论 EPO通过EPOR信号促进成骨细胞的分化和功能.     

促红细胞生成素促进骨髓基质细胞成骨分化的实验研究

目的:研究促红细胞生成素(EPO)通过ephrinB2/EphB4信号通路在细胞成骨分化中的作用。探讨EPO在骨稳态中的作用及其机制。方法:体外培养小鼠骨髓基质细胞系(ST2),加入EPO后,采用real-time PCR方法检测EphB4的表达以及成骨细胞相关基因的表达,采用ALP活性检测和茜素红染色观察EPO对成骨细胞功能的影响;在体外培养的ST2细胞中加入ephrinB2-Fc蛋白,模拟破骨细胞-成骨细胞共培养,使ephrinB-EphB4正向信号激活,采用上述方法检测其对成骨细胞的影响;进一步采用RNAi技术,使EphB4基因沉默,检测EPO对成骨细胞的影响。结果:EPO能增加ST2细胞RUNX2、ALP和Col1等成骨细胞相关基因的表达,同时伴随ST2细胞表面EphB4的表达升高,ALP活性和钙结节也增加;在模拟破骨细胞-成骨细胞共培养体系中,EPO也能促进ST2细胞的成骨向分化和功能;EphB4基因沉默后,EPO对ST2细胞的作用被减弱。结论:EPO能促进成骨细胞的分化和功能,该作用是通过ephrinB2/EphB4信号介导的。     

白介素-23对破骨细胞分化及功能直接调节作用的实验研究

目的检测白介素-23（IL-23）是否对破骨细胞分化及功能有直接调节作用。方法在体外培养小鼠破骨细胞的过程中加入不同浓度的IL-23,观察破骨细胞形成数量及吸收陷窝的变化以及组织蛋白酶-K mRNA的表达变化。同时,以RAW264.7诱导破骨细胞,采用RT-PCR及FACS方法检测IL-23刺激下,RANK mRNA及蛋白的表达变化情况。结果 IL-23作用下,小鼠破骨细胞数量增加,形成的吸收陷窝增多,组织蛋白酶-K mRNA的表达增强。同时在IL-23刺激下,破骨前体细胞表面RANK mRNA及蛋白的表达增强。结论 IL-23可以通过调高破骨前体细胞表面RANK的表达,直接促进小鼠破骨细胞分化。     

Notch信号促进核因子κB受体活化因子配体诱导的破骨细胞分化的体外研究

目的 探讨Notch信号抑制对核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导的小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响。方法 建立RANKL诱导的小鼠RAW264.7细胞体外分化模型,实时定量聚合酶链反应（real-time PCR）检测Notch信号成分（Notch1、Notch2、Delta1、Jagged1）、下游靶基因Hes1以及破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）和Cathepsin K在诱导前后mRNA的表达。在诱导体系中加入不同浓度的γ分泌酶抑制剂（GSI）,抑制Notch受体的表达,TRAP染色检测破骨细胞分化的变化情况。结果 50 ng•mL-1 RANKL诱导小鼠RAW264.7细胞3 d,Notch1、Notch2、Delta1、Jagged1及Hes1的mRNA表达均有不同程度的提高,其中以Notch2、Jagged1增高最明显;破骨细胞标志基因表达显著增高。在RANKL诱导的同时加入不同浓度GSI,抑制Notch的表达,可致Notch下游靶基因Hes1表达下降,同时TRAP阳性细胞计数显著减少,且呈剂量依赖性。结论 Notch信号可促进RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化。     

破骨细胞过氧化物酶体增殖因子活化受体gamma敲除对腭中缝扩张后骨新生和骨重建的影响

目的 探讨破骨细胞过氧化物酶体增殖因子活化受体gamma(PPAR-g)敲除对腭中缝扩张(MSE)后骨新生和骨重建的影响.方法 将雄性对照野生型小鼠(WT)和破骨细胞PPAR-g敲除小鼠(KO)分为如下4组,WT+假手术,WT+ MSE,KO+假手术,KO+ MSE.术后14天处死,采用HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、以及实时荧光定量PCR方法研究破骨细胞PPAR-g敲除对腭中缝扩张后骨新生和骨重建的影响.结果 KO+MSE组新骨形成面积较WT+ MSE组增加,细胞总数增多,但是破骨细胞计数较WT+ MSE组减少,破骨细胞分化相关基因(cFos,Calcr,Car2,Ctsk,和Mmp9)的表达显著下降.结论 破骨细胞PPAR-g敲除可以促进腭中缝扩张(MSE)后骨新生和骨重建.在腭中缝扩张后的骨重建过程中,PPAR-g是调控破骨细胞分化和骨新生的一个重要分子.     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对破骨细胞EphA2基因表达的调控

目的:研究小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7在破骨分化过程中,Pg-LPS对破骨细胞EphA2表达的影响。方法:用终浓度10 mg/L的Pg-LPS 刺激RAW264.7 细胞后,分别在1、3、5 d,应用RT-PCR检测破骨细胞中EphA2基因和破骨细胞相关基因(破骨细胞内基质金属蛋白酶( MMP9)、ACP5、c-fos、组织蛋白酶K(CtsK)、NFATc1)的表达,并且通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察实验组和对照组破骨细胞的分化成熟情况。结果:RT-PCR检测10 mg/L的Pg-LPS在第3天和5天,实验组比对照组EphA2基因表达分别增高2.4倍和1.2倍,两组之间存在显著差异(P<0.01);同时也能够促进破骨相关基因c-fos、NFATc1、CtsK、ACP5、MMP9的表达,实验组与对照组相比差异有显著性;TRAP染色结果显示:实验组比对照组的TRAP阳性多核细胞数目明显增多。结论:10 mg/L的Pg-LPS对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,在破骨分化的中期和晚期均能够促进EphA2基因的表达,但是在破骨分化早期对EphA2基因的表达无明显作用。     

铜掺入型钛合金对破骨细胞分化影响的体外研究

目的:研究铜掺入型钛合金对破骨细胞分化的影响。方法:通过激光熔化技术制备掺铜的钛合金。使用RANKL诱导小鼠单核细胞分化,制备破骨细胞。将掺铜的钛合金与破骨细胞共培养,通过观察细胞形态、记录破骨细胞数目以及破骨相关基因的表达,分析掺铜的钛合金对破骨细胞分化相关基因表达的影响。结果:小鼠单核细胞与RANKL共培养后可分化成破骨细胞。掺铜的钛合金能够抑制单核细胞向破骨细胞分化,同时还能降低破骨分化相关基因CTSK、TRAP、NFATc1和NF-κB的表达。结论:掺铜的钛合金可抑制破骨细胞的活性,有望应用于骨再生手术中个性化钛网的制备。     

CXC-型趋化因子4对单核巨噬细胞破骨向分化影响的实验研究

目的:研究CXC-型趋化因子4(CXCL4)对体外核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导小鼠骨髓来源单核巨噬细胞(BMDM)向破骨细胞分化的影响。方法:无菌分离小鼠BMDM,使用50 ng/mL M-CSF以及不同浓度的CXCL4刺激细胞,CCK-8实验检测细胞增殖活性,Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力。在M-CSF及RANKL均存在的前提下,以不同浓度的CXCL4作为干预因素,体外诱导细胞分化为破骨细胞,另设组加入BX471阻断剂处理细胞。TRAP染色法观察破骨细胞的形态并统计破骨细胞数目,RT-PCR检测JDP-2、NFATc1、c-Fos、MMP-9、TRAP、CTSK mRNA的表达情况。结果:不同浓度梯度的CXCL4均可增强BMDM的增殖活性及迁移能力;在RANKL及MCSF均存在的前提下,加入不同浓度CXCL4的各实验组的TRAP染色阳性的细胞数量明显多于对照组(P<0.05),而在BX471阻断剂预处理组中TRAP染色阳性的细胞数量低于各实验组,但高于对照组(P<0.05)。此外,CXCL4能够上调破骨相关基因的表达,而BX471则能部分抑制上述mRNA表达的增高(P<0.05)。结论:CXCL4能提高BMDM的增殖及迁移能力,并促进RANKL介导的BMDM向破骨细胞分化,其促进作用可能与CXCL4/CCR1通路有关。     

牙齿萌出过程中 RANKL mRNA 的表达与破骨细胞的关系

目的:探讨核因子κB受体活化剂配体 RANKL 在大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方组织中 mRNA 的表达及破骨细胞的分化情况.方法:运用原位杂交法检测大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方组织中 RANKL mRNA 的表达;TRAP 染色观察破骨细胞分化情况.结果:出生1、3、5、7 d大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方牙囊成纤维细胞、成釉细胞 RANKL mRNA的阳性表达强于对照组牙龈成纤维细胞(p<0.01).大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方出生后1 d破骨细胞多为单核,3 d时多核破骨细胞增多.结论:RANKL mRNA 在大鼠出生后1、3、5、7 d下颌第一磨牙牙囊成纤维细胞、成釉细胞中有表达,可能通过促进破骨细胞的分化及成熟参与牙齿的萌出.     

牙周炎患者自身组织核酸刺激小鼠巨噬细胞后对破骨相关因子mRNA表达的影响

目的 检测牙周炎患者自身组织核酸刺激巨噬细胞后破骨相关因子白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-12（IL-12）p35、IL-12p40、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、活化T细胞核因子 1（NFATc1）、核激活因子κB受体（RANK）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的表达,观察牙周炎患者自身组织核酸对巨噬细胞向破骨细胞分化的影响作用。方法 采集翻瓣术中慢性牙周炎患者炎症牙周组织及正畸患者健康牙拔除术获取的健康牙周组织,提取组织总RNA逆转录cDNA。培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,加入质量浓度1 μg•mL-1的特定序列寡核苷酸MT01共孵育3 h后（以1 μg•mL-1的PBS作为对照）,加入已提取的炎症牙周组织及健康牙周组织cDNA（质量浓度为1 μg•mL-1）。实验分4组：健康组织cDNA,炎症组织cDNA,MT01+健康组织cDNA,MT01+炎症组织cDNA。4组细胞分别孵育3、6、12、24 h,采用实时定量聚合酶链反应法检测破骨相关因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-α mRNA的表达,进行两两组间比较。结果 牙周炎患者自身组织核酸可上调RAW264.7破骨相关因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-α mRNA的表达;在免疫抑制剂MT01的作用下,牙周炎患者自身组织核酸上调RAW264.7内破骨相关因子mRNA的表达状况受到抑制。结论 牙周炎患者自身组织核酸可以影响小鼠巨噬细胞向破骨细胞的分化。     

中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞RANKL／OPG表达的影响

目的：探讨中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法：将系列浓度的中间普氏菌培养上清作用于牙龈成纤维细胞,显微镜下观察细胞的变化。实时定量 RT-PCR法和 Western blot法分别检测 RANKL、OPG mRNA及蛋白水平的表达,并计算 RANKL/OPG的比值。结果：牙龈成纤维细胞的数量随中间普氏菌培养上清浓度的增加而减少,50μg/mL 时,显微镜下没有活细胞存在。在mRNA水平上和蛋白水平上,RANKL/OPG的比值在12．5μg/mL处理组均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论：中间普氏菌培养上清可诱导人牙龈成纤维细胞表达 RANKL 和 OPG,破坏 RANKL/OPG比例的平衡,影响破骨细胞分化的细胞因子微环境,在破骨细胞分化和牙周炎骨吸收中起着一定的调节作用。     

MEPE基因沉默对人牙髓细胞增殖与成牙本质分化的作用研究

目的：研究细胞外基质磷酸化糖蛋白（Matrix Extracellular Phosphoglycoprotein,MEPE）基因沉默对人牙髓细胞（Human Dental Pulp Cells,hDPCs）增殖和成牙本质分化能力的影响,探讨其在牙髓损伤修复中的功能.方法：酶消化组织块法分离培养hDPCs,以lipo2000介导siRNA-hMEPE转染hDPCs,以阴性对照组和未转染组设为对照,l、3、5、7d后,CCK-8法检测细胞增殖情况;转染hDPCs后以矿化诱导液培养5、7、10d后,实时荧光定量RT-PCR检测骨涎蛋白（bone sialoprotein,BSP）、牙本质涎磷蛋白（Dentin Sialophos-phoprotein,DSPP）、骨钙蛋白（osteocalcin,OCN）、Collagen I mRNA表达水平.结果：CCK-8结果显示Si-h-MEPE转染hDPCsld后OD值下降,3d时到达最低值,且均低于未转染组与阴性对照组,3d时差异有统计学差异（P＜0.05）,未转染组与阴性对照组中,OD值持续升高,7d时到达峰值,与各自组内其他时间点比较有统计学差异（P＜0.05）;ALP活性检测结果显示,Si-h-MEPE转染hDPCs3d细胞OD值最低,且明显低于未转染组与阴性对照组（P＜0.05）,未转染组与阴性对照组hDPCsOD值呈现逐渐升高趋势,在7d时达到最大值（P＜0.05）.Si-h-MEPE转染hDPCs3d时BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ mRNA的表达量均较未转染组与阴性对照组下调（P＜0.05）.在未转染组中,BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ mRNA水平持续升高,在7d时达最高值,与3d比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：MEPE基因瞬时沉默抑制hDPCs增殖、使BSP、DSPP、OCN、Collagen Ⅰ基因表达下调,ALP活性降低,与未转染组与阴性对照组比较结果提示MEPE可能通过调控hDPCs的增殖和成牙本质分化能力,在牙髓损伤修复中发挥重要作用.     

口腔鳞癌与正常黏膜中T细胞分化蛋白mRNA的表达

目的：研究T细胞分化蛋白（T-cell differentiation protein,MAL）mRNA在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cellcarcinoma,OSCC）及配对正常口腔黏膜组织中的表达及意义。方法：采用RT-PCR方法检测30例OSCC患者肿瘤组织及其配对的正常口腔黏膜中MAL mRNA的表达,所得数据采用SAS6.12软件包进行χ2检验和t检验。结果：RT-PCR检测表明,MAL mRNA在30例OSCC和配对正常黏膜的阳性率分别为36.7%（11/30）和86.7%（26/30）（P〈0.001）;总表达水平分别为1.20±0.18和2.96±0.36,OSCC中表达水平较正常黏膜中表达下调2.47倍（P〈0.001）;MALmRNA在OSCC中表达下调与患者的性别、肿瘤的临床分期、有无颈淋巴结转移等临床参数无关,但与病理分化程度显著相关。结论：在OSCC的癌变过程中,MAL mRNA表达下调,表明MAL基因可能是OSCC的一个靶基因;MAL在OSCC诊断中具有潜在的应用价值。     

牙周膜相关蛋白1在人牙周膜细胞成骨分化过程中的表达

目的 研究牙周膜相关蛋白1（PLAP-1）在人牙周膜细胞（PDLC）成骨分化过程中的表达变化,为明确PLAP-1 在牙周组织中的作用奠定基础.方法 酶消化法培养人PDLC,免疫细胞化学染色鉴定其来源和PLAP-1 的表达,茜素红染色和碱性磷酸酶（ALP）实验鉴定其成骨分化能力,定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其成骨分化过程中,PLAP-1、Periostin、RGD-CAP、RUNX2、OCN 和OPN mRNA 表达变化,Western blot 检测PLAP-1、RUNX2 和OCN 蛋白表达变化并进行统计分析.结果 培养的人PDLC 来源于间充质;人PDLC 矿化诱导21 d 后茜素红染色阳性,矿化诱导后7、14、21 d 时ALP 活性较对照组明显增高（P ＜ 0.05）,具有成骨分化能力;PLAP-1 免疫细胞化学染色阳性;定量RT-PCR 和Western blot 结果显示,人PDLC 在mRNA 和蛋白水平均表达PLAP-1,且mRNA 表达量随人PDLC 成骨分化过程发生变化,诱导14 d上调,诱导21 d 下调,较对照组有明显差异（P ＜ 0.05）,Western blot 检测蛋白表达显示类似的表达趋势.结论 PLAP-1 在基因及蛋白水平均高表达于人PDLC,其表达量随人PDLC 成骨分化成一定模式,提示其参与调控牙周膜的功能与稳定,但其精细的调控功能还有待进一步深入研究.     

模拟失重后再超重对猴咬肌细胞SERCA mRNA表达的影响

目的：探讨模拟失重后再超重环境对猴咬肌细胞SERCA1a、SERCA2a mRNA表达的影响。方法：健康雄性猕猴23只,随机分为正常对照组（A组）和实验组：模拟失重（B组）,模拟超重（C组）,失重后再超重分别为＋11Gx/270s（D1组）、＋13Gx/230s（D2组）、＋15Gx/200s（D3组）和＋13Gx/230s恢复第10d（D4组）。实验期间,各组喂养条件相同,在实验结束后动物恢复第2d（A、B、C、D1、D2、D3组）和恢复第10d（D4组）处死取材,组织置于液氮中保存。采用常规方法制作冰冻切片,通过HE染色观察猴咬肌细胞组织形态学变化;使用RT-PCR方法检测猴咬肌细胞SERCA1a、SERCA2a mRNA的表达。结果：组织病理学观察可见,对照组猴咬肌细胞结构正常;实验组咬肌细胞胞膜边界模糊不清,间质增宽;模拟失重后再超重组肌细胞肿胀,偶见细胞核呈扁平状,移位胞浆中央。采用RT-PCR检测发现,各实验组与对照组相比,猴咬肌细胞SERCA1a mRNA表达均增强,SERCA2a mRNA除D4组外,其他实验组表达增强,其差异有统计学意义（P〈0.05）;D2、D3组与B组相比,SERCA1a mRNA表达升高,差异显著（P〈0.01）;D2、D3组与C组比较,SERCA1a mRNA表达增强,有显著差异（P〈0.01）;D4组与D2组比较,SERCA1a、SERCA2a mRNA表达均下降,有统计学意义（P〈0.05）。结论：模拟失重、模拟超重和模拟失重后再超重环境均可造成猴咬肌细胞组织形态学不同程度地改变,并可引起SERCA1a、SERCA2a mRNA表达增强,其中模拟失重后再超重恢复第10d咬肌细胞组织形态学趋于正常结构,SERCA1a、SERCA2a mRNA表达呈恢复下降趋势。     

17β-雌二醇对人根尖牙乳头干细胞RANKL、OPG表达影响的研究

目的:探讨17β-雌二醇对人根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs)核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法:通过酶消化法分离培养SCAPs,将SCAPs分别于对照组(普通培养基+10μmol/L无水乙醇)和含0.1μmol/L17β-雌二醇的培养基培养3d和7d后,实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法分别检测RANKL、OPG mRNA和蛋白表达。结果:17β-雌二醇刺激3d和7d组,OPGmRNA和蛋白表达均较对照组升高(P<0.01),RANKL mRNA和蛋白表达均较对照组降低(P<0.01)。结论:17β-雌二醇可能通过调节RANKL/OPG系统,参与调节SCAPs成牙/骨及破牙/骨活性。     

过表达RECK基因对成釉细胞瘤hTERT＋_AM永生化细胞株MMPs表达及侵袭能力的影响

目的：观察转染RECK基因对人成釉细胞瘤（ameloblastoma,AM）细胞株hTERT-AM的MMPs表达及细胞侵袭力的影响。方法：利用RECK基因慢病毒载体Lenti—RECK—eGFP／puro转染hTERTAM细胞株．Puro筛选和镜下挑单克隆纯化细胞。CCK8检测细胞活性,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,qRT—PCR检测细胞中RECK的mRNA的表达情况。Western蛋白印迹检测细胞中RECK、MMP2、MMP9的表达情况。采用SPSS13．0软件包对数据进行统计学分析。结果：转染RECK基因后,hTERT~AM细胞中RECK的mRNA和蛋白的表达均显著增高（P均〈0．01）,细胞活性无显著变化（P均〉0．05）,细胞迁移、侵袭能力均显著下降（P均〈0．01）,MMP2、MMP9蛋白表达均显著下降（P均〈0．05）。结论：RECK基因参与人成釉细胞瘤局部侵袭的调节,过表达RECK基因后,MMP2、MMP9下调,抑制AM细胞迁移和侵袭。RECK有望成为人成釉细胞瘤侵袭防治的新靶点。     

高纯度破骨样细胞体外培养及功能表达的研究

目的建立大量高纯度破骨样细胞体外培养的方法,并运用分子生物学技术观察体外诱导培养的破骨样细胞标志酶的基因表达。方法按照巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF） 30 ng/mL、核因子κB受体活化因子配基（RANKL） 50 ng/mL的质量浓度对骨髓单个核细胞诱导培养6 d,利用形态学观察、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、Giemsa染色、骨吸收陷窝检测以及破骨细胞标志酶基因表达的检测,对生成的破骨样细胞进行鉴定。结果实验获得的破骨样细胞中,TRAP阳性的单核破骨样细胞多见、TRAP阳性的多核破骨样细胞数量相对较少,胞核从2个到十几个不等;光镜下牙本质片上可见各种形态的骨吸收陷窝;应用RT-PCR方法证实破骨样细胞表达膜型基质金属酶（MT1-MMP）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、TRAP和组织蛋白酶K（CK）4种标志酶。结论以M-CSF和RANKL作为诱导因子,对大鼠骨髓单个核细胞进行诱导培养可以获得具有典型的破骨细胞形态特征,可以表达特征性标志酶基因,且数量大、纯度高。     

糖基化终产物及其受体对牙周膜成纤维细胞凋亡影响的实验研究

目的观察糖基化终产物(advanced glycation end products,AGE)促进糖基化终产物受体(receptor foradvanced glycation end products,RAGE)在大鼠牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLF)中的表达情况,并研究RAGE在大鼠PDLF凋亡中的作用。方法第3代大鼠PDLF在含有终浓度为200 mg/L的糖基化牛血清白蛋白(advanced glycation end products-bovine serum albumin,AGE-BSA)培养基内培养,根据孵育时间分为实验组A1、A2、A3、A4组;相同条件下PDLF于终浓度200 mg/L的BSA孵育,按与A1～A4组相同的孵育时间分为实验组B1、B2、B3、B4;在无AGE-BSA、BSA的培养基内培养第3代PDLF设为对照组C组。检测各组细胞活性、细胞凋亡情况、RAGE及细胞凋亡蛋白酶3 mRNA表达情况。结果 AGE干预的大鼠PDLF在细胞形态学及细胞活性检测方面均发生改变。相同时间点A、B各组细胞活性组间比较差异具有统计学意义(P<0.01),A1、A2、A3、A4 4组细胞活性的组间差异无统计学意义(F=2.353,P=0.088),B1、B2、B3、B4 4组的组间差异亦无统计学意义(F=0.468,P=0.706)。经流式细胞术检测,实验组A1、A2、A3、A4组细胞凋亡比例依次明显增高,与C组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。受AGE干预的细胞可以表达RAGE且细胞凋亡蛋白酶3表达阳性。结论 AGE可以刺激大鼠PDLF表达RAGE,促进细胞凋亡。     

口腔扁平苔藓患者Th1／Th2失衡表达的研究

目的：观察口腔扁平苔藓（oral liclaen planus,OLP）患者外周血中Th1、Th2型细胞转录因子T-het和GATA-3以及Thl、Th2型细胞因子的表达,进一步探索OLP的发病机制。方法：通过密度梯度离心法分离20例充血糜烂型,16例光滑型OLP病例和19例正常对照组人群的外周血单个核细胞,逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测各组外周血单个核细胞中T—betmRNA和GATA-3 mRNA的表达;ELISA法检测各组血清中干扰素-γ（interferon gamma,IFN-1）和白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）的表达。结果：充血糜烂型和光滑型OLP患者中T—betmRNA、IFN-γ的表达均低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;而充血糜烂型和光滑型OEP患者中GATA-3 mRNA、IL-4的表达均高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。T—bet mRNA和GATA-3 mRNA的表达在充血糜烂型及光滑型OLP患者组间的差异有统计学意义（P〈0．01）;而IFN-γ和IL-4的表达在充血糜烂型及光滑型OLP患者组间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：Th1／Th2失衡表达与OLP发病机制密切相关,为临床治疗OLP提供参考。