Iodogen法131I标记抗IGF1R单克隆抗体1H7及产物性质鉴定

目的探讨放射性碘标记抗IGF1R单克隆抗体1H7的实验条件及其性质。方法131I-1H7采用Iodogen法标记,Sephadex G-50层析柱分离纯化;纸层析测标记物放射化学纯度(RCP),分别置于室温、4℃、-20℃,于第8 d、16 d、24 d测定各自RCP,评价其体外稳定性,以竞争结合法鉴定其生物学性质。结果131I标记率为64.6%,131I-1H7放射性比活度5.48 MBq/μg,RCP 96.42%,即使在室温放置24 d后RCP仍达91.8%;131I-1H7与HepG2细胞结合的亲和常数K值为1.81×1011L/mol。结论Iodogen法131I标记1H7,所得产物放射化学纯度及放射性比活度高,体外稳定,生物活性保持完好,为进一步研究奠定了基础。     

人源性抗地高辛单链抗体(scFv)及diabody的获取

目的:从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗地高辛单链抗体(scFv),并构建双价抗体(diabody)。方法:以固相化的Dig对构建的大容量噬菌体抗体库进行筛选,4轮后挑取集落,用ELISA法鉴定其特异性,并对抗Dig阳性抗体基因进行DNA指纹分析及测序分析。选取活性好的抗体基因进行改造,构建diabody。结果:在抗体库的筛选过程中可见到明显的富集现象,获得4株可与Dig特异性结合的人源单链抗体,经DNA指纹分析及测序分析证明为不同抗体基因,分泌抗Dig抗体的阳性克隆的可变区基因轻链均属于λ第1亚群,重链基因分别属于第3和第4亚群。选取4号克隆进行基因改造,构建diabody的表达载体,获得活性较好的diabody。结论:利用噬菌体抗体技术获得了人源性抗Dig的抗体,并改造成应用前景较好的diabody,为临床诊断及治疗洋地黄类药物的中毒提供了具有实用价值的人源抗体。     

抗rhEndoglin单链抗体的可溶性表达、纯化及活性鉴定

目的 研制抗rhEndoglin-scFv(single chain variable fragment)抗体.方法 将具有抗原结合活性的抗rhEndoglin.scFv噬菌体感染大肠杆菌E-coli HB2151,经IFIG诱导表达,SDS-PAGE和Westem Blot鉴定分析.用HiTrap Anti.E Tag柱亲和层析纯化scFv抗体,HiTrap Desahing柱行缓冲液更换.用间接ELISA测scFv抗体的亲和常数,用竞争性ELISA和间接免疫荧光检测scFv抗体的抗原结合活性.结果 成功诱导表达和纯化抗rhEndoglin-scFv抗体,表达产物主要位于周质腔中,相对分子质鼍约为2.9×104.测定scFv的亲和常数为(2.14±0.84)×107L/mol,它能与抗rhEndo~in单抗竞争性结合同一抗原表位,且竞争作用随scFv浓度增加而加强.间接免疫荧光实验证实该scFv抗体能识别HUVEC胞膜表达的Endnglin抗原.结论 制备的抗rhEndoglin-scFv抗体具有与rhEndoglin和天然Endoglin结合的能力,可望将其用作肿瘤诊断和治疗的靶向载体.     

国产和进口化学发光免疫分析系统检测血清ProGRP的比对分析

目的 探讨国产自主研发AE-180全自动化学发光免疫分析系统和进口的罗氏cobas e 601电化学发光免疫分析系统同时检测血清ProGRP结果的可比性.方法 依据美国国家临床实验室标准化协会(NCCLS)指南文件EP9-A2[1]文件要求,以罗氏cobas e 601电化学发光免疫分析仪为对比仪器,苏州长光华医自主研发的AE-180全自动化学发光免疫分析仪为实验仪器,采用患者血清样本检测胃泌素释放肽前体(ProGRP)含量,通过实验数据的比对分析,对两套分析系统之间的偏倚进行评估.结果 在ProGRP测定的线性范围内,两套系统相关性好,r=0.997,直线回归方程为Y=0.9944X+0.5892,在ProGRP医学决定水平处的偏倚可接受.结论 两套系统检测ProGRP结果具有较好的一致性,国产自主研发的AE-180全自动化学发光免疫分析系统检测检测血清ProGRP能够满足临床需要,适于临床实验室推广使用.     

抗SARS-CoV病毒N蛋白的单链抗体(scFv)筛选

目的筛选出抗SARS-CoV病毒N蛋白的单链抗体。方法利用原核表达所获得的SARS病毒N蛋白,筛选人源单链抗体噬菌体展示库,经特异性的检测,以期得到抗SARS-CoV病毒N蛋白的特异单链抗体。结果获得了8个抗SARS病毒N蛋白的候选克隆。经测序,获得了编码抗体可变区的基因序列,并进行了原核表达。结论筛选得到的抗SARS-CoV病毒N蛋白单链抗体具有高度的特异性,可以用作临床实验或研究SARS病毒过程中快速检测SARSN蛋白或SARS病毒粒子的候选抗体。     

NBS法标记抗CD20F(ab')2条件的研究

目的 :探讨NBS法标记抗CD2 0F(ab’) 2 的最优条件。方法 :其它条件固定时 ,依次改变反应时间、NBS用量、反应温度、反应体积 ,进行标记后将反应混合物经PD - 1 0柱淋洗 ,收集蛋白峰 ,测定放射性计数 ,计算标记率和免疫活性分数。结果 :反应时间在 2min之前 ,标记率随时间延长而提高 ,2min后出现平台 ,3min达最大值 ,活性在 3min之前变化不大 ,之后明显降低 ;NBS/F(ab’) 2 在 1 6时标记率最高 ,1 4之后活性急剧下降 ;温度对标记率和活性的影响不明显 ;小体积反应有利于提高标记率。结论 :反应时间为 3min ,NBS/F(ab’) 2 为1 6 ,室温小体积标记为最优条件     

~（131）I标记肝癌单克隆抗体HAb18F（ab＇）_2的NBS法研究

本文研究了以溴代琥珀酰亚胺（ＮＢＳ）为氧化剂的（１３１）Ⅰ标记肝癌单克隆抗体ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ’）２的方法。探讨了反应体系中ＮＢＳ的用量，Ｆ（ａｈ’）２的用量及Ｎａ（１３１）Ⅰ活度三个因素对标记率的影响，并从反应机理上予以解释。     

~(131)I治疗Graves’病后发生甲低与TGA,TMA及TRAb的关系

目的 :从甲状腺自身免疫方面探讨1 3 1 I治疗甲亢的效果及甲低发生的因素。方法 :选择1 3 1 I治疗的88例Graves’病甲亢患者随访 3年 ,分为第 1组 (TGA、TMA、TRAb均阳性 )和第二组 (TGA、TMA阴性 ,TRAb阳性 )。采用x2 分析自身抗体水平与甲低发生的关系。结果 :1组甲低发生率为 31 4 % ,2组为 3 8% ,1组明显高于 2组 ,差异有显著性。结论 :TGA、TMA和TRAb水平与确定1 3 1 I剂量及甲低的发生关系密切。认为TGA、TMA水平高的患者应酌情减少1 3 1 I用量     

较小剂量~(131)I联合中药治疗Graves病后血清sFas/sFasL变化及其与TRAb关系的探讨

目的:探讨Graves病(GD)用较小剂量131I联合中药治疗前后血清sFas/sFasL(可溶性细胞凋亡因子-1 /sFas配体)变化的规律及其与TRAb的关系。方法: 31例GD患者,用较小剂量131I(85 1~207 2MBq,平均140 6MBq)联合中药进行治疗,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测GD患者治疗前及治疗后不同时期血清sFas与sFasL含量,求出sFas/sFasL,并与正常对照组对比,分析GD患者血清sFas和sFasL含量,求出sFas/sFasL,并与正常对照组对比,分析GD患者血清sFas和sFasL与TRAb的相关关系。结果:①GD患者治疗前sFas(179. 8±64. 2)pg/ml明显高于临床治愈期(104. 2±23. 5)pg/ml,P<0 05和正常对照组(110 6±18. 1)pg/ml,P<0 05,甲低时的sFas(117 0±20. 6)pg/ml与正常对照比无显著性差异。sFasL治疗前(353 8±92 8)pg/ml同样明显高于临床治愈期(261 1±85 3)pg/ml,P<0 05和正常对照组(265 6±62 1)pg/ml,P<0 05。甲低时的sFasL(257 1±55 3)pg/ml与正常对照比无显著性差异。②GD患者治疗前的sFas/sFasL(0 51±0 23)和甲低时(0 46±0 13)皆大于正常对照( 0 41±0 16,P<0 05 )。sFas和sFasL皆与TRAb呈正相关(r分别为0 52和0 49,P<0. 05)。③较小剂量131I联合中药治疗GD近期疗效良好,有效率100% (31 /31),一次性治愈率74 2% (23 /31),总治愈率8     

血清NSE、ProGRP、CEA、SCCA和CYFRA21-1联检在肺癌诊断中的意义

目的:探讨胃泌素释放肽前体(progastrin-releasing peptide,ProGRP)、神经特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase,NSE)、癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)、鳞状细胞癌抗原(squamous cell carcinomaantigen,SCCA)及细胞角蛋白19(CYFRA21-1)在肺癌诊断中的价值和临床意义。方法:分别采用化学发光法或电化学发光法检测14例肺部良性疾病、12例小细胞肺癌、29例非小细胞肺癌患者血清ProGRP、NSE、CEA、SCCA、CYFRA21-1含量。结果:NSE、ProGRP对SCLC诊断的敏感性分别为66.7%、83.3%,且NSE与ProGRP具有很好的相关性,CYFRA21-1对鳞癌诊断的敏感性为63.6%,CEA对腺癌诊断的敏感性为64.3%。SCLC组ProGRP、NSE水平均显著高于NSCLC组、肺良性疾病组,差异有统计学意义。NSCLC组,CYFRA21-1水平显著高于其余两组,差异有统计学意义。ProGRP、NSE联检对SCLC的检出率可达91.7%,CYFRA21-1、SCCA、CEA联检对腺癌、鳞癌的检出率分别为71.4%、72.7%。结论:ProGRP及ProGRP+NSE是SCLC诊断的较好指标,CYFRA21-1、CEA分别对鳞癌、腺癌具有一定的诊断价值。     

Graves'病131I治疗剂量及甲低与TGA、TMA的关系

目的:从甲状腺自身免疫方面探讨Graves'病131I治疗剂量及甲低的发生因素.方法:选择131I治疗的176例Graves'病患者随访3年,分为第Ⅰ组(TGA、TMA阳性)和第Ⅱ组(TGA、TMA阴性).采用χ2分析自身抗体水平与131I治疗剂量及甲低发生的关系.结果:Ⅰ组甲低发生率为31.4%,Ⅱ组为3.8%,Ⅰ组明显高于Ⅱ组,差异有显著性(P＜0.05).结论:TGA、TMA水平与确定131I剂量及甲低的发生关系密切.认为TGA、TMA水平高的患者应酌情减少131I用量.     

VIP-131I-ASON抑制HT29细胞的生长及癌蛋白的表达

将互补于C-m yc mRNA的反义寡核苷酸(A SON)进行放射性碘(131I,125I)标记,通过多聚赖氨酸与血管活性肠肽(V IP)偶联形成放射性反义复合物(V IP1-31I-A SON,V IP1-25I-A SON)。以正义(SON)和无义链(M ON)作为对照,比较HT 29结肠癌细胞对125I-A SON和V IP1-25I-A SON的摄取率;利用M TT法和流式细胞计数仪检测C-m yc癌蛋白方法,研究131I-A SON和V IP1-31I-A SON对HT 29结肠癌细胞的作用。实验结果表明,与V IP结合后,125I-A SON在结肠腺癌HT 29细胞中的摄取率大大提高,与未结合125I-A SON摄取率相比差异显著(P<0.05)。V IP1-31I-A SON对HT 29细胞生长抑制作用呈剂量依赖型,且抑制作用显著强于其它各对照组(P<0.05)。流式细胞计数表明,与V IP1-31I-A SON组和131I-A SON组荧光强度明显低于其它各组(P<0.05),而V IP1-31I-A SON组的荧光强度又比131I-A SON组低(P<0.01),表明V IP作为载体,能有效将A SON导入结肠癌细胞,明显抑制HT 29结肠癌细胞的生长和C-m yc癌蛋白的表达。     

血清CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC和ProGRP联合检测在肺癌诊断中的价值

目的探讨癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、鳞状细胞癌抗原（SCC）和胃泌素释放肽前体（ProGRP）在肺癌诊断中的价值。方法采用电化学发光法和酶联免疫法对228例肺癌患者、100例肺良性疾病患者及100例健康对照组者CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC和ProGRP的含量进行检测及比较。结果肺癌组血清CEA、CYFRA21-1、ProGRP的水平明显高于肺良性疾病组和健康对照组（P〈0.05）。肺癌肿瘤标志物的血清水平与其病理类型相关,血清CEA水平在腺癌时显著升高（中位数8.64,四分位数2.72-44.76,P〈0.05）,ProGRP水平在小细胞肺癌中显著升高（中位数152.00,四分位数46.00-1209.00,P〈0.05）,而血清SCC水平则在鳞癌时显著升高（中位数1.30,四分位数0.80-2.55,P〈0.05）。Ⅲ、Ⅳ期肺癌的血清CEA、CYFRA21-1、NSE和SCC水平明显高于Ⅰ、Ⅱ期肺癌（P〈0.05）。ProGRP＋CEA＋SCC联合检测对肺癌诊断的灵敏度、特异性和约登指数分别为75.9%、81.5%和0.574,灵敏度和约登指数大于各单项标志物的检测。结论 CEA对腺癌、ProGRP对小细胞肺癌以及SCC对鳞癌具有较大的辅助诊断价值,联合检测可明显提高肺癌的灵敏度,为早期诊断治疗提供有力的证据。     

白细胞介素－6的~（125）I标记及在单抗筛选中的应用

采用氯胺－Ｔ法对白细胞介素－６进行~（１２５）Ｉ标记，标记率和标记产品的纯度高，游离~（１２５）Ｉ很低。用本标记产品筛选抗ＩＬ－６单克隆抗体的实验结果显示它的结合率高而稳定。本法灵敏度高、特异性强，是一种快速、便于进行单克隆抗体筛选的微量免疫检测法。     

[~(125)I]-(A14)单碘胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内的趋瘤特性研究

目的 :观察放射性碘标记胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内的趋瘤或亲肿瘤 (tumor-seeking)特性。方法 :采用荷人肝癌裸鼠模型。用 [12 5I]- (A14)单碘胰岛素进行荷人肝癌裸鼠体内分布实验和抑制实验。结果 :体内分布实验显示肝癌组织摄取 [12 5I]- (A14)单碘胰岛素明显高于本底组织 (肌肉 ) ,肿瘤与血和肿瘤与肌肉的放射性比值随时间延长而增高。体内抑制实验发现肿瘤组织于 30min的抑制率为 35 .0 %。结论 :[12 5I]- (A14)单碘胰岛素在荷人肝癌裸鼠体内 ,通过受体介导作用 ,能被肝细胞癌组织特异性摄取。     

~(131)I标记抗人结肠癌单克隆抗体MC_3在荷瘤裸鼠体内分布及肿瘤放射免疫显像

抗人结肠癌单克隆抗体(McAb)MC_3用~(131)Ⅰ标记后在裸鼠人肠癌模型上进行肿瘤定位和放射免疫显像研究。结果显示:体外标记抗体特异性结合率为37.5%,裸鼠体内在48～120h的ECT照相可见在肿瘤部位均有放射性的特异性浓聚,其摄取量随时间延长逐渐增加,肿瘤显影清晰,显像的合适时间为96～120h。而给予非特异性的~(131)Ⅰ-NMIgG后,肿瘤部位未见放射性浓聚,而呈全身均匀性分布。120h肿瘤组织与肝脏及正常肠组织的比值分别为3.61和9.81,肿瘤定位指数为4.26。病理组织学检查显示注射~(131)Ⅰ-MC_3裸鼠肿瘤呈大片坏死,仅局部肿瘤边缘尚存少数完整的肿瘤组织。提示McAbMC_3用于肠癌的诊断和导向治疗可能有良好的前景。     

~(125)I放射性粒子对荷人结肠癌裸鼠治疗效应的实验研究

目的观察125I放射性粒子组织间植入对裸鼠皮下人结肠癌移植瘤的局部抑制作用。方法雌性Balb/c裸鼠20只,以人Colo205型结肠癌细胞建立裸鼠皮下人结肠癌实体肿瘤模型,待肿瘤体积长至理想大小,随机分成2组,对照组不予任何处理,治疗组给予移植瘤以125I放射性粒子组织间植入,每周测量2次肿瘤体积,治疗27d后,处死裸鼠,观察移植瘤的相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增殖率(T/C)、ABC免疫组化染色观察肿瘤增殖率[Brdu标记指数(LI)]。结果治疗27d后,裸鼠均存活。治疗组(125I粒子组)移植瘤的RTV为(251.59±72.24),明显小于对照组的RTV(1087.94±510.72),相对肿瘤增殖率为23.13%,明显减少,治疗组的LI为(15.00±5.00),明显小于对照组的LI(38.75±6.29)。结论①人Colo205型结肠癌模型是放射性粒子植入治疗大肠癌基础研究的良好模型之一;②125I放射性粒子对人结肠癌细胞增殖有明显的局部抑制作用;③125I放射性粒子在肿瘤体内累积一定剂量才会逐渐显现治疗效应。     

抗肝癌单链抗体(鼠及人源化)融合突变型TNF-α的构建、表达及其作用研究

我室从HAb25抗肝癌单克隆抗体中制备并高效表达了抗肝癌鼠及人源化单链抗体m/hscFv25(人源化工作由军事医学科学院袁清安等完成),与人天然型TNF-α连接后取得了一定的治疗效果.但由于天然型TNF-α的毒副作用很大,我们尝试用高活性、低毒性的突变型TNF-α(mTNF-α)将之替代,构建新型、高效、低毒的抗肝癌抗体原核表达载体pGEX4T-1/scFv25-mTNF-α,通过诱导表达、纯化后,对SMMC-7721肝癌细胞及荷肝癌裸鼠进行导向治疗研究.     

c(RGD)2与Angiopep-2共修饰的脂质体的制备、131I标记与生物分布特征

目的 为制备具有穿透血脑屏障和血脑肿瘤屏障能力及靶向脑胶质瘤的脂质体载体,合成以靶向肿瘤新生血管的c(RGD)₂肽与脑靶向肽Angiopep-2共修饰的脂质体,用¹³¹I标记并研究其生物分布特征。方法 将c(RGD)₂与Angiopep-2分别与DSPE-PEG2000偶联,用氢化大豆磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-Angiopep-2和DSPE-PEG2000-c(RGD)₂按摩尔比为60∶34∶3∶3制备脂质体,采用氯胺T法进行¹³¹I标记,测定¹³¹I标记的c(RGD)₂与Angiopep-2共修饰的脂质体在小鼠体内的生物分布。结果 所合成的DSPE-PEG2000-Angiopep-2与DSPE-PEG2000-c(RGD)₂经质谱测定的分子量与理论值相符;c(RGD)₂与Angiopep-2共修饰的脂质体的平均粒径为143.2±13.8nm,多分散系数(PDI)为0.214...