Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育中的表达

目的探讨Notch1在小鼠下颌第一磨牙胚胎发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌第一磨牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌第一磨牙自牙胚发育起始期至出生后2天不同发育阶段组织的Notch1分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育起始期和蕾状期牙板上皮上方或其包绕的口腔上皮中表达,在牙板上皮中没有表达。自帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中无表达。至牙釉质和牙本质分泌期,Notch1仍在颈环部位的中间层表达。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的牙上皮特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。     

跨膜蛋白Syndecan-1在不同发育时期小鼠磨牙组织中的表达

目的以小鼠磨牙为发育模型,研究其不同发育时期跨膜蛋白Syndecan- 1的表达特点,进而分析Syndecan-1在牙齿发育中的作用。方法取不同胎龄的胎鼠,制作其下颌第一磨牙的切片,进行免疫荧光染色,并在荧光显微镜下观察Syndecan- 1的表达情况。结果Syndecan- 1的表达随牙胚发育的时期不同而变化：蕾状期时在牙源性上皮和间充质中有弱的阳性分布,帽状期时成釉器上皮阳性表达减弱,而牙乳头及周围的间充质的阳性反应明显增强,钟状期时成釉器上皮又呈阳性表达,并以在中间细胞层的反应更为强烈,而牙乳头间充质的染色则很弱,同时前成釉细胞以及下方的成牙本质细胞的顶端也呈Syndecan- 1的阳性表达。结论Syndecan- 1参与了成釉器和牙乳头的发育和分化过程的调节,并与牙胚细胞的增殖以及成釉细胞和成牙本质细胞的分化相关。     

透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达

目的:检测透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法:取不同胎龄的ICR胎鼠,制备小鼠下颌第一磨牙不同发育时期切片,用免疫组织化学实验方法检测透明质酸在下颌第一磨牙牙胚组织中的表达情况。结果:透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚的不同发育阶段表达各异。在小鼠磨牙开始发生时,透明质酸即在增厚的牙板上皮中表达,随后在蕾状期牙蕾中央的上皮细胞间可见透明质酸的表达,而在深层的牙源性间充质表达则不明显。自帽状期至钟状晚期,透明质酸在牙胚星网状层细胞间以及牙源性间充质细胞的表达逐渐增强,而在基底膜、内外釉上皮细胞、成釉细胞以及成牙本质细胞所在区域不表达。结论:透明质酸在牙胚发育过程中呈现时间-空间特异性表达。特别是其在星网状层细胞以及牙乳头间充质细胞中的表达随着牙胚的发育逐渐增强提示其可能与牙胚的形态发生密切相关。     

Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达研究

目的:检测Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同时期的表达分布及变化规律,初步揭示Ddit3在小鼠牙胚发育中的作用。方法:取不同胚胎时间点的ICR妊娠小鼠,制备牙胚发育标本,通过免疫荧光和免疫组化的方法显示Ddit3在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同时间点的表达分布。结果:Ddit3在牙胚发育的早期主要表达于胞浆中,从钟状期开始,Ddit3不仅在胞浆中有阳性表达,同时也微弱地表达于细胞核中。分布如下:在小鼠下颌第一磨牙发育的板状期,Ddit3几乎没有表达。在蕾状期,Ddit3主要表达于釉上皮的细胞质中,在牙外胚间充质细胞中几乎无表达。在帽状期,Ddit3的表达模式基本和蕾状期相同。在钟状期早期,Ddit3在成釉细胞、前成牙本质细胞和牙乳头胞质中呈阳性表达,在部分细胞核中也检测到了Ddit3的表达。钟状期晚期,Ddit3在新形成的硬组织周围的高柱状成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的胞浆中有阳性表达,在大多数成釉细胞、成牙本质细胞和牙乳头细胞的细胞核中也有表达。结论:Ddit3可能会调节成釉细胞和成牙本质细胞的分化及其硬组织的生物矿化。     

C-Met在ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚中的表达

目的探讨c-Met在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育中的表达情况。方法采用孕12d、13d、14d、16d、18d ICR胎鼠及出生后2d ICR仔鼠的头部制作冰冻切片,以抗小鼠c-Met多克隆抗体对冰冻切片进行免疫荧光实验,激光共聚焦显微镜观察。结果 c-Met在牙胚蕾状期、帽状期的上皮、钟状期的内釉上皮、成釉细胞和成牙本质细胞中有表达;牙胚和口腔黏膜连接区域两侧的间充质中、牙乳头及蕾状早期颊侧下方下颌的间充质中c-Met也有表达。结论 C-Met对于牙齿的形态发生,成釉细胞和成牙本质细胞的分化,牙乳头细胞的发育可能具有重要作用。     

Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同阶段的表达研究

目的:检测Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同阶段的表达分布及变化规律,进一步揭示Pik3cb对牙形态发生的影响。方法:制备原位杂交探针,及小鼠牙胚发育标志时间点的牙胚冰冻切片,通过原位杂交方法进一步显示Pik3cb在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育不同时期的表达情况。结果:蕾状期Pik3cb明显表达于牙板上皮,帽状期开始大量表达于釉上皮与牙乳头,进入钟状期表达部位趋于集中,尤以内釉上皮及后续新形成硬组织周围的高柱状成釉细胞处最为明显。结论:Pik3cb在牙源性上皮及成釉细胞表达,并可能通过PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号通路与成釉细胞瘤行为相关。     

Fibulin-7在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的时空表达

目的：观察Fibulin-7蛋白在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育过程中的时空表达特点。方法：取胚胎15.5 d、出生后第1天、第7天的C57BL/6J小鼠下颌骨标本,应用免疫组织化学方法检测Fibulin-7在下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达情况。结果：Fibulin-7蛋白在小鼠下颌第一磨牙牙胚自钟状期末期至牙胚发育成熟过程中表达量逐渐增加。结论：Fibulin-7蛋白在牙胚发育的不同阶段均有表达,推测Fibulin-7参与了牙间充质细胞分化为成牙本质细胞、牙髓-牙本质复合体的形成过程。     

Notch 1信号蛋白在大鼠牙胚发育中的免疫组化表达研究

目的通过检测大鼠牙胚发育不同阶段Notch1信号的表达情况，探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法采用免疫组织化学染色技术观测大鼠孕期12、14、16、17、18、19d和出生后1、3、5、7、9d牙胚中Notch1的表达。结果Notch1的表达始于钟状中期。在钟状中晚期，Notch1的表达在牙乳头间充质、成牙本质细胞层呈弱阳性。在内釉细胞层呈阳性。牙体组织形成开始，Notch1则在成釉细胞的中间层有反复表达，在成牙本质细胞层中有一过性表达。牙齿萌出后，该信号在成牙本质细胞和成釉细胞表达均为阴性。结论Notch1在牙胚发育过程中与成釉细胞分化有关，它可能在牙齿发育早期基质触发前成釉细胞向成釉细胞分化中起重要作用。     

ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空表达

目的:研究ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空分布。方法:采用免疫组织化学方法和图像分析技术观察ADAM28在小鼠牙胚发育各期的表达分布及差异。结果:ADAM28在牙胚发育各时期均有不同程度的表达。帽状期开始即在口腔上皮及成釉器星网层细胞、基底膜、牙乳头细胞和牙囊细胞表达强阳性,到钟状晚期,成釉细胞、釉基质、上皮根鞘和牙乳头细胞阳性表达;至冠根硬组织发育期,成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘、成牙骨质细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞阳性表达。结论:ADAM28作为上皮和间充质间重要的信号分子,参与了从蕾状期到钟状晚期、从基质分泌到硬组织形成的牙冠、牙根形态发生过程,它可能在牙源性间充质细胞的早期形成、增殖与分化启动中发挥重要作用。     

氯离子通道CLC-3在小鼠牙胚发育中的表达

目的:探讨CLC-3在BALB/c小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的时空表达。方法:选取E13.5、E15.5、E18.5 d的BALB/c胎鼠和P1、P5 d的BALB/c小鼠,脱颈处死后取其头部,梯度乙醇脱水,石蜡包埋后连续切片,最后对石蜡切片行CLC-3免疫组化染色。结果:当胎鼠牙胚处于蕾状期时,CLC-3在牙胚的牙板上皮中可见表达;当牙胚发育为帽状期时,在牙乳头和牙囊细胞中表达;到钟状期时,CLC-3在牙乳头、牙囊、星网状层细胞和中间层细胞中广泛表达。出生后的小鼠CLC-3在牙乳头、牙囊、成釉细胞、成牙本质细胞、星网状层细胞、中间层细胞中均广泛表达。结论:CLC-3在小鼠牙胚发育的不同时期呈现不同的时空表达。     

Dental epithelial histo-morphogenesis in the mouse: positional information versus cell history

Reciprocal epithelial-mesenchymal interactions control odontogenesis and the cap stage tooth germ mesenchyme specifies crown morphogenesis. The aim of this work was to determine whether this mesenchyme could also control epithelial histogenesis. Dental mesenchyme and enamel organ were dissociated from mouse first lower molars at E14. At this early cap stage, the enamel organ consists of four cell types forming the inner dental epithelium (IDE), primary enamel knot (PEK), outer dental epithelium (ODE) and the stellate reticulum (SR). Pelleted trypsin-dissociated single dental epithelial cells, which had lost all positional information, were reassociated to either dental mesenchyme or dissociated mesenchymal cells and cultured in vitro. Although with different timings, teeth developed in both types of experiments showing a characteristic dental epithelial histogenesis, cusp formation, and the differentiation of functional odontoblasts and ameloblasts. The rapid progression of the initial steps of histogenesis suggested that the cell history was not memorized. The dental mesenchyme, as well as dissociated mesenchymal cells, induced the formation of a PEK indicating that no specific organisation in the mesenchyme is required for this step. However, the proportion of well-formed multicusped teeth was much higher when intact mesenchyme was used instead of dissociated mesenchymal cells. The mesenchymal cell dissociation had consequences for the functionality of the newly-formed PEK.     

Inhibition of human dental pulp stem cell differentiation by Notch signaling

Notch signaling plays a critical role in development and cell fate specification. Notch receptors and ligands have been found to be expressed in dental epithelium or mesenchyme in the developing tooth, suggesting that Notch signaling may regulate odontogenesis. Post-natal human dental pulp stem cells (DPSCs) isolated from the dental pulp have characteristics of mesenchymal stem cells and can differentiate into odontoblasts. In this study, we examined whether Notch signaling regulated the odontoblastic differentiation of DPSCs. We found that over-expression of the Notch ligand, Jagged-1, activated the Notch signaling pathway in DPSCs. Jagged-1 inhibited the odontoblastic differentiation of DPSCs in vitro. Jagged-1-expressing DPSCs could not form mineralized tissues in vivo. Moreover, over-expression of the constitutively activated Notch1 intracellular domain (Notch-ICD) also inhibited odontoblastic differentiation of DPSCs. Taken together, our results demonstrate that Notch signaling can inhibit the odontoblastic differentiation of DPSCs.     

Role of the Notch signalling pathway in tooth morphogenesis

Notch receptors are involved in cell fate decisions through the process of lateral inhibition or inductive signalling. Jagged2 belongs to the family of transmembrane proteins that serve as the ligands for Notch receptors. We have analysed the expression of the Jagged2 gene in developing mouse teeth. Jagged2 expression is restricted in inner enamel epithelial cells that give rise to the ameloblasts. We have also examined the role of Jagged2 in tooth development using mutant mice that lack the domain of the Jagged2 protein required for interaction with the Notch receptors (DSL domain). Homozygous mutant mice die after birth, exhibit abnormal tooth morphology and fusions between the palatal and mandibular shelves. These results demonstrate that Notch signalling plays an essential role in tooth development.     

氟抑制小鼠切牙成釉细胞内骨形成蛋白-2表达

目的观察慢性氟中毒对小鼠切牙成釉细胞骨形成蛋白-2(BMP-2)表达的影响，探讨氟斑牙的致病机制。方法建立小鼠慢性氟中毒氟斑牙模型，SABC免疫组化法检测下切牙成釉器细胞内BMP-2的表达分布。结果BMP-2在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞表达最强，在中间层细胞，星网状细胞中均有表达，并且随着氟浓度的升高，表达减弱。结论氟抑制BMP-2在成釉细胞中的表达，影响釉基质分泌。     

Notch1在牙根发育不同阶段牙髓中的表达

目的 研究牙根发育不同阶段的恒牙牙髓中Notch1蛋白的表达,探讨其在牙髓发育和成熟中的作用。方法 收集因正畸而拔除的人健康恒牙,拔除后立即取出牙髓,固定,石蜡包埋。按照牙根发育程度,分为3组:第1组（牙根刚开始发育）,牙根发育不足1/3,共10例;第2组（牙根发育中）,牙根发育1/3~2/3,共15例;第3组（牙根发育完成）,根尖孔闭合,共12例。采用SP法,对牙髓标本的石蜡切片进行Notch1的免疫组化染色。利用图像分析仪和Meta Morph/Cool snapfx/AX70软件系统对阳性染色部位的透光强度进行定量分析。应用SPSS 10.0软件包,采用方差分析进行统计学分析。结果 Notch1蛋白在恒牙牙根发育不同阶段的牙髓组织中均有表达,主要在牙髓成纤维细胞和血管内皮细胞的胞质内呈阳性着色;随着牙根的逐渐发育,Notch1在牙髓中的表达强度逐渐减弱（P<0.01）。结论 Notch1参与牙髓牙本质复合体的发育和成熟。     

In situ localization of tenascin mRNA in developing mouse teeth

Tenascin is a large extracellular-matrix glycoprotein found in developing connective tissue. A cDNA probe to mouse tenascin, mTN2, was used to determine the cellular origins of this molecule in the murine tooth germ by in situ hybridization. At embryonic day 19, a hybridization signal significantly greater than background was detected with mTN2 in the subodontoblastic layer of the dental mesenchyme and in the inner enamel epithelium of the enamel organ. At postnatal day 1, a signal was detected over pre-odontoblasts and the strata intermedium and externum. No tenascin mRNA was detected in odontoblasts or the stellate reticulum at either age, and hybridization in ameloblasts was not significantly greater than background at postnatal day 1. Thus, much of the tenascin found throughout developing teeth appears to be synthesized by pre-odontoblasts and the inner enamel epithelium, the two populations of cells destined to generate mineralized matrix.