霍乱弧菌脂多糖的提取与其生物学活性的测定

采用Ｗｅｓｔｐｈａｌ的热酚－水法及高速离心法从霍乱弧菌５６９Ｂ等菌株中提取脂多糖，用血凝法测其效价。并以提取的脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞诱生肿瘤坏死因子的能力测其生物学活性。实验表明霍乱弧菌５６９Ｂ菌株的脂多糖有较强的诱生肿瘤因子的能力，而且其血凝效价也较高。     

胎盘活性因子体外抗单纯疱疹病毒作用

目的：探讨胎盘活性因子（ＰＡＦ）在细胞培养中对单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）起抑制作用。方法：运用间接免疫荧光法检测药物抗病毒作用。结果：ＰＡＦ对病毒吸附细胞无干扰作用，而对病毒有直接的杀伤及抑制作用，以抑制浓度为１００μｇ／ｍｌ，作用时间为８ｈ效果最好。结论：该药对细胞无毒无害，无副作用，是较为理想的免疫调节剂。     

霍乱弧菌系列胶体金标记免疫层析快速检测试剂条的应用

今年，我们试用了江苏省疾控中心推广使用的霍乱弧菌系列胶体金标记免疫层析快速检测试剂条(下称金标法)，并与国标法进行了分析比较，报告如下。     

放射性碘标记的抗肺癌单克隆抗体在载瘤裸...

Nude mice bearing humor lung cancer xenografts were injected intravenously or intraperitoneally with a mixture of radioiodinated anti-lung-cancer monoclonal antibodies, 2E3 and 6D1. The blood radioactivity versus time curve was fitted to a two-compartment open model with a 3.4 day blood radioactivity clearance half-life and a 636 ml/kg apparent distribution volume. Radioiodinated 2E3 and 6D1 given intraperitoneally were rapidly absorbed, with a 2.08 absorption half-life and 89% bioavailability. The highest radioactivity levels were found in the tumor, blood, liver and spleen 1-3 days after injection; next came the lung, kidney, stomach and intestine. The relative radioactivity increased in the tumor as levels in blood and normal tissues decreased. The in vivo deiodination of radioiodinated 2E3 and 6D1 was about 18.6% and free radioiodine was excreted in the urine.     

胎盘活性因子体外抗单纯疱疹病毒作用

目的：探讨胎盘活性因子（ＰＡＦ） 在细胞培养中对单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）起抑制作用。方法：运用间接免疫荧光法检测药物抗病毒作用。结果：ＰＡＦ对病毒吸附细胞无干扰作用，而对病毒有直接的杀伤及抑制作用。以抑制浓度为１００ μｇ／ｍｌ，作用时间为８ ｈ 效果最好。结论：该药对细胞无毒无害，无副作用，是较为理想的免疫调节剂。     

猪血清胸腺因子免疫活性的测定

根据哺乳动物循环血液中所含有的血清胸腺因子(STF)能使θ-阴性的玫瑰花瓣状形成细胞(RFC~-)转变成RFC~+,同时提高其对抗θ抗原血清的代用品硫唑嘌呤的敏感性的原理,采用成熟的BALB/C品系小鼠,经摘去胸腺后的鼠脾脏淋巴细胞和绵羊红细胞(SRBC)之间,在STF和硫唑嘌呤同时共存的条件下具有抑制玫瑰花结形成的作用,从而建立了对哺乳动物循环血液中的STF(九肽)的超微量生物活性测定方法。用本方法对猪血清和血浆的检测结果,其活性滴度分别为1:512、1:1024。     

肝癌患者血清和腹水可溶性肿瘤坏死因子受体-p55的测定

目的 进一步了解肝癌患者的异常免疫状态,探讨血清、腹水中可溶性肿瘤坏死因子受体-p55（sTNFR-p55）检测的临床意义。方法　以双单抗夹心酶免疫吸附法检测了25例肝癌患者和25例肝硬化患者的血清、腹水中血清sTNFR-p55水平并以正常人为对照。结果肝癌病人血清sTNFR-p55浓度[（0.74±0.50）ng/ml]显著高于正常人[（0.37±0.03）ng/ml]和肝硬化患者和[（0.35±0.02）ng/ml],P<0.01。肝癌病人腹水sTNFR-p55浓度[（1.11±1.25）ng/ml]亦显著高于肝硬化患者[（0.33±0.03）ng/ml],P<0.01。肝癌、肝硬化患者血清与腹水的sTNFR-p55水平显著相关。肝癌患者血清sTNFR-p55水平与外周血TBil和AFP呈正相关（r=0.524,P=0.01和r=0.234,P=0.03）。结论　sTNFR-p55的检测对反映肝癌患者的异常免疫状态和肿瘤诊断具有实用价值。     

抗肿瘤坏死因子单抗对内毒素血症大鼠急性肝损伤的保护作用

目的　观察肿瘤坏死因子 (TNF α)在内毒素血症大鼠急性肝损伤中的作用及抗肿瘤坏死因子单抗(anti TNF αMcAb)保护效应。方法　 91只大鼠分为 5组 ,除对照组外 ,其它各组大鼠应用静脉注射法制作内毒素肝损伤模型 ,注射内毒素前、后应用anti TNF αMcAb控制TNF α含量 ,ELISA法检测肝匀浆液中TNF α含量 ,用血液生化指标变化评价肝损伤程度。结果　内毒素组TNF α含量和血生化指标均明显高于对照组(P <0 .0 1 ) ;注射内毒素前 30min应用anti TNF αMcAb可完全避免TNF α含量和血生化指标的升高 ,与对照组无显著差别 (P >0 .0 5 ) ;注射内毒素前 5min应用anti TNF αMcAb可部分避免TNF α含量升高和肝损伤 ;注射内毒素后 30min应用anti TNF αMcAb则TNF α含量和血生化指标均显著高于对照组 (P <0 .0 1 )。结论　TNF α是内毒素肝损伤的重要介导因子 ;注射内毒素前使用anti TNF αMcAb可减轻内毒素肝损伤     

一种筛选中和活性抗人TNF单抗细胞模型的建立及其应用

目的:建立一种筛选中和活性抗人肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF) mAb细胞模型,并从一组抗人TNF mAb中筛选出具有相对较高中和活性的mAb. 方法:用含100 mL/L FCS的DMEM细胞培养液将L929细胞的浓度调整到1×108/L,按每孔100 μL,加入至96孔细胞培养板中,培养过夜. 弃细胞培养上清后,将200 μL的实验液转入培养板中,继续培养16 h. 活细胞用结晶紫染色,脱色后,于570 nm波长测定A值. 结果:浓度在0.3～0.5 mg/L范围内的放线菌素D(antinomycin D, ActD)对L929细胞的生长抑制作用比较稳定;TNF的浓度高于20 kU/L时, 能够使95%以上的实验细胞发生凋亡; 浓度在12.5～50.0 μg/L范围的mAb对TNF的中和作用具有明显的剂量依赖关系; 在ActD, TNF和mAb的浓度分别为0.35 mg/L, 20 kU/L和25.0 μg/L的条件下,发现D2的中和活性与阳性对照抗体无显著性差异(P>0.05),但高于阴性对照抗体,E6,D12,E11 (P<0.01). 与阴性对照抗体比较,E6, E11也具有一定的中和活性(P<0.05),而D12无中和活性(P>0.05). 结论:本研究建立的mAb抑制TNF诱导L929细胞凋亡的细胞模型可用于筛选中和活性抗TNF mAb;D2的中和活性相对较高,可作为构建治疗性嵌合抗体的制剂.     

抗MIF单克隆抗体的制备及其放射性碘标记方法

目的  制备抗小鼠巨噬细胞移动抑制因子（mMIF）单克隆抗体（McAb）对其进行放射性碘标记,为进一步研究MIF在炎症、肿瘤核素显像中的意义奠定基础。方法  异丙基硫代-β-D-半乳糖（IPTG）诱导pEQ30-mMIF/M15工程菌表达重组mMIF蛋白;采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,蛋白质印迹技术（Western blotting）和酶联免疫吸附试验（ELISA）进行特异性鉴定,巨噬细胞移动抑制试验（MMI）鉴定生物学活性。采用二氯二苯基甘脲（Iodogen） 法,用Na125 I 标记抗mMIF单克隆抗体。结果  成功建立3株稳定高效价分泌抗mMIF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5G2D7,5G2C7,5G2E3。经Western blotting、ELISA和MMI鉴定证明抗mMIF单克隆抗体具有良好的抗原特异性和生物学活性;125 I-抗mMIF单克隆抗体的标记率为90.40%,放射化学纯度98.36%,放射性比活度为21.48MBq/μg。结论  成功制备抗mMIF单克隆抗体和放射性碘标记抗mMIF单克隆抗体,为深入研究MIF相关性疾病和利用MIF进行临床肿瘤及炎症放射免疫显像提供了实验基础。     

氨胺—T法和Iodogen法碘标记抗体的比较

本文比较了氯胺－Ｔ法和Ｉｏｄｏｇｅｎ法碘化标记单克隆抗体ＢＡＣ５在不同反应条件下的标记率，标记反应的时间与抗体免疫活性之间的关系。结果表明：这两种标记方法的最佳ＰＨ值为７－８；反应体积在１００－２００μｌ范围内均可以得到较好的结果；氯胺－Ｔ法反应３ｍｉｎ标记率已接近最大值，而Ｉｏｄｏｇｅｎ法要在１０ｍｉｎ后才有最大的产额。结果还表明：在本实验条件下，氨胺－Ｔ法和Ｉｏｄｏｇｅｎ法的反应时间分别小于２     

脾内微量注射免疫法制备抗重组可溶性组织因子单克隆抗体

目的制备抗重组可溶性组织因子(r-sTF)单克隆抗体并建立检测组织因子(TF)含量的夹心ELISA法,以期为TF的深入研究及临床应用提供参考依据。方法取微量TF对Balb/c小鼠直接进行脾内注射免疫,分离小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞,融合后对杂交瘤细胞进行筛选克隆化培养;建立了3株稳定分泌TF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1-C3、2-G9、3-H9;进而在小鼠体内诱生腹水,并用rprotein A亲合层析法纯化;经鉴定后用过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记于其中一株单抗上,建立夹心ELISA法测定正常人血浆中的TF含量。结果纯化的单抗用SDS-PAGE测定纯度,在Mr为150 000左右呈现一条带;Western blot测定显示1-C3、2-G9、3-H9分泌的单抗可特异地识别Mr为47 000的TF,经免疫球蛋白(Ig)类和亚类鉴定实验证实3株单抗均为IgG1;用夹心ELISA法检测正常人血浆中的TF含量为(130±80)pg/mL。结论用脾内微量注射法成功制备抗TF单克隆抗体及ELISA测定TF含量方法的建立,为TF的制备纯化和检测奠定了基础,也使TF的临床深入化研究成为可能。