RIP1增强顺铂诱导食管癌细胞的凋亡

目的：探讨受体相互作用蛋白1( RIP1)增强顺铂( DDP)诱导食管癌细胞凋亡的敏感性。方法单溶液细胞增殖分析( MTS )法检测不同浓度 DDP 对食管癌细胞株KYSE510、KYSE410的增殖抑制作用;Annexin V/PI 双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测RIP1、半胱天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、PARP的蛋白表达。结果 DDP诱导食管癌细胞凋亡具有剂量和时间相关性。凋亡率随剂量增加和时间延长升高, RIP1蛋白的表达升高, DDP 联合RIP1特异性抑制剂处理食管癌细胞后,较敏感的KYSE510凋亡率明显减少。结论 RIP1可能参与了DDP诱导食管癌细胞凋亡的作用。     

紫杉醇抗人宫颈癌细胞株的体外研究

目的 研究紫杉醇对人宫颈癌细胞株HCE1细胞凋亡率和细胞周期的影响.方法 用紫杉醇处理人宫颈癌细胞株HCE1细胞,采用MTT比色法检测紫杉醇对宫颈癌细胞增殖的影响,确定紫杉醇抑制宫颈癌细胞的最佳浓度,通过流式细胞仪分析紫杉醇处理后宫颈癌细胞凋亡率和细胞周期的改变.结果 紫杉醇对人宫颈癌细胞株HCE1细胞的增殖具有抑制作用,且随药物浓度的增加和作用时间延长,抑制作用越明显;低浓度紫杉醇只影响宫颈癌细胞的凋亡率不影响细胞周期,高浓度紫杉醇既影响宫颈癌细胞的凋亡率又影响细胞周期.结论 紫杉醇能有效诱导人宫颈癌HCE1细胞的凋亡.     

chk1反义寡核苷酸增加HeLa细胞顺铂作用下凋亡敏感性

目的:通过反义封闭chk1基因,阻断细胞周期检测点信号传导通路,从而增加宫颈癌HeLa细胞对顺铂(DDP)的敏感性. 方法:采用MTT法检测梯度浓度DDP作用人宫颈癌细胞株HeLa 24,48和72 h后对细胞的生长抑制率. 以脂质体为载体将chk1正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western Blot测量Chk1蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测DDP作用后细胞凋亡率. 结果:DDP对HeLa细胞有生长抑制作用,并有时间和浓度依赖性. 反义封闭chk1基因可抑制Chk1蛋白表达(P＜0.01), DDP作用下细胞凋亡率为54.1%,高于转染正义链的34.2%(P＜0.01). 结论:反义封闭chk1基因可增加HeLa细胞对DDP的凋亡敏感性.     

抑制热休克蛋白70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂化疗的敏感性

目的 探讨抑制宫颈癌Hela229细胞内热休克蛋白(HSP)70表达对顺铂(DDP)化疗敏感性的影响.方法 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)及集落克隆法测定各因素对Hela229细胞的抑制作用;溴化丙啶(PI)单染法及DAPI检测细胞的凋亡率;JC-1染色法测定线粒体膜电位(△Ψm)的变化;Western blotting测定相关蛋白的表达;建立裸鼠动物模型测定各因素体内的抑瘤作用.结果 宫颈癌细胞较正常宫颈细胞高表达HSP70;当HSP70抑制剂与顺铂合用,细胞的存活率较单用顺铂显著下降(P<0.01);PI与DAPI染色实验表明HSP70抑制剂能增加顺铂诱导的细胞凋亡率;JC-1染色结果显示,HSP70抑制剂处理后顺铂组细胞线粒体膜电位发生了明显的降低.Western blotting实验结果显示HSP70蛋白表达抑制剂与顺铂合用较单用顺铂显著增加促凋亡蛋Bax/caspase-3表达及caspase-3活化;明显降低抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达.裸鼠移植肿瘤模型结果表明HSP70抑制剂与顺铂合用能增强顺铂对模型小鼠肿瘤的抑制作用(P<0.01).结论 抑制HSP70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂的敏感性,机制可能是通过抑制HSP70,进而调节凋亡相关蛋白的表达,促进宫颈癌细胞凋亡.HSP70有望成为宫颈癌基因治疗的一个新靶点.     

顺铂作用于宫颈癌HeLa细胞致细胞周期调节因子变化及对细胞周期的阻滞作用

目的：探讨细胞周期调节因子atm,chk2,p53基因在顺铂（DDP）诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用．方法：MTY法检测梯度浓度DDP对HeLa细胞的生长抑制率,RT—PCR法和WesternBlot法检测DDP作用前后HeLa细胞atm,chk2及p53mRNA和蛋白的表达．流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化．结果：DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制作用具有浓度和时间依赖性．DDP作用HeLa细胞后atm,chk2,p53mRNA和蛋白的表达均增强,细胞凋亡增加,细胞周期阻滞于G2／M期（P〈0．05）．结论：atm,chk2,p53基因与细胞凋亡及G2／M期阻滞有关．干预atm,chk2,筇3基因通路有望成为宫颈癌化疗增敏的新策略．     

抑制单羧酸转运蛋白1可增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 探讨siRNA沉默单羧酸转运蛋白1(MCT1)增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制.方法 Western blot检测HNE1和HNE1/DDP细胞中MCT1的表达及siRNA转染沉默MCT1在HNE1/DDP细胞中MCT1的表达;MTT法检测不同浓度顺铂和MCT1 siRNA联合顺铂对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测Mcl-1、Bak、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 MCT1在HNE1/DDP细胞中高表达,抑制MCT1的表达可增加HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),部分逆转鼻咽癌细胞对顺铂的耐药.此外,抑制MCT1的表达可增强HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的作用,MCT1 siRNA与8μmol/L顺铂联合作用于HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(51.23±2.86)%,较单用MCT1 siRNA、顺铂的凋亡率明显升高(P<0.05).同时使细胞线粒体膜电位降低,下调Mcl-1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达.结论 抑制MCT1的表达可增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,其机制可能与下调Mcl-1、Bcl-2和上调Bax有关.     

掌叶半夏有效提取物单独或与顺铂联合对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用

目的观察中药掌叶半夏有效提取物(PE)对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用,以及PE对HeLa细胞对顺铂(DDP)敏感性的影响,以期寻找药物治疗宫颈癌更完善的途径。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别用PE、DDP及DDP PE处理细胞;用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果PE及DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长均表现出明显的抑制作用,低剂量PE可加强DDP对HeLa细胞的抑制作用;流式细胞术检测结果显示PE作用后HeLa细胞呈现出凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞的比例明显增加。结论PE对宫颈癌HeLa细胞有明显的抑制生长和促凋亡作用,同时能提高HeLa细胞对顺铂的敏感性。     

姜黄素对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的增敏作用及其机制的研究

目的:探讨姜黄素对卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP的增敏作用并探讨其机制.方法:采用MTT法检测姜黄素对COC1/DDP细胞的增敏作用;用流式细胞仪检测单用顺铂、单用姜黄素、顺铂与姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48 h后的细胞凋亡率;Western blot法检测单用顺铂及顺铂与姜黄素合用后各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达.结果:姜黄素浓度在15～35 μmol/L以内时以一定的剂量-效应关系对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用.顺铂的浓度在1.25～5 mg/L时加入20 μmol/L姜黄素后耐药细胞生存率下降明显(P＜0.05),尤以2.5 mg/L顺铂和20 μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂及单用姜黄素相比,凋亡率明显增加(P＜0.05);顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Survivin蛋白的表达明显降低(P＜0.05),Caspase-3蛋白的表达明显增高(P＜0.05).结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin蛋白的表达,增加Caspase-3蛋白的表达有关.     

氯丙嗪单独及与顺铂联合应用对人宫颈癌Hela细胞生长的影响

目的:探讨氯丙嗪(CPZ)和顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞株的体外抑制作用。方法:将氯丙嗪、顺铂单独或联合处理Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,并于用药后不同时间点观察细胞形态学变化。结果:不同浓度的氯丙嗪对细胞生长均有抑制作用,随药物浓度的增加,抑制作用加强。氯丙嗪和顺铂联合应用后抗增殖作用较单一用药显著增强(P<0.05)。二者均可诱导细胞凋亡,联用凋亡率明显增加,并出现G0/G1期细胞阻滞。结论:氯丙嗪可抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,且对顺铂有协同作用。     

氟尿嘧啶联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞的抑制作用及其对TRPV5和TRPV6蛋白表达的影响

目的:研究氟尿嘧啶联合顺铂对骨肉瘤细胞株MG-63的生长抑制作用,探讨其对瞬时性受体电位通道5(TRPV5)和瞬时性受体电位通道6(TRPV6)蛋白表达的影响。 方法:常规培养MG-63细胞,以5×10⁴mL^-1的细胞密度种植细胞,实验分为对照组、氟尿嘧啶组、顺铂组及氟尿嘧啶联合顺铂组4组。CCK-8法检测不同时间MG-63细胞的生长抑制情况;分别于24、48和72 h采用细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒检测MG-63细胞加入不同药物后的凋亡情况;免疫细胞化学染色法检测MG-63细胞在加药前后TRPV5和TRPV6蛋白的表达情况。结果:氟尿嘧啶和顺铂对MG-63细胞的抑制作用均显著,且随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞中黑色颗粒增多,胞体回缩,细胞老化或死亡。与两药单独或是联用作用于MG-63细胞24 h比较,随着时间的延长,48 h 和72 h两者对细胞的抑制作用明显增强(P<0.05)。与对照组比较,氟尿嘧啶组和顺铂组24、48和72h后凋亡率逐渐增加(P<0.01),随着药物作用时间的延长,细胞凋亡率亦呈升高的趋势。当加入氟尿嘧啶和顺铂72 h后,MG-63细胞表达TRPV5和TRPV6含量较加药前明显降低(P<0.05)。结论:氟尿嘧啶与顺铂联用可以提高MG-63细胞增殖抑制及凋亡作用,同时对MG-63细胞TRPV5和TRPV6表达水平具有明显的抑制作用。     

以Celecoxib为基础的联合方案对宫颈癌细胞抑制作用的研究

目的:探讨环氧化酶-2(cox-2)抑制剂Celecoxib与化疗药顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞的作用及机制。方法:用免疫细胞化学SP法检测Hela细胞cox-2蛋白表达后,将Celecoxib、DDP单独或联合处理Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:Celecoxib可下调Hela细胞cox-2蛋白表达,抑制其增殖作用呈浓度和时间依赖性。在一定浓度范围内DDP也抑制Hela细胞生长,作用呈量效关系。Celecoxib与DDP联合应用后抗增殖作用较单一用药显著增强(P<0.05),DDP浓度≥1 mg/L时两者有协同或相加作用。Celecoxib及DDP均可有效诱导Hela细胞凋亡,联用凋亡率明显增加并出现G0-G1期细胞阻滞。结论:Celecoxib与DDP联用可通过抑制增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞对Hela细胞有协同抗肿瘤效应,提示两者联合可能在宫颈癌临床治疗上具有潜在价值。     

胰岛素对人宫颈癌Hela细胞化疗敏感性的影响

目的探讨胰岛素能否增强人宫颈癌Hela细胞对顺铂（DDP）的化疗敏感性及其相关机制。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞株,MTr法检测5U／L胰岛素作用3、6、9、12、15、18、21h后,联合DDP（7．26mg／L）对人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率的影响。流式细胞仪检测对照组、DDP组、胰岛素组及联合组（胰岛素化疗前作用6h）的细胞周期时相变化情况。结果DDP组、胰岛素化疗前作用不同时间组与对照组相比,Hela细胞的增殖抑制率明显上升（P〈0．01）;且胰岛素于化疗前提前作用3、6、9、12、15h后加入DDP,宫颈癌Hela细胞的增殖抑制率明显高于DDP组（P〈0．01）。流式分析显示DDP组及胰岛素组的S期细胞比例较对照组高（P均〈0．01）,联合组s期细胞比例较DDP组高（P〈0．01）。结论胰岛素具有较显著的DDP化疗增敏作用,胰岛素作用时机选择是胰岛素对宫颈癌细胞化疗增敏作用的关键。     

Effects of Livin gene RNA interference on apoptosis of cervical cancer Hela cells and enhanced sensitivity to cisplatin

The recombinant plasmids pGenesil-1-BIRC71 and pGenesil-1-BIRC72 were transfected into Hela cells and cisplatin was added with different concentrations in order to study the inhibitory effects of Livin gene, increase the apoptosis induced by cisplatin, and detect the expression ofBcl-2, Bax, caspase-3, and survivin genes. The pGenesil-1-BIRC71 and pGenesil-1-BIRC72 were transfected into Hela cells, and the expression levels of Livin, Bcl-2, Bax, caspase-3, and survivin genes were detected by using fluorescence quantitative real-time PCR. Then cisplatin at different concentrations （3.0, 6.0 and 9.9 μg/mL） was added into the transfected Hela cells, and 24, and 48 h later, the apoptosis rate was measured by flow cytometry. After transfection of pGenesil-l-BIRC71 and pGenesil-1-BIRC72 into Hela cells, the expression level of Livin gene was obviously reduced, and the apoptosis rate was significantly increased in transfection group as compared with control group （P〈0.05）. Cisplatin could increase the apoptosis rate in a dose- and time-dependent manner. After cisplatin was added, the expression levels of Bcl-2 mRNA were reduced, and those of Bax, caspase-3, and survivin mRNA were increased in transfection group as compared with those in control group （P〈0.05）. It was concluded that shRNA expression vector targeting Livin gene could inhibit the expression of Livin gene in Hela cells and enhance the apoptosis induced by cisplatin, which was related to the decreased expression of Bcl-2 and activation of Bax and caspase-3. Survivin might play an important role as an antagonist in the process of apoptosis induction.     

丹参酮ⅡA联合顺铂对Hela细胞的凋亡作用

目的研究丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)联合顺铂(DDP)在体外对宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及凋亡蛋白Bax与Bcl-2表达水平的变化。方法采用苏木素-伊红染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡情况;Western Blot测定Bax与Bcl-2蛋白在Hela细胞中的表达水平。结果对照组细胞未见凋亡,而两药单用组及联合组均可见凋亡细胞;除对照组外其他各组均可检测到细胞亚二倍体凋亡峰,Tan ⅡA+DDP组凋亡率高于两药单用组凋亡率,差别均有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白在各组中均有表达,但表达水平变化不明显(P>0.05);Bax蛋白在对照组中几乎不表达,而在各药物处理组中均有表达,且两药联合组中表达水平高于两药单用组,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论Tan ⅡA与DDP二者联合可以增加Hela细胞凋亡率,其中通过增加Bax蛋白的表达,使Bax/Bcl-2比值升高,可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

丹参酮Ⅱ A联合顺铂对Hela细胞生长及p53蛋白表达水平的影响

目的:研究丹参酮Ⅱ A联合顺铂在体外对宫颈癌Hela细胞生长的影响及细胞中p53蛋白表达水平的变化。方法:采用MTT法测定丹参酮Ⅱ A联合顺铂对Hela细胞增殖的影响;HE染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡情况;Western Blot测定p53蛋白水平的表达。结果:丹参酮ⅡA联合顺铂用药组比同等剂量的两药单用组及对照组对Hela细胞的增殖抑制率高(P<0.05);对照组细胞未见凋亡,而两药单用组及联合组均可见细胞凋亡;药物处理组均可检测到细胞亚G1峰,两药联合组细胞亚G1峰与单药组差异显著;在只含溶媒组、丹参酮Ⅱ A组、顺铂组及丹参酮Ⅱ A联合顺铂组中p53蛋白水平表达逐步升高。结论:丹参酮Ⅱ A联合顺铂比两药单用能显著抑制Hela细胞的生长;二者通过增加p53蛋白的表达,促进细胞凋亡。     

纳米雄黄对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨纳米雄黄对不同宫颈癌细胞株Hela(HPV18阳性,腺癌),Caski(HPV16阳性,鳞癌), C33A(HPV阴性,腺癌)增殖、凋亡的影响。方法：体外培养3种不同宫颈癌细胞,采用不同质量浓度(5,10, 20,40 mg/L)纳米雄黄作用于不同宫颈癌细胞24,48,72,96 h,相差显微镜下观察不同质量浓度组与对照 组细胞形态学变化;MTT法测定药物对细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果： 纳米雄黄混悬液(5,10,20,40 mg/L)作用于Caski,Hela,C33A细胞24,48,72,96 h,均可抑制细胞增殖, 且呈时间剂量依赖性,抑制率波动于9.02%~49.06%,以20 mg/L质量浓度组为例,抑制率Caski(39.15%)>Hela (36.17%)>C33A(30.56%)。随着质量浓度的增加,早期凋亡、中晚期凋亡细胞均增加,凋亡率(早期+中晚期凋亡率)波 动于19.29%~99.54%,以20 mg/L质量浓度组为例,凋亡率Caski(60.43±2.88)%>Hela (41.95±3.01)%>C33A (43.49±2.19)%。 细胞周期结果显示高质量浓度组(20,40 mg/L)对Hela,Caski细胞有G2/M期阻滞。结论：纳米雄黄混悬液可抑制不同 宫颈癌细胞株的增殖,促进细胞凋亡,其对Caski细胞的作用最强,对Hela细胞次之,对C33A细胞相对最弱。对HPV 阳性的细胞可产生G2/M期阻滞。     

银杏酚C171与顺铂联用逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性

探讨银杏酚C171对顺铂耐药人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药及凋亡的影响。方法: 体外培养A549及A549/DDP细胞,MTT法检测A549/DDP细胞的耐药倍数,确定顺铂作用浓度;此浓度顺铂与不同浓度银杏酚C171(0, 10,20,40 mg/L)联合应用,分别通过Transwell法、免疫印记及流式细胞术检测A549/DDP细胞迁移、侵袭,Nrf2/Keap1信号通路相关蛋白的表达及细胞凋亡情况。结果： MTT结果显示,与A549细胞相比,A549/DDP细胞具有5.8倍耐药性,确定顺铂作用浓度为4 mg/L;与对照组相比,Transwell实验显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能明显抑制A549/DDP细胞的迁移和侵袭(P<0.05);免疫印迹结果显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能抑制A549/DDP细胞Nrf2、Mrp1及抗凋亡蛋白Bcl2的表达(P<0.05),且促进凋亡蛋白Bax及Keap1蛋白的表达(P<0.01);流式细胞术结果显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能致A549/DDP细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。 结论： 银杏酚C171与顺铂联用可逆转体外A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,并促进细胞凋亡。     

土贝母皂苷甲增强人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的探讨土贝母皂苷甲(tubeimoside 1,TBMS1)促进人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂(cisplatin,DDP)的增敏作用。方法采用MTT法分别检测顺铂和TBMS1对A2780/DDP细胞作用的半抑制浓度值(IC50),将实验分为对照组:只加等量生理盐水;顺铂组:给予6μmol/L顺铂处理;联合用药Ⅰ组:6μmol/L顺铂+3μmol/L TBMS1;联合用药Ⅱ组:6μmol/L顺铂+6μmol/L TBMS1。按上述方法处理细胞后,MTT法检测细胞活力;电泳法检测细胞内DNA损伤;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期;Western blot分析周期蛋白A(Cyclin A)和周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果 TBMS1(3、6μmol/L)与顺铂(6μmol/L)联用使人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性增强;细胞的DNA损伤随TBMS1浓度的增加而明显增多;细胞周期被阻滞在S期,联合用药Ⅰ和Ⅱ组S期所占比例分别为(51.23±3.53)%、(77.34±2.80)%;细胞凋亡率为(5.19±0.78)%、(7.11±1.06)%;Cyclin A的表达为1.89±0.28及2.91±0.43,CyclinD1为0.66±0.09及0.28±0.05(P<0.05,P<0.01)。结论 TBMS1显著增加顺铂对A2780/DDP细胞增殖抑制作用,Cyclin A、Cyclin D1可能参与其调节。     

维生素C增加人宫颈癌Hela细胞株对顺铂敏感性的研究

目的研究维生素C与顺铂合用对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用,流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率。结果维生素C和顺铂均可抑制Hela细胞生长,将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期并诱导细胞凋亡。两药联合作用时表现出协同作用,细胞生长抑制率显著提高,凋亡率明显增加。结论维生素C可与顺铂协同抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。