ERK/MAPK信号通路激活与乳腺癌细胞浸润性生长的关系

目的：探讨乳腺癌细胞中ERK／MAPK信号转导通路异常激活与乳腺癌细胞浸润性生长的关系及可能机制。方法:采用Western蛋白印迹技术检测乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-435S中磷酸化ERK／MAPK(P-ERK)蛋白表达，以及表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和ERK／MAPK通路抑制剂PD98059对两种细胞ERK／MAPK信号转导通路磷酸化的调节。结果:雌激素受体ER(-)的浸润性乳腺癌细胞系MDA-MB-435S中，p-ERK表达明显高于ER( )的非浸润性乳腺癌细胞系MCF-7；EGF可刺激两种细胞p-ERK的表达增加，但这种刺激作用在MDA-MB-435S细胞中更加明显；IGF-1则仅能刺激MCF-7细胞中p-ERK的表达。PD98059能有效阻滞EGF、IGF-1对p-ERK的激活。结论：ERK／MAPK信号转导通路的异常激活与乳腺癌的浸润性生长有关，而EGF可能是异常激活ERK／MAPK信号转导通路，是刺激ER(-)的乳腺癌细胞浸润性生长的重要因素之一。     

阻断MAPK通路对前列腺癌细胞增殖的影响

目的：研究前列腺癌进展中细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的变化，探讨阻断此通路对前列腺癌细胞增殖的影响。方法：用MTT法检测表皮生长因子（EGF）、PD98059对前列腺癌细胞系LNCaP、PC 3和DU145增殖的影响；用Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）表达和磷酸化ERK1/2水平的差异，以及EGF、PD98059对细胞ERK1/2磷酸化水平的影响。结果：EGF促进LNCaP、PC 3和 DU145的增殖，PD98059抑制细胞增殖；Western blot结果显示，3株前列腺癌细胞的总ERK1/2无明显差异。在血清饥饿的状态下，LNCaP细胞无ERK1/2的活化,而PC 3和 DU145细胞ERK1/2处于持续活化的状态。PD98059能够阻断EGF对3株前列腺癌细胞ERK1/2的激活。结论：MAPK通路的持续活化在前列腺癌的恶性进展中起重要作用，阻断此通路可以抑制前列腺癌细胞的增殖。     

外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达的影响

 目的观察外源性硫化氢（H2S）对嗜铬细胞瘤细胞（PC12）茁位淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）表达的影响,并探讨可
能涉及的细胞信号机制。方法用不同浓度的硫氢化钠（NaHS）处理体外培养的PC12细胞,利用RT-PCR和Western blot法检
测细胞内BACE1mRNA及蛋白表达;继以LY294002 和PD98059 分别阻断磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（PI3-K/
Akt）及丝裂酶原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶1/2（MAPK/ERK1/2）通路,Western blot 法检测其对NaHS 诱导的通路下游
蛋白Akt1 和ERK1/2 磷酸化的影响及其对BACE1 蛋白表达变化的调节;ELISA法检测细胞培养液中A茁42 水平的变化。结果
NaHS 在实验浓度范围内呈剂量依赖性下调BACE1mRNA 及蛋白表达,200 μmol/L 时最明显,各NaHS 组与对照组相比,差异
均有统计学意义（ P<0.05）;LY294002 抑制NaHS 诱导的Akt1蛋白磷酸化,削弱NaHS 对BACE1 蛋白的下调作用,其表达在
LY294002 预处理组与NaHS 200 μmol/L组相比,差异具有统计学意义（ P<0.05）;而PD98059 虽能抑制NaHS 导致的ERK1/2
蛋白磷酸化,但对其调节BACE1 蛋白表达无影响,PD98059 预处理组与NaHS 200 μmol/L 组相比,差异无统计学意义（ 跃
0.05）;不同处理条件下的A茁42 表达与BACE1 变化趋势基本一致。结论外源性H2S 下调PC12 细胞BACE1 表达,其机制可
能与PI3-K/Akt 信号通路的激活有关,而与MAPK/ERK1/2 通路无关。     

纤维连接蛋白诱导人胚胎肺纤维细胞增殖的MAPK信号转导通路研究

目的 探讨纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺纤维细胞(HFL1)增殖的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路.方法 采用不同浓度FN刺激HFL1,观察细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059、p38蛋白激酶抑制剂SB203580对FN诱导HFL1增殖作用的影响.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况.结果 FN对HFL1诱导增殖作用呈剂量依赖性升高趋势,在50 ng/ml时作用显著;PD98059和SB203580可抑制FN诱导的HFL1细胞增殖.结论 FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过MAPK信号转导途径实现.     

丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1对缺氧诱导因子-1转录活性调节机制的研究

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)参与缺氧诱导因子-1(HIF-1)转录活性调节的机制。方法采用Western印迹检测常氧及缺氧状态下磷酸化细胞外信号调节激酶ERK和总ERK在胃癌细胞系SGC7901中的表达;利用脂质体将正义真核表达载体及针对MKP-1的小干扰RNA载体转入SGC901细胞;借助双荧光素酶基因报告系统(dual luciferase reporter,DLR)检测ERK通路抑制剂PD98059对SGC7901细胞中HIF-1转录活性的影响。结果(1)缺氧时磷酸化ERK在SGC901中的含量增加,而总ERK的表达不变;(2)缺氧12h时不同浓度的PD98059均能抑制HIF-1的转录活性;而p38通路抑制剂SB203580对HIF-1的转录活性无影响;(3)将针对MKP-1的小干扰RNA载体和空载体分别瞬时转入SGC7901细胞,转染24h后,缺氧12h时磷酸化ERK在小干扰。RNA载体转染细胞(U6M2)的表达高于空载体转染细胞(U6);(4)不同浓度的PD98059均能够抑制U6和U6M2细胞中HIF-1的转录活性,当PD98059浓度达50μmol／L以上时,U6和U6M2细胞中HIF-1的转录活性差异无统计学意义。(5)不同浓度的PD98059均能够抑制U6和U6M2细胞血管内皮生长因子(VEGF)的产生,当PD98059浓度达50μmol／L以上时,VEGF的分泌量在U6和U6M2细胞中差异无统计学意义。结论在胃癌细胞系SGC7901中,缺氧时MKP-1通过灭活ERK的途径参与HIF-1转录活性的调节。     

ERK1/2介导的bFGF在乳腺癌细胞系MCF-7增殖中的作用

目的 观察Ras-Raf-ERK1/2途径介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖的影响,探讨bFGF及其信号传导途径与乳腺癌发生及发展的关系.方法 应用细胞免疫组织化学技术检测不同浓度bFGF处理细胞后ERK1/2蛋白的表达;应用蛋白印迹技术检测不同浓度、不同时间bFGF和bFGF+PD98059处理MCF-7细胞后,细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达水平的变化.结果 经bFGF不同浓度(0、12.5、25及50 ng/mL)处理MCF-7乳腺癌细胞系后,ERK蛋白表达随着浓度的增加而增强,且与bFGF水平呈剂量依赖关系;以最佳工作浓度25 ng/mLbFGF处理MCF-7乳腺癌细胞系不同时间后,其表达活性明显高于对照组和bFGF+PD98059组.加入bFGF抑制剂PD98059后,bFGF诱导MCF-7细胞系p-ERK1/2活性的作用受到抑制,ERK蛋白表达明显下调.结论 bFGF通过Ras-Raf-ERK1/2途径的介导,促进了MCF-7细胞的增殖,进而抵抗无血清诱导的凋亡.抑制剂PD98059可阻断此诱导作用,使ERK表达明显下调.ERK信号传导通路可能是乳腺癌侵袭和转移的重要途径,ERK1/2和bFGF的表达可为乳腺癌治疗的靶点提供理论依据.     

PD98059对肝癌HepG2细胞Tec信号转导作用的初步研究

目的探讨MEK1抑制剂PD98059对肝癌细胞株HepG2细胞中Tec(tyrosine kinase expressed in hepatocellular carcinoma)及ERK2作用.方法免疫细胞化学方法检测Tec、ERK2在HepG2细胞中的表达;用RT-PCR和Westernblot方法检测,不同浓度PD98059处理细胞后,HepG2细胞中的Tec、ERK2 mRNA及蛋白表达.结果Tec、ERK2在HepG2细胞中呈高表达,PD98059明显影响HepG2细胞Tec、ERK2 mRNA以及蛋白表达,呈剂量依赖性,40 μmol/LPD98059细胞抑制最明显.结论Tec可能是肝癌细胞内Ras/Raf/ERK信号转导途径上游的信号蛋白,与Ras/Raf/ERK信号转导通路存在着某种信号联系.     

PD98059抑制哮喘中TGF-β1诱导的人支气管上皮细胞上皮间质转化进程

目的 探究PD98059对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人支气管上皮细胞BEAS-2B上皮间质转化(EMT)进程的影响及可能的分子机制。方法 本研究采用人支气管上皮细胞(BEAS-2B),使用TGF-β1诱导BEAS-2B上皮间质转化模型,使用ERK1/2抑制剂PD98059探究抑制ERK/MAPK信号转导是否影响EMT进程。通过免疫荧光检测BEAS-2B气道重塑模型α-SMA蛋白的表达及定位;CCK-8法检测各组细胞存活率;Edu实验检测各组细胞增殖能力水平;transwell实验检测各组细胞迁移能力水平;Western blot检测各组EMT标志蛋白表达及ERK/MAPK通路的激活情况。结果 与正常组相比,模型组α-SMA表达增加,α-SMA在BEAS-2B细胞胞质上表达。PD98059在40μmol/L浓度与5 ng/mL TGF-β1共处理抑制BEAS-2B细胞生长(P<0.05)。与三组Edu阳性率无显著差异(P>0.05)。与正常组相比,模型组迁移细胞数增加(P<0.05),上皮间质化标志蛋白表达增加(P<0.05),p-ERK蛋白表达增加(P...     

牛膝多肽可能通过ERK1/2途径诱导PC12细胞向神经元分化

目的:研究牛膝多肽(ABPP)诱导PC12细胞向神经元分化的作用,初步探讨ABPP作用于PC12细胞的信号转导途径?方法:以体外培养的PC12细胞为研究模型,观察在低血清的情况下不同浓度ABPP(0.25?0.50?1.00 μg/ml)诱导PC12细胞发生的形态学改变?采用免疫荧光细胞化学法,观察神经丝蛋白(NF-H)在ABPP诱导分化的PC12细胞中的表达;采用Western blot法观察ABPP(1.0 μg/ml)加药后不同时间段(0?6?12 h和1?2?3?7 d)和不同浓度ABPP(0.25?0.50?1.00 μg/ml)加药2 d后对PC12细胞ERK1/2活性的影响,同时应用ERK1/2特异性拮抗剂PD98059与ABPP共培养PC12细胞,分析ABPP对PC12细胞的作用与ERK1/2通路的关系?结果:ABPP处理3 d后,部分PC12细胞开始出现神经元样的形态?随着加药时间延长具有神经元样的细胞逐渐增多,到7 d时,可以见到神经生长因子(NGF)和ABPP处理组PC12细胞的突起都显著增多,能形成网络;14 d时,这种现象愈发显著?加药后7 d和14 d,ABPP各浓度组的细胞分化率以及细胞突起长度均明显提高,且存在明显的剂量反应关系?加药第7天和第14天,ABPP高剂量组与NGF组的PC12细胞均出现NF-H标记阳性的分化细胞?ABPP对ERK1/2的激活作用存在明显的量效关系,以1.0 ug/ml作用2 d为最大?当用PD98059抑制ERK1/2的活化时,ABPP对ERK1/2的激活作用被部分阻断?结论:ABPP具有诱导PC12细胞神经元性分化的作用,此作用可能是通过ERK1/2信号转导途径实现的?     

白藜芦醇抑制胃癌细胞株MKN45增殖的机制研究*

目的 通过研究白藜芦醇抑制胃癌MKN45细胞增殖及对丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路的影响,探讨白藜芦醇抗胃癌的作用机制。方法 体外常规培养胃癌MKN45细胞,将细胞分为对照组、MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059组（PD98059组）、白藜芦醇低剂量组（100?μmol/L）、 白藜芦醇高剂量组（400?μmol/L）。各组细胞处理1、2和4?h后,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blotting法检测Ras、Raf、MEK、ERK1/2蛋白的表达,细胞免疫化学法检测Ras、Raf、MEK、ERK1/2蛋白荧光强度的变化。结果 与对照组比较,PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞在处理1、2和4?h后,细胞增殖受到抑制（P?<0.05）,且呈时间剂量依赖性;PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞Ras、Raf、MEK和ERK1/2表达下降,差异有统计学意义（P?<0.05）,且白藜芦醇的作用呈剂量依赖性（P?< 0.05）;MEK和ERK1/2蛋白主要定位于细胞质中,且PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞ERK1/2的荧光强度均减弱。结论 白藜芦醇呈剂量依赖性抑制胃癌细胞株MKN45的增殖,可能与抑制MEK/ERK信号通路,减弱Ras、Raf、MEK和ERK1/2的表达有关。     

FGF8b调控前列腺癌细胞上皮间质转化的分子机制

目的:探讨成纤维细胞生长因子8b(fibroblast growth factor 8b,FGF8b)促进前列腺癌DU145细胞上皮间质转化的分子机制。方法:先选取3组细胞,分别为空白对照组(DU145细胞)、阴性对照组[(DU145细胞转染空白质粒(简称pcDNA3.1/DU145)]和实验组[DU145细胞转染FGF8b(简称FGF8b/DU145)]。采用Western印迹检测细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路活性,然后将FGF8b/DU145细胞及DU145细胞在PD98059(ERK激酶抑制剂)作用下分为4组:A组为2%胎牛血清(FBS)处理的FGF8b/DU145细胞;B组为2%FBS+PD98059(50μmol/L)处理的FGF8b/DU145细胞;C组为2%FBS处理的DU145细胞;D组为2%FBS+PD98059(50μmol/L)处理的DU145细胞,培养观察细胞形态学的变化,最后Western印迹和Transwell小室检测各组细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的变化以及细胞的迁移能力改变。结果:实验组ERK1/2活性明显高于空白对照组和阴性对照组。给予PD98059后,B组与未给予PD98059组的A组相比,上皮细胞标志物上皮钙黏素蛋白表达量明显上调(P<0.05);间质标志物波形蛋白表达量明显下调(P<0.05)。细胞迁移试验结果提示:在给予PD98059后,B组FGF8b/DU145细胞的迁移能力与A组相比明显减弱。结论:FGF8b调控前列腺癌细胞DU145发生上皮-间质转化,可能由ERK激酶通路介导,MAPK激酶1作为该信号通路的关键因子之一,可能是干预前列腺侵袭转移的有效靶点。     

PMA和PD98059对全反式维甲酸抑制HepG2细胞表达OPN的影响

目的研究佛波醇酯(PMA)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)抑制剂PD98059对全反式维甲酸(ATRA)体外抑制人肝癌细胞株(HepG2)表达骨桥蛋白(OPN)的影响及其机制的初步探讨。方法PMA、PD98059分别处理经ATRA处理的肝癌细胞HepG2,光镜下观察细胞形态,West-ernblot检测骨桥蛋白(OPN)、ERK1/2表达及其磷酸化变化,ImagePro软件分析各条带灰度值变化并做统计学分析。结果在ATRA显著抑制肝癌细胞表达OPN并诱导细胞分化的基础上,PMA可刺激OPN表达,这种作用可被PD98059明显抑制。结论激活ERK1/2通路可逆转ATRA抑制HepG2表达OPN的作用。     

IGFBP2增强IGF-1诱导的HepG2细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)对胰岛素样生长因子-1(IGF-1)诱导人源肝癌(HCC)细胞株HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法选用15.6、31.2、62.5、125、250 ng/ml的IGFBP2与50 ng/ml的IGF-1联合刺激HepG2细胞。用CCK-8法检测细胞增殖,transwell法检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测细胞内信号通路相关蛋白的活化和表达。结果与IGF-1单独刺激相比,IGFBP2与IGF-1联合作用可增强HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力;IGFBP2与IGF-1联合刺激增加HepG2细胞株中IGF1R、Akt和ERK磷酸化水平,而对总表达无明显改变,同时上调早期生长反应蛋白1(EGR1)的表达。结论 IGFBP2通过活化Akt及ERK信号通路增强IGF-1诱导HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的能力。     

ERK和P38MAPK在转化生长因子-β1诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白中的作用

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)和P38丝裂原活化的蛋白激酶(P38MAPK)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白中所介导的作用。方法:用Westernblot检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白合成以及ERK和P38MAPK的磷酸化。用PD98059和SB203580分别来抑制ERK和P38MAPK的活性。结果:加入TGF-β1后,系膜细胞ERK、P38MAPK磷酸化水平逐渐增加,5小时达高峰。TGF-β1显著增加系膜细胞纤维连接蛋白的表达。用PD98059预处理能增加TGF-β1引起的纤维连接蛋白合成,且具有浓度依赖性。SB203580预处理能降低TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达,也具有浓度依赖性。结论:ERK活化可能负性调控TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达,而P38MAPK活化对其则可能起正性调控作用。     

二烯丙基二硫通过细胞外信号调节激酶途径调节HepG2细胞Survivin表达

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法W estern b lot法检测survivin、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）和p-ERK1/2的表达;AO/EB染色观察细胞形态学变化。结果ERK1/2抑制剂PD98059抑制DADS诱导survivin表达的作用。PD98059与DADS联合应用可以促进HepG2细胞凋亡。结论DADS诱导HepG2细胞survivin的表达与ERK1/2信号通路有关。     

PD98059对bFGF诱导的CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)激酶MEK抑制剂PD98059对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用.方法以不同浓度的bFGF和PD98059诱导CAOV3细胞,通过细胞计数法MTT比色法观察PD98059对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪测定细胞各周期细胞百分数的变化;利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法,液体闪烁测定ERK活性的变化.结果bFGF使该细胞株增殖比明显增加,而PD98059使该细胞株增殖比明显下降,在一定浓度范围内,其程度均随浓度增高而增强;CAOV3细胞受到bFGF刺激后,由G0 G1期进入S和G2 M期的细胞明显增多,在PD98059的作用下,由G0 G1期进入S和G2 M期的细胞明显减少,并在一定浓度范围内成剂量依赖性,与对照组比较,差异显著;随着bFGF浓度的增加,CAOV3细胞ERK活性随之升高,当bFGF浓度为75ng/ml时,ERK活性达到峰值,PD98059抑制细胞内ERK活性,与PD98059浓度呈剂量依赖效应.结论PD98059对bFGF引起的细胞增殖具有抑制作用,bFGF可能通过激活Ras-Raf-ERK信号转导途径来调控CAOV3细胞增殖,PD98059可有效阻滞此传导途径.     

ERK1/2在H2S后处理缺氧复氧心肌细胞中的表达及意义

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)在硫化氢后处理缺氧复氧心肌细胞中的表达及意义。方法:建立心肌细胞株H9C2缺氧复氧模型并进行硫化氢后处理。实验分5组:缺氧复氧组(H/R)、硫化氢后处理组(H2S)、硫化氢后处理并ERK抑制剂组(H2S+PD)、ERK抑制剂组(PD)和对照组(Control)。各组心肌细胞使用real-time PCR检测ERK1/2 m RNA的表达,Western blot检测细胞ERK1/2蛋白的表达,细胞增殖-毒性检测法(cell counting Kit-8,CCK-8)检测细胞的增殖率,并通过流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:real-time PCR结果显示ERK1/2 m RNA基因表达在H2S组(1.374±0.270)心肌细胞与H/R组(0.590±0.046)、H2S+PD组(0.895±0.106)以及PD组(0.211±0.025)比较差异有统计学意义(F=23.000,P=0.000);H2S组(1.374±0.270)大鼠H9C2细胞ERK1/2m RNA出现相对明显表达(P=0.005),而H2S+PD组(0.895±0.106)较H/R组(0.590±0.046)表达明显(P=0.027);同样ERK1/2蛋白表达在H2S组(ERK1:1.986±0.184;ERK2:1.993±0.175)的心肌细胞与H/R组(ERK1:1.317±0.179;ERK2:1.062±0.161)、H2S+PD组(ERK1:1.615±0.12;ERK2:1.328±0.047)以及PD组(ERK1:0.925±0.42;ERK2:0.735±0.369)表达组间差异有统计学意义(F1=5.15,P1=0.016,F2=5.44,P2=0.045);在CCK-8法检测结果显示H2S组的心肌细胞较其余各组增殖率明显增加;流式细胞仪检测结果提示H2S组的心肌细胞凋亡率较其余各组明显降低。结论:经硫化氢后处理的缺氧复氧心肌细胞ERK m RNA以及ERK蛋白表达明显上调,增殖率明显提高,凋亡率差异明显。可能是由于加入外源性信号因子硫化氢激活缺氧复氧心肌细胞ERK1/2信号转导通路,有利于心肌细胞损伤的修复,进而产生心肌保护作用。     

ERK1/2信号通路在OX-LDL诱导的血管平滑肌细胞TLR4 mRNA表达中的作用

目的探讨ERK1/2信号通路在氧化性低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）Toll样受体-4（TLR4）mRNA表达中的作用。方法采用贴块法培养大鼠VSMCs,在氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）及PD98059（ERK1/2特异性抑制剂）作用下采用RT-PCR检测VSMCs TLR4 mRNA的表达,用Westernblotting检测ERK1/2磷酸化水平的变化。结果OX-LDL使VSMCs ERK1/2磷酸化水平升高;PD98059抑制ERK1/2的磷酸化;OX-LDL刺激VSMCs上调TLR4 mRNA的表达（P〈0.05）;PD98059预孵育后TLR4 mRNA的表达较单独OX-LDL刺激情况下降低（P〈0.05）。结论OX-LDL通过或部分通过ERK1/2信号通路介导VSMCs TLR4 mRNA的表达。     

水飞蓟宾对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响及机制研究

目的 研究水飞蓟宾(silibinin, SB)对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响,并探究其作用机制。方法 CCK-8检测不同浓度SB对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响,筛选SB作用浓度。将细胞分为9组：对照组、SB-L(水飞蓟宾低剂量)组、SB-M(水飞蓟宾中剂量)组、SB-H(水飞蓟宾高剂量)组、PD98059(ERK1/2信号抑制剂)组、SB202190(p38 MAPK抑制剂)组、PD98059+SB组、SB202190+SB组和顺铂组;CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell观察各组细胞侵袭情况,实时PCR检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK 1/2)和p38 mRNA表达水平,Western blot检测MMP-2、MMP-9、ERK1/2、p38、p-ERK1/2和p-p38蛋白表达水平。结果 与对照组比较,其余各组细胞的增殖率和侵袭细胞数均显著降低(均P<0.05),MMP-...     

有丝分裂原激活蛋白激酶信号传导通路在三苯氧胺非雌激素拮抗肿瘤中的作用

目的 研究有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号传导通路在三苯氧胺（TAM）非雌激素拮抗的抗肿瘤机制中发挥的作用。方法 应用TAM与MEK抑制剂PD98059处理MCF-7细胞,用Western印迹法检测p-ERK表达情况。用MTT法检测细胞增殖状态,用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡。结果 TAM抑制ERK活化,抑制细胞G1/S期转化。促进细胞凋亡,联合应用PD98059和TAM,可以协同作用。结论 抑制MAPK信号传导通路可能是ATM非雌激素拮抗的抗肿瘤机制之一。