肿瘤坏死因子-α对体外培养的人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3和基层金属蛋白酶-9表达的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α，（tumor necrosis factor-α．TNF—α）对体外培养的人眼小梁细胞基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP-3、MMP-9）表达的影响。方法 对人眼小梁细胞（humantrabecular cells，HTCs）进行体外原代培养及传代培养。取传3代的小梁细胞分别施加含TNF-α终浓度为0（对照组）、1mg／ml、10mg／ml、25ng／ml的无血清培养液．48h后采用免疫细胞化学法观察小梁细胞MMP-3、MMP-9的染色变化。对结果进行计算机图像分析并进行统计学检验．结果 利用免疫细胞化学法检测1ng／ml、10ng／ml、25ng／ml的TNF-α实验组小梁细胞MMP-3的平均灰度值分别为138．63±8．15、138．73±7．02、129.25±10．47．均低于对照组平均灰度值143．53±6．01．且各实验组与对照组比较差异均有显著性（P〈0．05）：实验组小梁细胞MMP-9的平均灰度值分别为137．60±11．53、125．20±17．29、119．88±12．47．均低于对照组平均灰度值145．30±7．05．且各实验组与对照组比较差异均有显著性（P〈0．05）。结论 TNF-α在-定范围内促进小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达．增加了小梁网异常堆积的细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的降解，使房水流出增加，眼压降低。     

NF-κB活性对TNF-α调节小梁细胞表达MMP-3和MMP-9的影响

目的探讨核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是否参与肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）调节人眼小梁细胞（human trabecular cells，HTCs）表达基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinases-3，MMP-3）和基质 金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinases-9，MMP-9）的过程。方法采用RT-PCR法和酶谱分析法（zymography）检测体外培养的人眼小梁细胞经0ng／ml（对照组）、lng／ml、10ng／ml、25ng/ml TNF-α处理24h后，细胞表达MMP-3、MMP-9的量；运用NF-κB的特异抑制剂二硫氨基甲酸吡啶（pyrrolidine dithocarba-mate，PDTC）抑制NF-κB的活化，观察TNF-α对体外培养的HTCsMMP-3，MMP-9表达影响的改变。结果运用RT-PCR法和酶谱分析法研究均发现经浓度为1ng／ml、10ng／ml、25ng／ml的TNF-α处理的细胞在mRNA和上清液中活性蛋白水平均能增加MMP-3、MMP-9的表达，各组mRNA／β-actin吸光度比值和条带酶解量与对照组相比差异均有显著性（P〈0．05）。提前30min加入PDTC，MMP-3、MMP-9的表达量分别较未加入PDTC组表达量明显减少．差异有显著性（P〈0．05）。结论TNF-α可上调MMP-3及MMP-9的表达。PDTC能够下调TNF-α对小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达，因此推测NF-κB可能参与MMP-3和MMP-9转录的启动．     

白细胞介素-1α对猪小梁细胞基质金属蛋白酶／基质金属蛋白酶抑制剂表达的影响

背景房水外流通路的阻塞或小梁网细胞外基质（ECM）的异常堆积导致房水流畅系数降低是引起眼压升高的原因之一,基质金属蛋白酶（MMPs）和组织金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）的平衡对ECM的代谢至关重要,白细胞介素-1α（IL-1α）可以通过调节MMPs的表达而调节房水的外流。目的研究猪重组IL-1α对体外培养的猪眼小梁细胞MMP-2、MMP-3及TIMP-1表达的影响。方法从猪眼取出带有小梁组织的巩膜,用组织块培养法培养小梁细胞并进行传代,第3代的猪小梁细胞应用纤维连接蛋白（FN）和层黏连蛋白（LM）进行鉴定。第3代小梁细胞血清饥饿培养24h后分为2组,对照组加入无血清培养基,IL组加入10m／L IL-1α,分别培养30min。采用细胞免疫化学法分析IL组MMP-2、MMP-3及TIMP-1蛋白在培养小梁细胞中的表达;采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测小梁细胞中MMP-2mRNA、MMP-3mRNA及TIMP-1 mRNA的表达,并与对照组的检测结果进行比较。结果传3代的细胞对FN和LM呈现阳性反应。与对照组比较,IL组小梁细胞中MMP-3和TIMP-1蛋白的表达量（A值）明显升高,差异均有统计学意义（t=-7．694、t=-5．199,P〈0．05）,但2组间小梁细胞中MMP-2表达的差异无统计学意义（t=-2．365,P〉0．05）。IL组小梁细胞中MMP-3mRNA和TIMP-1mRNA的表达量（A值）明显高于对照组,差异均有统计学意义（t=-3．025、t=-1．921,P〈0．05）,而2组间小梁细胞中MMP-2mRNA的表达差异无统计学意义（t=-1．173,P〉0．05）。结论外源性IL-1α能增加猪眼小梁细胞中MMP-3、TIMP-1的表达,引起MMP-3／TIMP-1平衡改变,促进小梁网ECM的分解,增加房水外流,而对MMP-2的表达无影响。     

转移生长因子-β2介导的小梁细胞纤维联结蛋白的mRNA及蛋白质的表达

目的探讨转移生长因子-β2（TGF—β2）对猪眼小梁细胞中纤维联结蛋白的mRNA及蛋白质表达的影响。方法经器官培养法（organ culture）2～3天后，分组的猪眼前段分别注入浓度为0．45ng／ml（原发性开角型青光眼前房水中TGF—β2的浓度）和0．18ng／ml（正常人眼前房水中TGF—β2的浓度）的活性TGF—β2，对照眼灌注不含TGF—β2的培养基，将猪眼前节经固定、石蜡包埋和切片，通过原位杂交和免疫组化的方法检测小梁网细胞中纤维联结蛋白的mRNA和蛋白质的表达，对照组采用同样的方法检测。结果在灌注含有0．45ng／ml活性TGF—β2的标本中，小梁细胞中纤维联结蛋白的杂交信号和免疫反应强度均呈强阳性，而在灌注含有0．18ng／ml TGF—β2的标本中，小梁细胞其杂交信号和免疫反应强度均较弱，在对照组中，杂交信号和免疫组化染色呈阴性。结论TGF—β2对灌注猪眼中小梁网的纤维联结蛋白的mRNA和蛋白质表达起正调节作用，表明猪眼小梁细胞合成的这种ECM（细胞外基质成分，即纤维联结蛋白）被房水中的TGF—β2调节，这个结论和我们以及其他研究者先前的假设是一致的，即浓度升高的活化TGF—β2可能在猪眼的小梁组织发生病理组织学改变中起着重要的作用。     

复方血栓通对猴脉络膜一视网膜内皮细胞增生、移行和管腔形成的作用

目的探讨复方血栓通干预猴脉络膜．视网膜内皮细胞（Rr／6A）参与血管生成的作用及机理。方法实验研究。本研究分为四部分：①取对数生长期RF／6A细胞进行培养,设立空白对照组、阳性对照组以及不同浓度的复方血栓通观察组．每组均加入终浓度为10ng／ml的血管内皮生长因子（VEGF）．阳性对照组加入终浓度0．20mg／ml的硫酸鱼精蛋白,复方血栓通观察组设立0．39～50．00mg／ml的多个不同浓度组。培养24h后采用酶联免疫检测仪测定各组吸光度4值,观察不同浓度的复方血栓通对VEGF诱导的RF／6A细胞增殖的影响。②设立空白对照组和终浓度为3．13、6．25、12．50mg／ml的复方血栓通组,培养24h后检测不同浓度复方血栓通对RF／6A细胞移行的影响。⑧设立空白对照组和终浓度为0．39、0．78、1．56mg／ml的复方血栓通组,培养12h后检测不同浓度的复方血栓通对RF／6A细胞管腔形成的影响;④设立空白对照组、终浓度为0．20mg／ml的硫酸鱼精蛋白阳性对照组和终浓度为1．56、3．13、6．25mg／ml的复方血栓通组,培养24h后,运用Western Blot和实时定量逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）的方法,分别检测不同浓度的复方血栓通对RF／6A细胞表达VEGF、基质金属蛋白酶2（MMP．2）蛋白和mRNA的影响。对多组计量资料进行单因素方差分析。结果①各组间4值差异有统计学意义（F=158．669,P〈0．01）,同空白对照组比较,0．78～25．00mg／ml浓度的复方血栓通对VEGF诱导的RF／6A细胞增殖具有明显抑制作用（尸均〈0．011;②复方血栓通浓度为0、3．13、6．25和12．50mg／ml时,RF／6A细胞移行数分别为123．3±13．8、114．3±15．5、54．0±6．1和40．3±10．1,组间差异有统计学意义（B36．918,P〈0．01）;与空白对照组比较,6．25和12．50mg／ml浓度的复方血栓通对RF／6A细胞移行具有明显的抑制作用（P均〈0．01）;③复方血栓通浓度为0、0．39、0．78和1．56mg／ml时RF／6A细胞内皮管腔形成数分别为20．3±2．5、12．7±2．1、9．7±1．2和0．7±0．6,组间差异有统计学意义（F=64．324,P〈0．01）;与空白对照组比较,0．39、0．78和1．56mg／mA浓度的复方血栓通对RF／6A细胞内皮管腔形成均具有明显的抑制作用（P均〈0．01）,且抑制作用随浓度增加而增强;④空白对照组、阳性对照组以及1．56、3．13和6．25mg／ml浓度的复方血栓通组VEGF和MMP．2蛋白相对含量组间差异均有统计学意义（F=343．346、1670．505,P均〈0．01）;与空白对照组比较,其余各组均具有显著抑制RF／6A细胞VEGF和MMP-2蛋白表达的作用（P均〈0.01）,复方血栓通的抑制作用随浓度增加而增强;各组VEGF和MMP-2mRNA相对含量的差异也有统计学意义（F=228．130,208．579,P均〈0．01）,与空白对照组比较,其余各组均具有显著抑制RF／6A细胞VEGFmRNA表达的作用（P均〈0．01）,复方血栓通的抑制作用随浓度增加而增强。结论复方血栓通可能通过抑制RF／6A细胞增殖、移行以及管腔形成来抑制其参与新生血管生成．其机理可能与抑制RF／6A细胞VEGF、MMP-2的表达有关。     

NF-κB对人眼小梁细胞MMP-3及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的研究NF-κB对人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3，MMP-3）及组织金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteihase-1，TIMP-1）mRNA表达的影响。方法采用原代培养的人眼小梁细胞，通过脂质体转染的方法，将P65表达质粒转染小梁细胞，24h后通过RT-PCR方法检测MMP-3及TIMP—1 mRNA的表达。结果P65转染后MMP-3 mRNA的表达明显增高，与正常对照组相比差异有显著性（P〈0．05），TIMP—1 mRNA的表达与正常对照组相比无明显改变（P〉0．05）。结论NF—κB的活化可激活MMP-3的表达，提示NF-κB信号通路参与了小梁网外引流通道的调控。     

白细胞介素-1α对培养的人眼小梁细胞吞噬功能的影响

目的观察白细胞介素-1α（IL-1α）对体外培养的人眼小梁细胞（HTM）吞噬功能的影响。方法取人眼小梁组织进行小梁细胞体外培养,取传3～5代的人眼小梁细胞,加入不同浓度的IL-1α的DMEM-F12培养液,用倒置相差显微镜、光镜、电镜观察细胞吞噬功能的变化。结果小梁细胞吞噬乳胶微球数与IL-1α浓度（F=3．603,P=0．046）和作用时间（F=15．846,P=0．005）均有相关性（F=18．069,P=0．000）。结论IL-1α可以直接损害体外培养的人眼小梁细胞吞噬功能,其吞噬程度与IL-1α作用时间和浓度相关。     

可溶性CD44分子对原发性开角型青光眼患者小梁网细胞凋亡的影响

目的 探讨不同浓度的可溶性CD44分子(soluble CD44,sCD44)对原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)患者小梁网细胞凋亡的影响,以及研究sCD44与POAG发病的关系.方法 采用组织块培养法原代培养POAG患者小梁网细胞,取传3代的小梁网细胞分别加入含sCD44终浓度为0ng/ml(对照组),l ng/ml,5 ng/ml,10 ng/ml,25 ng/ml,50 ng/ml的无血清培养基,分别培养24h后收集细胞,采用CCK-8法、荧光显微镜和流式细胞仪法,研究sCD44对POAG患者小梁网细胞凋亡的影响.结果 通过CCK-8法检测发现:随着sCD44终浓度的增加,sCD44对POAG患者小梁网细胞的抑制作用增强,且各实验组与对照组及各实验组之间相比差异有统计学意义(P＜0.05);通过荧光显微镜观察显示随着sCD44终浓度的增加,早期和晚期凋亡细胞明显增多;通过流式细胞仪法检测sCI44终浓度为l ng/ml,5 ng/ml,10 ng/ml,25 ng/ml,50 ng/ml实验组小梁网细胞凋亡率分别为10.73±0.02,17.33±0.03,21.15±0.02,25.13±0.03,30.00±0.03,均高于对照组小梁网细胞凋亡率2.56±0.02,且各实验组与对照组及各实验组之间相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 sCD44在一定浓度范围内可以抑制POAG患者小梁网细胞的增殖,促进细胞的凋亡,并且呈现一定的剂量依赖性,sCD44可能通过作用于小梁网细胞间接参与POAG的发病过程.     

NF-κB活性对TNF-α调节小梁细胞表达MMP-3和MMP-9的影响

目的 探讨核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是否参与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)调节人眼小粱细胞(human trabecular cells,HTCs)表达基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinases-3,MMP-3)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的过程.方法 采用RT-PCR法和酶谱分析法(zymography)检测体外培养的人眼小梁细胞经0 ng/ml(对照组)、1 ng/ml、10 ng/ml、25 ng/ml TINF-α处理24 h后,细胞表达MMP-3、MMP-9的量;运用NF-κB的特异抑制剂二硫氨基甲酸吡啶(pyrrolidine dithocarba-mate,PDTC)抑制NF-κB的活化,观察TNF-α对体外培养的HTCs MMP-3,MMP-9表达影响的改变.结果 运用RT-PCR法和酶谱分析法研究均发现经浓度为1ng/ml、10 ng/ml、25 ng/ml的TNF-α处理的细胞在mRNA和上清液中活性蛋白水平均能增加MMP-3、MMP-9的表达,各组mRNA/β-actin吸光度比值和条带酶解量与对照组相比差异均有显著性(P＜0.05).提前30 min加入PDTC,MMP-3、MMP-9的表达量分别较未加入PDTC组表达量明显减少,差异有显著性(P＜0.05).结论 TNF-α可上调MMP-3及MMP-9的表达,PDTC能够下调TNF-α对小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达,因此推测NF-κB可能参与MMP3和MMP-9转录的启动.     

转化生长因子β1对体外培养的牛眼小梁细胞MMP3和MMP9表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对培养的牛眼小梁细胞基质金属蛋白酶（MMPs)的影响。房水引流阻力在原发性开角型青光眼（POAG）发病机制中的作用。方法 对牛眼小梁细胞进行体外原代及传代培养，对传三代小梁细胞分别施加含TGF-β1终浓度为0、0.5,1,5ng/ml的培养液，48h后行MMP3及MM农艺师免疫组人SP法染色。结果进行计算机图像分析并行统计学检验。结果 体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP3及MMP9，TGF-β1可抑制小梁细胞MMP3及MMP9表达。结论 TGF-β1在一定范围内抑制小梁细胞MMP3及MMP9表达，造成小梁网ECM的异常堆积，导致房水引流阻力增高。     

IL-1α对体外培养的牛小梁网细胞MMPs及TIMPs表达的影响

目的 观察白细胞介素-1α（IL-1α）对体外培养的牛小梁网细胞分泌基质金属蛋白酶（MMPs）和基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）的影响，探讨IL-1α降低眼压的机制。方法 采用酶谱分析法和反向酶谱分析法检测牛小梁网细胞MMP和TIMPs的分泌，并观察IL-1α对MMP和TIMPs分泌的调节作用。结果 体外培养的牛小梁细胞分泌MMP-2、MMP-3、MMP-9和TIMP-1；IL-1α对MMP-2、MMP-3、MMP-9的分泌有促进作用，且呈时间和浓度依赖性，其中以IL-1α对MMP-3的分泌促进作用最强；IL-1α对TIMP-1的分泌也有微小的增加作用。结论 IL-1α能够显著促进牛小梁网细胞分泌MMPs，打破了MMP／TIMPs的平衡，可能进一步促进小粱网细胞外基质（ECM）的分解，增强房水流动性。     

高糖环境下白细胞介素1β对大鼠视网膜Müller细胞谷氨酰胺合成酶的影响

目的探讨高糖环境下白细胞介素1β（IL-1β）对视网膜Mǚller细胞谷氨酰胺合成酶的影响及其机制。方法将体外培养的大鼠Mǚller细胞随机分为对照组（5mmol／L葡萄糖）和实验组（25mmol／L葡萄糖）,分别以不同浓度的IL-1β（0、0．1、1．0、5．0、10．0ng／ml）刺激24h后,采用间接免疫荧光法和免疫印迹法检测两组细胞内谷氨酰胺合成酶（GS）和即早基因c—Jun的表达变化,使用流式细胞仪Annexin V—FITC／PI双染色法测定两组细胞凋亡的情况。结果细胞免疫荧光组化法和免疫印迹法检测显示在高糖环境下就有Mǘller细胞GS表达下降、IL-1β和c—Jun表达的升高（P〈0．05）;IL-1β刺激24h后,对照组和实验组Mǚller细胞中GS的表达都随IL-1β刺激浓度升高而逐渐降低同时c—Jun的表达随IL-1β刺激浓度的增加而升高,这一结果在高糖状态下尤为明显;流式细胞仪检测显示不同浓度的IL-1β刺激24h后,两组细胞随着IL-1β浓度的增加凋亡率明显升高,在高糖环境下细胞凋亡率的增加更加明显。结论模拟糖尿病状态下,免疫相关因子IL-1β可使GS表达下降,从而影响了谷氨酸的循环,可能间接引起神经节细胞的死亡,出现早期神经视网膜功能的障碍。其可能机制为IL-1β激活了c-Jun途径而影响GS的功能。     

人高度近视眼房水中基质金属蛋白酶-2的表达

目的比较高度近视及正视的白内障患者房水基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的表达情况,探讨房水中MMP-2与高度近视的相关性。设计实验研究。研究对象30例年龄相关性白内障患者的房水。方法白内障手术中收集合并高度近视患者房水15例（实验组）及正视眼患者房水15例（对照组）。将房水标本通过蛋白质印迹法检测MMP-2酶原和活化MMP-2的表达。主要指标房水MMP．2的表达灰度值。结果实验组中MMP-2酶原表达量（430．4±57．3）大于活化MMP-2（294．5±35．2）（t=10．400,P=0.000）;对照组中MMP。2酶原表达量（402．8±57．7）大于活化MMP-2（280．3±49．7）（t=8．400,P=0．000）。实验组和对照组间比较,MMP．2酶原（t=1．320,P=0．200）及活化MMP-2（t=0．900,P=0．375）表达量差异均无统计学意义。结论在本样本有限的研究中,未检测到高度近视眼患者房水中MMP-2表达量的异常,房水中MMP-2有少量以活化形式存在,大部分以酶原形式存在,具有应激活化的潜能。（眼科,2009,18：260-264）     

增殖性糖尿病视网膜病变玻璃体SDF-1和VEGF的含量分析

研究增殖性糖尿病视网膜病变患者玻璃体基质细胞衍生因子（Stromalcell—derivedfactor-1。SDF-1）和血管内皮生长因子（Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）的浓度，及其相互作用关系。方法：酶联免疫吸附法（Enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）检测玻璃体内SDF-1和VEGF的含量，每个标本重复3次。实验组为增殖性糖尿病视网膜病变（Proliferativediabeticretinopathy，PDR）的住院患者30例，对照组为同期行玻璃体切除术的特发性黄斑裂孔患者12例。结果：PDR患者玻璃体VEGF的平均浓度为（2865．87±387．85）pg／ml，明显高于特发性黄斑裂孔组[（142．42±21．03）pg／ml，P〈0．0001]。增殖性糖尿病视网膜病变患者玻璃体SDF-1的含量平均为（298．40±24．57）pg／ml，对照组为（86．9l±15．89）pg／ml，两组的差异具有统计学意义（P〈0．0001）。在30例PDR患者玻璃体内VEGF和SDF-1的含量表现为正相关（Pearson相关系数r=0．62，P〈0．001）。结论：增殖性糖尿病患者玻璃体SDF-1和VEGF的含量均高于非糖尿病患者，提示SDF-1和VEGF共同参与了增殖性糖尿病视网膜病变患者病理性新生血管的形成过程。     

巨噬细胞条件培养液及重组人IL-1β对RPE细胞产生MMP-2及MMP-9的影响

目的 观察巨噬细胞条件培养液（MφM）及白细胞介素-1β（IL-1β）对视网膜色素上皮（RPE）细胞分泌基质金属蛋白酶（MMP）-2及MMP-9的影响,探讨巨噬细胞与RPE细胞之间的相互关系.方法 在人RPE细胞培养液中加入50%体积分数的人MφM作用48 h;加入终质量浓度为10、50、100、200 ng/ml重组人IL-1β作用12、24、48 h.用酶谱法检测RPE细胞培养液中MMP-2及MMP-9,凝胶图像扫描分析仪定量.结果 MφCM促RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9,促MMP-9分泌尤其明显;48 h内IL-1β促RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9具有时间和质量浓度依赖性.结论 MφCM中含有促RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9的因子,IL-1β是巨噬细胞产生的主要炎性因子,提示巨噬细胞可能通过分泌细胞因子调节RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9,参与细胞增生、迁移等病理过程.     

bFGF、EGF和NGF对人角膜内皮细胞生长调控的实验研究

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（Basicfibroblastgrowthfacfor，bFGF）、表皮细胞生长因子（Epidermalgrowthfactor，EGF）和神经细胞生长因子（Nervegrowthfactor，NGF）对体外培养的人角膜内皮细胞的生长调控作用。方法：将相同数量的人角膜内皮细胞接种于96孔板。加入浓度分别为0ng／ml、1ng／ml、3ng／ml、10ng／ml、30ng／ml、100ng／ml的EGF、bFGF和NGF进行培养。5天后MTT法用检测增殖情况。结果：在0ng／ml、1ng／ml、3ng／ml、10ng／ml、30ng／ml、100ng／ml浓度下bFGF组的平均OD值分别为：0．224±0．045、0．239±0．040、0．262±0．0342、0．278±0．0319、0．281±0．0324、0．260±0．0310。EGF组的平均OD值分别为：0．228±0．0304、0．245±0．0418、0．267±0．0454、0．275±0．0347、0．271±0．0449、0．250±0．0253。NGF组的平均OD值分别为：0．216±0．0187、0．228±0．0226、0．231±O．0225、0．242±0．0279、0．245±0．0294、0．247±0．0349。结论：bFGF在30ng／ml范围内对内皮细胞生长有促进作用，并具有剂量依赖性。高于100ng／ml时促生长作用降低。EGF在10ng／ml范围内对内皮细胞生长有促进作用，并具有剂量依赖性。高于30ng／ml时促生长作用降低。NGF本次实验剂量范用内对角膜内皮细胞生长无明显作用。     

转化生长因子-β2对牛眼小梁细胞外基质合成的影响

目的观察人眼房水中转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2, TGF-β2)对体外培养牛眼小梁细胞外基质合成的影响.方法将体外培养的第3～5代牛眼小梁细胞分为对照组和实验组,实验各组分别经0.32×103 ng/L、1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2作用48 h后,分别应用3H-脯氨酸掺入及液体闪烁测量技术、酶联免疫吸附法和放射免疫技术检测小梁细胞胶原(collagen, CA)、纤维连接蛋白(fibronectin, FN)及透明质酸(hyaluronic acid, HA)的合成.结果与对照组相比,不同浓度的TGF-β2均可促进牛眼小梁细胞CA的合成.0.32×103 ng/L、1.00×103 ng/L TGF-β2组与对照组比较差异有显著意义(q′=3.85、4.38, P<0.05),3.20×103 ng/L TGF-β2组与对照组比较差异有非常显著意义(q′=11.40, P<0.01),3H-脯氨酸掺入量呈浓度依赖性增高;1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2组促进牛眼小梁细胞合成FN, 与对照组比较差异有显著意义(q′=3.63, P<0.05) 和非常显著意义(q′=20.10, P<0.01); 1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2组均抑制牛眼小梁细胞合成HA, 与对照组比较差异有非常显著意义(q′=15.15、16.92, P<0.01).结论 TGF-β2可能在正常人眼小梁网细胞外基质的增龄性变化及原发性开角型青光眼患者小梁网及其邻管组织内细胞外基质异常沉积的过程中发挥了重要作用.     

转化生长因子β1对培养人眼小梁细胞分泌Ⅳ型胶原的影响

目的观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对培养人眼小梁细胞分泌Ⅳ型胶原的影响.方法在成功地培养人眼小粱细胞的基础上,应用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay ELISA)及免疫组织化学技术,分别观察1ng/ml TGF-β1作用于小梁细胞后培养上清液中及细胞铺片上Ⅳ型胶原的含量.结果ELISA法TGF-β1作用第一个4天,实验组Ⅳ型胶原的含量为187.50±29.01pg/ml(x±s),对照组为93.75±20.56pg/ml,两者间的差异有统计学意义.TGF-β1作用第二个4天,实验组为128.75±52.02 pg/ml,对照组为91.25±21.36pg/ml,差异无统计学意义.Ⅳ型胶原的含量在对照组之间及实验组之间也无统计学差异.免疫组化法TGF-β1作用12天,实验组铺片与对照组相比Ⅳ型胶原的阳性着色增强.结论TGF-β1可以促进培养的人眼小梁细胞分泌Ⅳ型胶原,它可能是原发性开角型青光眼患者小梁细胞外基质堆积的原因之一.眼科学报2000;16217～219.     

层粘连蛋白对人视网膜母细胞瘤株基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的影响

目的研究层粘连蛋白(laminin,LN)对人视网膜母细胞瘤株(Hxo-Rb44)基质金属蛋白酶-2(matrix metallopro-teinase,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase,MMP-9)及其mRNA表达的影响。方法在体外培养的人视网膜母细胞瘤细胞株(Hxo-Rb44)内分别加入含0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/mlLN的无血清RPMI-1640培养基,培养24h后,分别利用免疫组化SP染色法和PT-PCR检测每个实验组Hxo-Rb44表达MMP-2,MMP-9及其mRNA的含量,统计学方法比较不同实验组Hxo-Rb44表达MMP-2,MMP-9及其mRNA的差异。结果视网膜母细胞瘤细胞经LN刺激后,细胞内MMP-2和MMP-9及其mRNA表达均增加,免疫组化结果显示5μg/ml、10μg/ml、20μg/mlLN处理组MMP-2和MMP-9的染色灰度值分别是178.1±11.7和167.0±15.7、147.9±13.4和140.3±12.0、114.4±13.6和104.0±10.6,和对照组相比,差异有显著性(P<0.05),且LN浓度越高,其表达越强。5μ/ml、10!g/ml、20!g/mlLN处理组的MMP-2/β-actin、MMP-9/β-actin灰度值比值分别是0.181±0.016和0.254±0.023、0.201±0.021和0.287±0.020、0.243±0.019和0.320±0.022,与对照组相比,差异均有显著性(P<0.05),且随着LN浓度增高而增高,呈明显的量效关系。结论LN可诱导视网膜母细胞瘤细胞中表达的MMP-2和MMP-9及其mRNA增加,并呈剂量依赖型。提示LN对视网膜母细胞瘤的侵袭和转移可能具有促进作用。     

大鼠自身免疫性葡萄膜视网膜炎辅助T细胞的类细胞因子水平表达

目的观察实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（experimental autoimmune uveoretinitis，EAU）大鼠血清以及脾细胞培养上清液中辅助T细胞1／辅助T细胞2（helper T cell 1／helper T cell2，Th1／Th2）类细胞因子水平。方法用Fmoc法合成光感受器间维生素A类结合蛋白R16多肽片段，联合免疫佐剂诱导EAU动物模型。在EAU高峰期取大鼠血清，分离脾细胞，培养后取上清液，应用酶联免疫吸附法检测血清以及脾细胞培养上清液中Th1类细胞因子（interferon-γ，IFN-γ、interleukin-2，IL-2）和Th2类细胞因子（IL-4、IL-10）水平。结果EAU组大鼠血清中IFN-1和IL-2的浓度分别为（33．8±5．2）μg／L，（52．5±7．9）μg/L，显著高于空白对照组[（6．2±1．4）μg/L，（3．7±0．8）μg/L和弗氏完全佐剂对照组[（complete Freund＇s adjuvant，CFA）；（9．2±1．9）μg/L，（5．1±1．1）μg/L]（P〈0．05）；而IL-4、IL-10的浓度与空白对照组和CFA组相比差异无统计学意义。EAU组大鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ、IL-2的浓度分别为（1105．3±197．5）μg/L，（45．0±16．2）μg/L，显著高于空白对照组（5．24±1．7）μg/L，（4．1±1．3）μg/L和CFA组（25．14±5．9）μg/L，（5．1±1．9）μg/L（P〈0．01），IL4、IL-10的浓度与空白对照组和CFA组相比差异无统计学意义；CFA组大鼠脾细胞培养上清液中IFN-1的浓度明显高于空白对照组（P〈0.05），IL-2、IL-4、IL-10的浓度与空白对照组相比差异无统计学意义。结论在EAU高峰期，Th1类细胞因子水平显著升高，提示EAU是Th1细胞诱导的疾病（中国眼耳鼻喉科杂志，2008，8：280-282）