肿瘤坏死因子受体-p55在大肠癌中的表达及其意义

目的探讨大肠癌组织中肿瘤坏死因子受体（Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｐ５５, ＴＮＦＲ－Ｐ５５）表达的数目与临床病 理因素及肿瘤分期间的关系。方法用免疫组织化学ＳＡＢＣ法检测９１例大肠癌组织、８１例癌旁组织及１３例正常肠粘 膜标本中 ＴＮＦＲ－ｐ５５的表达。结果大肠癌组织中 ＴＮＦＲ－ｐ５５表达比癌旁组织及正常组织显著增高,癌旁组织 ＴＮＦＲ－ｐ５５ 表达亦显著高于正常组织。在大肠癌组织中,ＴＮＦＲ－ｐ５５表达与浆膜浸润程度和淋巴结转移与否呈负相关,即肿瘤侵及 浆膜或有淋巴结转移时 ＴＮＦＲ－ｐ５５表达低。同时,Ｄｕｋｅｓ Ａ期和 Ｂ期患者 ＴＮＦＲ－ｐ５５表达显著高于 Ｄｕｋｅｓ Ｃ期。结论 检测ＴＮＦＲ－ｐ５５的表达对判断大肠癌恶性程度,预测肿瘤浸润深度、淋巴结转移趋势及肿瘤分期有重要价值。     

X线照射对大肠癌细胞株Lovo细胞TNFR-p55表达及释放的影响

目的 研究X线照射在体外培养人大肠癌细胞株LoVo后．其膜TNFR-p55表达及释放sTNFR-p55情况。方法免疫细胞化学检测细胞膜TNFR-p55蛋白的表达．EUSA法检测培养上清中sTNFR-p55水平,流式细胞仪分析细胞凋亡率,光镜观察细胞形态变化。结果x线照射后的细胞膜TNFR-p55蛋白表达显著增强（P〈0．01）;照射后大肠癌Lovo细胞上清sTNFRR-p55水平显著低于照射前sTNFRR-p55水平（P〈0．01）;光镜发现细胞体积缩小、变圆、胞浆浓缩、核固缩深染;流式细胞仪分析细胞凋亡率显著增高（P〈0．05）。结论x线可通过上调细胞膜TNFR-p55蛋白的表达,抑制其脱落释放sTNFRR-p55到上清中,诱导细胞凋亡增强照射肿瘤的杀伤作用。     

正常妊娠与妊娠高血压综合征孕妇胎盘中肿瘤坏死因子α及其受体的变化

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）及其p55型受体（p55 TNFR）在正常妊娠及妊娠高血压综合征（妊高征）发病机制中的作用。方法：采用免疫组化法研究12例正常妊娠妇女、43例妊高征患者胎盘中胎儿面和母体面TNF-α和p55 TNFR的表达。结果：正常妊娠组与妊高征组胎盘中均可见TNF-α和p55 TNFR的表达,中、重度妊高征组表达强度较正常妊娠组与轻度妊高征组显著增加（P<0.05）,中、重度妊高征组母体 面的表达强度显著高于胎儿面（P<0.01）。 结论：正常妊娠妇女胎盘中表达少量的TNF-α和p55 TNFR,参与正常妊娠的调节。胎盘中异常增加的TNF-α与p55 TNFR可能在妊高征的发病中起重要的作用。      

TNF-α的表达及sTNF-R水平与早期自然流产相关性的研究

目的：研究肿瘤坏死因子（TNF－α），可溶性肿瘤坏死因子受体（sTNER)I和Ⅱ与早期流产的关系。方法：对孕3mo内20例正常妊娠、20例第1次自然流产（spontaneous abortion,SA)和15例反复自然流产（recurrent spontaneous abortion,RSA)妇女的绒毛和蜕膜组织应用免疫组织化学SP法检测TNF－α，应用双抗体夹心ELISA法检测上述妇女血清中sTNFRI与sTNFRⅡ。结果：（1）SA及RSA绒毛细胞滋养层和蜕膜中TNF－α的表达均明显高于对照组；合体滋养层中TNF－α的表达SA与对照组无显著性差异，而RSA显著低于对照组（P＜0．05）；（2）SA与对照组比较，sTNFRI差异有显著性（P＜0．05），sTNFRI与sTNFRⅡ在RSA中的水平较SA均有显著差异（P＜0．01）。结论：TNF－α、sTNFR与自然流产的发生发展有关。因某些病理情况引发的蜕膜中TNF－α表达增加可能是自然流产发生的一个原因，而sTNFR水平的升高则可能具有自我保护和自我稳定的生理意义。     

肿瘤坏死因子α主要通过其受体1作用于鼠肾上腺皮质Y1细胞皮质醇的表达

背景和目的：全身炎症反应综合征时肿瘤坏死因子α（TNF-α）在导致肾上腺相对不足中起着重要的作用。为探讨TNF-α是通过其哪个受体来抑制皮质醇释放,我们研究肾上腺皮质Y1细胞TNF-α受体表达情况及其受体阻断与皮质醇释放间的关系。 方法: 应用RT-PCR和免疫细胞化学方法来评估Y1细胞中的TNF受体的表达。 合成与TNF受体1（TNF-R1）DNA片段相对应的shRNA序列,并克隆于表达载体pcDNA™6.2-GW/EmGFP中,然后转染Y1细胞。采用实时定量PCR（Q-PCR）检测转染shRNA或 mock-shRNA Y1细胞TNF-R1表达的阻断率,同时对转染的Y1细胞加入TNF-α 和 ACTH,检测Y1细胞皮质醇的表达水平。 结果： RT-PCR和免疫细胞化学方法,在肾上腺皮质Y1细胞检测到TNF-R1的表达,而检测不到TNF-R2的表达。shRNA 转染的Y1细胞中TNF-R1 mRNA表达明显低于mock shRNA转染的Y1细胞（P<0.05）。通过shRNA阻断TNF-R1表达,TNF-α就不能抑制ACTH促皮质醇的合成,shRNA 转染Y1细胞的皮质醇表达水平明显高于mock-shRNA Y1细胞(P<0.05)。 结论：我们的结果显示,在肾上腺皮质中,TNF-α抑制ACTH促皮质醇的合成是通过TNF-R1受体。     

Tumor necrosis factor alpha affect hydrocortisone expression in mice adrenal cortex cells mainly through tumor necrosis factor alpha-receptor 1

Background  Tumor necrosis factor alpha (TNF-α) is important in promoting relative adrenal insufficiency (RAI) due to systemic inflammatory response syndrome (SIRS). We identified the TNF-α receptor involved in the inhibition of adrenal corticotrophin (ACTH)-stimulated hydrocortisone release by studying the expression of TNF-α receptors in adrenal cortex Y1 cells and the effect of downregulating TNF receptors on ACTH-stimulated hydrocortisone release.

Methods  We used real-time PCR and immunocytochemistry to evaluate the expression of TNF receptors on Y1 cells. TNF-receptor 1 (TNF-R1) DNA fragments corresponding to the short hairpin RNA (shRNA)-sequences were synthesized and cloned into pcDNA^TM 6.2-GW/EmGFP expression vector. Knockdown efficiency of TNF-R1 expression was evaluated in miRNA transfected and mock-miRNA transfected Y1 cells by quantitative real-time PCR (Q-PCR). Hydro- cortisone expression levels were determined in TNF-R1-knockdown and control Y1 cells treated with TNF-α and ACTH.

Results  Mouse adrenal cortex Y1 cells were positive for type I TNF-R1, but not type II TNF-receptor (TNF-R2). Blocking TNF-R1 expression resulted in loss of TNF-α-mediated inhibition of ACTH-stimulated hydrocortisone expression, suggesting a role for the TNF-R1 related signaling pathway in ACTH-stimulated hydrocortisone synthesis.

Conclusion  The inhibitory effect of TNF-α on ACTH-stimulated hydrocortisone synthesis was mediated via TNF-R1 in adrenal cortex.

     

重组人肿瘤坏死因子致肺癌细胞(LC-6)凋亡的研究

目的：探讨重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）引起肺癌细胞（ＬＣ－６）死亡的机制。方法：应用原位细胞毒性分析、ＤＮＡ解降片段琼脂糖凝胶电泳、形态学和流式细胞学测定的动态分析。结果：ｒｈＴＮＦ作用于肺癌细胞（ＬＣ－６）数小时后,引起细胞核ＤＮＡ解成寡聚核苷酸片断,说明肺癌细胞（ＬＣ－６）以细胞凋亡的方式死亡,并且细胞凋亡的程度与重组人肿瘤坏死因子作用的时间及浓度呈正相关。单纯应用放线菌素Ｄ后则肺癌细胞（     

新型重组人肿瘤坏死因子在小鼠体内的药代动力学

目的　研究新型重组人肿瘤坏死因子 (nrh TNFα)在小鼠体内的药代动力学 .方法　采用 1 2 5I标记的 nrh TNFα同位素法 ,观察 im和 iv后的体内过程 .结果　按 10 ,2 0和 4 0μg· kg- 1 3个剂量给小鼠 im nrh TNFα后在 1～ 2 h达到峰浓度 ,总放射性在体内消除较快 ,t1 / 2 为 4 .7～ 6 .5 h,所得结果均证明 Cmax和 AU C与剂量呈显著相关 (r=0 .95 ) ,与 iv给药 (10μg· kg- 1 )的血药浓度进行绝对生物利用度试验 ,其 im给药生物利用度为 0 .80 3.nrh TNFα在体内的分布以肾含量最高 ,脑浓度最低 ,但都低于同时间的血药浓度 .按 10 μg·kg- 1 im给药后 ,用 RA法测定尿和粪 2 4 h放射性总量 ,尿中放射性回收率为 86 .8% ,粪中回收率为 9.5 % ,总排泄量达给药剂量的 96 .3% .结论　 nrh TNFα在小鼠的体内代动力学符合二室模型     

结直肠癌组织中肿瘤出芽与恶性程度分析

目的:探讨结直肠癌组织中肿瘤出芽的临床病理意义.方法:应用光镜和免疫组化EnVision法观察83例结直肠癌组织中肿瘤出芽的情况.结果:83例结直肠癌中有46例肿瘤发生了出芽(55.4%).肿瘤出芽的发生率在有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P＜0.01);有淋巴管侵犯者肿瘤出芽的发生率明显高于无淋巴管侵犯者(P＜0.01),pTNM分期中,Ⅲ期结直肠癌中肿瘤出芽的检出率明显高于Ⅱ期(P＜0.01).肿瘤出芽与患者年龄、性别、肿瘤部位、大小、分化程度和血管侵犯均无关(P＞0.05).结论:肿瘤出芽是提示侵袭性或浸润性生长的组织学特征,应用CKpan进行免疫标记可提高肿瘤出芽的检出率.     

大肠杆菌表达人新型肿瘤坏死因子的纯化

制备符合临床要求的高纯度新型人肿瘤坏死因子，建立简单，高效的纯化途径。方法：用本室构建的ｎｈＴＮＦ基因工程菌，经发酵收菌，裂菌，硫酸铵盐析，Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ及Ｓ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ层析，得到高活性，高纯度的ｎｈＴＮＦ－单一色谱峰，比活性达１×１０＾９Ｕ／ｍｇ蛋白。     

人肿瘤坏死因子真核表达探讨

目的:研究人肿瘤坏死因子真核表达.方法:重组质粒(pORB2TNF-α)和线性杆状病毒(AcNPV)共转染昆虫细胞系(sf21),裂解转染细胞,ELISA方法蛋白定位,裂解物电泳评价杆状病毒重组体(AcNPV-pORB2TNF-α)表达蛋白;用6 χ His标签纯化蛋白,纯化蛋白进行蛋白印迹(Western blot).结果:转染细胞表达蛋白为可溶蛋白;转染AcNPV-pORB2TNF-α细胞裂解物电泳见35kD Xy1E蛋白条带;纯化蛋白电泳可见17kD蛋白条带并且Western blot呈阳性.结论:用构建人肿瘤坏死因子杆状病毒重组体,成功表达TNF-α蛋白.     

恒河猴肌注新型重组人肿瘤坏死因子的药代动力学

目的　研究新型重组人肿瘤坏死因子 (nrh TNFα)在恒河猴体内的药代动力学行为 .方法　采用 EL ISA法测定恒河猴 im nrh TNFα后的血药浓度 .结果　恒河猴按 40 μg·kg- 1 剂量 im nrh TNFα后 ,血液中的平均达峰时间为 1.7h;峰浓度的个体差异较大 ,范围为 5 75～ 112 0 ng· L- 1 ,平均峰浓度为 833ng· L- 1 ;药物在血液中的消除符合一房室模型 ,半衰期 T1 / 2 为 1.4～ 2 .4(平均 1.9) h.结论　 nrh TNFα im后 ,能被恒河猴吸入血 ,在血液中的消除符合一房室模型 ,在灵长类动物恒河猴的药代动力学行为与啮齿类动物小鼠的相类似 ,但吸收入血和消除均较小鼠的慢     

Increased serum and ascitic fluid levels of soluble tumor necrosis factor-p55 in hepatocellular carcinoma patients

Objective: To explore the levels of serum and ascitic fluid soluble tumor necrosis factor receptor-p55 (sTNFR-p55) and understand their clinical implication in primary hepatocellular carcinoma (HCC) patients. Methods: Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to examine the levels of sTNFR-p55 in the serum and ascitic fluid in 25 HCC patients and 25 patients with liver cirrhosis (LC). The test was also performed on the serum of 30 healthy subjects who served as control group. To assess the clinical effects of increased serum concentrations of sTNFR-p55, four parameters were analyzed by logistic regression. Results: Serum and ascitic fluid levels of sTNFR-p55 in HCC patients were significantly higher than those in LC patients and controls (P=0. 001). No significant difference was found between serum sTNFR-p55 levels in the latter 2 groups (P = 0. 19), and positive correlation between serum levels of sTNFR-p55 and that in ascitic fluid was noted in the 2 patient groups (r=1. 000, P<0. 001). Level     

检测X线照射肝癌细胞株HepG2可溶性肿瘤坏死因子受体-p75的临床意义

目的 研究X线照射在体外培养人肝癌细胞株HepG2后sTNFR-p75变化情况.方法 ELISA法检测培养上清中sTNFR-p75水平,流式细胞仪分析细胞凋亡率,光镜及透射电镜观察细胞形态变化.结果 X线照射后肝癌HepG2细胞培养上清sTNFR-p75水平显著低于照射前sTNFR-p75水平(P<0.01);光镜及透射电镜发现细胞体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染凋亡小体形成;流式细胞仪分析细胞凋亡率显著增高(P<0.05).结论 X线可通过抑制sTNFR-p75脱落到上清中,诱导细胞凋亡,增强照射肿瘤的杀伤作用.     

新型重组人肿瘤坏死因子药代动力学的实验方法

目的 为探讨新型重组人肿瘤坏死因子（nrTNF α）药代动力学而建立生物样品中nrhTNFα的检测方法。方法 （1）方法Ⅰ（RA）：动物肌注^125 Ⅰ标记的nrhTNFα后，测定各生物样品中的总放射活性；（2）方法Ⅱ（HPLC－RA）；上述生物样品无经HPLC分离后，收集并测定其中^125Ⅰ－nrhTNFα部分的放射活性；（3）方法 ⅢELISA法。结果 RA，HPLC－RA法检测的nrhTNFα质量浓度与放射性呈直线相关（RA，r=0.999HPLC－RA,r=0.999)。ELISA法证明nrhTNFα的酶联免疫检测药盒适用于nrhTNFα的检测，nrhTNFα的标准曲线与nrhTNFα的标准曲线显正相关，r=0.994,这一检测系统与其他细胞因子包括IFNα，TNFβ，IL－2和IL－6无交叉反应。结论 RA，HPLC－RA和ELISA法均可作为nrhTNFα的药代动力学实验方法。     

Tumor necrosis factor (TNF) superfamily ligands and receptors

1　TNF ligand and receptor superfamily membersTumor Necrosis Factor (TNF) supergene family and its cognate family of rel ated r eceptors (TNF-R) have expanded in the past few years to include at least 17 lig ands and 22 receptors (The New TNF Nomenclature Scheme, http://www.gene.ucl.ac.uk/users/nomenclature/genefamily/tnfinfo.html)[1]. With the exception of LTα,whichlacks a hydro phobic transmembrane region, allof the ligands are type Ⅱintegral membrane pro teins that may also function as soluble proteins. Many of the TNF superfamily ligands pair with a single, although some specific receptor, including TNFα, LT α, TRAIL, FasL, LIGHT and TRANCE/RANKL, bind to multiple receptors (Tab 1).     

肿瘤坏死因子对糖代谢的作用

目的：研究肿瘤坏死因子（ＮＴＦ）对血糖的影响。方法：对５组不同情况的实验室检测资料进行多因素回归分析。结果：人体血循环中ＴＮＦ在调整子年龄、胰岛素等变量的影响之后，仍独立的影响着代谢综合征患者血糖浓度及血胰岛素浓度。这与动物实验及体外组织培养证实的ＴＮＦ抑制胰岛素受体作用相吻合。结论：肿瘤坏死因子对糖代谢有重要的负向调节作用。     

Increase of tumor necrosis factor receptor 1 expression in women with unexplained early spontaneous abortion

Objective: To investigate membrane tumor necrosis factor receptor 1 protein expression level in decidua and concentration of soluble tumor necrosis factor receptor 1 in serum in women with unexplained early spontaneous abortion, threatened abortion, and compare the levels with healthy pregnant women. Methods: Thirty-seven women with unexplained early spontaneous abortion, 27 women with threatened abortion, and 34 healthy pregnant women undergoing artificial abortion of pregnancy at 6 - 10 weeks of gestation were selected. Decidual samples were collected when women were undergoing artificial abortion, and blood samples were collected at the same time. The level of membrane tumor necrosis factor receptor 1 in decidua was detected by flow cytometer, and the concentration of soluble tumor necrosis factor receptor 1 in sera was measured with an enzyme-linked immunosorbent assay. Results: The percentages of membrane tumor necrosis factor receptor 1 positive decidual cells were 16.42 ± 7.10 Mean ± SD for wome     

犬中等程度颌面枪弹伤后血中肿瘤坏死因子表达的意义

目的：通过研究颌面枪弹伤后肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)在血中的表达情况,探讨前炎症细胞因子与创伤并发症间的内在联系。方法：用ELISA方法检测犬颌面枪弹伤后血中不同时间点TNF－α、IL-6的表达变化情况。结果：枪弹伤后尽管犬未出现严重的创伤并发症,但血中TNF－α呈一过性高表达,表达高峰在伤后2－6h;不同的犬表达水平浓度差别较大;无需治疗可逐渐恢复正常。同时未检测到血中IL－6。结论：创伤后前炎症细胞因子的表达是机体对创伤的正常免疫应答,表达水平高低可能反应创伤的程度,但一过性的高表达并不能显加重创伤的全身反应,创伤后血中TNF－α的浓度作为一种监测伤情变化的指标可能有一定的参考价值。     

蜕膜组织TNFR1基因表达与原因不明早期自然流产关系探讨

目的检测蜕膜组织肿瘤坏死因子受体1(Tumornecrosisfactorreceptor,TNFR1)的表达含量及其组织学、细胞学定位,探讨不明原因早期自然流产与患者TNFR1基因表达的关系。方法采用流式细胞仪检测技术,检测37例孕6~10周不明原因自然流产患者(流产组)和34例同期妊娠的健康妇女(对照组)蜕膜组织TNFR1的表达含量;并应用免疫组化方法,检测其中31例流产组和30例对照组蜕膜组织TNFR1表达的组织学、细胞学定位。结果(1)流式细胞仪检测流产组、对照组蜕膜组织中TNFR1的表达含量分别为(16.48±7.2)%,(12.52±5.6))%,流产组高于对照组,差异具有显著性(t=2.24,P<0.05)。免疫组化检测结果显示流产组蜕膜腺体上皮、间质、血管内皮细胞TNFR1表达率分别为77.4%,93.5%和67.7%,对照组分别为96.7%,70.0%和23.3%。2组腺体上皮细胞TNFR1表达率无显著性差异(P>0.05);流产组蜕膜间质、血管内皮细胞TNFR1表达率均高于对照组,差异均有显著性(P<0.05,P<0.05)。结论蜕膜组织中TNFR1表达水平升高,主要分布在蜕膜间质和血管内皮细胞表面,这种改变可能与不明原因早期自然流产有关。